检索结果-内蒙古大学图书馆

噬菌体展示protein A及protein L Ig结合单结构域随机组合文库及Ig亲和筛选

生物化学与生物物理进展 2005年第6期32卷 535-543页

作者：徐容沈毅臖邓松华蔡春晓陈秋莉贾建安王锦红潘欣潘卫安徽医科大学病理生理学教研室合肥230032 第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433

ProteinA和proteinL是细菌产生的两种结构和功能均不同的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)结合分子,在细菌的致病中起重要作用.用含SacⅠ位点的特定引物PCR分别扩增制备proteinA的A、B、C、D抗体结合结构域和proteinL的B3抗体结合结构域,... 详细信息

ProteinA和proteinL是细菌产生的两种结构和功能均不同的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)结合分子,在细菌的致病中起重要作用.用含SacⅠ位点的特定引物PCR分别扩增制备proteinA的A、B、C、D抗体结合结构域和proteinL的B3抗体结合结构域,各结构域DNA片段经SacⅠ酶切后,再随机连接形成各种不同长度的分子组合文库,将该文库呈现在噬菌体表面构建了噬菌体展示Ig结合分子单结构域随机组合文库,所建组合文库容量为2.3×106个菌落形成单位,滴度为4.1×1011TU/ml,包含各种单结构域片段,并以随机方式连接.用人Ig对该文库进行4轮亲和筛选,随机挑选36个代表性的阳性克隆进行序列测定分析表明,亲和筛选获得了多种非天然形式存在的新的Ig结合分子结构,其中32个克隆具有由proteinL的单结构域和proteinA的单结构域间隔重复排列而成的特征性(MDPL-MDPA)n结构.对噬菌体展示Ig结合分子单结构域随机组合文库的体外分子进化研究的尝试,为Ig结合分子的结构和功能研究提供了一新的途径,也为Ig结合分子的定向改造打下基础.

关键词：噬菌体展示分子进化结构域组合文库 protein A protein L

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生长因子与软骨细胞-胶原海绵复合体联合应用修复软骨缺损的研究

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中华老年医学杂志 2005年第11期24卷 847-850页

作者：朱如里董英海高学纯王明丽卢晓林刘淑恒张之栋安徽医科大学第一附属医院骨科上海第二医科大学附属仁济医院骨科安徽医科大学微生物教研室

目的研究在体条件下碱性成纤维生长因子(bFGF)与软骨细胞-胶原海绵复合体联合应用修复软骨缺损的疗效。方法取3日龄异体幼兔膝关节软骨细胞,体外培养后接种在胶原海绵支架上,再做移植。同一大白兔双侧膝关节内外髁分为4组:空白对照组、... 详细信息

目的研究在体条件下碱性成纤维生长因子(bFGF)与软骨细胞-胶原海绵复合体联合应用修复软骨缺损的疗效。方法取3日龄异体幼兔膝关节软骨细胞,体外培养后接种在胶原海绵支架上,再做移植。同一大白兔双侧膝关节内外髁分为4组:空白对照组、软骨细胞-胶原海绵复合体移植组(复合体移植组)、bFGF应用组和软骨细胞-胶原海绵复合体与bFGF联合应用组。移植术后不同时间分批处死,进行大体、光镜和电镜观察。结果移植术后12周联合应用组软骨缺损修复以完全修复为主,而复合体移植组以不完全修复为主,差异有统计学意义;20周时2组均得到修复,差异无统计学意义,组织学分析均为软骨组织;在不同时间点空白对照组和单纯bFGF应用组软骨缺损修复差异无统计学意义,但组织学上修复的组织,前者为纤维组织,而后者同时有软骨组织存在。结论bFGF在软骨组织工程中有促进软骨缺损早期修复的作用。

关键词：成纤维生长因子2 软骨细胞胶原Ⅰ型关节软骨

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HIV-1 Gag蛋白P2/NC蛋白酶切割位点序列的随机化及噬菌体展示

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第二军医大学学报 2005年第11期26卷 1243-1247页

作者：周波贾建安温宗梅邓松华蒋少华陈秋莉潘欣潘卫安徽医科大学病理生理学教研室合肥230032 第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433

目的:构建HIV-1 Gag PR蛋白P2/NC切割位点序列随机化的噬菌体展示文库,研究HIV-1蛋白酶(protease PR)耐药性突变对其敏感切割序列的影响。方法:PCR扩增制备重组HIV-1gag基因上的CAP2和NC片段,在CAP2片段5′端引入StuⅠ酶切位点,3′端PR... 详细信息

目的:构建HIV-1 Gag PR蛋白P2/NC切割位点序列随机化的噬菌体展示文库,研究HIV-1蛋白酶(protease PR)耐药性突变对其敏感切割序列的影响。方法:PCR扩增制备重组HIV-1gag基因上的CAP2和NC片段,在CAP2片段5′端引入StuⅠ酶切位点,3′端PR切割位点处的氨基酸序列进行随机化;在NC片段5′端设计重叠区域,3′端引入SalⅠ酶切位点。应用Overlapping PCR将CAP2和NC片段拼接并克隆于噬菌体展示载体LD3-pCANTAB5S上,建立HIV-1PR靶蛋白CAP2和NC之间切割位点随机化的噬菌体展示文库。结果:该噬菌体展示文库库容量为2.1×106,滴度为3.0×1012TU/ml,CAP2/NC片段插入率为52.1%;12个样品的序列分析显示切割位点中随机化的核苷酸与氨基酸均呈随机性分布;10个阳性单克隆噬菌体CAP2/NC-LD3-pCANTAB5S样品中9个与IgG特异结合。结论:成功地对HIV-1PR靶蛋白CAP2和NC之间切割位点进行了随机化并展示于噬菌体表面,构建了其噬菌体展示文库,为筛选耐药性突变的PR敏感切割序列及构建蛋白酶抑制剂噬菌体筛选模型打下基础。

关键词： HIV-1 蛋白酶切割位点序列随机化噬菌体展示文库

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噬菌体展示免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库的构建

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第二军医大学学报 2005年第4期26卷 396-401页

作者：杨华李连青王蓓霞徐容沈毅珺贾建安潘欣陈秋莉潘卫山西医科大学基础医学部微生物学与免疫学教研室太原030001 山西省临床检验中心太原030012 第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433

目的:构建由免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合的噬菌体展示文库,为应用各种类型免疫球蛋白对该文库进行体外分子进化筛选研究打下基础。方法:PCR扩增制备分别编码Protein A 的A、D结构域、Protein G的B2 结构域和Pro tein L的B3结构... 详细信息

目的:构建由免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合的噬菌体展示文库,为应用各种类型免疫球蛋白对该文库进行体外分子进化筛选研究打下基础。方法:PCR扩增制备分别编码Protein A 的A、D结构域、Protein G的B2 结构域和Pro tein L的B3结构域的序列片段,片段两端引入XbaⅠ酶切位点,3′端引入分别编码0、1、2、3个氨基酸大小随机连接肽的序列,并克隆于pMD 18T载体构建重组质粒。以上述16种重组质粒为模板,PCR扩增分别制备各种单结构域片段及两端部分T载体序列,XbaⅠ酶切,各种酶切片段混合后连接,并克隆于噬菌体展示载体pCANTAB5S,构建噬菌体展示免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库,挑取单克隆进行序列测定,评价文库的随机性。结果:噬菌体展示免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库库容量为2×107,滴度为1.3×1011;文库中含77%以上的阳性克隆,其中由2个以上单结构域组成的阳性克隆占24%;序列分析显示组合文库包含上述4种单结构域序列,连接方式符合随机连接的特点,随机连接肽的编码核酸也呈随机分布。结论:成功构建了免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库,该文库库容、多样性和随机性完全可满足进行体外分子进化研究的要求。

关键词：免疫球蛋白结合分子噬菌体展示组合文库结构域随机连接肽

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人类白细胞抗原-G cDNA的克隆及序列分析

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广西医科大学学报 2005年第3期22卷 370-372页

作者：杨海波何琳惠池永斌王植柔广西医科大学微生物及免疫学教研室南宁530021 广西医科大学2003级上海第二医科大学免疫所广西肿瘤医院泌尿外科

目的:构建表达人类白细胞抗原-G(HLA-G)蛋白的真核表达载体pcDNA3-HLA-G。方法:从孕妇绒毛组织中提取总RNA,借助RT-PCR技术扩增HLA-G的cDNA并把其插入真核表达载体pcDNA3,然后经酶切和测序法鉴定。结果:经酶切鉴定及测序分析,证实已构... 详细信息

目的:构建表达人类白细胞抗原-G(HLA-G)蛋白的真核表达载体pcDNA3-HLA-G。方法:从孕妇绒毛组织中提取总RNA,借助RT-PCR技术扩增HLA-G的cDNA并把其插入真核表达载体pcDNA3,然后经酶切和测序法鉴定。结果:经酶切鉴定及测序分析,证实已构建表达HLA-G蛋白的真核表达载体pcDNA3-HLA-G。结论:应用RT-PCR扩增及DNA连接技术成功构建HLA-G的真核表达载体。

关键词：人类白细胞抗原-G 克隆序列分析 RT—PCR

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多重耐药产PER-1型超广谱β内酰胺酶阴沟肠杆菌的研究

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中华检验医学杂志 2005年第6期28卷 642-644页

作者：余方友傅颖媛胡龙华贾坤茹韩立中倪语星温州医学院附属第一医院检验科 325000 江西医学院免疫学教研室江西医学院第二附属医院检验科上海第二医科大学附属瑞金医院临床微生物科

目的研究多重耐药阴沟肠杆菌017对β内酰胺类抗菌药物耐药的机制。方法使用双纸片扩散法和改良三相试验对阴沟肠杆菌017进行β内酰胺酶的表型检测,并用聚合酶链反应(PCR)扩增β内酰胺酶基因,对PCR产物进行测序确定基因型别。结果阴沟肠... 详细信息

目的研究多重耐药阴沟肠杆菌017对β内酰胺类抗菌药物耐药的机制。方法使用双纸片扩散法和改良三相试验对阴沟肠杆菌017进行β内酰胺酶的表型检测,并用聚合酶链反应(PCR)扩增β内酰胺酶基因,对PCR产物进行测序确定基因型别。结果阴沟肠杆菌017经双纸片扩散法证实产超广谱β内酰胺酶(ESBLs),经三相试验证实该菌除了产ESBLs外,还同时产AmpC酶。PCR产物经测序长度为579bp,与GENEBANK的PAPER1A基因序列100%符合,确定为PER1基因。结论阴沟肠杆菌017耐β内酰胺类抗菌药物的主要原因是PER1型ESBLs和AmpC酶所致。

关键词： PER-1型超广谱β内酰胺酶阴沟肠杆菌多重耐药聚合酶链反应(PCR) 产超广谱β内酰胺酶双纸片扩散法 β内酰胺类 PCR产物 ESBLs 抗菌药物耐药内酰胺酶基因产AmpC酶表型检测三相试验基因型别基因序列 1基因测序

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人乳腺癌组织中CD_(1C)^+树突状细胞免疫组化研究

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解剖科学进展 2005年第2期11卷 124-126页

作者：史福军李艳萍董珂汪艳丽新乡医学院组织学与胚胎学教研室新乡453003 上海第二医科大学病原微生物学教研室上海200025

目的观察树突状细胞在人乳腺癌组织中的形态学变化。方法利用CD1C+作为树突状细胞(dendriticcell,DC)的特征性标志分子,用免疫组织化学方法观察20例人乳腺癌组织及癌旁相对正常组织中树突状细胞的分布和形态学变化,同时检测p53蛋白的表... 详细信息

目的观察树突状细胞在人乳腺癌组织中的形态学变化。方法利用CD1C+作为树突状细胞(dendriticcell,DC)的特征性标志分子,用免疫组织化学方法观察20例人乳腺癌组织及癌旁相对正常组织中树突状细胞的分布和形态学变化,同时检测p53蛋白的表达。结果乳癌组织中树突状细胞CD1C+阳性面数密度(4.55±1.32)和平均光密度值(0.13±0.03)明显低正常乳腺组织面数密度(11.16±5.32)和平均光密度值(0.27±0.07,P<0.05);乳癌组织DC数量较正常乳腺组织明显减少(P<0.05)。20例乳腺癌中,p53蛋白阳性表达率为60%;正常组织为阴性。结论树突状细胞及其表达的p53蛋白可能参与肿瘤免疫调节作用。

关键词：树突状细胞乳腺癌组织免疫组化研究免疫组织化学方法正常乳腺组织 p53蛋白形态学变化免疫调节作用正常组织光密度值乳癌组织阳性表达率 cell 标志分子同时检测数密度特征性平均

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以减毒沙门菌作为DNA疫苗载体的研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2004年第3期18卷 238-242,F002页

作者：何平陈洪刘晶星陈淑云胡宝瑜上海第二医科大学微生物教研室 200025

目的　以真核表达质粒pCMVβ为报告基因 ,研究用芳香族氨基酸合成缺陷的沙门菌SL72 0 7为载体以提高DNA疫苗免疫应答的可行性。方法　携带质粒pCMVβ的SL72 0 7体外感染小鼠腹腔巨噬细胞后 ,用X gal染色方法和RT PCR方法检测巨噬细胞内 ... 详细信息

目的　以真核表达质粒pCMVβ为报告基因 ,研究用芳香族氨基酸合成缺陷的沙门菌SL72 0 7为载体以提高DNA疫苗免疫应答的可行性。方法　携带质粒pCMVβ的SL72 0 7体外感染小鼠腹腔巨噬细胞后 ,用X gal染色方法和RT PCR方法检测巨噬细胞内 β gal的表达。小鼠口服免疫SL72 0 7(pCMVβ)后 ,用RT PCR方法检测 β gal基因在淋巴组织中的转录产物 ;用ELISA方法检测体液免疫 ;用3H TdR掺入法检测脾淋巴细胞增殖 ;用JAM试验检测杀伤性T淋巴细胞反应。结果　SL72 0 7能有效地将质粒DNA传递到体外培养的巨噬细胞中并进行表达 ;小鼠口服携带有pCMVβ的SL72 0 7后 ,能在脾脏、派伊尔结、肠系膜淋巴结中检测到目的基因的转录 ,并可诱导小鼠产生特异性体液免疫和细胞免疫。与肌内注射pCMVβ相比较 ,口服SL72 0 7(pCMVβ)能更有效地诱导出细胞免疫应答。结论　减毒沙门菌SL72 0 7作为DNA疫苗的载体 ,可经口服途径进行免疫 ,并可将质粒直接传递给抗原递呈细胞 ,诱导出以细胞免疫为主的免疫应答。

关键词： CMV 沙门菌 DNA疫苗口服减毒小鼠诱导 SL RT-PCR方法 ELISA方法

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幽门螺杆菌基因组特征及研究进展

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细胞生物学杂志 2004年第1期26卷 15-18页

作者：杨贵珍刘钟滨郭晓奎同济大学医学院微生物教研室上海200331 上海第二医科大学微生物教研室上海200025

幽门螺杆菌是胃相关疾病:慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌和MALT淋巴瘤的一个重要的病原体。其毒力因子包括:尿素酶、鞭毛蛋白、粘附素、细胞毒素相关蛋白和空泡毒素等,通过对全基因序列分析研究,对幽门螺杆菌的致病机制有了进一步的了解。

关键词：幽门螺杆菌基因组研究进展胃炎消化性溃疡胃癌

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柯萨奇-腺病毒受体基因的原核表达和多克隆抗体制备

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上海第二医科大学学报 2004年第9期24卷 726-730页

作者：吴赟陈洪黄孝天陈宏新刘晶星上海第二医科大学基础医学院微生物教研室上海200025

目的利用原核基因工程克隆表达柯萨奇-腺病毒受体(CAR)胞外段,并制备多克隆抗体。方法从HeLa细胞中抽提总RNA,通过RT-PCR获得编码CAR胞外段的cDNA,与pQE31质粒连接,构建表达型重组质粒,测序证实后诱导表达,经Ni-NTA柱亲和纯化后,免疫新... 详细信息

目的利用原核基因工程克隆表达柯萨奇-腺病毒受体(CAR)胞外段,并制备多克隆抗体。方法从HeLa细胞中抽提总RNA,通过RT-PCR获得编码CAR胞外段的cDNA,与pQE31质粒连接,构建表达型重组质粒,测序证实后诱导表达,经Ni-NTA柱亲和纯化后,免疫新西兰兔,ELISA检测抗血清滴度。结果重组质粒转化的大肠杆菌M15经IPTG诱导表达及亲和纯化后得到滴度较高的融合蛋白,SDS-PAGE和Western blot显示其分子量约为26 kd,具有特异的抗原性,主要以包涵体形式存在于菌体中。纯化的融合蛋白免疫新西兰兔后产生的抗体,经ELISA检测抗体滴度>1:32 000。结论CAR胞外段基因的克隆表达和多克隆抗体的制备,为进一步研究该受体在以腺病毒载体为基础的基因治疗中的作用及柯萨奇病毒的致病机制奠定了基础。

关键词：胞外段腺病毒受体多克隆抗体滴度基因重组质粒新西兰兔克隆表达诱导表达纯化

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