检索结果-内蒙古大学图书馆

中华神经科杂志 2005年第7期38卷 430-433页

作者：杨卉陈生弟李彪陆国强梁梁徐洁懿上海第二医科大学附属瑞金医院神经科帕金森病诊疗与研究中心200025

目的探讨泛素蛋白酶体通路的功能障碍对于多巴胺能细胞的活力以及胞质内包涵体生成的影响。方法应用蛋白酶体抑制剂lactacystin(5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L和20μmol/L)处理PC12细胞24h,MTT方法检测细胞活力,WesternBlot方法测定... 详细信息

目的探讨泛素蛋白酶体通路的功能障碍对于多巴胺能细胞的活力以及胞质内包涵体生成的影响。方法应用蛋白酶体抑制剂lactacystin(5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L和20μmol/L)处理PC12细胞24h,MTT方法检测细胞活力,WesternBlot方法测定细胞内泛素化蛋白质水平,免疫荧光细胞化学染色观察泛素免疫阳性包涵体的生成。结果经5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L和20μmol/Llactacystin处理24h后,PC12细胞的活力显著降低(细胞存活率分别为81.5%±3.6%、75.4%±2.4%、70.2%±2.7%和60.4%±3.9%),呈现剂量依赖性。WesternBlot证实对照组细胞内未检测到相对高分子质量的泛素化蛋白质;随着lactacystin作用浓度的增加,细胞内相对高分子质量泛素化蛋白质的含量逐渐增高。免疫荧光染色显示对照组中仅有极少数细胞内含有泛素阳性包涵体;20μmol/Llactacystin处理组中含有泛素阳性包涵体的细胞数目显著增多(P<0.01)。结论泛素蛋白酶体通路的功能缺失能诱导多巴胺能细胞死亡,造成细胞内泛素化蛋白质积聚,促进胞质内泛素阳性包涵体的生成,可能在帕金森病黑质多巴胺能神经元变性死亡和Lewy小体形成中发挥重要作用。

关键词：泛素蛋白酶抑制药 PCI2细胞帕金森病

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大鼠骨髓基质细胞分泌胶质细胞源性神经营养因子的研究

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神经科学通报 2005年第1期21卷 23-27页

作者：叶民陈生弟戚晨陆国强梁梁徐洁懿上海第二医科大学附属瑞金医院神经科帕金森病诊疗与研究中心上海200025

目的研究骨髓基质细胞(BMSCs)能否分泌胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)及其分泌规律,为进一步探讨BMSCs治疗帕金森病(PD)大鼠模型的作用机制提供实验依据。方法取较高纯度的BMSCs进行培养,通过RT-PCR和ELISA法,分别从mRNA和细胞蛋白水... 详细信息

目的研究骨髓基质细胞(BMSCs)能否分泌胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)及其分泌规律,为进一步探讨BMSCs治疗帕金森病(PD)大鼠模型的作用机制提供实验依据。方法取较高纯度的BMSCs进行培养,通过RT-PCR和ELISA法,分别从mRNA和细胞蛋白水平测定体外培养BMSCs的上清液和细胞蛋白中GDNF的含量。结果通过RTPCR法检测结果显示在mRNA水平,BMSCs中有GDNF的表达。在蛋白水平,采用ELISA法在培养第3天以后的培养液和细胞蛋白中均可检测到GDNF,并随着时间的延长,培养液和细胞蛋白中GDNF浓度明显升高。结论BMSCs具有分泌GDNF的能力,细胞分泌可能受周围环境和自身生长状况的影响,其分泌是非持续性的。GDNF浓度的升高不仅与BMSCs细胞数量增加有关,还与细胞本身分泌能力的增强有关。

关键词：骨髓基质细胞胶质细胞源性神经营养因子逆转录酶-聚合酶链反应酶联免疫吸附试验治疗帕金森病

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影响帕金森病患者生活质量的主要因素

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临床神经病学杂志 2005年第1期18卷 16-18页

作者：吴逸雯张璟干静翁中芳刘振国陈生弟上海第二医科大学附属瑞金医院神经科帕金森病诊疗与研究中心 200025

目的　探讨影响帕金森病(PD)患者生活质量(QoL)的主要因素。方法　采用PD统一评分量表第2部分(UPDRS Ⅱ)对97例PD患者的健康相关生活质量(HRQoL)进行评估,同时选用汉密尔顿焦虑量表(HAMA)、汉密尔顿抑郁量表(HAMD)、简易精神状态量表(... 详细信息

目的　探讨影响帕金森病(PD)患者生活质量(QoL)的主要因素。方法　采用PD统一评分量表第2部分(UPDRS Ⅱ)对97例PD患者的健康相关生活质量(HRQoL)进行评估,同时选用汉密尔顿焦虑量表(HAMA)、汉密尔顿抑郁量表(HAMD)、简易精神状态量表(MMSE)、PD统一评分量表第1及第3部分 (UPDRS Ⅰ,UPDRS Ⅲ)、Hoehn Yahr分级作为评估患者的焦虑状况、抑郁状况、认知功能、运动障碍程度的主要指标。结合患者的年龄、起病年龄、性别、病程、左旋多巴累积用量、有无症状波动、有无精神症状等可能影响QoL的因素评价上述指标对PD患者QoL影响的程度。结果　逐步线性多重回归分析显示:对PD患者 HRQoL(UPDRS Ⅱ分数)影响最大的因素是运动症状(UPDRS Ⅲ)、病程、抑郁程度(HAMD抑郁评分)及有无精神症状(UPDRS Ⅰ)。上述4项因素相加对UPDRS Ⅱ分数的影响起决定作用的占78.4%。结论　在本次调查的样本中,心理与躯体因素联合作用影响PD患者的QoL。因此,在诊治过程中应联合治疗心理及躯体疾患,加强康复锻炼,完善生活辅助用具,以提高PD患者的QoL。

关键词：帕金森病生活质量抑郁焦虑痴呆

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α-synuclein片段对PC12细胞内蛋白聚集、线粒体功能和活性氧水平的影响

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中华老年医学杂志 2005年第2期24卷 130-133页

作者：巴茂文刘振国陈生弟陆国强上海第二医科大学附属瑞金医院神经内科帕金森病诊疗与研究中心 200025

目的　研究α synuclein的纤维源性片段NAC对PC12细胞内蛋白聚集、线粒体功能及活性氧水平的影响。　方法　采用神经生长因子将PC12细胞诱导分化成多巴胺能细胞 ,后经不同浓度的NAC(0、0 1、1 0、10 0、2 5 0、5 0 0 μmol/L)处理 4... 详细信息

目的　研究α synuclein的纤维源性片段NAC对PC12细胞内蛋白聚集、线粒体功能及活性氧水平的影响。　方法　采用神经生长因子将PC12细胞诱导分化成多巴胺能细胞 ,后经不同浓度的NAC(0、0 1、1 0、10 0、2 5 0、5 0 0 μmol/L)处理 4 8h ,MTT法测定线粒体氧化还原酶的活力。用硫磺素S染色观察细胞内蛋白聚集情况 ,JC 1检测线粒体膜电位 ,DCFH DA检测细胞内活性氧水平。　结果　经NAC处理 4 8h后 ,与对照组比较 ,PC12细胞线粒体活力在高浓度 (≥ 2 5 μmol/L)NAC作用时明显下降 6 4 1% (P <0 0 5 )。NAC(2 5 μmol/L)可诱导出现蛋白聚集 ,JC 1荧光染色可检测到线粒体膜电位明显去极化 ,DCFH DA荧光染色及流式细胞仪检测显示PC12细胞内活性氧增加。 6 0 6 %　结论　NAC可引起PC12细胞内蛋白聚集 ,进而线粒体功能障碍及氧化应激增强 ,最终导致细胞死亡。

关键词： PC12细胞线粒体功能 NAC 蛋白聚集活性氧 α-synuclein 细胞内片段氧化还原酶细胞死亡

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脂多糖对多巴胺能神经元的损毁作用

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中华老年医学杂志 2005年第10期24卷 779-782页

作者：刘军陈生弟刘振国乐卫东上海第二医科大学附属瑞金医院神经科帕金森病诊疗与研究中心200025 美国休斯顿贝勒医学院神经科

目的离体、在体水平分别观察脂多糖(LPS)对多巴胺(DA)能神经元的毁损作用,及其对动物行为的影响。方法将LPS、6羟基多巴胺(6OHDA)和LPS与小胶质细胞共培养的上清液分别加入大鼠嗜铬细胞瘤(PC12)细胞中,四唑盐比色试验(MTT)观察一定时间... 详细信息

目的离体、在体水平分别观察脂多糖(LPS)对多巴胺(DA)能神经元的毁损作用,及其对动物行为的影响。方法将LPS、6羟基多巴胺(6OHDA)和LPS与小胶质细胞共培养的上清液分别加入大鼠嗜铬细胞瘤(PC12)细胞中,四唑盐比色试验(MTT)观察一定时间内细胞活性的变化;将LPS注入大鼠单侧黑质,在一定时间内,观察动物行为的变化;免疫组化法检测黑质区DA能神经元数目,高压液相色谱(HPLC)测定黑质纹状体系统DA等及其代谢产物含量。结果LPS对PC12细胞活性无直接影响,LPS与小胶质细胞共培养组和6OHDA组则对PC12细胞活性有明显影响,使细胞活性分别下降26%和30%;大鼠单侧黑质注入LPS后21、28d,阿朴吗啡诱发大鼠出现旋转行为,转次为4～6次/min;注射侧黑质TH阳性细胞数减少约35%～60%,尤以21、28d明显;LPS注射后14、21d和28d大鼠的纹状体和黑质DA及其代谢物含量降低30%～70%。结论LPS间接地对DA能神经元产生一定的损毁作用,并可导致大鼠偏侧旋转行为的发生。

关键词：帕金森病脂多糖类多巴胺

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α-synuclein增加细胞对蛋白酶体抑制剂毒性的易感性

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上海医学 2005年第9期28卷 794-796页

作者：李琳刘振国陈生弟倪培华陆国强上海第二医科大学附属瑞金医院神经内科帕金森病诊疗与研究中心上海第二医科大学检验系

帕金森病（PD）是临床上常见的神经系统变性疾病之一，主要病理特征是黑质多巴胺能神经元变性缺失和细胞内出现特征性包涵体Lewy小体。近年来发现，α-synuclein基因突变可引起家族性PD，而α-synuclein蛋白是Lewy小体的主要成分，因此... 详细信息

帕金森病（PD）是临床上常见的神经系统变性疾病之一，主要病理特征是黑质多巴胺能神经元变性缺失和细胞内出现特征性包涵体Lewy小体。近年来发现，α-synuclein基因突变可引起家族性PD，而α-synuclein蛋白是Lewy小体的主要成分，因此α-synuclein在PD发病机制中可能起重要作用。α-synuclein的基因突变及结构改变是PD的病因之一，α-synuclein蛋白代谢障碍亦可能与PD的发病密切相关。有研究表明，野生型和突变型α-synuclein均可通过泛素-蛋白酶体途径降解，可引起家族性PD的另两个基因Parkin和UCHL-1均与泛素-蛋白酶体系统（UPS）有关，在Lewy小体中亦有泛素和一些蛋白酶体成分聚集。因此，α-synuclein与蛋白酶体功能的关系及其在Lewy小体形成和多巴胺能神经元变性过程中的作用成为关注的热点。[第一段]

关键词： α-synuclein 蛋白酶体抑制剂细胞内 synuclein蛋白泛素-蛋白酶体途径 Lewy小体多巴胺能神经元易感性泛素-蛋白酶体系统

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蛋白酶体抑制剂lactacystin诱导PC12细胞凋亡以及半胱氨酸蛋白水解酶3活化的实验研究

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中华医学杂志 2005年第29期85卷 2058-2061页

作者：杨卉陈生弟陆国强李彪梁梁徐洁懿上海第二医科大学附属瑞金医院神经科帕金森病诊疗与研究中心杭州市第一人民医院神经内科200025

目的探讨蛋白酶体功能缺陷是否能诱导多巴胺能细胞发生凋亡及其可能的作用机理。方法应用高选择性的蛋白酶体抑制剂lactacystin(0、1μmol/L、5μmol/l或10μmol/L)处理大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞株24h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞... 详细信息

目的探讨蛋白酶体功能缺陷是否能诱导多巴胺能细胞发生凋亡及其可能的作用机理。方法应用高选择性的蛋白酶体抑制剂lactacystin(0、1μmol/L、5μmol/l或10μmol/L)处理大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞株24h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力的改变。10μmol/Llactacystin作用24h后,Hoechst荧光染色观察凋亡细胞的核形态学改变,流式细胞仪测定细胞凋亡百分率。用Western印迹法检测10μmol/Llactacystin作用0、24或48h时PC12细胞内半胱氨酸蛋白水解酶3活化片段的动态变化。结果5μmol/L或10μmol/Llactacystin作用24h后,PC12细胞的活力(87%±6%和26%±6%)显著低于对照组(P<0.05)。Hoechst荧光染色显示10μmol/Llactacystin作用24h后部分细胞呈现凋亡细胞核形态学改变;流式细胞仪证实31.4%±4.0%的PC12细胞发生了凋亡,与对照组(7.5%±0.8%)比较差异有统计学意义(P<0.01)。Western印迹法显示对照组细胞内仅有极少量的半胱氨酸蛋白水解酶3活化片段表达;10μmol/Llactacystin作用48h的PC12细胞内半胱氨酸蛋白水解酶3活化片段的表达明显较多。结论蛋白酶体抑制剂lactacystin能诱导多巴胺能细胞PC12发生凋亡,半胱氨酸蛋白水解酶3蛋白酶的激活可能参与lactacystin诱导的PC12细胞凋亡过程;蛋白酶体的功能缺陷在帕金森病发病机制中可能发挥重要作用。

关键词：蛋白酶抑制药 PCI2细胞脱噬作用帕金森病

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野生型和G88C突变型α-synuclein基因真核表达质粒构建

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上海医学 2005年第1期28卷 58-60页

作者：李琳倪培华刘振国陈生弟上海第二医科大学附属瑞金医院神经内科帕金森病诊疗与研究中心200025 上海第二医科大学附属瑞金医院检验系 200025

　目的　构建人野生型和突变型 (G88C)α- synuclein基因真核表达载体。方法　采用逆转录聚合酶链反应从人胚脑组织中扩增人α -synuclein基因,克隆至pMD18 T中。采用SOE法定点突变获得G88C突变型α- synuclein基因,并将其克隆至pMD18 ... 详细信息

　目的　构建人野生型和突变型 (G88C)α- synuclein基因真核表达载体。方法　采用逆转录聚合酶链反应从人胚脑组织中扩增人α -synuclein基因,克隆至pMD18 T中。采用SOE法定点突变获得G88C突变型α- synuclein基因,并将其克隆至pMD18 T中。酶切鉴定后将野生型和突变型 (G88C)α- synuclein基因亚克隆至真核表达质粒pcDNA3. 1+中。结果　酶切及DNA测序结果证实,野生型和突变型α- synuclein基因分别插入到pcDNA3. 1+中,野生型α- synuclein基因序列与基因库 (登录号L08850)完全一致,突变型 (G88C)α- synuclein基因除第 88位碱基G被C替代以外,其余序列与野生型完全一致。结论　构建野生型和G88C突变型α- synuclein基因真核表达质粒为研究人α- synuclein基因的功能及其突变体的致病机制奠定了基础。

关键词： α-synuclein 突变型野生型真核表达质粒 pcDNA3 脑组织致病机制酶切碱基克隆

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野生型和C279G突变型UCHL1基因真核表达质粒构建

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上海第二医科大学学报 2005年第5期25卷 455-458页

作者：巴茂文刘振国倪培华陈生弟李琳陆国强上海第二医科大学瑞金医院神经内科帕金森病诊疗与研究中心上海200025 上海第二医科大学瑞金医院检验医学中心上海200025 上海第二医科大学新华医院神经内科

目的构建人野生型和C279G突变型pEGFP-N1-UCHL1质粒。方法采用RT-PCR方法从人胚脑组织中扩增出人泛素羧基末端水解酶1(UCHL1)基因,插入至pMD18Tvector中;再采用SOE法定点突变,通过酶切和连接,构建野生型和C279G突变型pEGFP-N1UCHL1。结... 详细信息

目的构建人野生型和C279G突变型pEGFP-N1-UCHL1质粒。方法采用RT-PCR方法从人胚脑组织中扩增出人泛素羧基末端水解酶1(UCHL1)基因,插入至pMD18Tvector中;再采用SOE法定点突变,通过酶切和连接,构建野生型和C279G突变型pEGFP-N1UCHL1。结果酶切和DNA测序证实,野生型和突变型UCHL1基因分别插入到pEGFP-N1中,野生型UCHL1基因序列与GenBank完全一致,C279G突变型UCHL1基因除第279位碱基C被G替代以外,其余序列与野生型完全一致。结论成功构建野生型和C279G突变型UCHL1基因真核表达质粒。

关键词： UCHL1 突变型基因真核表达质粒构建 RT-PCR方法真核表达质粒 L1基因 DNA测序人野生型羧基末端胚脑组织定点突变基因序列水解酶 SOE 基因分插入酶切

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体外诱导骨髓基质干细胞治疗帕金森病大鼠模型的研究

体外诱导骨髓基质干细胞治疗帕金森病大鼠模型的研究

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中国神经科学学会第六届学术会议暨学会成立十周年庆祝大会

作者：叶民陈生弟汪锡金张宇红陆国强梁梁徐洁懿上海第二医科大学附属瑞金医院神经科帕金森病诊疗与研究中心上海第二医科大学附属瑞金医院神经科帕金森病诊疗与研究中心上海第二医科大学附属瑞金医院神经科帕金森病诊疗与研究中心上海第二医科大学附属瑞金医院神经科帕金森病诊疗与研究中心上海第二医科大学附属瑞金医院神经科帕金森病诊疗与研究中心上海第二医科大学附属瑞金医院神经科帕金森病诊疗与研究中心上海第二医科大学附属瑞金医院神经科帕金森病诊疗与研究中心

目的:探讨骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)诱导分化为巢蛋白(nestin) 阳性的神经干细胞后移植治疗帕金森病动物模型的疗效及作用机制。方法:将建模成功的帕金森病模型分为三组,将Brdu标记的诱导分化的骨髓基质干细胞BM... 详细信息

目的:探讨骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)诱导分化为巢蛋白(nestin) 阳性的神经干细胞后移植治疗帕金森病动物模型的疗效及作用机制。方法:将建模成功的帕金森病模型分为三组,将Brdu标记的诱导分化的骨髓基质干细胞BMSCs、未诱导的BMSCs和生理盐水分别注入模型鼠右侧的纹状体,在治疗后1至5个月分别观察阿朴吗啡诱导的旋转行为的变化,移植后第1周,第1,3,5月分别进行脑恒冷切片荧光免疫组织化学鉴定(免疫荧光检测Brdu/Nestin、Brdu/GFAP、Brdu/NSE、BrdU/TH 双标细胞)以及脑切片酪氨酸羟化酶(TH)免疫组织化学检测TH阳性细胞并计数。结果:细胞移植后1个月,BMSCs诱导组和BMSCs未诱导组的旋转次数开始明显少于生理盐水组(P<0.05);在移植后第1周,BMSCs诱导组移植区可见一定数量Brdu/Nestin, 1月后Brdu/Nestin基本消失而出现Brdu/GFAP、Brdu/NSE双标的细胞,而未发现明显的BrdU/TH 双标的细胞。通过对移植后第1至5个月时的TH阳性细胞数的定量分析显示:各组间损毁侧黑质TH阳性细胞生存率无明显差异(P>0.05)。结论:BMSCs诱导组治疗帕金森病模型的疗效总体好于未诱导的BMSCs组,该两组的疗效均好于生理

关键词：骨髓基质干细胞帕金森病巢蛋白治疗

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