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生物化学与生物物理学报 2002年第2期34卷 193-198页

作者：杨劲松郑新民陈诗书上海第二医科大学生化教研室、分子生物学实验室、人类基因治疗研究中心美国康奈尔大学上海第二医科大学生化教研室、分子生物学实验室、人类基因治疗研究中心上海200025 纽约14850

利用蛋白质酪氨酸磷酸酶α(PTPα)基因转染NIH3T3细胞 ,研究PTPα诱导前后细胞生物学行为的变化 ,为肿瘤形成早期机制的研究提供细胞模型。用携带PTPα基因的四环素调控体系转染NIH3T3细胞并诱导 2 4h后 ,用RT PCR和蛋白质印迹法证实PT... 详细信息

利用蛋白质酪氨酸磷酸酶α(PTPα)基因转染NIH3T3细胞 ,研究PTPα诱导前后细胞生物学行为的变化 ,为肿瘤形成早期机制的研究提供细胞模型。用携带PTPα基因的四环素调控体系转染NIH3T3细胞并诱导 2 4h后 ,用RT PCR和蛋白质印迹法证实PTPα在诱导细胞中的表达高于未诱导细胞 ,用RT PCR及蛋白质印迹法发现内源性Src的表达水平在诱导与未诱导细胞中没有变化 ,而Src激酶的活性在诱导细胞中增高 ,并且在诱导细胞中Src的酪氨酸磷酸化水平降低。再用透射式电子显微镜和流式细胞技术观察到诱导细胞的表型已发生变化 ,实验结果表明PTPα诱导 2 4h使细胞的表型开始发生转化 ,这种变化很可能与PTPα表达水平升高使SrcC末端的pTyr52 7去磷酸化而激活Src相关

关键词： PTPα Src 转化

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PTPα高表达致NIH3T3细胞恶变早期相关基因的筛选与鉴定

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生物化学与生物物理学报 2002年第5期34卷 601-607页

利用已建立的蛋白质酪氨酸磷酸酶α(PTPα)诱导表达模型筛选NIH3T3细胞中PTPα诱导表达前后的差别表达基因 ,有利于探索肿瘤早期形成的机制。诱导PTPα表达 2 4h ,用差异显示逆转录PCR获得 6 5条差异片段 ,利用生物信息学方法分析这些... 详细信息

利用已建立的蛋白质酪氨酸磷酸酶α(PTPα)诱导表达模型筛选NIH3T3细胞中PTPα诱导表达前后的差别表达基因 ,有利于探索肿瘤早期形成的机制。诱导PTPα表达 2 4h ,用差异显示逆转录PCR获得 6 5条差异片段 ,利用生物信息学方法分析这些差异片段 ,发现其中含有 2 9种已知基因、1 2种已知EST、6种未知EST ;对已知基因进行功能查询和分析 ,发现它们分别与信号转导、细胞骨架及粘附、转录与翻译、能量代谢、凋亡及核糖体蛋白质相关 ,其中G蛋白基因、TCR基因、类Trx基因、小窝蛋白 1 (caveolin 1 )基因经RT PCR及Northern印迹实验证实了差异表达的真实性。结果表明 ,PTPα诱导表达 2 4h后多种基因发生了表达变化 ,涉及细胞生理多方面的功能 ,其中一些基因在癌变的早期起重要的作用 ,这为深入探讨肿瘤早期形成机制打下基础 ,也可为基因治疗候选靶点的选择提供依据

关键词：蛋白质酪氨酸磷酸酶α 差别表达肿瘤形成机制

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人β2微球蛋白基因启动子的克隆及其在P815细胞中的活性研究

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细胞与分子免疫学杂志 2005年第6期21卷 672-675页

作者：张兴黔梅文瀚钱关祥上海第二医科大学生物化学教研室及分子生物学实验室人类基因治疗研究中心上海200025

目的:克隆人β2微球蛋白(β2m)基因启动子,并研究其在小鼠肥大细胞瘤细胞P815中对下游报告基因的启动活性。方法:用PCR法从基因组内扩增β2m基因启动子。通过基因重组的方法,构建含此启动子的EGFP基因真核表达载体,然后分别瞬时和稳定转... 详细信息

目的:克隆人β2微球蛋白(β2m)基因启动子,并研究其在小鼠肥大细胞瘤细胞P815中对下游报告基因的启动活性。方法:用PCR法从基因组内扩增β2m基因启动子。通过基因重组的方法,构建含此启动子的EGFP基因真核表达载体,然后分别瞬时和稳定转染P815细胞。通过RT-PCR、荧光显微镜摄像和流式细胞术分析,观察IFN-γ作用前后EGFP的表达。结果:从基因组内扩增出302bp的人β2m基因的启动子,成功地构建了含此启动子的真核报告载体。RT-PCR的结果表明,IFN-γ对启动子的活性具有诱导作用,且呈浓度依赖性。流式细胞术的结果显示,在5×105U/LIFN-γ作用下,尽管表达EGFP的细胞数量没有差异,但刺激组EGFP的表达强度是未刺激组的2倍。结论:人β2m基因启动子在小鼠肥大细胞瘤细胞P815中具有高度的启动活性。通过该启动子中所含干扰素刺激反应元件(ISRE),可在IFN-γ诱导作用下调控下游目的基因的表达。

关键词： β2微球蛋白启动子 IFN-1

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干扰素-γ基因转导前后人肝癌细胞HepG1表型变化及基因表达图谱差异的研究

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胃肠病学 2001年第4期6卷 211-214页

作者：蒋小陵杨劲松张腾飞陈诗书上海第二医科大学生化教研室分子生物学实验室人类基因治疗研究中心 200025

目的：比较人肝癌细胞经干扰素（ＩＦＮ）－γ基因转导前后细胞表型及基因表达图谱的差异。方法：①用扫描电镜、流式细胞仪等方法观察ＩＦＮ－γ基因转导前后人肝癌细胞ＨｅｐＧ１表型的变化；③应用微阵列膜片分别与未转导及转导了Ｉ... 详细信息

目的：比较人肝癌细胞经干扰素（ＩＦＮ）－γ基因转导前后细胞表型及基因表达图谱的差异。方法：①用扫描电镜、流式细胞仪等方法观察ＩＦＮ－γ基因转导前后人肝癌细胞ＨｅｐＧ１表型的变化；③应用微阵列膜片分别与未转导及转导了ＩＦＮ－γ基因的ＨｅｐＧ１ｍＲＮＡ进行杂交，同时设一转导空白载体ＬＸＳＮ的ＨｅｐＧ１ｍＲＮＡ与膜片杂交作为对照，比较杂交信号，获得表达差异的基因。结果：①ＩＦＮ－γ基因转导的ＨｅｐＧ１细胞生长速度减慢，表面绒毛结构数量增多，绒毛变细、变长，ＨＬＡⅠ类和Ⅱ类分子表达增高；②ＩＦＮ－γ基因转导后，ＨｅｐＧ１细胞有多种基因的表达发生变化，其中一些基因较未转导ＩＦＮ－γ时表达增高，一些较未转导ＩＦＮ－γ时表达减低。表达发生变化的基因主要为与细胞周期和细胞凋亡相关的基因。结论：ＩＦＮ－γ基因修饰ＨｅｐＧ１细胞后使细胞表型发生变化，并且在基因表达上也发生改变。运用微阵列技术为进一步了解这些基因的相互关系及其与肿瘤生物学行为的关系奠定了基础，也可为优化肿瘤免疫基因治疗提供线索。

关键词：肝肿瘤基因表达基因转导干扰素-γ基因基因治疗

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复制缺陷型腺病毒载体介导hVEGF cDNA在C2C12和NIH3T3细胞中的表达

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中国生物化学与分子生物学报 2001年第6期17卷 704-709页

作者：孙欲晓陈诗书上海第二医科大学生物化学教研室分子生物学实验室人类基因治疗研究中心上海200025

为提高hVEGFcDNA在心肌中的表达 ,降低在其它组织中表达可能产生的不良反应 ,用PCR法得到人磷酸肌酸激酶 (MCK)增强子和CMV核心启动子 .利用克隆技术构建了含双拷贝MCK增强子 (m)和人巨细胞病毒 (CMV)核心启动子 (c)的嵌合启动子 (mmc) ... 详细信息

为提高hVEGFcDNA在心肌中的表达 ,降低在其它组织中表达可能产生的不良反应 ,用PCR法得到人磷酸肌酸激酶 (MCK)增强子和CMV核心启动子 .利用克隆技术构建了含双拷贝MCK增强子 (m)和人巨细胞病毒 (CMV)核心启动子 (c)的嵌合启动子 (mmc) ,构建真核表达质粒pK3 mmcLacZ ,制备受mmc嵌合启动子调控的重组腺病毒Ad mmcVEGF .经X gal染色、β 半乳糖苷酶定量分析、RT PCR、hVEGFELISA定量分析、VEGF活性测定等研究表明。

关键词：人磷酸肌酸激酶增强子嵌合启动子肌细胞特异性表达血管内皮生长因子腺病毒载体心肌缺血基因治疗复制

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基因修饰肿瘤细胞的研究进展

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上海免疫学杂志 1994年第4期14卷 250-252页

作者：张腾飞陈诗书上海第二医科大学生化教研室分子生物学实验室人类基因治疗中心

基因修饰肿瘤细胞的研究进展（文献综述）上海第二医科大学生化教研室分子生物学实验室人类基因治疗中心（上海２０００２５）张腾飞，陈诗书综述近年来Ｔ细胞识别抗原的分子基础及控制Ｔ细胞活化和特异性杀伤功能的各种途径已有了较多... 详细信息

基因修饰肿瘤细胞的研究进展（文献综述）上海第二医科大学生化教研室分子生物学实验室人类基因治疗中心（上海２０００２５）张腾飞，陈诗书综述近年来Ｔ细胞识别抗原的分子基础及控制Ｔ细胞活化和特异性杀伤功能的各种途径已有了较多的了解。因此，我们现在可以制定一些...

关键词：基因修饰肿瘤细胞

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NIH3T3细胞恶变早期相关新基因的鉴定与功能分析

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中国生物化学与分子生物学报 2003年第2期19卷 173-181页

作者：杨劲松郑新民陈诗书上海第二医科大学生物化学教研室分子生物学实验室人类基因治疗研究中心上海200025 美国康奈尔大学分子生物学和遗传学系纽约14850

利用已建立的蛋白质酪氨酸磷酸酶α(PTPα)诱导表达模型寻找与PTPα高表达导致NIH3T3细胞恶变早期相关的新基因 ,探索肿瘤早期形成的机理 .诱导PTPα表达 2 4h ,用差异显示逆转录PCR获得 65条差异片段 ,利用生物信息学方法分析这些差异... 详细信息

利用已建立的蛋白质酪氨酸磷酸酶α(PTPα)诱导表达模型寻找与PTPα高表达导致NIH3T3细胞恶变早期相关的新基因 ,探索肿瘤早期形成的机理 .诱导PTPα表达 2 4h ,用差异显示逆转录PCR获得 65条差异片段 ,利用生物信息学方法分析这些差异片段 .发现其中含有 2 9种已知基因 ,12种已知ESTs ,6种未知ESTs .对EST片段 ,利用芯片拼接 (insilicocloning)的方法获得 2条新的带有完整开放阅读框 (ORF)的全长cDNA .利用生物信息学方法分析其同源性、二级结构、功能模体(motif)、保守区、结构域和家族分布情况 ,并且对这 2条新全长cDNA进行部分克隆测序鉴定 ,用半定量RT PCR实验证实其差异表达的真实性 .结果表明 ,这 2条全长cDNA为新基因 (GenBankAY0 35 2 12 ,AY0 35 2 13) ,它们在PTPα诱导表达前后确实存在差异表达 ,并与细胞能量代谢及酶功能相关。

关键词：蛋白质酪氨酸磷酸酶α NIH3T3细胞恶变肿瘤早期形成机理基因鉴定功能分析 DDRT-PCR 生物信息学

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H-2K^b cDNA的克隆及其在多种真核细胞中的表达

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上海第二医科大学学报 1999年第3期19卷 193-196,200页

作者：钱书兵钱关祥陈诗书上海第二医科大学生物化学教研室分子生物学实验室人类基因治疗研究中心

目的克隆H－2KbcDNA及研究其在多种真核细胞中的表达。方法RT－PCR法扩增H－2KbcDNA，克隆入双顺反子逆转录病毒载体pGCEN，PA317包装出重组病毒后，分别感染NIH3T3、COS7及***，PCR和RT－PCR分析目的基因表达，FACS分析H－2Kb在细胞膜... 详细信息

目的克隆H－2KbcDNA及研究其在多种真核细胞中的表达。方法RT－PCR法扩增H－2KbcDNA，克隆入双顺反子逆转录病毒载体pGCEN，PA317包装出重组病毒后，分别感染NIH3T3、COS7及***，PCR和RT－PCR分析目的基因表达，FACS分析H－2Kb在细胞膜上的表达。结果以双顺反子逆转录病毒载体pGCEN介导，分别建立了H－2Kb基因转导细胞：NIH3T3／Kb、COS7／Kb及***／Kb。PCR结果表明目的基因已存在于宿主细胞中，RT－PCR结果表明目的基因已获得正确表达。FACS结果表明H－2Kb分子已稳定表达在细胞膜表面。结论MHC分子基因在多种真核细胞中的表达为研究抗原递呈及抗肿瘤作用提供了基础。

关键词： H-2K^b基因克隆逆转录病毒载体真核表达 cDNA

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α-TNF修饰肝癌细胞辐射后增殖性和致瘤性的改变

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上海第二医科大学学报 1997年第3期17卷 182-184页

作者：徐荣婷朱敏张腾飞胡亮吴兆平陈诗书上海第二医科大学生物化学教研室分子生物学实验室人类基因治疗研究中心 200025

将含α－肿瘤坏死因于互补DNA（α－TNFcDNA）的缺陷型逆转录病毒感染人肝癌细胞株（HHCL），经新霉素衍生物（G418）筛选，获得HHCL－TNF基因修饰株，用不同强度60Co辐射后，以不同浓度，分别接种BALB／C裸鼠，定期观察接种处肿瘤的生... 详细信息

将含α－肿瘤坏死因于互补DNA（α－TNFcDNA）的缺陷型逆转录病毒感染人肝癌细胞株（HHCL），经新霉素衍生物（G418）筛选，获得HHCL－TNF基因修饰株，用不同强度60Co辐射后，以不同浓度，分别接种BALB／C裸鼠，定期观察接种处肿瘤的生长情况。发现：（1）未经60Co辐射的HHCL细胞致瘤性明显高于60Co辐射组（P＜0．01）；（2）未经60Co辐射的HHCL－TNF细胞的致瘤性明显高于60Co辐射组（P＜0．01），但不同辐射剂量组间（40Gy～100Gy）无差异；③未经60Co辐射的HHCL细胞的致瘤性明显高于未经60Co辐射的HHCL－TNF组（P＜0．01）。结果显示：经60Co辐射后HHCL和HHCL－TNF细胞的致瘤性均基本消失，为"肿瘤疫苗"用于临床治疗提供参考依据。

关键词：肿瘤坏死因子 ^60Co辐射肿瘤疫苗肝肿瘤

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微阵列(microarrays)技术及其应用

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生命科学 2001年第2期13卷 85-88页

作者：杨劲松陈诗书上海第二医科大学生化教研室分子生物学实验室人类基因治疗研究中心上海200025

微阵列分为ｃＤＮＡ微阵列和寡聚核苷酸微阵列。微阵列上“印”有大量已知部分序列的ＤＮＡ探针，微阵列技术就是利用分子杂交原理，使同时被比较的标本（用同位素或荧光素标记）与微阵列杂交，通过检测杂交信号强度及数据处理，把他们... 详细信息

微阵列分为ｃＤＮＡ微阵列和寡聚核苷酸微阵列。微阵列上“印”有大量已知部分序列的ＤＮＡ探针，微阵列技术就是利用分子杂交原理，使同时被比较的标本（用同位素或荧光素标记）与微阵列杂交，通过检测杂交信号强度及数据处理，把他们转化成不同标本中特异基因的丰度，从而全面比较不同标本的基因表达水平的差异。微阵列技术是一种探索基因组功能的有力手段。

关键词：微阵列分子杂交基因组功能应用

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