检索结果-内蒙古大学图书馆

中华老年医学杂志 2005年第11期24卷 822-824页

作者：庞小芬巩云霞许勇陆顺元孔辉盛红沈倍倍王铸刚上海第二医科大学附属瑞金医院老年病科上海市200025 上海第二医科大学医学遗传学教研室

目的探讨骨保护蛋白(OPG)在增龄、去卵巢小鼠和骨质疏松患者血清中的变化。方法应用双能X线骨密度仪和酶联免疫法分别测定增龄、去卵巢小鼠及骨质疏松症患者骨密度和血清OPG水平。结果去卵巢小鼠的骨密度显著低于增龄小鼠〔分别为(0.151... 详细信息

目的探讨骨保护蛋白(OPG)在增龄、去卵巢小鼠和骨质疏松患者血清中的变化。方法应用双能X线骨密度仪和酶联免疫法分别测定增龄、去卵巢小鼠及骨质疏松症患者骨密度和血清OPG水平。结果去卵巢小鼠的骨密度显著低于增龄小鼠〔分别为(0.151±0.008)和(0.160±0.007)g/cm2,P<0.01〕,两组骨密度值均较成年鼠低(P<0.01);去卵巢小鼠血清OPG水平(20.57±7.00)pmol/L显著高于增龄小鼠(15.39±2.86)pmol/L,P<0.01;骨密度值与OPG浓度呈显著负相关(r=-0.246,P<0.05)。老年骨质疏松症患者血清OPG浓度男性和女性分别为(10.77±3.14)pmol/L和(10.56±2.56)pmol/L,均显著高于健康人〔男性和女性分别为(6.55±0.87)pmol/L(、9.19±1.73)pmol/L,P<0.01〕;血清OPG与年龄呈显著正相关(r=0.656,P<0.01)。结论血清OPG水平在骨质疏松小鼠模型和老年骨质疏松患者中均与骨密度或年龄密切相关,表明OPG浓度升高在老年绝经后骨质疏松的发病中具有重要作用。

关键词：骨质疏松骨密度骨细胞

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BPOZ基因纯合缺失ES细胞系的建立及其生长和分化研究

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中国生物化学与分子生物学报 2005年第6期21卷 801-806页

作者：项佑贵党素英许勇王龙孙霞费俭傅继梁王铸钢上海第二医科大学医学遗传学教研室上海200025 上海南方模式生物研究中心上海201203

研究BPOZ基因缺失对细胞生长和分化的影响.以高浓度的G418筛选BPOZ基因杂合缺失型ES细胞,PCR鉴定抗高浓度G418细胞克隆基因型;半定量RTPCR分析3种基因型ES细胞BPOZ基因的表达情况,分析3种基因型ES细胞Oct34基因的表达以明确ES细胞分化状... 详细信息

研究BPOZ基因缺失对细胞生长和分化的影响.以高浓度的G418筛选BPOZ基因杂合缺失型ES细胞,PCR鉴定抗高浓度G418细胞克隆基因型;半定量RTPCR分析3种基因型ES细胞BPOZ基因的表达情况,分析3种基因型ES细胞Oct34基因的表达以明确ES细胞分化状态.利用3种基因型ES细胞进行细胞生长曲线和3H胸嘧啶核苷参入实验比较其生长速度和增殖能力.以裸鼠荷瘤实验和类胚体形成实验比较BPOZ基因纯合缺失型ES细胞与野生型ES细胞生长分化能力.结果表明,筛选获得两个BPOZ基因剔除的纯合ES细胞克隆;筛选得到的纯合ES细胞中BPOZ基因表达完全缺失,细胞处未分化状态.与野生型ES细胞相比,BPOZ基因纯合缺失型ES细胞生长受抑,增殖能力减弱.BPOZ基因纯合缺失型ES细胞可分化形成类胚体和具备来自3个不同胚层的细胞和组织的畸胎瘤.BPOZ基因剔除使ES细胞生长受抑,对ES细胞分化发育没有明显影响.

关键词： BPOZ 基因纯合缺失 ES细胞生长分化

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一种新的垂体分泌蛋白Mimecan原核表达、抗体制备及其在垂体瘤组织中的表达(英文)

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中国生物化学与分子生物学报 2005年第1期21卷 13-18页

作者：胡三梅陈凤玲陈天钦叶廷军李荣英史文静宋怀东陆振虞上海第二医科大学医学遗传学教研室上海第二医科大学附属瑞金医院上海内分泌研究所上海第二医科大学附属瑞金医院病理科上海200025

Mimecan osteoglycin是一种分泌型蛋白质 ,目前其功能尚不明确 .从人垂体cDNA中克隆到OIF基因并构建成重组表达质粒pGEX 5X 2 mimecan ,将此重组表达质粒转化大肠杆菌BL2 1(DE3)后用IPTG诱导 ,成功表达了一种分子量约为 38kD融合蛋白 ... 详细信息

Mimecan osteoglycin是一种分泌型蛋白质 ,目前其功能尚不明确 .从人垂体cDNA中克隆到OIF基因并构建成重组表达质粒pGEX 5X 2 mimecan ,将此重组表达质粒转化大肠杆菌BL2 1(DE3)后用IPTG诱导 ,成功表达了一种分子量约为 38kD融合蛋白 ,约占菌体总蛋白的 30 %～ 4 0 % .此融合蛋白经纯化分离后免疫新西兰大白兔以制备多克隆抗体 .用Western印迹法检测兔的抗血清 .结果显示 ,该多克隆抗体有较好的针对mimecan蛋白的专一性并且效价较高 ,可用于对mimecan的功能研究 .用此多克隆抗体检测到在某些种类的人垂体瘤组织中mimecan表达极高 ,提示可能存在新的垂体瘤类型 .

关键词： mimecan/osteoglycin GST融合蛋白多克隆抗体垂体瘤

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hOPG基因启动子驱动报告基因LacZ的转基因小鼠模型的建立

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中国生物工程杂志 2005年第11期25卷 12-15页

作者：许勇项佑贵严兰珍王龙徐国江费俭傅继粱王铸钢上海第二医科大学医学遗传学教研室上海201203 上海南方模式生物研究中心上海201203

目的:建立带有人类骨保护素OPG基因启动子驱动报告基因LacZ的转基因小鼠模型,为OPG体内转录水平的表达调控研究和药物筛选创造条件。方法:将克隆到的人类OPG基因5′端上游6.0kb非翻译序列作为启动子,大肠杆菌编码β半乳糖苷酶的LacZ基... 详细信息

目的:建立带有人类骨保护素OPG基因启动子驱动报告基因LacZ的转基因小鼠模型,为OPG体内转录水平的表达调控研究和药物筛选创造条件。方法:将克隆到的人类OPG基因5′端上游6.0kb非翻译序列作为启动子,大肠杆菌编码β半乳糖苷酶的LacZ基因作为报告基因,构建表达载体pCINeoOPGLacZ。经显微操作注射到受精卵原核中,经PCR以及Southern印迹杂交鉴定转基因阳性小鼠;用RTPCR分析LacZ在组织中的表达;利用邻硝基苯βD半乳吡喃糖苷(ONPG)作为底物反应后比色分析组织中的β半乳糖苷酶活性。结果:构建完成的表达载体pCINeoOPGLacZ质粒经酶切和测序鉴定序列正确,线性化后显微注射。PCR以及Southern印迹杂交鉴定获得了10只转基因小鼠(Founders),经交配繁育,建立了5个转基因小鼠系,RTPCR分析表明其中一个系小鼠组织中表达LacZ基因,与内源OPG表达模式一致,组织中可以广泛检测到相应的β半乳糖苷酶活性。结论:成功建立了人类OPG基因启动子驱动报告基因LacZ的转基因小鼠,为体内研究OPG转录水平的表达及药物筛选提供了理想的动物模型。

关键词：人类骨保护素启动子报告基因转基因小鼠

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PC-1转基因小鼠的建立及其与2型糖尿病发病的关系

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中华内分泌代谢杂志 2005年第6期21卷 554-556页

作者：王毅骆惠均王芳张丽君马志敏孔辉王龙陆振虞王铸钢 200025 上海第二医科大学医学遗传学教研室医学与分子遗传学实验室大理学院南方模式生物研究中心

目的探讨PC-1基因高表达与肥胖、胰岛素抵抗及2型糖尿病的关系.方法构建pcDNA3.1/PC-1转基因质粒,经显微注射的方法获得G0代转基因小鼠;用PCR、Southern印迹、RT-PCR和Western印迹方法检测PC-1转基因小鼠的基因组整合和组织表达;对转基... 详细信息

目的探讨PC-1基因高表达与肥胖、胰岛素抵抗及2型糖尿病的关系.方法构建pcDNA3.1/PC-1转基因质粒,经显微注射的方法获得G0代转基因小鼠;用PCR、Southern印迹、RT-PCR和Western印迹方法检测PC-1转基因小鼠的基因组整合和组织表达;对转基因小鼠进行腹腔葡萄糖耐量试验(IPGTT)和胰岛素耐量试验(ITT).结果测序证明克隆的PC-1 cDNA序列与GenBank相应序列相比无误,转基因质粒中PC-1插入方向正确;鼠尾基因组DNA PCR和Southern印迹表明共获得8个PC-1转基因阳性的G0代小鼠,分别与野生型C57BL/6J小鼠交配后获得5个F1代PC-1转基因小鼠系;RT-PCR、Western印迹证实该基因在2个单系的骨骼肌和肝组织中有稳定表达;与野生型小鼠相比,转基因阳性小鼠的体重、空腹血糖、IPGTT和ITT结果无明显变化.结论成功构建稳定表达PC-1基因的转基因小鼠系,研究结果表明该基因在相关组织中的高表达不足以触发肥胖、胰岛素抵抗或2型糖尿病的发生.

关键词： PC-1基因小鼠,转基因糖尿病,2型

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潮霉素和新霉素抗性基因转基因小鼠的建立及其表达研究

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生物工程学报 2005年第1期21卷 159-162页

作者：党素英麻孙恺孙霞严兰珍王铸钢上海南方模式生物研究中心上海201203 上海第二医科大学医学遗传学教研室上海200025 上海南方模式生物研究中心上海201203

建立潮霉素(hygromycin,hyg)和新霉素(neomycin,neo)抗性基因转基因小鼠系,以获得两种抗性基因同时表达的小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs),为条件性基因剔除或小鼠胚胎干细胞克隆的筛选创造条件.将pTK-hygR-pA,PGK-neoR-pA两个转录单元分别克... 详细信息

建立潮霉素(hygromycin,hyg)和新霉素(neomycin,neo)抗性基因转基因小鼠系,以获得两种抗性基因同时表达的小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs),为条件性基因剔除或小鼠胚胎干细胞克隆的筛选创造条件.将pTK-hygR-pA,PGK-neoR-pA两个转录单元分别克隆至pBluescript载体中获得hygR-neoR双抗性基因表达质粒,以Kpn Ⅰ和Xba Ⅰ双酶切,回收4245bp串联基因片段,经显微注射获得HygR-neoR转基因小鼠.PCR及Southern blot鉴定转基因小鼠基因型;RT-PCR检测hygR、neoR基因在转基因阳性小鼠组织及MEFs中的表达.经显微注射共获得7只转基因阳性小鼠(Founders,G0代),经交配繁育,建立了6个转基因小鼠系.RT-PCR检测其中5个转基因阳性小鼠系F1代杂合子成年雌性小鼠肝脏、卵巢组织中hygR、neoR基因的表达,发现hn30,hn33,hn66和hn67系阳性小鼠的1种或2种组织中有hygR、neoR的表达;RT-PCR检测发现hyg和neo抗性基因在从h30和hn66系分离培养的MEFs中表达.通过显微注射,建立了表达hyg-neo抗性基因的转基因小鼠系,转基因表达检测发现两个转基因小鼠系的胚胎成纤维细胞中表达双抗性基因.

关键词：潮霉素抗性基因新霉素抗性基因转基因小鼠小鼠胚胎成纤维细胞

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多发性骨性连接综合征及其相关疾病的遗传学研究进展

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国外医学（遗传学分册） 2005年第4期28卷 221-223页

作者：顾鸣敏王铸钢上海第二医科大学医学遗传学教研室 200025

多发性骨性连接综合征及近端指/趾关节黏连症等为一组常染色体显性遗传的骨发育不全病。这组疾病大多与NOG基因的突变有关,但也存在一些遗传异质性。本文主要综述这组疾病在临床分型及遗传学研究方面的进展。

关键词：多发性骨性连接综合征 NOG基因突变遗传异质性遗传学研究相关疾病骨性连接综合征多发性常染色体显性遗传骨发育不全

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Annexin B1单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立和特性鉴定

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第二军医大学学报 2005年第12期26卷 1347-1349页

作者：高远舰王俊霞王凯慧张毅颜宏利孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433 河北医科大学实验动物中心石家庄050017

目的:制备抗Annexin B1单克隆抗体,为进一步研究Annexin B1的生理功能奠定基础。方法:制备了具有抗原性的Annexin B1,并采用脾内包埋法免疫小鼠,无菌取出脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,随后以ELISA方法和有限稀释法进行3次筛选和亚... 详细信息

目的:制备抗Annexin B1单克隆抗体,为进一步研究Annexin B1的生理功能奠定基础。方法:制备了具有抗原性的Annexin B1,并采用脾内包埋法免疫小鼠,无菌取出脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,随后以ELISA方法和有限稀释法进行3次筛选和亚克隆。结果:用杂交瘤技术,我们获得了1株杂交瘤细胞株,能稳定地分泌高滴度的针对Annexin B1的特异单抗。结论:成功筛选并制备了Annexin B1的特异单抗,为下一步功能研究打下了良好的基础。

关键词：膜联蛋白B1 杂交瘤单克隆抗体

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卡介菌基因组DNA制备工艺研究

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中国生物制品学杂志 2005年第1期18卷 36-38页

作者：王静胡振林周凤娟凌亦凌孙树汉河北医科大学病理生理教研室石家庄050017 第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的　摸索制备高纯度卡介菌 (MycobacteriumbovisBacillusCalmette Gu啨ｒｉｎ ,BCG)基因组DNA(BCG -DNA)的制备工艺。方法　采用超声破碎结核杆菌 ,加热使蛋白变性初步去除菌体蛋白 ,进一步经蛋白酶消化 ,乙醇沉淀DNA组分 ,再经离子... 详细信息

目的　摸索制备高纯度卡介菌 (MycobacteriumbovisBacillusCalmette Gu啨ｒｉｎ ,BCG)基因组DNA(BCG -DNA)的制备工艺。方法　采用超声破碎结核杆菌 ,加热使蛋白变性初步去除菌体蛋白 ,进一步经蛋白酶消化 ,乙醇沉淀DNA组分 ,再经离子交换和凝胶过滤层析 ,去除残余菌体蛋白和多糖 ,精制DNA ,并进行质量检测。结果　所制备的BCG -DNA片段大小介于 2 0 0～ 2 5 0bp之间 ,纯度大于 95 % ,蛋白含量占 0 . 1% ,多糖残留占 3 .5 %。结论此方法制备的BCG- DNA纯度较高 ,且无有机溶剂残留 ,适用于BCG DNA制备。

关键词： BCG 卡介菌多糖结核杆菌超声 DNA 酶消化制备工艺高纯度去除

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AML1-ETO转基因小鼠的建立及初步表型分析

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诊断学理论与实践 2005年第2期4卷 133-136页

作者：柳子星马志敏顾鸣敏孔辉王龙匡颖徐国江费俭王铸钢上海第二医科大学医学遗传学教研室上海200025 云南大理学院遗传学教研室大理671000 上海南方模式生物研究中心上海201203

目的:建立AM L1-ETO融合基因转基因小鼠,在整体动物水平研究AM L1-ETO融合蛋白在白血病发病中所起的作用。方法:构建hCG/AM L1-ETO转基因质粒,通过显微注射将该质粒转入小鼠受精卵中,植入假孕母鼠输卵管,获得G0代转基因小鼠;用聚合酶链... 详细信息

目的:建立AM L1-ETO融合基因转基因小鼠,在整体动物水平研究AM L1-ETO融合蛋白在白血病发病中所起的作用。方法:构建hCG/AM L1-ETO转基因质粒,通过显微注射将该质粒转入小鼠受精卵中,植入假孕母鼠输卵管,获得G0代转基因小鼠;用聚合酶链反应(PCR)方法检测融合基因的整合情况,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测融合基因的表达情况和组织表达谱。结果:PCR法共检出10只G0代转基因阳性小鼠,其中8个系均产下F1代小鼠,由此建立了8个AM L1-ETO转基因小鼠系。RT-PCR法证实AM L1-ETO融合基因在22系中稳定表达,但血常规、肝脏、脾脏等组织未见异常变化;对该系小鼠的组织表达谱检测表明,融合基因在肝脏、脾脏、心脏和肌肉组织存在不同程度的表达,但在脑组织中不表达。结论:AM L1-ETO融合基因能在转基因小鼠的骨髓等组织中表达,但尚不足以引发白血病,推测其他致病基因在小鼠白血病的发生中也起一定作用。

关键词：转基因小鼠 AML1-ETO融合基因逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR) 表型分析聚合酶链反应(PCR) RT-PCR法组织表达谱初步小鼠白血病融合蛋白基因质粒显微注射表达情况稳定表达异常变化不同程度肌肉组织致病基因受精卵

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