检索结果-内蒙古大学图书馆

中国免疫学杂志 2004年第10期20卷 700-703页

作者：钱高潮王红郑佐娅王从珠杭勤李卫鹏盛慧明高丰厚李稻王鸿利上海第二医科大学医学检验重点实验室上海200023

目的 :制备凝血酶调节蛋白 (thrombomodulin ,TM)抗体。方法 :原核表达目的蛋白 ,将表达的融合蛋白纯化后免疫小鼠。以EVC30 4包板的cell ELISA检测抗体滴度 ,用Westernblot和免疫组化鉴定抗体特异性。结果 :目的蛋白在大肠杆菌中大量... 详细信息

目的 :制备凝血酶调节蛋白 (thrombomodulin ,TM)抗体。方法 :原核表达目的蛋白 ,将表达的融合蛋白纯化后免疫小鼠。以EVC30 4包板的cell ELISA检测抗体滴度 ,用Westernblot和免疫组化鉴定抗体特异性。结果 :目的蛋白在大肠杆菌中大量表达形成包涵体 ,将表达蛋白纯化并复性后免疫小鼠 ,3次免疫后得抗体效价为 1∶4 0 0 0 ,经加强免疫后抗体效价达到1∶80 0 0 ;特异性较好。结论 :在天然TM提取纯化困难的情况下。

关键词：凝血酶调节蛋白原核表达抗体制备免疫小鼠免疫后加强免疫抗体特异性植物凝集素复性提取纯化

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NUP98-PMX1转基因小鼠发生髓系白血病样表型

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中华血液学杂志 2004年第5期25卷 262-265页

作者：王阳顾鸣敏谭轶陆顺元王龙孔辉孙岳平陆振虞陈赛娟王振义王铸钢 200025 上海第二医科大学医学遗传学教研室医学与分子遗传学实验室上海第二医科大学附属瑞金医院、上海血液学研究所上海南方模式生物研究中心

目的在整体动物水平研究NUP98-PMX1融合蛋白的致白血病作用.方法采用分子克隆技术构建含有NUP98-PMX1的转基因质粒,显微注射法建立转NUP98-PMX1基因的小鼠,以PCR、RT-PCR方法检测融合基因的表达;用流式细胞仪检测骨髓细胞表型.结果转染N... 详细信息

目的在整体动物水平研究NUP98-PMX1融合蛋白的致白血病作用.方法采用分子克隆技术构建含有NUP98-PMX1的转基因质粒,显微注射法建立转NUP98-PMX1基因的小鼠,以PCR、RT-PCR方法检测融合基因的表达;用流式细胞仪检测骨髓细胞表型.结果转染NUP98-PMX1融合基因的NIH3T3细胞生长加快,软琼脂上可形成集落,并使裸鼠致瘤.出现病态的8只NUP98-PMX1转基因小鼠中有4只发生粒细胞白血病样表型,其中3只表现为人类慢性髓系白血病样表型.结论 NUP98-PMX1融合基因具有致瘤性,其表达在髓系白血病的发生中起着极为重要的作用.

关键词：基因,NUP98-PMX1 小鼠,转基因白血病,髓样

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纤溶酶-α_2抗纤溶酶复合物单克隆抗体的制备及鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2004年第3期20卷 372-375页

作者：李建新王红杭勤郑佐娅罗伟李稻王鸿利北京大学深圳医院检验科广东深圳518036 上海第二医科大学医学检验重点实验室上海200023

目的 :制备纤溶酶 α2 抗纤溶酶复合物 (PAP)的单克隆抗体(mAb)。方法 :以从血浆中纯化的PAP免疫BALB/c小鼠。按常规方法融合 ,以固相等分子浓度的纤溶酶原、α2 抗纤溶酶(α2 AP)及PAP为抗原 ,建立间接ELISA筛选杂交瘤细胞培养上清 ... 详细信息

目的 :制备纤溶酶 α2 抗纤溶酶复合物 (PAP)的单克隆抗体(mAb)。方法 :以从血浆中纯化的PAP免疫BALB/c小鼠。按常规方法融合 ,以固相等分子浓度的纤溶酶原、α2 抗纤溶酶(α2 AP)及PAP为抗原 ,建立间接ELISA筛选杂交瘤细胞培养上清 ,并对杂交瘤细胞分泌的mAb的特异性和亲和力进行鉴定。结果 :共获得 2 4株可稳定分泌特异性mAb的杂交瘤细胞。其中 ,针对PAP分子中纤溶酶结构的mAb 16株 ,针对α2 AP结构的mAb 1株 ,针对新抗原 (PAP分子中新出现的不同于前体分子纤溶酶原及α2 AP的抗原决定簇 )结构的mAb 7株。这些腹水中抗PAPmAb的滴度为 2× 10 -4～ 1× 10 -8,其中 4株mAb的亲和常数为 5 .6 2× 10 -9～ 3.5 8× 10 -11mol/L之间。结论 :成功地制备针对PAP新抗原的具有高亲和力的mAb ,为建立不受其前体分子干扰的PAP特异性检测方法 ,研究纤溶系统的激活状态提供了工具。

关键词： PAP 单克隆抗体新抗原

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HEV Ⅳ型ORF2编码蛋白N-端合成肽的抗原性检测

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临床检验杂志 2004年第2期22卷 126-127页

作者：盛慧明周文达童明庆俞炳耀甄志刚上海第二医科大学医学检验重点实验室上海200023 南京医科大学第一附属医院检验中心南京210029

目的　检测戊型肝炎病毒 (HEV)Ⅳ型开放阅读框架 2 (ORF2 )编码蛋白N 端表位的抗原性 ,寻找良好的抗原肽 ,以便用于HEV抗体测。方法　根据HEVORF2编码蛋白N 端中含有的抗原表位 ,从HEV中国株蛋白的氨基酸序列中选取 2 5～ 38位序列氨基... 详细信息

目的　检测戊型肝炎病毒 (HEV)Ⅳ型开放阅读框架 2 (ORF2 )编码蛋白N 端表位的抗原性 ,寻找良好的抗原肽 ,以便用于HEV抗体测。方法　根据HEVORF2编码蛋白N 端中含有的抗原表位 ,从HEV中国株蛋白的氨基酸序列中选取 2 5～ 38位序列氨基酸 ,用固相化学合成法合成抗原肽 ,并用ELISA检测抗原性。结果　HEVⅣORF2编码蛋白N 端氨基酸顺序为2 5～ 38的抗原肽与急性期戊型肝炎病人血清有较高的反应性 ,与Genelab诊断试剂盒的符合率达 93.8%。结论　为提高HEV抗体的检出率 ,在包被抗原中应含有HEVⅣ型ORF2编码蛋白N

关键词： HEV Ⅳ型 ORF2编码蛋白N-端合成肽抗原性检测戊型肝炎病毒开放阅读框架

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纤溶酶-α_2抗纤溶酶复合物检测方法的建立和初步临床应用

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中华检验医学杂志 2004年第6期27卷 381-384页

作者：李建新王红杭勤罗伟郑佐娅李稻王鸿利上海第二医科大学医学检验重点实验室上海市血液学研究所

目的　建立纤溶酶 α2 抗纤溶酶复合物 (PAP)的检测方法。方法　从血浆中纯化PAP作为免疫原制备单克隆抗体 (单抗 ) ,建立双抗体夹心法酶联免疫吸附试验 (ELISA) ,并对该法进行评价。结果　获取了特异针对PAP新抗原的单抗LW 3C10 ,和针... 详细信息

目的　建立纤溶酶 α2 抗纤溶酶复合物 (PAP)的检测方法。方法　从血浆中纯化PAP作为免疫原制备单克隆抗体 (单抗 ) ,建立双抗体夹心法酶联免疫吸附试验 (ELISA) ,并对该法进行评价。结果　获取了特异针对PAP新抗原的单抗LW 3C10 ,和针对PAP及纤溶酶原 (Plg)的单抗LW 2B9。对PAP的亲和常数分别为 4 6 9× 10 10 mol/L、5 6 2× 10 9mol/L。以它们建立的夹心ELISA检测PAP在 0～ 15 0 μg/L范围内线性良好 ,批内、批间CV分别为 4 0 %～ 5 2 %、11 2 %～ 13 6 % ,回收率为 85%～ 10 5 % ,加入α2 抗纤溶酶 (α2 AP)及纤溶酶 α2 巨球蛋白复合物 (P α2 M)不干扰测定 ,与美国ADI公司PAP试剂盒相关良好 (r=0 96 2 9)。急性髓细胞白血病组、急性心肌梗死组、肝病组、健康老年人组的血浆PAP水平显著高于正常对照组 (P <0 0 0 1)。结论　该法可用于评估纤溶系统激活。

关键词：纤溶酶-α2抗纤溶酶复合物检测建立临床应用酶联免疫吸附测定单克隆抗体

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永生型骨髓间质干细胞体外诱导为心肌样细胞的实验研究

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中华心血管病杂志 2004年第1期32卷 59-63页

作者：朱洪生连锋王彦婷朱伟许文荣上海第二医科大学附属仁济医院心胸外科 200001 上海第二医科大学神经生物学实验室江苏大学医学技术学院临检教研室

目的　采用骨髓间质干细胞体外诱导为心肌细胞 ,为心力衰竭的干细胞移植治疗提供新的细胞材料。方法　抽取贵州香猪骨髓液 3ml,按照Wakitani的方法培养出骨髓间质干细胞 ,连续传代 4个月 ,得到永生型细胞 ,经 5 氮胞苷 (5 azacytidine... 详细信息

目的　采用骨髓间质干细胞体外诱导为心肌细胞 ,为心力衰竭的干细胞移植治疗提供新的细胞材料。方法　抽取贵州香猪骨髓液 3ml,按照Wakitani的方法培养出骨髓间质干细胞 ,连续传代 4个月 ,得到永生型细胞 ,经 5 氮胞苷 (5 azacytidine)刺激后 ,进行RT PCR ,基因测序 ,免疫组化 ,电镜超微结构鉴定。结果　骨髓间质干细胞经 5 氮胞苷刺激后 ,部分细胞呈梭形。RT PCR ,基因测序结果表明细胞有心房利钠肽 (ANP) ,脑利钠肽 (BNP) ,心肌特异性肌球蛋白重链 (cardiac MHC) ,β肌球蛋白重链 (beta MHC) ,α骨骼肌肌动蛋白 (α skeletalactin)表达 ,结蛋白 (desmin) ,肌球蛋白重链 (MHC) ,心肌特异性肌钙蛋白Ⅰ (cTnTⅠ )免疫组化阳性。电镜示梭形细胞有明显的肌丝 ,细胞核呈单椭圆形 ,位于细胞中央。结论　骨髓间质干细胞经 5 氮胞苷刺激后 ,从基因 ,蛋白 ,超微形态上已有心肌细胞特点 ,表明在体外环境下可向心肌细胞转化。

关键词：永生型骨髓间质干细胞体外诱导心肌样细胞实验研究细胞移植治疗

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抗rhNDPK-A单克隆抗体的制备及鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2004年第1期20卷 86-88页

作者：李雪玲王一飞熊盛张美英李冰李久香王红郑佐娅王从朱暨南大学生物医药研究开发基地广东广州510632 上海第二医科大学医学检验重点实验室上海200023

目的 :研制抗rhNDPK A (recombinanthumannucleosidediphosphatekinase A)单克隆抗体 (mAb) ,并鉴定其特性。方法 :以纯化的rhNDPK A免疫BALB/c小鼠 ,采用杂交瘤技术制备抗rhNDPK AmAb ;用免疫双扩散鉴定Ig亚类 ;West ernblot鉴定mAb的特异性 ;间接ELISA检测mAb的腹水效价、亲和常数 ,并进行表位分析。结果 :获得 6株可分泌特异性mAb的抗rhNDPK A的杂交瘤细胞系 2D9、8C7、13E2、15D9、15E3和 2 0D9,Ig亚类均为IgG1;其效价为 1× 10 -4～5× 10 -6;亲和常数为 4 .5× 10 -9～ 2 .8× 10 -10 mol/L ;共有3个抗原表位。结论 :获得抗rhNDPK A的mAb 。

关键词： rhNDPK-A 单克隆抗体特性鉴定

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分步洗脱亲和层析法快速纯化纤溶酶-α_2抗纤溶酶复合物

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中国实验血液学杂志 2004年第3期12卷 355-358页

作者：李建新周芸王红郑佐娅李稻王鸿利北京大学深圳医院检验科深圳518036 上海第二医科大学医学检验重点实验室上海200023

为快速地获取高度纯化的纤溶酶 α2 抗纤溶酶复合物 (plasmin α2 antiplasmincomplex ,PAP) ,对其纯化方法进行了改进。将尿激酶激活的新鲜乏血小板血浆上Lysine Sepharose 4B亲和层析柱后 ,以不同成分的洗脱液分步洗脱。结果表明 ,每... 详细信息

为快速地获取高度纯化的纤溶酶 α2 抗纤溶酶复合物 (plasmin α2 antiplasmincomplex ,PAP) ,对其纯化方法进行了改进。将尿激酶激活的新鲜乏血小板血浆上Lysine Sepharose 4B亲和层析柱后 ,以不同成分的洗脱液分步洗脱。结果表明 ,每 10 0ml新鲜血浆能获取纯化PAP 3.0mg ,整个纯化过程可在数小时内完成。结论 :本方法简单、快速、经济以及得率高。

关键词：纤溶酶-a2 抗纤溶酶复合物亲和层析纯化分步洗脱

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NUP98-HOXA9融合基因转基因小鼠的建立及乙烷亚硝基脲诱变的研究

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中华血液学杂志 2004年第5期25卷 257-261页

作者：陆顺元顾鸣敏王阳谭轶孙岳平王龙孔辉陆振虞王铸钢 200025 上海第二医科大学医学遗传学教研室医学与分子遗传学实验室上海南方模式生物研究中心

目的从整体动物水平阐明NUP98-HOXA9融合蛋白在白血病发病机制中的作用.方法采用分子克隆技术构建含有NUP98-HOXA9的转基因质粒,经显微注射建立含有该融合基因的转基因小鼠,并对其细胞表型进行分析;采用PCR、RT-PCR等技术进行转基因整... 详细信息

目的从整体动物水平阐明NUP98-HOXA9融合蛋白在白血病发病机制中的作用.方法采用分子克隆技术构建含有NUP98-HOXA9的转基因质粒,经显微注射建立含有该融合基因的转基因小鼠,并对其细胞表型进行分析;采用PCR、RT-PCR等技术进行转基因整合和表达检测;对表型正常的转基因小鼠用乙烷亚硝基脲(ENU)诱变,观察转基因小鼠的表型变化.结果 5个单系的转基因小鼠在骨髓细胞中检出NUP98-HOXA9融合基因的稳定表达,但血常规、骨髓象及肝、脾等未见异常改变.ENU诱变后部分转基因阳性小鼠出现类似人类慢性髓系白血病的表现.结论 NUP98-HOXA9融合基因产物能在转基因小鼠中表达,但不足以诱发白血病;ENU诱变结果提示转基因小鼠对ENU造成的第二次打击可提高白血病的易感性.

关键词：基因,NUP98-HOXA9 小鼠,转基因亚硝基脲化合物

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心血管疾病的生化标志物

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诊断学理论与实践 2004年第3期3卷 221-222页

作者：郑佐娅上海第二医科大学医学检验重点实验室上海200023

在西方发达国家,心脑血管疾病的发病率和死亡率一直占首位,在我国发病人数也在增加,并呈低龄化的趋势.检测心血管疾病标志物有助于对早期和终末期心脏疾病的鉴别诊断和预后判断.检测技术尤其是POCT(point-of-caretesting)应用的发展,将... 详细信息

在西方发达国家,心脑血管疾病的发病率和死亡率一直占首位,在我国发病人数也在增加,并呈低龄化的趋势.检测心血管疾病标志物有助于对早期和终末期心脏疾病的鉴别诊断和预后判断.检测技术尤其是POCT(point-of-caretesting)应用的发展,将会进一步发挥这些标志物的作用.

关键词：心血管疾病急性心肌梗死心肌缺血生化标志物肌红蛋白肌钙蛋白超敏C反应蛋白肌酸磷酸激酶 B型钠尿肽

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