检索结果-内蒙古大学图书馆

中国病理生理杂志 2014年第5期30卷 876-880页

作者：朱晓彤杨瑞周露婷张晔李玲章卫平施广霞陈玉霞第二军医大学基础部病理生理学教研室上海200433 大连医科大学病理生理学教研室辽宁大连116044

目的:构建含锌指蛋白ZBTB20基因的重组腺病毒载体,以研究锌指蛋白ZBTB20的生物学功能。方法:将带有FLAG标签的ZBTB20 cDNA片段(ZBTB20-FLAG)克隆至pAdTrack-CMV载体,将该载体与pAdEasy质粒进行细菌内同源重组从而获得重组腺病毒载体pAd-... 详细信息

目的:构建含锌指蛋白ZBTB20基因的重组腺病毒载体,以研究锌指蛋白ZBTB20的生物学功能。方法:将带有FLAG标签的ZBTB20 cDNA片段(ZBTB20-FLAG)克隆至pAdTrack-CMV载体,将该载体与pAdEasy质粒进行细菌内同源重组从而获得重组腺病毒载体pAd-ZBTB20,之后在293细胞中进行包装以及扩增,并对病毒滴度进行检测;采用肝脏组织特异性ZBTB20基因敲除小鼠的原代肝细胞和肝脏组织模型,分别于离体和在体水平鉴定所制备的重组腺病毒Ad-ZBTB20介导的ZBTB20蛋白表达情况;并采用报告基因技术检测过表达的ZBTB20蛋白的功能活性。结果:成功制备了锌指蛋白ZBTB20重组腺病毒,该重组腺病毒感染原代肝细胞和小鼠肝脏组织能过表达ZBTB20蛋白,并且此ZBTB20蛋白能抑制其下游靶基因甲胎蛋白的转录。结论:所构建的ZBTB20重组腺病毒可以介导ZBTB20的过表达并具备转录调节活性,为今后研究ZBTB20的相关生物学功能奠定了基础。

关键词：含锌指和BTB区蛋白20 重组腺病毒甲胎蛋白类转录调节

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中枢一氧化氮对心血管作用的多样性研究

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第二军医大学学报 2012年第7期33卷 718-720页

作者：章汝文沈镀孙巍巍王杨凯白洁袁文俊王伟忠第二军医大学基础部生理学教研室上海200433 宁夏医科大学基础医院院生理系银川750004 第二军医大学基础部计算机教研室上海200433

目的观察一氧化氮(nitric oxide,NO)在心血管中枢孤束核(NTS)和头端延髓腹外侧区(RVLM)内的心血管作用特点,从而明确其在介导中枢心血管功能调控中的意义。方法采用微量注射的方法观察麻醉SD大鼠NTS和RVLM增加或降低NO后动物血压、心率... 详细信息

目的观察一氧化氮(nitric oxide,NO)在心血管中枢孤束核(NTS)和头端延髓腹外侧区(RVLM)内的心血管作用特点,从而明确其在介导中枢心血管功能调控中的意义。方法采用微量注射的方法观察麻醉SD大鼠NTS和RVLM增加或降低NO后动物血压、心率和肾交感神经活动的变化。结果在麻醉SD大鼠模型上,在心血管反射传入的中继站NTS内微量注射NO前体L-精氨酸(L-Arg,2nmol/50nl)能降低基础血压、心率和肾交感神经活动(P<0.05),而注射NO合酶(NOS)抑制剂NG-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME,10nmol/50nl)能增加心血管功能(P<0.05)。在交感输出的关键区域RVLM注射L-Arg(2nmol/100nl)能增加血压、心率和交感神经活动(P<0.05),而给予L-NAME(10nmol/100nl)则抑制心血管功能(P<0.05)。结论 NO在不同的心血管中枢中具有不同的作用,提示其多样性效应对维持基础心血管功能具有特定的意义。

关键词：一氧化氮孤束核头端延髓腹外侧区血压

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牛蒡苷抗炎和解热作用研究

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药物评价研究 2013年第6期36卷 422-425页

作者：张淑雅王小萍陈昕芦晓红张宏裴秀英宁夏医科大学生育力保持教育部重点实验室/生物化学与分子生物学系宁夏银川750004 宁夏医科大学总医院药剂科宁夏银川750004 第二军医大学药学院药用植物学教研室上海200433

目的研究牛蒡苷的抗炎和解热作用,为牛蒡苷及牛蒡子的临床应用提供依据。方法应用小鼠耳廓肿胀模型、大鼠肉芽肿和弗氏完全佐剂模型观察牛蒡苷对急慢性炎症的影响,采用大肠杆菌内毒素发热家兔模型观察牛蒡苷的解热作用。结果牛蒡苷在60... 详细信息

目的研究牛蒡苷的抗炎和解热作用,为牛蒡苷及牛蒡子的临床应用提供依据。方法应用小鼠耳廓肿胀模型、大鼠肉芽肿和弗氏完全佐剂模型观察牛蒡苷对急慢性炎症的影响,采用大肠杆菌内毒素发热家兔模型观察牛蒡苷的解热作用。结果牛蒡苷在60、120、240 mg/kg剂量下显著减轻二甲苯所致小鼠耳廓肿胀,减少大鼠肉芽组织增生,明显降低发热家兔体温,但并不改善佐剂性关节炎大鼠足关节肿胀程度。结论牛蒡苷具有良好的抗急性炎症和解热作用。

关键词：牛蒡苷炎症发热

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AntiMRP3(scFv)-sTRAIL靶向诱导多形性成胶质细胞瘤的凋亡

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中国肿瘤生物治疗杂志 2012年第3期19卷 261-266页

作者：倪长伟郎悦赵辰阳苏静乐媛王梁华尹剑大连医科大学附属第二医院神经内科辽宁大连116027 大连医科大学附属第二医院神经外科辽宁大连116027 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433

目的:观察抗人类多药耐药相关蛋白3(multidrug resistance protein 3,MRP3)的单链抗体与可溶性坏死因子相关凋亡诱导配体(soluble TNF-related apoptosis inducing ligand,sTRAIL)的融合蛋白antiMRP3(scFv)-sTRAIL对多形性成胶质细胞瘤(glioblastoma multiforme,GBM)U251细胞凋亡的影响,并探讨其机制。方法:MTT法检测不同浓度antiMRP3(scFv)-sTRAIL(3.9063～250 nmol/L)作用后U251细胞的存活率。给予亲代antiMRP3(scFv)或TRAIL活性中和抗体mAb 2E5预孵育,应用IC50剂量的antiMRP3(scFv)-sTRAIL作用U251细胞,流式细胞仪检测U251细胞的凋亡率,Western blotting检测U251细胞中caspase-3的激活及其关键底物DNA裂解因子(DNA fragmentation factor,DFF)的降解。结果:随着antiMRP3(scFv)-sTRAIL浓度的增加,U251细胞的存活率逐渐降低[(84.84±0.2)%～(19.93±1.8)%];IC50剂量(62.5 nmol/L)的antiMRP3(scFv)-sTRAIL单独或给予antiMRP3(scFv)、mAb 2E5预孵育后处理,致U251细胞的凋亡率分别为(58.0±1.3)%、(14.9±1.7)%和(17.4±3.0)%;antiMRP3(scFv)或mAb 2E5预孵育均可阻断U251细胞中antiMRP3(scFv)-sTRAIL诱导的caspase-3的激活及DFF的裂解。结论:AntiMRP3(scFv)-sTRAIL促进sTRAIL靶向识别并诱导GBM细胞凋亡,为开发靶向性抗肿瘤药物奠定了基础。

关键词：多形性成胶质细胞瘤单链抗体多药耐药相关蛋白3 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体

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HIV-1 HXB2株蛋白酶的原核表达、纯化及其Gag蛋白CAP2NC的切割活性分析

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第二军医大学学报 2008年第4期29卷 365-370页

作者：陈铭潘欣贾建安何俊蒋少华陈璐姚静娟陈秋莉曹洁潘卫第二军医大学基础部微生物学教研室上海200433 安徽医科大学病理学教研室合肥230032 第二军医大学长征医院感染科上海200003

目的:原核表达、纯化HIV-1型HXB2株蛋白酶(protease,PR),用于对HIV-1 Gag P2/NC蛋白酶切割位点序列随机突变的噬菌体展示文库的切割筛选及构建新的蛋白酶抑制剂(protease inhibitor,PI)类药物体外筛选模型。方法:根据HIV-1 HXB2株PR DN... 详细信息

目的:原核表达、纯化HIV-1型HXB2株蛋白酶(protease,PR),用于对HIV-1 Gag P2/NC蛋白酶切割位点序列随机突变的噬菌体展示文库的切割筛选及构建新的蛋白酶抑制剂(protease inhibitor,PI)类药物体外筛选模型。方法:根据HIV-1 HXB2株PR DNA序列设计引物,在PR序列上游添加自切割位点MGTVSFNF 8个氨基酸编码获得PR107 DNA编码序列,将PR107 DNA克隆至原核表达载体pET-32a,序列测定后转化大肠杆菌BL21 DE3进行诱导表达。表达产物经用Ni-NTA亲和柱纯化,经复性后,进行靶蛋白CAP2NC切割试验,SDS-PAGE检测切割结果。结果:成功合成了使用大肠杆菌偏好密码子的HIV-1 PRl07的DNA编码序列,序列测定显示其编码氨基酸序列与原始序列完全一致;成功构建了HIV-1 PR原核表达质粒pETa2a—PR107,转化大肠杆菌BL21 DE3经IPTG诱导后,表达出相对分子质量为30 000的HIV-1 PR融合蛋白,纯化的目的蛋白浓度为2.54 mg/ml;纯化蛋白经复性后具有对底物蛋白CAP2NC的切割活性,该作用能被PI药物抑制。结论:成功构建大肠杆菌偏好密码子带自切割位点的HIV-1 PR原核表达载体pET32a—PR107,在大肠杆菌中表达,经纯化复性获得了具有切割活性的HIV-1 PR融合蛋白。

关键词： HIV 蛋白酶基因表达切割

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骆驼蓬属植物种子中去氢骆驼蓬碱和骆驼蓬碱的HPLC-荧光检测法测定

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中国医药工业杂志 2008年第6期39卷 443-446页

作者：程雪梅刘玉琴谢惠定王长虹王峥涛上海中药标准化研究中心上海中医药大学中药研究所中药标准化教育部重点实验室上海201203 新疆医科大学第二附属医院药剂科新疆乌鲁木齐830028 昆明医学院基础医学院化学教研室云南昆明650031

建立了HPLC-荧光检测法测定不同产地骆驼蓬、骆驼蒿、多裂骆驼蓬种子(共15个样品)中去氢骆驼蓬碱(1)和骆驼蓬碱(2)的含量。采用C18色谱柱,以乙腈-醋酸铵缓冲液(19∶81)为流动相,激发波长为250nm、发射波长为460nm。结果显示,骆驼蓬中1... 详细信息

建立了HPLC-荧光检测法测定不同产地骆驼蓬、骆驼蒿、多裂骆驼蓬种子(共15个样品)中去氢骆驼蓬碱(1)和骆驼蓬碱(2)的含量。采用C18色谱柱,以乙腈-醋酸铵缓冲液(19∶81)为流动相,激发波长为250nm、发射波长为460nm。结果显示,骆驼蓬中1的含量(3.6%～5.0%)高于2(2.8%～3.5%);多裂骆驼蓬则相反,1、2的含量分别为1.6%～2.0%和2.3%～3.1%;骆驼蒿中2的含量较高(4.4%),但1含量低于检测限。

关键词：骆驼蓬骆驼蒿多裂骆驼蓬去氢骆驼蓬碱骆驼蓬碱高效液相色谱-荧光检测测定

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体外鉴定汉坦病毒包膜糖蛋白G2与β3整合素的相互作用

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生物技术通报 2008年第5期24卷 136-139页

作者：郭进军李青岭周倩云曾爱忠黄爱龙重庆医科大学附属第二医院消化内科重庆医科大学附属第二医院病毒性肝炎研究所感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆400016 重庆医科大学附属第二医院病毒性肝炎研究所感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室重庆400016

根据汉坦病毒76-118株M基因和β3整合素基因序列设计引物,分别以质粒M56和Hela细胞cDNA为模板通过PCR扩增和基因重组获得G2蛋白膜外区81～140片段的GST融合表达质粒以及β3整合素膜外区23～133片段FLAG融合表达质粒。通过SDS-PAGE检测G... 详细信息

根据汉坦病毒76-118株M基因和β3整合素基因序列设计引物,分别以质粒M56和Hela细胞cDNA为模板通过PCR扩增和基因重组获得G2蛋白膜外区81～140片段的GST融合表达质粒以及β3整合素膜外区23～133片段FLAG融合表达质粒。通过SDS-PAGE检测G2片段在BL21表达菌中诱导表达及纯化的效果,Western blot检测β3整合素片段在真核细胞中的表达。将在BL21裂解上清中表达的G2蛋白N端81～140位氨基酸片段(G2N81～140)纯化后与经过GST蛋白预处理的含有β3整合素片段的细胞裂解上清进行孵育,同时以未做任何转染的HEK293细胞裂解上清和无关蛋白GST-TLM作为阴性对照,通过GSTPull-down验证G2蛋白与β3整合素之间的相互作用。结果显示在Pull-down所获蛋白复合物中检测到β3整合素27～133位氨基酸片段产物的存在。结果表明G2蛋白与β3整合素之间可能存在有直接的相互作用,为β3整合素作为汉坦病毒细胞膜受体提供了进一步证据。

关键词：汉坦病毒受体包膜糖蛋白G2 β3整合素 GST Pull—down

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一个约30kD膜蛋白作为汉坦病毒候选受体的筛选

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生物技术通报 2008年第4期24卷 125-129页

作者：李青岭冯涛郭进军黄爱龙重庆医科大学附属第二医院病毒性肝炎研究所感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆400016 重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室重庆400016

目的:筛选汉坦病毒包膜糖蛋白G2可能的候选受体或受体辅助分子,方法:根据汉坦病毒76～118株M基因序列设计引物,PCR扩增和基因重组获得G2全长及各功能片段的GST融合表达质粒,SDS-PAGE检测它们在BL21菌中诱导表达及纯化的效果。生物素标... 详细信息

目的:筛选汉坦病毒包膜糖蛋白G2可能的候选受体或受体辅助分子,方法:根据汉坦病毒76～118株M基因序列设计引物,PCR扩增和基因重组获得G2全长及各功能片段的GST融合表达质粒,SDS-PAGE检测它们在BL21菌中诱导表达及纯化的效果。生物素标记汉坦病毒易感细胞Vero E6和非允许细胞CHO的细胞膜蛋白。将在BL21裂解上清中有表达的G2蛋白N端81～140位氨基酸片段(G2N81-140)纯化后与含有生物素标记的Vero E6细胞膜裂解液进行孵育,同时以非允许细胞CHO和无关蛋白GST-TLM做为阴性对照,通过GST Pull-down分离与G2蛋白特异性结合的细胞膜蛋白。结果:一个约30kD的Vero E6细胞膜蛋白与G2N81～140片段之间存在着特异性的相互作用。结论:该30kD蛋白可能是汉坦病毒细胞膜候选受体或受体辅助分子之一,是病毒入侵细胞的一个相关分子。

关键词：汉坦病毒受体包膜糖蛋白G2 GST Pull-down生物素膜标记

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诺帝滴眼液抑制碱烧伤诱导大鼠角膜新生血管分子机制的初步研究

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医学分子生物学杂志 2008年第6期5卷 519-523页

作者：刘丹宁樊继山谢汉平第三军医大学西南医院全军眼科中心重庆市400038 重庆医科大学附属第二医院眼科重庆市400010 第三军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室重庆市400038

目的初步探索0.1%诺帝滴眼液对角膜新生血管(corneal neovascularization,CRNV)抑制作用的分子机制。方法建立大鼠碱烧伤角膜新生血管模型,分空白溶液组、0.1%诺帝滴眼液组、0.1%地塞米松滴眼液组。采用免疫组化及RT-PCR法检测VEGF、fl... 详细信息

目的初步探索0.1%诺帝滴眼液对角膜新生血管(corneal neovascularization,CRNV)抑制作用的分子机制。方法建立大鼠碱烧伤角膜新生血管模型,分空白溶液组、0.1%诺帝滴眼液组、0.1%地塞米松滴眼液组。采用免疫组化及RT-PCR法检测VEGF、flk-1蛋白及mRNA表达。结果治疗组及地塞米松组VEGF蛋白表达少于空白溶液组(P<0.05)。7d、14d VEGF mRNA抑制率分别为:治疗组58.60%,74.60%;地塞米松组76.88%,80.95%。flk-1 mRNA抑制率:治疗组66.27%,69.63%;地塞米松组72.16%,74.81%。结论0.1%诺帝滴眼液明显降低角膜VEGF和其受体flk-1 mRNA蛋白表达,通过下调VEGF受体量,间接减少VEGF受体后信号转导及效应蛋白合成,抑制了CRNV的发生。

关键词：诺帝角膜新生血管血管内皮生长因子血管内皮生长因子受体

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观赏獐牙菜中的三萜内酯成分研究

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中草药 2007年第11期38卷 1619-1622页

作者：肖怀陆阳何正春刘光明云南大理学院药学院云南大理671000 上海第二医科大学化学教研室上海200025

目的研究云南抗肝炎民族药观赏獐牙菜Swertia decora的化学成分,寻找生物活性物质。方法用系统溶剂提取,常规的硅胶柱色谱和薄层色谱进行分离纯化,根据化合物的理化性质、UV、MS、NMR、HMPC等波谱手段鉴定其结构。结果从观赏獐牙菜的低... 详细信息

目的研究云南抗肝炎民族药观赏獐牙菜Swertia decora的化学成分,寻找生物活性物质。方法用系统溶剂提取,常规的硅胶柱色谱和薄层色谱进行分离纯化,根据化合物的理化性质、UV、MS、NMR、HMPC等波谱手段鉴定其结构。结果从观赏獐牙菜的低极性部分分离得到内酯类、三萜类、甾体类等化合物,分别鉴定为3β-羟基-11α,12α-环氧齐墩果-28,13β-内酯(3β-hydroxy-11α,12α-epoxyoleanan-28,13β-olide,Ⅰ)、β-胡萝卜苷(β-daucos-terol,Ⅱ)、齐墩果酸(oleanolic acid,Ⅲ)和红百金花内酯(erythrocentaurin,Ⅳ)。结论化合物Ⅰ为首次从獐牙菜属植物中分离得到,我们对其部分碳谱数据归属作了修证。其它化合物则首次从观赏獐牙菜中分离得到。

关键词：观赏獐牙菜三萜 3β-羟基-11α,12α-环氧齐墩果-28,13β-内酯

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