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中华微生物学和免疫学杂志 1996年第5期16卷 367-369页

作者：娄金丽李颖赵玉坤白华郭承吉孙彦中国医科大学基础医学院微生物学教研室中国医科大学第一临床学院中国医科大学第二临床学院

应用ＥＤ－ＰＣＲ（Ｅｎｚｙｍａｔｉｃｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ－ｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ）技术从临床分离的７６株葡萄球菌中鉴定出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（Ｍｅｔｈｉｃｉｌｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔｓｔ... 详细信息

应用ＥＤ－ＰＣＲ（Ｅｎｚｙｍａｔｉｃｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ－ｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ）技术从临床分离的７６株葡萄球菌中鉴定出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（Ｍｅｔｈｉｃｉｌｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ，ＭＲＳＡ）９株，耐甲氧西林血浆凝固酶阴性的葡萄球菌（Ｍｅｔｈｉｃｉｌｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔｃｏａｇｅｌａｓｅ－ｎｅｇａｔｉｖｅｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ，ＭＲ－ＣＮＳ）１１株。此结果与药物敏感性检测结果相符。ＥＤ－ＰＣＲ法具有简便、特异、省时，耗资少等优点，宜在临床检验室推广应用。

关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 EDPCR 医院感染

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中介素对脂多糖诱导巨噬细胞核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎症小体活化及细胞焦亡的影响

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中华风湿病学杂志 2022年第12期26卷 813-819,I0002页

作者：景刚张军锋朱爱萍杨佳常思佳黄太平王艳红山西医科大学第二医院检验科太原030001 山西中医药大学基础医学院晋中030619 山西医科大学微生物学与免疫学教研室太原030001

目的利用脂多糖刺激的小鼠巨噬细胞系RAW 264.7,研究中介素对腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)诱导的核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体活化和细胞焦亡的影响及其机制。方法细胞分组为:对照组,脂多糖组,中介素处理组,磷脂酰肌醇-3... 详细信息

目的利用脂多糖刺激的小鼠巨噬细胞系RAW 264.7,研究中介素对腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)诱导的核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体活化和细胞焦亡的影响及其机制。方法细胞分组为:对照组,脂多糖组,中介素处理组,磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)阻滞剂LY294002组。实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测细胞NLRP3炎症小体的激活情况及炎症因子IL-1β和IL-18表达,碘化丙锭(PI)染色法检测细胞焦亡的改变。计量资料以±s表示,组间差异比较采用方差分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果与对照组[(0.83±0.09),(0.49±0.04)]比较,脂多糖组磷酸化(p)-PI3K/PI3K(0.44±0.05),p-Akt/Akt(0.27±0.06)比值均显著降低,与脂多糖组相比,脂多糖+中介素组细胞中p-PI3K/PI3K(1.22±0.18),pAkt/Akt(0.83±0.09)比值均显著升高(F=31.40,P<0.001;F=50.88,P<0.001)。与对照组比较,脂多糖组(脂多糖和ATP)可刺激RAW264.7细胞炎症因子IL-1β、IL-18和NLRP3炎症小体(NLRP3,caspase-1,ASC)的mRNA及蛋白表达上调;与脂多糖组相比,中介素处理可抑制炎症因子IL-1β、IL-18和NLRP3炎症小体表达,这种效应可被PI3K/Akt通路的阻滞剂LY294002所阻断。Real-time PCR结果显示,IL-1βmRNA相对表达量:对照组为(1.00±0.11),脂多糖组为(8.32±0.61),脂多糖+中介素组为(8.32±0.55),脂多糖+中介素+LY组为(7.23±0.41)(F=15.42,P<0.001);IL-18 mRNA相对表达量:对照组为(1.00±0.17),脂多糖组为(1.82±0.21),脂多糖+中介素组为(1.14±0.15),脂多糖+中介素+LY组为(1.53±0.11)(F=18.16,P<0.001);NLRP3 mRNA相对表达量:对照组为(1.00±0.13),脂多糖组为(2.58±0.18),脂多糖+中介素组为(1.07±0.17),脂多糖+中介素+LY组为(1.33±0.32)(F=15.98,P<0.001);caspase-1 mRNA相对表达量:对照组为(1.00±0.09),脂多糖组为(6.20±0.19),脂多糖+中介素组为(3.43±0.06),脂多糖+中介素+LY组为(5.50±0.45)(F=18.39,P<0.001);ASC mRNA相对表达量:对照组为(1.00±0.21),脂多糖组为(4.58±0.48),脂多糖+中介素组为(2.07±0.51),脂多糖+中介素+LY组为(3.33±0.32)(F=15.19,P<0.001)。蛋白质免疫印迹结果显示,IL-1β蛋白相对表达量:对照组为(100%),脂多糖组为[(188±14)%],脂多糖+中介素组为[(112±11)%],脂多糖+中介素+LY组为[(171±27)%](F=21.25,P<0.001);IL-18蛋白相对表达量:对照组为(100%),脂多糖组为[(183±16)%],脂多糖+中介素组为[(115±19)%],脂多糖+中介素+LY组为[(179±23)%](F=19.62,P<0.001);NLRP3蛋白相对表达量:对照组为(100%),脂多糖组为[(149±15)%],脂多糖+中介素组为[(106±10)%],脂多糖+中介素+LY组为[(144±15)%](F=14.35,P<0.001);ASC蛋白相对表达量:对照组为(100%),脂多糖组为[(188±12)%)],脂多糖+中介素组为[(110±18)%],脂多糖+中介素+LY组为(192±8)%(F=15.79,P<0.001)。结论中介素通过调节PI3K/Akt活性,抑制NLRP3炎症小体的活化与细胞焦亡。

关键词：巨噬细胞脂多糖类细胞焦亡 NLRP3炎症小体中介素 PI3K/Akt信号通路

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人巨细胞病毒感染对单核细胞功能的影响

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病毒学报 2019年第6期35卷 907-918页

作者：施昕妤郭刚强林康明李宝青薛向阳章慧娣温州医科大学基础医学院微生物学和免疫学教研室温州325035 温州医科大学附属第二医院检验科温州325000 温州医科大学附属第一医院肾内科温州325000

人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)是一种β疱疹病毒。单核细胞是HCMV的主要体内靶标。当前大多数的研究集中于单个时间点来分析HCMV感染对单核细胞功能的影响,并未整体且动态地阐述HCMV感染对单核细胞功能的影响。本研究从GEO(... 详细信息

人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)是一种β疱疹病毒。单核细胞是HCMV的主要体内靶标。当前大多数的研究集中于单个时间点来分析HCMV感染对单核细胞功能的影响,并未整体且动态地阐述HCMV感染对单核细胞功能的影响。本研究从GEO(Gene Expression Omnibus)数据库筛选HCMV感染单核细胞4h、24h、48h后的基因芯片,通过生物信息学方法对HCMV感染单核细胞4h、24h、48h后的功能影响进行详细的阐述及比较分析,并用定量反转录聚合酶连锁反应(quantificational reverse transcription polymerase chain reaction,qRTPCR)验证HCMV感染人单核细胞白血病细胞(THP-1细胞)4h、24h和48h后白细胞介素(Interleukin,IL)-1β、IL-8、肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNF)-a、IL-10的表达。结果表明HCMV感染单核细胞4h后参与信号转导、炎症反应、免疫反应、防御病毒反应和趋化反应等17个通路,且可能与病理学过程/疾病、病毒疾病、RNA病毒感染和免疫系统疾病等相关。HCMV感染单核细胞24h后主要参与炎症反应、细胞趋化等信号通路,预测主要与系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)、结缔组织疾病和自身免疫性疾病等10种疾病相关。HCMV感染单核细胞48h后主要参与炎症反应、细胞趋化等信号通路,预测主要与结缔组织疾病、病理学过程和SLE等10个疾病相关。qRT-PCR结果显示HCMV感染THP-1细胞4h、24h和48h后IL-1β、IL-8、TNF-α、IL-10的表达增加。本研究表明HCMV感染主要引起炎症反应及趋化反应,并可能与自身免疫性疾病或SLE高度相关。

关键词：人巨细胞病毒(HCMV) 单核细胞炎症反应趋化反应

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新型冠状病毒核酸荧光型RT-RAA检测方法的建立及其评价

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安徽医科大学学报 2021年第6期56卷 980-985页

作者：高越刘伯玉任翠平高勇朱禹杨莉温萌钱振芦宝静柳燕安徽医科大学基础医学院微生物学教研室合肥230032 阜阳市第二人民医院阜阳236015

目的建立新型冠状病毒(SARS-CoV-2)荧光型RT-RAA快速检测方法。方法以体外转录SARS-CoV-2的RNA为模板,利用单链DNA结合蛋白、重组酶和DNA聚合酶,在40.5℃恒温下,快速完成orf1ab基因和S基因序列片段的扩增,并用已知新冠核酸阳性和其他呼... 详细信息

目的建立新型冠状病毒(SARS-CoV-2)荧光型RT-RAA快速检测方法。方法以体外转录SARS-CoV-2的RNA为模板,利用单链DNA结合蛋白、重组酶和DNA聚合酶,在40.5℃恒温下,快速完成orf1ab基因和S基因序列片段的扩增,并用已知新冠核酸阳性和其他呼吸道病毒感染患者咽拭子标本进行初步评价。结果该研究建立的方法分别检测SARS-CoV-2两种基因的所需时长均在20 min以内,检测2种基因的灵敏度均为2拷贝数/反应管,特异性为100%,2种引物的最低检出限3次重复实验扩增反应起峰时间一致,曲线形态接近。结论该研究建立的方法灵敏性高,特异性强,重复性良好,临床标本检测结果符合率高,且不需要昂贵的仪器,适用于现场快速检测。

关键词： SARS-CoV-2 RT-RAA 核酸快速检测

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人卵巢粘液性囊腺癌细胞系的建立及生物学特性的研究

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中华妇产科杂志 2001年第7期36卷 421-423页

作者：万启惠徐大刚李宗权李维才吴中明程南俊遵义医学院寄生虫学教研室 563003 上海第二医科大学寄生虫学教研室成都市第六人民医院麻醉科遵义医学院电镜室 563003 遵义医学院微生物学教研室 563003 遵义医学院病理学教研室 563003

目的　探讨人卵巢粘液性囊腺癌细胞系的建立 ,并研究其生物学特性。方法　用贴壁培养法建立细胞系 ,冷冻保存。用光学显微镜、电子显微镜观察细胞系的形态 ,研究细胞系的生长及生物学特性。结果　国内第 1株人卵巢粘液性囊腺癌细胞系建... 详细信息

目的　探讨人卵巢粘液性囊腺癌细胞系的建立 ,并研究其生物学特性。方法　用贴壁培养法建立细胞系 ,冷冻保存。用光学显微镜、电子显微镜观察细胞系的形态 ,研究细胞系的生长及生物学特性。结果　国内第 1株人卵巢粘液性囊腺癌细胞系建立成功 ,命名为OMC685 ,现已传至 91代 ,冷冻 8年多复苏后仍生长良好。其生物学特性为 ,形态学观察证实该细胞系具有腺上皮癌细胞的特点 ;细胞生长旺盛 ;植物血凝素凝集试验阳性 ;染色体为亚三倍体 ,有畸变 ;异种动物移植阳性 ;免疫组织化学酸性粘液染色阳性 ;雌二醇及黄体酮阳性 ;无支原体及病毒污染 ;对脊髓灰质炎病毒Ⅰ型、腺病毒 7型及麻疹病毒敏感。

关键词：卵巢肿瘤囊腺癌粘液细胞系生物学特征

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呼吸道合胞病毒合并肺炎克雷伯菌感染所致肺炎与TLR4-NF-κB信号通路关系的初步研究

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安徽医科大学学报 2015年第9期50卷 1252-1258页

作者：王云黄升海吴璇李振兴于莉汪旻旻安徽医科大学基础医学院微生物学教研室合肥230032 安徽省第二人民医院输血科合肥230061

目的探讨呼吸道合胞病毒(RSV)合并肺炎克雷伯菌(Kp)感染SD大鼠后,初步研究其所致肺炎与TLR4-NF-κB信号转导通路的关系。方法 60只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、RSV组、Kp组及RSV+Kp组,以RSV、Kp滴鼻感染SD大鼠,分别于感染后第0、1、3... 详细信息

目的探讨呼吸道合胞病毒(RSV)合并肺炎克雷伯菌(Kp)感染SD大鼠后,初步研究其所致肺炎与TLR4-NF-κB信号转导通路的关系。方法 60只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、RSV组、Kp组及RSV+Kp组,以RSV、Kp滴鼻感染SD大鼠,分别于感染后第0、1、3、5、7天不同时间点,测量其体重、肺指数(LI)的变化;HE染色观察肺的病理学改变;RT-PCR法检测肺组织中TLR4、NF-κB的mRNA表达;Western blot检测NF-κB蛋白的表达;ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)含量的变化。结果与正常对照组相比,RSV组和Kp组均存在弥漫性肺泡间隔增厚和炎症细胞浸润,且随感染时间的延长,肺泡结构破坏逐渐加重,LI、TLR4 mRNA、NF-κB mRNA、NF-κB蛋白、TNF-α和IL-1β的表达均升高,并与RSV和Kp感染之间存在时间依赖性关系;RSV+Kp组LI、TLR4 mRNA、NF-κB mRNA、NF-κB蛋白、TNF-α和IL-1β的表达量进一步升高,肺组织炎症明显加剧。结论 RSV和Kp混合感染具有协同作用,加重肺部炎症;RSV合并Kp感染可能通过TLR4-NF-κB途径诱导肺部炎症反应,释放细胞因子TNF-α和IL-1β等。

关键词：呼吸道合胞病毒肺炎克雷伯菌肺炎 TLR4 NF-κB 炎性因子

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新型隐球菌临床菌株中CNAG＿01032基因的鉴定和功能研究

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菌物学报 2019年第8期38卷 1341-1349页

作者：邱文兰咏哲王迪黄劲廖万清康颖倩贵州医科大学基础医学院微生物学教研室贵州贵阳550025 贵州省微生物与人类健康关系研究人才基地暨贵州省普通高校病原生物学特色重点实验室贵州贵阳550025 贵州医科大学生物化学与分子生物学教研室贵州贵阳550025 第二军医大学上海长征医院真菌学研究所上海200003

新型隐球菌是一种具有荚膜的重要临床致病真菌。本课题组在前期工作中发现CNAG01032基因可能引起不同来源菌株的表型差异,本研究在此基础上以新型隐球菌临床来源菌株IFM56800(C1)、IFM56769(C2)为背景构建CNAG01032基因敲除突变体,并检... 详细信息

新型隐球菌是一种具有荚膜的重要临床致病真菌。本课题组在前期工作中发现CNAG01032基因可能引起不同来源菌株的表型差异,本研究在此基础上以新型隐球菌临床来源菌株IFM56800(C1)、IFM56769(C2)为背景构建CNAG01032基因敲除突变体,并检测突变株和野生型菌株经典毒力因子变化情况;使用API 20C AUX测试系统测试突变株和野生型菌株对19种糖的利用情况;使用尾静脉注射法感染BALB/c雌性小鼠进行致病性检测。结果显示:成功构建以临床株C1、C2为背景的CNAG-01032基因敲除突变株;突变株在37℃生长、黑色素产生与野生型菌株无显著差异,但荚膜厚度分别比C1、C2减少16.4%、18.2%;两基因敲除菌株均不能分解利用纤维二糖;致病性与野生型菌株无显著差异。新型隐球菌CNAG01032基因可能参与临床来源菌株IFM56800、IFM56769的荚膜合成和纤维二糖的代谢。

关键词：病原性真菌基因敲除荚膜纤维二糖

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混合植皮中自体皮岛免疫抑制效应和间接识别机理的关系初探

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上海免疫学杂志 1996年第5期16卷 273-277页

作者：沈传来郑泽铣周光炎史济湘上海第二医科大学上海市免疫学研究所上海市烧伤研究所南京铁道医学院微生物学教研室

本文建立烧伤患者淋巴细胞与异体表皮细胞的混合培养体系（ＭＥＬＣ），并进一步添加自体表皮层细胞，以模拟混合皮肤移植时自体皮岛的局部微环境，探讨相应的免疫学机理。结果发现：１．自体表皮层细胞能有效地抑制ＭＥＬＣ反应；２．... 详细信息

本文建立烧伤患者淋巴细胞与异体表皮细胞的混合培养体系（ＭＥＬＣ），并进一步添加自体表皮层细胞，以模拟混合皮肤移植时自体皮岛的局部微环境，探讨相应的免疫学机理。结果发现：１．自体表皮层细胞能有效地抑制ＭＥＬＣ反应；２．抗原加工阻断剂预处理自体表皮细胞之后，后者对自身淋巴细胞的增殖抑制现象消失或明显缓解，提示自体表皮层细胞有抗原递呈功能，参与对同种异体抗原的间接识别；３．单抗封闭实验显示ＤＲ分子不参与自体表皮的抗原递呈作用。据推测ＤＱ等非ＤＲ分子可能参与自体表皮对异体ＨＬＡ抗原的加工递呈。相应的免疫机制，有待进一步探讨。

关键词：皮肤移植 MELC 间接识别免疫抑制烧伤

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散发性戊型肝炎74例临床分析

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中国医科大学学报 1995年第2期24卷 199-200页

作者：何令丁虹曲以琴周子文张风驰杨少纯第二临床学院传染科辽宁省建平县医院中国医科大学基础医学院微生物学教研室

本文观察７４例急性戊型肝炎病人临床表现，发现散发性戊型肝炎多见于青壮年、老年人也不少见，其中５９例（８０％）有饭店就餐史，７０例（９４．６％）病人呈自限性，重症肝炎４例，死亡２例，死亡率为２．７％，老年人戊型肝炎及乙... 详细信息

本文观察７４例急性戊型肝炎病人临床表现，发现散发性戊型肝炎多见于青壮年、老年人也不少见，其中５９例（８０％）有饭店就餐史，７０例（９４．６％）病人呈自限性，重症肝炎４例，死亡２例，死亡率为２．７％，老年人戊型肝炎及乙型、戊型重叠感染临床表现重，其机制尚不十分清楚。

关键词：戊型肝炎散发性诊断临床分析

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提高DNA疫苗免疫效果的策略

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微生物学免疫学进展 1999年第3期27卷 58-60页

作者：王灵枢刘晶星陆德源上海第二医科大学微生物教研室内蒙古医学院微生物学教研室

近年来，ＤＮＡ疫苗的研究进展迅速，已在多种病毒、细菌、寄生虫病、肿瘤、过敏性疾病及免疫病理性疾病的防治研究中取得了令人鼓舞的成果，进一步提高ＤＮＡ疫苗的免疫效果是今后努力的方向。当前在这方面主要的策略有：构建真核表达... 详细信息

近年来，ＤＮＡ疫苗的研究进展迅速，已在多种病毒、细菌、寄生虫病、肿瘤、过敏性疾病及免疫病理性疾病的防治研究中取得了令人鼓舞的成果，进一步提高ＤＮＡ疫苗的免疫效果是今后努力的方向。当前在这方面主要的策略有：构建真核表达载体时，选择合适的启动子；质粒基本骨架中插入免疫刺激序列（ＩＳＳ）或选择具有免疫增强作用的载体；细胞因子基因与外源基因共表达或共接种以提高外源基因编码抗原诱导的免疫反应。此外，质粒ＤＮＡ的接种剂量和途径也可影响免疫反应效果。

关键词： DNA疫苗免疫效果策略

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