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第四军医大学学报 2001年第16期22卷 1460-1462页

作者：杨连君王文亮司晓辉第四军医大学基础部病理学教研室陕西西安710033 上海第二医科大学第九人民医院口腔医学研究所上海200011

目的　探讨在乙醇诱导下发生凋亡时 ,原发性肝细胞癌 (简称肝癌 )细胞的形态学变化 .方法　用含 60 m L·L- 1乙醇的培养液持续作用 6h诱导人肝癌细胞系 HCC- 92 0 4凋亡 .进行凋亡活细胞的台盼蓝、吖啶橙 /溴化乙啶 (AO/ EB)染色 ... 详细信息

目的　探讨在乙醇诱导下发生凋亡时 ,原发性肝细胞癌 (简称肝癌 )细胞的形态学变化 .方法　用含 60 m L·L- 1乙醇的培养液持续作用 6h诱导人肝癌细胞系 HCC- 92 0 4凋亡 .进行凋亡活细胞的台盼蓝、吖啶橙 /溴化乙啶 (AO/ EB)染色 ,凋亡细胞固定后的 May- Grunwald- Giemsa(MGG)、HE染色和透射电镜观察 ,并进行 TUNEL法凋亡检测 .结果　60 m L· L- 1 乙醇可使 HCC- 92 0 4细胞产生明显的细胞固缩、变圆 ,胞核和胞质浓染 ,胞核呈颗粒状、环形或新月体状 ,胞质可见“出泡”现象等凋亡形态学变化 .大部分细胞为台盼蓝拒染 ,并呈 TU NEL 阳性着色 .部分 TUNEL 阳性细胞也可见明显的凋亡形态学变化 .结论　乙醇可使肝癌细胞产生明显的凋亡形态学变化 .

关键词：乙醇肝细胞癌脱噬作用细胞凋亡形态学

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消减免疫法制备抗肝癌凋亡细胞相关抗原单克隆抗体

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第四军医大学学报 2001年第18期22卷 1720-1723页

作者：杨连君司晓辉王文亮第四军医大学基础部病理学教研室陕西西安710033 上海第二医科大学第九人民医院口腔医学研究所

目的　分析肝癌细胞凋亡过程中相关分子的表达情况 ,制备抗凋亡相关抗原的 m Ab.方法　用 6 0 m L· L- 1乙醇作用 6 h诱导 HCC- 92 0 4细胞凋亡 . May- Grunwald- Giemsa(MGG)法染色观察细胞形态 .流式细胞仪分析细胞 DNA含量 .环... 详细信息

目的　分析肝癌细胞凋亡过程中相关分子的表达情况 ,制备抗凋亡相关抗原的 m Ab.方法　用 6 0 m L· L- 1乙醇作用 6 h诱导 HCC- 92 0 4细胞凋亡 . May- Grunwald- Giemsa(MGG)法染色观察细胞形态 .流式细胞仪分析细胞 DNA含量 .环磷酰胺消减免疫法免疫 10只小鼠 ,另取 10只小鼠用常规法免疫作为对照 .末次免疫后取鼠尾血清进行免疫细胞化学法检测 .选取尾血清与凋亡细胞和非凋亡细胞的反应差异最明显者取脾细胞 ,与骨髓瘤细胞 SP2 /0融合 . EL ISA法筛选 .计算杂交瘤细胞融合率和抗体阳性率 .有限稀释法连续克隆化 .免疫细胞化学法进一步筛选 .Western blot法分析m Ab相关抗原的分子质量 .结果　 MGG染色可见大部分细胞出现凋亡 .流式细胞仪分析可见亚二倍体凋亡峰 .实验组有 2只鼠的尾血清在凋亡细胞呈强阳性 ,而与非凋亡细胞的反应很弱 .两组的细胞融合率无明显差异 ;在凋亡细胞高表达 ,而在非凋亡细胞低表达的抗体的产生率也未见明显差异 .实验组总的抗体产生率明显低于对照组 (P<0 .0 1) ,在凋亡细胞与非凋亡细胞均高表达的抗体的产生率也明显低于对照组 (P<0 .0 1) .筛选出 1株在乙醇诱导的 HCC- 92 0 4凋亡细胞核内高表达 ,而在非凋亡的 HCC- 92 0 4细胞低表达的 m Ab.此 m

关键词：免疫法脱噬作用单克隆抗体肝细胞癌

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细胞周期相关蛋白在肝癌细胞系HCC-9204表达的免疫细胞化学定位

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第四军医大学学报 2001年第3期22卷 282-283页

作者：杨连君王文亮司晓辉第四军医大学基础部病理学教研室陕西西安710033 上海第二医科大学第九人民医院口腔医学研究所

0　引言　肿瘤细胞的发生和增殖与细胞周期蛋白（Cyclin）及其相关分子Cyclin依赖性蛋白激酶（CDK）和CDK抑制蛋白（CKI）的调控密切相关［1］. 关于Cyclin及其调控分子在培养的原发性肝细胞癌（以下简称肝癌）细胞中表达的定位情况尚... 详细信息

0　引言　肿瘤细胞的发生和增殖与细胞周期蛋白（Cyclin）及其相关分子Cyclin依赖性蛋白激酶（CDK）和CDK抑制蛋白（CKI）的调控密切相关［1］. 关于Cyclin及其调控分子在培养的原发性肝细胞癌（以下简称肝癌）细胞中表达的定位情况尚未见报道. 我们采用免疫细胞化学技术检测Cyclin D1及其相关分子CDK4和CKI家族中的p27Kip1在培养的肝癌细胞系HCC-9204中的表达情况.

关键词：细胞周期相关蛋白肝细胞癌免疫细胞化学

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稳定表达Bcl-2蛋白的肝细胞癌细胞株的建立与鉴定

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第四军医大学学报 2001年第8期22卷 763-766页

作者：杨连君王文亮司晓辉第四军医大学基础部病理学教研室陕西西安710033 上海第二医科大学第九人民医院口腔医学研究所

目的　为了探讨抗凋亡基因 bcl- 2在肝细胞癌 (简称肝癌 )细胞凋亡过程中的调节功能及其作用机制 ,建立稳定表达 Bcl- 2蛋白的肝癌细胞株 .方法　提取含有人 bcl- 2基因的逆转录病毒真核表达载体 p DOR- SB质粒 ,用限制性内切酶Eco R (... 详细信息

目的　为了探讨抗凋亡基因 bcl- 2在肝细胞癌 (简称肝癌 )细胞凋亡过程中的调节功能及其作用机制 ,建立稳定表达 Bcl- 2蛋白的肝癌细胞株 .方法　提取含有人 bcl- 2基因的逆转录病毒真核表达载体 p DOR- SB质粒 ,用限制性内切酶Eco R (酶切后经琼脂糖凝胶电泳鉴定 .用脂质体介导的基因转染法分别将 p DOR- SB和 p DOR质粒导入不表达 Bcl- 2蛋白的人肝癌细胞系 HCC- 92 0 4细胞中 ,通过 G- 418筛选获得转入目的基因的阳性细胞克隆 .免疫细胞化学法检测 Bcl-2蛋白的表达情况 .经多次用有限稀释法连续克隆化直至获得 10 0 %稳定表达 Bcl- 2蛋白的肝癌细胞株 .结果　琼脂糖凝胶电泳可见 1.9kb的 bcl- 2基因片断 .免疫细胞化学检测表明转染了 p DOR- SB的 HCC- 92 0 4细胞大部分有 Bcl- 2蛋白的表达 ,而转染了 p DOR空载体或未转染的 HCC- 92 0 4细胞均未见 Bcl- 2蛋白表达 .经过连续 3次克隆化后转染 p DOR-SB的 HCC- 92 0 4细胞 10 0 %表达 Bcl- 2蛋白 .结论　成功地获得了稳定表达 Bcl- 2蛋白的肝癌细胞株 ,命名为 HCC- bcl2 .

关键词：肝细胞癌 Bcl-2蛋白基因表达鉴定

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植入脑源性神经营养因子载体细胞对幼鼠缺氧缺血性脑损伤后记忆的影响

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中国行为医学科学 2001年第6期10卷 524-526页

作者：洪新如侍坚曲伸陈新民全军儿科中心福州总医院儿科福建福州350025 上海第二医科大学基础医学部神经生物学研究室上海200025 上海第二军医大学基础部神经生物学教研室上海200433

目的　探讨脑内移植脑源性神经营养因子载体细胞对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后记忆功能的影响。方法　 7d龄新生大鼠左侧颈总动脉结扎联合低氧吸入法制成缺氧缺血性脑损伤模型。损伤后即刻行左侧皮层内植入构建的稳定表达和分泌脑源性... 详细信息

目的　探讨脑内移植脑源性神经营养因子载体细胞对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后记忆功能的影响。方法　 7d龄新生大鼠左侧颈总动脉结扎联合低氧吸入法制成缺氧缺血性脑损伤模型。损伤后即刻行左侧皮层内植入构建的稳定表达和分泌脑源性神经营养因子的大鼠成肌细胞 ,观察植入 6w后大鼠记忆功能的变化。结果　脑源性神经营养因子载体细胞脑内移植 6w后移植组动物主动回避反应习得和维持能力、一次被动回避反应的保持能力均显著提高。结论　脑源性神经营养因子载体细胞脑内移植可显著增强新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后记忆能力的恢复和发展。

关键词：脑源性神经营养因子脑缺氧脑缺血记忆功能新生儿窒息动物实验

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人精子膜甘露糖结合蛋白的研究

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生殖与避孕 2000年第1期20卷 20-25页

作者：丁之德 S.Hansen S.Thiel T.Hjort JC.Jensenius 上海第二医科大学组胚教研室上海200025 丹麦Aarhus大学微生物免疫学研究所

我们运用 Percoll密度梯度离心技术从正常捐精者的精液中分离出成熟精子并使其获能 ,经含 1 %穿通 (Triton) X 1 1 4Tris缓冲液溶解 ,超声粉碎及离心分离后获得人精子可溶性蛋白悬液。随后运用蛋白质亲和层析及 SDS PAGE电泳技术分离人... 详细信息

我们运用 Percoll密度梯度离心技术从正常捐精者的精液中分离出成熟精子并使其获能 ,经含 1 %穿通 (Triton) X 1 1 4Tris缓冲液溶解 ,超声粉碎及离心分离后获得人精子可溶性蛋白悬液。随后运用蛋白质亲和层析及 SDS PAGE电泳技术分离人精子可溶性蛋白质 ,经银染后发现 :用山羊抗人巨噬细胞甘露糖受体 (anti macrophage mannosereceptor,AMMR) Ig G包被的 Affi Prep Hz support珠能结合人精子中一种分子量为2 9KD的蛋白质 ,而对照组为正常山羊血清 (normal goat,NG) Ig G包被珠 ,其结果却呈阴性。最后运用精子膜生物素标记及蔗糖密度梯度离心技术进一步标记分离人精子膜可溶性蛋白质 ,证实了这种与 AMMR Ig G结合的蛋白质为甘露糖结合蛋白 ,存在于人精子膜上。精子膜甘露糖结合蛋白可能与精卵识别的起始过程有相当密切的关系。

关键词：精子膜甘露糖结合蛋白亲和层析

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肝癌细胞系表达p53,c-myc和增殖细胞核抗原的定位

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空军军医大学学报 2000年第4期21卷 548-549页

作者：杨连君司晓辉王文亮上海第二医科大学第九人民医院口腔内科第四军医大学基础部病理学教研室!陕西西安710033

0 引言野生型p53是一种抑癌基因,而其突变型和c-myc都是癌基因. 增殖细胞核抗原(PCNA)是一种细胞增殖相关蛋白. 关于它们在培养的原发性肝细胞癌 (简称肝癌)细胞中表达的定位情况以往文献很少涉及. HCC-9204是一株较新的肝癌细胞系[1].... 详细信息

0 引言野生型p53是一种抑癌基因,而其突变型和c-myc都是癌基因. 增殖细胞核抗原(PCNA)是一种细胞增殖相关蛋白. 关于它们在培养的原发性肝细胞癌 (简称肝癌)细胞中表达的定位情况以往文献很少涉及. HCC-9204是一株较新的肝癌细胞系[1]. 我们采用免疫组织化学技术检测p53,c-myc和PCNA在培养的HCC-9204细胞中的表达情况.

关键词： p53 c-myc 增殖细胞核抗原肝癌免疫组织化学

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大鼠附睾组织中Cu,Zn-SOD和CAT免疫金银法定位

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解剖科学进展 1999年第4期 370-370页

作者：项凡张君慧吴明章上海第二医科大学组胚教研室!200025

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精浆肉毒碱与解脲脲原体感染的相关性研究

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大连大学学报 1998年第2期19卷 70-72页

作者：逯越陈国卫吴明章高卫大连大学医学院基础部大连116622 中国人民解放军第四六九医院大连116021 上海第二医科大学组胚教研室上海200025

本文采用精浆肉毒碱测定(DTNB)方法,对40名患有解脲脲原体感染的男性不育患者的精浆肉毒碱测定,结果:精浆肉毒碱含量94.14±57.62nmol/ml:肉毒碱总量286.6±306.87nmol,本实验室吴明章等测得156例正常生育力男子精浆中的肉毒碱... 详细信息

本文采用精浆肉毒碱测定(DTNB)方法,对40名患有解脲脲原体感染的男性不育患者的精浆肉毒碱测定,结果:精浆肉毒碱含量94.14±57.62nmol/ml:肉毒碱总量286.6±306.87nmol,本实验室吴明章等测得156例正常生育力男子精浆中的肉毒碱,每毫升精浆肉毒碱239.56±105.59nmol/ml;精浆中肉毒碱总量757.34±471.72nmol。两组间相比,经统计学处理(t检验)P<0.01差异非常显著,提示,解脲脲原体感染引起精浆肉毒碱含量下降,是其导致男性不育的原因之一。

关键词：解脲脲原体肉毒碱不育

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磺胺吡啶、吡啶对培养的大鼠附睾上皮细胞的影响

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生殖与避孕 1997年第5期17卷 292-295页

作者：张君慧吴立君董赛珍丁之德谢蔚英卢琦华吴明章上海第二医科大学组胚教研室上海200025 上海市计划生育科学研究所上海200032

柳氮磺胺吡啶（SASP）具抗生育作用。本文将合成SASP的原料磺胺吡啶及吡啶置培养的成年雄性SD大鼠的附睾各段上皮细胞中，共同孵育11天后，作培养细胞的形态学观察及上清液的生化测定。结果表明用药组与对照组的细胞在光镜下未见明显差... 详细信息

柳氮磺胺吡啶（SASP）具抗生育作用。本文将合成SASP的原料磺胺吡啶及吡啶置培养的成年雄性SD大鼠的附睾各段上皮细胞中，共同孵育11天后，作培养细胞的形态学观察及上清液的生化测定。结果表明用药组与对照组的细胞在光镜下未见明显差异；磺胺吡啶组上清液内的唾液酸含量显著增高，在附睾尾部尤为明显（P＜0．01）；用药组与对照组的α－1，4糖苷酶的活性无显著差异。实验结果提示：磺胺吡啶对大鼠附睾上皮细胞的功能可有一定的影响。

关键词：磺胺吡啶吡啶附睾上皮细胞

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