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HIV-1 HXB2株蛋白酶的原核表达、纯化及其Gag蛋白CAP2NC的切割活性分析

第二军医大学学报 2008年第4期29卷 365-370页

作者：陈铭潘欣贾建安何俊蒋少华陈璐姚静娟陈秋莉曹洁潘卫第二军医大学基础部微生物学教研室上海200433 安徽医科大学病理学教研室合肥230032 第二军医大学长征医院感染科上海200003

目的:原核表达、纯化HIV-1型HXB2株蛋白酶(protease,PR),用于对HIV-1 Gag P2/NC蛋白酶切割位点序列随机突变的噬菌体展示文库的切割筛选及构建新的蛋白酶抑制剂(protease inhibitor,PI)类药物体外筛选模型。方法:根据HIV-1 HXB2株PR DN... 详细信息

目的:原核表达、纯化HIV-1型HXB2株蛋白酶(protease,PR),用于对HIV-1 Gag P2/NC蛋白酶切割位点序列随机突变的噬菌体展示文库的切割筛选及构建新的蛋白酶抑制剂(protease inhibitor,PI)类药物体外筛选模型。方法:根据HIV-1 HXB2株PR DNA序列设计引物,在PR序列上游添加自切割位点MGTVSFNF 8个氨基酸编码获得PR107 DNA编码序列,将PR107 DNA克隆至原核表达载体pET-32a,序列测定后转化大肠杆菌BL21 DE3进行诱导表达。表达产物经用Ni-NTA亲和柱纯化,经复性后,进行靶蛋白CAP2NC切割试验,SDS-PAGE检测切割结果。结果:成功合成了使用大肠杆菌偏好密码子的HIV-1 PRl07的DNA编码序列,序列测定显示其编码氨基酸序列与原始序列完全一致;成功构建了HIV-1 PR原核表达质粒pETa2a—PR107,转化大肠杆菌BL21 DE3经IPTG诱导后,表达出相对分子质量为30 000的HIV-1 PR融合蛋白,纯化的目的蛋白浓度为2.54 mg/ml;纯化蛋白经复性后具有对底物蛋白CAP2NC的切割活性,该作用能被PI药物抑制。结论:成功构建大肠杆菌偏好密码子带自切割位点的HIV-1 PR原核表达载体pET32a—PR107,在大肠杆菌中表达,经纯化复性获得了具有切割活性的HIV-1 PR融合蛋白。

关键词： HIV 蛋白酶基因表达切割

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大鼠慢性心肌梗死模型制备的改进

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四川动物 2008年第3期27卷 396-398页

作者：肖骏佘强罗开良黄开顺曹友德重庆医科大学附属第二医院心内科重庆400010 重庆医科大学基础研究所重庆医科大学病理学教研室

目的改进制备大鼠心肌梗死模型的方法,提高术后大鼠存活率。方法采用戊巴比妥钠腹腔注射麻醉,开胸行冠状动脉前降支结扎法,术后给予呼吸道管理。结果术后存活率达到76%,4周存活率达到67.5%。结论准确结扎前降支才能保证造模成功,加强呼... 详细信息

目的改进制备大鼠心肌梗死模型的方法,提高术后大鼠存活率。方法采用戊巴比妥钠腹腔注射麻醉,开胸行冠状动脉前降支结扎法,术后给予呼吸道管理。结果术后存活率达到76%,4周存活率达到67.5%。结论准确结扎前降支才能保证造模成功,加强呼吸道管理是提高术后大鼠存活率的重要措施。

关键词：心肌梗死动物模型大鼠

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别嘌呤醇对心肌梗死后大鼠心肌细胞凋亡的抑制作用

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第三军医大学学报 2008年第8期30卷 735-738页

作者：肖骏佘强罗开良黄开顺曹友德重庆医科大学附属第二医院心血管内科重庆400010 重庆医科大学基础研究所重庆400016 重庆医科大学基础医学院病理学教研室重庆400016

目的探讨黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XO)抑制剂别嘌呤醇对心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法结扎冠脉前降支制作大鼠心肌梗死模型,随机分为假手术组(sham,n=5),心肌梗死组(MI,n=16)和别嘌呤醇组(50 ***-1.d-1,n=15),28 d后检测... 详细信息

目的探讨黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XO)抑制剂别嘌呤醇对心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法结扎冠脉前降支制作大鼠心肌梗死模型,随机分为假手术组(sham,n=5),心肌梗死组(MI,n=16)和别嘌呤醇组(50 ***-1.d-1,n=15),28 d后检测心肌梗死面积,TUNEL法检测心肌细胞凋亡,免疫组化法检测Fas蛋白表达,Western blot检测XO和caspase 3蛋白表达,比色法测定XO和清除活性氧活力。结果MI组非梗死区心肌细胞凋亡指数升高,Fas、XO、caspase 3蛋白表达增强,XO活力增加,清除活性氧活力降低(P<0.01);别嘌呤醇组明显缓解了上述指标的变化。结论别嘌呤醇能够抑制非梗死区心肌细胞凋亡,其作用机制可能与减少活性氧生成及降低Fas和caspase 3的表达有关。

关键词：别嘌呤醇黄嘌呤氧化酶活性氧细胞凋亡心肌梗死

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男性生殖系统腺瘤样瘤临床病理特征及诊治

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中国综合临床 2008年第1期24卷 66-67页

作者：刘川吴小候张唯力胡自力徐光勇张荣贵李昱重庆医科大学第二临床学院泌尿外科重庆400010 重庆医科大学临床学院泌尿外科重庆医科大学基础医学院病理学教研室

目的探讨男性生殖系统腺瘤样瘤临床病理特征、组织来源及诊治方案。方法回顾性分析12例经病理证实的男性生殖系统腺瘤样瘤的临床及病理学资料，结合近期文献进行分析和探讨。结果本病主要发生于附睾。临床表现为阴囊局部无痛性小肿块。... 详细信息

目的探讨男性生殖系统腺瘤样瘤临床病理特征、组织来源及诊治方案。方法回顾性分析12例经病理证实的男性生殖系统腺瘤样瘤的临床及病理学资料，结合近期文献进行分析和探讨。结果本病主要发生于附睾。临床表现为阴囊局部无痛性小肿块。彩超可确定肿瘤的部位。免疫表型：波形纤维蛋白（Vim）、细胞角蛋白（CK）、上皮膜抗原（EMA）、间皮细胞（MC）均阳性，癌胚抗原（CEA）、CD34、单核巨噬细胞抗原（Leu）M1、上皮相关抗原（MOC）-31均阴性。所有病例均行肿瘤切除术。结论男性生殖系统腺瘤样瘤临床表现及影像学表现无特异性，诊断主要靠病理确诊。免疫组化对本病的诊断和鉴别诊断均有重要意义，也支持其为间皮来源。肿瘤切除术中行冰冻切片检查，以确定睾丸及附睾保留的范围。

关键词：腺瘤样瘤外科手术男性

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Wnt拮抗因子SFRP5在胃癌中的甲基化和异常表达

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中国医科大学学报 2008年第6期37卷 745-747页

作者：赵成海尚超徐彦金卜献民张宁王巍中国医科大学基础医学院病理学生理教研室沈阳110001 中国医科大学图书馆沈阳110001 中国医科大学辽河油田第二职工医院肿瘤科辽宁盘锦124010 中国医科大学附属盛京医院普通外科沈阳110004

目的检测Wnt拮抗因子分泌型Frizzled相关蛋白(SFRP5)在胃癌中的甲基化和表达状态,探讨SFRP5在胃癌发病机制中的作用。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)检测SFRP5在胃癌中的甲基化状态,采用逆转录PCR(RT-PCR)和即时定量PCR(real-time PCR)检... 详细信息

目的检测Wnt拮抗因子分泌型Frizzled相关蛋白(SFRP5)在胃癌中的甲基化和表达状态,探讨SFRP5在胃癌发病机制中的作用。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)检测SFRP5在胃癌中的甲基化状态,采用逆转录PCR(RT-PCR)和即时定量PCR(real-time PCR)检测SFRP5在胃癌中的表达状态。结果在胃癌组织中,有29例(72.5%)检出SFRP5甲基化,在其相应的癌旁组织中,有4例(10%)检出SFRP5甲基化。SFRP5在胃癌组织中的甲基化频率显著高于癌旁正常组织(χ2=32.237,P<0.001)。SFRP5mRNA在胃癌组织中表达显著低于癌旁正常组织(P<0.001)。SFRP5在胃癌细胞系HGC-27、AGS和NCI-N87中发生甲基化,表达消失,而在SGC-7901中未发生甲基化,存在表达。结论SFRP5甲基化及异常表达在胃癌中是一种较为普遍的现象,其参与了部分胃癌的发病过程。

关键词：胃癌甲基化分泌型Frizzled相关蛋白5 wnt拮抗因子

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Ki67、p53和P糖蛋白在肺鳞癌、腺癌中的表达关系及意义

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中国医科大学学报 2008年第6期37卷 798-799页

作者：刘树立姜波徐彦金李建华中国医科大学基础医学院病理学教研室沈阳110001 辽宁省清原满族自治县人民医院病理室辽宁清原113300 辽河油田第二职业医院肿瘤科辽宁盘锦124010

目的探讨Ki67、p53和P糖蛋白(P-gp)在肺鳞癌、腺癌中的表达及与临床病理参数的关系和意义。方法采用免疫组化方法检测Ki67、p53和P-gp在112例肺鳞癌、腺癌中的表达情况。结果Ki67、p53和P-gp的阳性率分别为40.2%(45/112)、49.1%(55/112)... 详细信息

目的探讨Ki67、p53和P糖蛋白(P-gp)在肺鳞癌、腺癌中的表达及与临床病理参数的关系和意义。方法采用免疫组化方法检测Ki67、p53和P-gp在112例肺鳞癌、腺癌中的表达情况。结果Ki67、p53和P-gp的阳性率分别为40.2%(45/112)、49.1%(55/112)和37.5%(42/112),Ki67和p53的表达呈正相关(r=0.191,P=0.043),并且Ki67和p53的阳性表达率分别与肺鳞癌、腺癌的分化程度呈负相关(P<0.05),同时二者的协同表达是肺癌低分化的密切因素;而P-gp的阳性率与淋巴结转移正相关(r=0.240,P=0.011)。结论Ki67和p53的表达分别与肺鳞癌和腺癌的低分化程度相关,P-gp的表达与肺鳞癌和腺癌的淋巴结转移呈正相关,Ki67和p53的协同表达可能是促进肺癌的恶性进展的重要因素。

关键词： Ki67 p53 P糖蛋白肺鳞癌肺腺癌

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别嘌呤醇对心肌梗死后大鼠心室重构和心功能的影响

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重庆医科大学学报 2008年第6期33卷 678-682页

作者：肖骏佘强罗开良黄开顺曹友德重庆医科大学附属第二医院心内科重庆400010 重庆医科大学基础研究所重庆400016 重庆医科大学基础医学院病理学教研室重庆400016

目的:探讨黄嘌呤氧化酶(Xanthine oxidase,XO)抑制剂别嘌呤醇(Allopurinol)对心肌梗死(Myocardial infarction,MI)后大鼠心室重构和心功能的影响。方法:结扎冠脉前降支制作大鼠心肌梗死模型,随机分为假手术组(sham,n=5),心肌梗死组(MI,n... 详细信息

目的:探讨黄嘌呤氧化酶(Xanthine oxidase,XO)抑制剂别嘌呤醇(Allopurinol)对心肌梗死(Myocardial infarction,MI)后大鼠心室重构和心功能的影响。方法:结扎冠脉前降支制作大鼠心肌梗死模型,随机分为假手术组(sham,n=5),心肌梗死组(MI,n=16)和别嘌呤醇组[50mg(/kg·d),n=15],28d后观察血流动力学和超声心动图的变化,并检测左心室重量指数(LVWI),心肌梗死面积,清除活性氧(Reactive oxygen species,ROS)活力,XO活力和蛋白表达。结果:与sham组比较,MI组LVWI,XO蛋白表达和活力升高,清除活性氧活力和心功能降低(P<0.01)。别嘌呤醇组与MI组比较,LVWI和XO活力降低,清除活性氧活力和心功能升高(P<0.05或P<0.01),但心率,动脉血压,梗死面积和XO蛋白表达在两组间差异无显著性(P>0.05)。结论:别嘌呤醇能够抑制心肌梗死后心室重构,改善心功能。其机制可能与抑制黄嘌呤氧化酶活性,减少活性氧的生成有关。

关键词：别嘌呤醇黄嘌呤氧化酶活性氧心室重构心肌梗死

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HIV Gag CAP2NC噬菌体蛋白酶切割模型的构建

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生物化学与生物物理进展 2007年第3期34卷 317-325页

作者：贾建安周波蒋少华陈秋莉赵平潘欣温宗梅邓松华卢洪洲潘卫第二军医大学微生物教研室上海200433 安徽医科大学病理学教研室合肥230032 上海市公共卫生中心上海201508

HIV蛋白酶(protease,PR)耐药突变的大量出现严重地影响了AIDS的治疗.应用突变PR对展示HIVPR靶序列随机文库的噬菌体进行切割筛选,可获得突变PR的敏感噬菌体,该噬菌体可用于针对HIVPR耐药突变株的蛋白酶抑制剂(protease inhibitor,PI)新... 详细信息

HIV蛋白酶(protease,PR)耐药突变的大量出现严重地影响了AIDS的治疗.应用突变PR对展示HIVPR靶序列随机文库的噬菌体进行切割筛选,可获得突变PR的敏感噬菌体,该噬菌体可用于针对HIVPR耐药突变株的蛋白酶抑制剂(protease inhibitor,PI)新药筛选.为了探索这一可能性,将包含HIVPR靶位点P2/NC序列的Gag蛋白CAP2NC片段展示于噬菌体表面,并在该片段的N端连接一可与人免疫球蛋白分子特异结合的固相化标签序列LD3,将该噬菌体固定于人免疫球蛋白包被的酶标板上,用HIVSF2PR进行切割,用抗M13噬菌体酶标抗体ELISA法检测未被切割的剩余噬菌体以反映切割效果.结果表明,所构建的噬菌体能被HIVPR有效切割,最大切割效应可达80%以上,其ELISA检测值明显下降,并且该切割效应与HIVPR呈明显的量效关系,能被PI类药物Indinavir(IDV)特异抑制.首次成功构建了展示HIV Gag CAP2NC片段的噬菌体蛋白酶切割模型,不仅可为研究HIVPR的耐药性变异及其靶序列的适应性变异提供一新的研究平台,同时也为构建一种全新的PI类药物,尤其是针对耐药的PI类药物大规模体外噬菌体筛选模型打下基础.

关键词：人类免疫缺陷病毒蛋白酶蛋白酶抑制剂药物筛选噬菌体展示

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原发性睾丸弥漫性大B细胞淋巴瘤的临床病理及预后

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中华病理学杂志 2007年第7期36卷 461-465页

作者：李丹米粲赵涌王娅兰马英李圆圆向美环重庆医科大学基础医学院病理学教研室附属第一医院病理科 400016 重庆医科大学附属第二医院病理科

目的观察原发性睾丸弥漫性大 B 细胞淋巴瘤的临床病理、免疫表型特征及患者存活情况,探讨该肿瘤的病理诊断、鉴别诊断及预后。方法按 WHO(2001)淋巴瘤分类标准收集14例原发性睾丸弥漫性大 B 细胞淋巴瘤,中位年龄62岁,按 Ann Arbor 分期... 详细信息

目的观察原发性睾丸弥漫性大 B 细胞淋巴瘤的临床病理、免疫表型特征及患者存活情况,探讨该肿瘤的病理诊断、鉴别诊断及预后。方法按 WHO(2001)淋巴瘤分类标准收集14例原发性睾丸弥漫性大 B 细胞淋巴瘤,中位年龄62岁,按 Ann Arbor 分期标准,Ⅰ期10例,Ⅱ期3例,Ⅳ期1例。11例有随访资料,其中3例存活,最长存活时间86个月;8例死亡,存活时间5～19个月,中位存活时间为11个月。总结14例的组织病理学、免疫表型特征,并进行存活分析。结果单侧睾丸无痛性肿大是最常见的临床表现。形态学变型全部为中心母细胞性。免疫分型,生发中心样 B 细胞型(GCB 型)1例,非生发中心样 B 细胞型(non-GCB 型)13例。10例 p53蛋白表达阳性,肿瘤细胞增殖活性高,6例肿瘤细胞表达 bcl-2蛋白。存活分析表明,1、2、5年生存率分别为45.5%、17.0%、17.0%。结论原发性睾丸弥漫性大 B 细胞淋巴瘤多为外周活化的 B 细胞起源,预后差,易复发和转移;病理活检加免疫表型检测对肿瘤的诊断和鉴别诊断有重要作用。

关键词：睾丸淋巴瘤 B细胞淋巴瘤大细胞弥漫型免疫表型分型预后

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骨形成蛋白7和转化生长因子β1在不同病理类型IgA肾病的变化

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中华肾脏病杂志 2007年第5期23卷 292-295页

作者：杨林段惠军王建荣杨万霞傅淑霞河北医科大学第二附属医院肾内科石家庄050000 河北医科大学基础医学院病理学教研室

目的观察转化生长因子β1（TGF-β1）和骨形成蛋白7（BMP-7）在不同病理类型IgA肾病的变化,并探讨其意义。方法 89例IgA肾病患者分成3组：A组为47例轻度系膜增生性IgA肾病;B组为29例中重度系膜增生性IgA肾病;C组为13例增生硬化或硬化性... 详细信息

目的观察转化生长因子β1（TGF-β1）和骨形成蛋白7（BMP-7）在不同病理类型IgA肾病的变化,并探讨其意义。方法 89例IgA肾病患者分成3组：A组为47例轻度系膜增生性IgA肾病;B组为29例中重度系膜增生性IgA肾病;C组为13例增生硬化或硬化性IgA肾病。检测患者的血压、尿蛋白量（24 h）、Scr和Ccr。免疫组化和ELISA方法测定患者肾组织冰冻切片及其血、尿中TGF-β1和BMP-7水平。计算患者病理切片硬化肾小球数、新月体数和间质纤维化面积百分比。结果随着IgA肾病患者肾小球病变的加重,肾小管萎缩和肾间质纤维化增多,其血压、尿蛋白量（24 h）、Scr逐渐增加,除B、C两组间尿蛋白量（24 h）无显著差异外,其余各组间差异均有统计学意义（P＜0．05）。与A组比较,B组肾组织及血、尿TGF-β1明显增多,C组显著降低（P＜0．01）。肾组织冰冻切片及血、尿BMP-7随着肾脏病变的加重,水平逐渐下降（P＜0．01）;而且与Ccr呈正相关;与血压、Scr、尿蛋白量（24 h）、硬化肾小球数、新月体数、肾间质纤维化面积呈负相关。结论 TGF-β1在IgA肾病系膜增生严重时明显增加,肾脏广泛纤维化时明显降低,可能参与了IgA肾病肾间质纤维化的发生。BMP-7随肾脏病变的加重而明显降低,可能导致其抗肾纤维化作用减弱。

关键词：肾小球肾炎 IgA 转化生长因子β1 骨形成蛋白7 纤维化

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