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下调MDA-MB-231乳腺癌细胞骨硬化蛋白(SOST)可增加间接共培养的MG-63成骨细胞的成骨作用

细胞与分子免疫学杂志 2016年第11期32卷 1481-1485页

作者：程俊雄郭丹陈茜王婷黄佳祎重庆医科大学基础医学院病理生理学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 重庆医科大学第二附属医院乳腺外科重庆400016

目的构建靶向抑制骨硬化蛋白(SOST)基因的小干扰RNA(siRNA)腺病毒,感染MDA-MB-231乳腺癌细胞并与MG-63成骨细胞共培养,检测对成骨相关分子表达的影响。方法针对SOST基因RNA序列设计带3个干扰片段的2对引物,以p B2B为模板,扩增"背靠... 详细信息

目的构建靶向抑制骨硬化蛋白(SOST)基因的小干扰RNA(siRNA)腺病毒,感染MDA-MB-231乳腺癌细胞并与MG-63成骨细胞共培养,检测对成骨相关分子表达的影响。方法针对SOST基因RNA序列设计带3个干扰片段的2对引物,以p B2B为模板,扩增"背靠背"排列的H1和U6启动子。两个PCR产物以Gibson DNA Assembly的方式同时连接腺病毒穿梭质粒p Ad Trace-OK,经同源重组、HEK293细胞包装获得SOST-siRNA腺病毒。感染MDA-MB-231乳腺癌细胞,实时定量PCR检测SOST mRNA的表达水平,ELISA检测SOST蛋白水平。将转染该腺病毒的MDA-MB-231细胞与MG-63成骨细胞间接共培养,实时定量PCR检测护骨因子(OPG)、骨钙蛋白(OCN)、整合素结合涎蛋白(IBSP)、核因子κB受体激活蛋白配体(RANKL)的表达情况。结果成功获得带3个干扰片段的腺病毒穿梭质粒,经同源重组和包装后,获得AdR-si SOST腺病毒。用该病毒感染MDA-MB-231细胞后,明显抑制SOST的表达。在乳腺癌骨转移体外模型中感染Ad-si SOST腺病毒,能导致MG-63细胞的OPG、OCN、IBSP mRNA表达上升,RANKL mRNA降低。结论在乳腺癌骨转移体外模型中感染Ad-si SOST腺病毒,能促进MG-63细胞的成骨分化,提高OPG/RANKL的比例。

关键词： SOST siRNA 腺病毒乳腺癌骨转移

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银杏叶提取物防治心脑血管疾病的研究进展

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中国新药杂志 2016年第1期25卷 76-81页

作者：李淑琴朱嘉宝武宇洲河北医科大学基础医学院病理生理学教研室河北医科大学第二医院心血管内科

银杏叶提取物(Ginkgo biloba extract)是目前国际上使用最为广泛的中药提取物之一,主要活性成分是银杏黄酮和银杏内酯类化合物。心脑血管疾病是全球主要的病死原因,对其防治具有重要的意义。近年来的研究表明,银杏叶提取物对心脑血管疾... 详细信息

银杏叶提取物(Ginkgo biloba extract)是目前国际上使用最为广泛的中药提取物之一,主要活性成分是银杏黄酮和银杏内酯类化合物。心脑血管疾病是全球主要的病死原因,对其防治具有重要的意义。近年来的研究表明,银杏叶提取物对心脑血管疾病的防治有多环节、多靶点、不良反应小的优势,应用前景良好。因此,本文综述了近年来银杏叶提取物对心脑血管疾病的防治作用和机制。

关键词：银杏叶提取物心血管疾病脑血管疾病 EGb 761

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慢性心衰大鼠心肌细胞内雷尼丁受体及集钙蛋白的表达

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解剖学杂志 2016年第5期39卷 529-533页

作者：胡淑婷沈亚峰彭涛杨勇骥宁夏医科大学基础医学院生理学系银川750004 第二军医大学生物物理学教研室上海200433

目的：研究慢性心衰大鼠心肌细胞内雷尼丁受体（RyR2）及其调节蛋白集钙蛋白的表达,探讨心衰心肌细胞内钙容量降低的机制.方法：雄性SD大鼠被随机分为心衰组和假手术组,运用激光扫描共聚焦显微镜、透射电子显微镜、免疫印迹等方法研究... 详细信息

目的：研究慢性心衰大鼠心肌细胞内雷尼丁受体（RyR2）及其调节蛋白集钙蛋白的表达,探讨心衰心肌细胞内钙容量降低的机制.方法：雄性SD大鼠被随机分为心衰组和假手术组,运用激光扫描共聚焦显微镜、透射电子显微镜、免疫印迹等方法研究2组大鼠心肌细胞肌浆网内钙容量、心肌细胞超微结构及心肌细胞内肌浆网钙释放通道RyR2和其调节蛋白集钙蛋白表达的变化.结果：慢性心衰大鼠心功能左心室舒张末期压力、左室压力最大上升速率均显著低于假手术组.假手术组大鼠心肌细胞的肌小节完整,肌丝排列整齐,线粒体结构正常;心衰组大鼠部分心肌细胞肌丝溶解,线粒体肿胀,嵴断裂.慢性心衰大鼠心肌细胞肌浆网内钙容量显著低于假手术组.慢性心衰大鼠心肌细胞内RyR2的表达量无明显变化,集钙蛋白表达明显下降.结论：慢性心衰大鼠心肌细胞内集钙蛋白表达下调,可能是导致心肌细胞肌浆网钙容量减少的原因之一.

关键词：心力衰竭心肌细胞肌浆网雷尼丁受体集钙蛋白大鼠

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血小板STIM1蛋白表达水平与急性缺血性脑卒中严重程度及预后的相关性研究

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中国地方病防治 2016年第9期31卷 1025-1027页

作者：周慧董鸣刘杰广州医科大学深圳市第二人民医院神经内科广东深圳518000 深圳大学基础医学院病理生理学教研室

目的探讨血小板中钙离子感受蛋白基质相互作用因子1(STIM1)蛋白在急性缺血性脑卒中的表达以及其与脑梗死发作严重程度和预后的相关性。方法回顾性分析本院收治的120例急性缺血性脑梗死患者外周血和相关临床资料,分离外周血中血小板,通过... 详细信息

目的探讨血小板中钙离子感受蛋白基质相互作用因子1(STIM1)蛋白在急性缺血性脑卒中的表达以及其与脑梗死发作严重程度和预后的相关性。方法回顾性分析本院收治的120例急性缺血性脑梗死患者外周血和相关临床资料,分离外周血中血小板,通过western blotting检测患者血小板内STIM1蛋白含量。使用NIHSS评分标准判断急性缺血性脑卒中患者发病24小时内病情严重程度,并在三个月后对病人进行随访,重新评估病人NIHSS评分以判断患者预后情况。运用统计分析方法分析健康人以及病情严重程度不同的急性脑梗死患者血小板内STIM1蛋白表达含量的差异是否存在统计学意义,并分析其与缺血性中风短期预后的相关性。结果在患病人群中其平均STIM1蛋白表达量比正常人群表达量有明显升高(P<0.01)。患病严重程度不同的病人之间,其外周血血小板内STIM1蛋白表达量存在差异,并且外周血血小板内STIM1蛋白表达量与病人的患病严重程度存在正相关的关系。结论血小板STIM1蛋白表达增加提示患者具有更严重的脑卒中,其三个月预后差。这种作用可能是因为血小板内STIM1蛋白含量一定程度反映了体内血小板的活性状态,临床应紧密检测该指标,尽早治疗以防止病情进一步恶化。

关键词：急性缺血性脑卒中血小板钙库操纵的钙内流通道(SOCC) STIM1

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胎盘间充质干细胞低氧培养液对肠黏膜上皮细胞氧化应激损伤的保护作用

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中国医科大学学报 2016年第2期45卷 131-135,140页

作者：杜莉莉吕润潇杨晓漪辛娜马廷贤中国医科大学基础医学院病理生理学教研室沈阳110013 第二军医大学附属长海医院研究生队、第二军医大学研究生队上海200433 中国医科大学95期临床医学7年制沈阳110013

目的研究胎盘间充质干细胞(p MSCs)低氧培养液对肠黏膜上皮细胞氧化应激损伤的作用。方法组织块培养法提取p MSCs,流式细胞术检测表面标志,ELISA检测p MSCs常氧(21%O_2)或低氧(1%O_2)培养5 d后培养液中胰岛素样生长因子1(IGF-1)的含量... 详细信息

目的研究胎盘间充质干细胞(p MSCs)低氧培养液对肠黏膜上皮细胞氧化应激损伤的作用。方法组织块培养法提取p MSCs,流式细胞术检测表面标志,ELISA检测p MSCs常氧(21%O_2)或低氧(1%O_2)培养5 d后培养液中胰岛素样生长因子1(IGF-1)的含量。人结肠腺癌细胞(Caco2)经100μmol/L H_2O_2处理12 h后分别培养于正常培养液、p MSCs常氧培养液或p MSCs低氧培养液,5 d后台盼蓝染色测细胞存活情况,MTT测细胞增殖,Annexin V-FITC/PI双染测细胞凋亡。结果 p MSCs阳性表达CD29,CD44。p MSCs低氧培养液中的IGF-1明显多于p MSCs常氧培养液(P<0.05)。与p MSCs常氧培养液相比,p MSCs低氧培养液中H_2O_2处理的Caco2存活细胞多,增殖快,凋亡少(P<0.05)。向p MSCs低氧培养液中加入IGF-1抗体后,细胞增殖减慢,凋亡增多(P<0.05)。结论 p MSCs低氧培养液对H_2O_2处理的Caco2具有保护作用。机制与IGF-1促进细胞增殖、抑制凋亡相关。

关键词：胎盘间充质干细胞低氧氧化应激人结肠腺癌细胞

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p38抑制剂对低剪切应力诱导的人脐静脉内皮细胞株Fractalkine蛋白表达的影响

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新疆医科大学学报 2016年第3期39卷 293-297页

作者：阿曼古丽.如则赵一蔚古力热巴.夏依买旦吴江聂永梅新疆医科大学基础医学院生理学教研室乌鲁木齐830011 新疆医科大学第二附属医院心电图室乌鲁木齐830063

目的探讨p38MAPK信号通路特异性抑制剂SB203580对血流低剪切应力诱导的人脐静脉内皮细胞株Fractalkine蛋白表达的影响。方法用M199生长液（含1%的青链霉素合剂和10%的胎牛血清）培养***926细胞至第2～5代,待细胞长满汇合后加载强度为4.5... 详细信息

目的探讨p38MAPK信号通路特异性抑制剂SB203580对血流低剪切应力诱导的人脐静脉内皮细胞株Fractalkine蛋白表达的影响。方法用M199生长液（含1%的青链霉素合剂和10%的胎牛血清）培养***926细胞至第2～5代,待细胞长满汇合后加载强度为4.58dyne/cm^2的剪切应力,分别处理0、5、10、30、60min。收集细胞提总蛋白,通过Western-blot技术检测剪切应力处理不同时间对***926细胞p38 MAPK磷酸化的影响,并分析p38 MAPK特异性抑制剂SB203580对p38磷酸化水平的抑制程度,观察SB203580对低剪切应力诱导的人脐静脉内皮细胞株Fractalkine蛋白表达的影响。结果低剪切应力处理可引起***926细胞p38蛋白磷酸化水平的上调,此过程与剪切应力作用时间有关,30min时磷酸化水平最高。用SB203580处理可明显抑制低剪切应力诱导的***926细胞Fractalkine蛋白表达上调过程。结论低剪切应力可激活p38信号转导途径,激活的p38信号分子可能参与调节低剪切应力诱导的内皮细胞Fractalkine表达上调过程,p38抑制剂能够下调低剪切应力诱导的Fractalkine的表达。

关键词： EA.hy926细胞流体剪切应 Fractalkine p38 MAPK p38抑制剂

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PI3K、ERK、IGF-1R和ER蛋白在宫颈癌细胞株中的表达及意义

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新疆医科大学学报 2016年第8期39卷 1044-1047页

作者：宁超荣小灵杜靖新疆医科大学基础医学院生理学教研室乌鲁木齐830011 新疆医科大学第二附属医院检验科乌鲁木齐830064 新疆医科大学高职学院机能教研室乌鲁木齐830011

目的研究体外特定细胞株(C33a、HaCaT及SiHa)中磷酸肌醇3激酶(PI3K)、细胞外调节激酶(ERK)、胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)和雌激素受体(ER)蛋白的表达量,分析各蛋白的表达与HPV16感染致癌的关系。方法培养C33a、HaCaT及SiHa 3种细胞... 详细信息

目的研究体外特定细胞株(C33a、HaCaT及SiHa)中磷酸肌醇3激酶(PI3K)、细胞外调节激酶(ERK)、胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)和雌激素受体(ER)蛋白的表达量,分析各蛋白的表达与HPV16感染致癌的关系。方法培养C33a、HaCaT及SiHa 3种细胞,采用蛋白免疫印迹(Western blot)技术检测IGF-1R、PI3K、ERK和ER蛋白在3种细胞株中的表达水平。结果 IGF-1R、PI3K和ERK蛋白在SiHa细胞株中的表达高于在C33a、HaCaT细胞株中的表达,差异有统计学意义(P<0.05),而在SiHa细胞株中ER的表达低于在C33a细胞株中的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PI3K、ERK、IGF-1R和ER蛋白在宫颈癌细胞株中呈现不同程度的表达,可能与HPV16感染后宫颈癌变存在一定的关系。

关键词：宫颈癌细胞 PI3K ERK IGF-1R ER

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MicroRNA-10a-5p促进大鼠心肌细胞凋亡的研究

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宁夏医科大学学报 2016年第8期38卷 872-875,977页

作者：尚佳毛竹君王锐熊耀康袁文俊扈启宽宁夏医科大学基础医学院生理学系银川750004 浙江省中医药研究院杭州310007 浙江中医药大学中药资源教研室杭州310053 第二军医大学生理学教研室上海200433

目的研究microRNA-10a-5p(miR-10a-5p)对新生大鼠心肌细胞活力及凋亡的影响。方法原代培养的SD新生大鼠心肌细胞分为:对照组(转染无意义RNA序列)、miR-10M组(行miR-10a-5p模拟物转染)、miR-10I组(行miR-10a-5p抑制剂转染)。转染48h后,... 详细信息

目的研究microRNA-10a-5p(miR-10a-5p)对新生大鼠心肌细胞活力及凋亡的影响。方法原代培养的SD新生大鼠心肌细胞分为:对照组(转染无意义RNA序列)、miR-10M组(行miR-10a-5p模拟物转染)、miR-10I组(行miR-10a-5p抑制剂转染)。转染48h后,免疫荧光法和q RT-PCR法检测转染效率;MTT法检测细胞活力;PI单染、荧光显微镜观察细胞凋亡情况;Western blot方法检测凋亡相关蛋白caspase-3的表达量。结果相比于对照组,miR-10M组miR-10a-5p的表达量显著增高(P<0.05),细胞活力显著降低(P<0.05),细胞凋亡增高(P<0.01),caspase-3表达量显著升高(P<0.05);而miR-10I组,miR-10a-5p的表达量显著降低(P<0.05),细胞活力显著升高(P<0.05),细胞凋亡降低(P<0.05),caspase-3表达量无明显变化。结论摇miR-10a-5p可能降低大鼠心肌细胞活力,且通过caspase途径促进细胞凋亡。

关键词： miR-10a-5p 心肌细胞凋亡

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p53-p21通路在动脉血管平滑肌细胞衰老中的作用研究

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大连医科大学学报 2015年第4期37卷 339-344页

作者：蔺昕燕贾玉红郭连英贾玉杰徐婷婷大连医科大学附属第二医院妇产科辽宁大连116027 大连医科大学基础医学院病理生理学教研室辽宁大连116044

目的研究p53-p21通路在血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)衰老中的作用。方法用血管紧张素II(angiotensin II,Ang II)持续作用引起VSMC衰老,检测衰老相关蛋白分子的表达。利用β半乳糖苷酶(senescence associated beta galactosidase,SA-β-gal)染色确定VSMC衰老,检测经Ang II诱导的p53敲除小鼠及其同窝野生型小鼠VSMC的衰老情况,通过感染腺病毒p21及其对照GFP的方法使VSMC中p21过表达,用3H标记脱氧胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法检测p21过表达VSMC增殖,用流式细胞仪测定细胞周期。结果Ang II处理引起VSMC的p53、p21、p16表达增加,Ang II处理后使p53基因敲除的VSMC衰老细胞数明显少于其对照p53野生型鼠的VSMC(P<0.01),过表达p21显著抑制VSMC的3H-TdR掺入(P<0.01),并且引起细胞周期G1期阻滞;过表达p21能引起VSMC衰老。结论 p53-p21通路在Ang II引起的VSMC衰老发生过程中发挥重要作用。

关键词：血管平滑肌细胞衰老 p53 p21

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RNA干扰在心血管疾病研究中的现状和展望

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中国新药与临床杂志 2015年第12期34卷 893-898页

作者：李淑琴朱嘉宝武宇洲河北医科大学基础医学院病理生理学教研室河北石家庄050017 河北医科大学第二医院心血管内科河北石家庄050000

RNA干扰可特异性使目的基因沉默,具有高效、特异和低毒的特点,正逐渐成为研究心血管疾病发病机制和防治措施的重要工具。本文就RAN干扰的研究简史、作用机制、在心血管疾病细胞水平和整体动物水平的研究、RNA干扰的局限性及改善策略和... 详细信息

RNA干扰可特异性使目的基因沉默,具有高效、特异和低毒的特点,正逐渐成为研究心血管疾病发病机制和防治措施的重要工具。本文就RAN干扰的研究简史、作用机制、在心血管疾病细胞水平和整体动物水平的研究、RNA干扰的局限性及改善策略和在心血管疾病研究中的展望作一综述,为心血管疾病的防治提供新思路。

关键词： RNA干扰 RNA,小分子干扰心血管疾病肌细胞,心脏成纤维细胞

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