检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：尚杨卫中国医科大学

学位级别：硕士

前言：　　全世界每年因恶性肿瘤死亡的病人高达500万，肿瘤已经成为当今威胁人类健康的主要疾病。研究证实肿瘤组织中的血管较正常组织丰富。目前发现肿瘤内血管生成不仅对肿瘤的生长至关重要，而且对肿瘤的转移也发挥重要作用，肿瘤... 详细信息

前言：　　全世界每年因恶性肿瘤死亡的病人高达500万，肿瘤已经成为当今威胁人类健康的主要疾病。研究证实肿瘤组织中的血管较正常组织丰富。目前发现肿瘤内血管生成不仅对肿瘤的生长至关重要，而且对肿瘤的转移也发挥重要作用，肿瘤的转移是恶性肿瘤的主要致死病因之一。　　肿瘤细胞穿越基底膜是转移的关键，基底膜是由层粘连蛋白（Laminin，LN）、Ⅳ型胶原、巢蛋白、硫酸肝素蛋白聚糖等组成的网状结构，其中层粘连蛋白是主要成分。完整的层粘连蛋白是由细胞分泌到细胞外，由α、β、γ三条链组成的异构三聚体，分子量从400kDa到900kDa不等;到目前为止，共发现5种类型的α链、4种类型的β链、3种类型的γ链，有19种组合形式，在机体各组织中广泛表达，诸如血管内皮和平滑肌细胞。层粘连蛋白调控周围血管内皮细胞和平滑肌细胞的黏附、增殖、分化、迁移和凋亡，从而对血管再生和其空间结构的维持发挥重要作用。层粘连蛋白在人体随着时间的变化，在不同组织有不同种表达形式。目前研究表明:人血管内皮细胞仅表达两种层粘连蛋白:LN411(即Lamininα4β1γ1)和LN511(即Lamininα5β1γ1)。所有的内皮细胞各个阶段都表达LN411，其α4G域被抗体封闭时就能触发内皮细胞依赖线粒体的程序性细胞死亡，这表明LN411对内皮细胞的生存是必需的;而LN511只有在生后3-4周的毛细血管和小静脉的内皮细胞基底膜上出现，并且促血管生成的病理因素（如促炎因子TNFα）能够上调其表达，说明LN511或在血管新生过程中起重要作用。　　LN511的膜受体包括整合素受体（Integrin）和非整合素受体(如Lutheran bloodgroup glycoprotein)，以整合素为主。内皮细胞膜上表达几种整合素受体，其中整合素α3β1为LN511的主要特异性受体。LNα5是LN511的亚基。LN511的许多生物学功能都是通过LNα5来实现的，因为它包含与细胞受体相互作用的主要位点。无论是胚胎鼠还是幼鼠，LNα5基因敲除后会表现出多种组织器官发育缺陷，如颅脑畸形，并指，肾小球基底膜、肾小管毛细血管网形成障碍等。这些结果表明LNα5在组织器官的发育和发展中具有多重功能。有意思的是，LNα5同样也是一个调节肿瘤黏附、侵袭和转移的多功能黏附蛋白。一方面，LNα5与肿瘤细胞表面的整合素受体结合，促进肿瘤细胞的黏附;另一方面，LNα5与肿瘤细胞表面的一类非整合素受体(Lutheran blood group glycoprotein)结合，促进肿瘤细胞的迁移，有利于肿瘤侵袭和转移，事实上整合素受体与非整合素受体是一种竞争性地关系。研究表明在乳腺、甲状腺、卵巢、前列腺等组织上的恶性肿瘤高表达LNα5，我们通过免疫组化发现LNα5在肺癌、肾癌、肠癌、胰腺癌等肿瘤组织中也呈现高表达（图1，2）。那么这些肿瘤细胞与LNα5之间的关系又如何呢？我们拟以肺腺癌A549细胞系为例进行研究。　　本实验通过检测LNα5在肺腺癌组织中的表达，从蛋白和mRNA水平上研究LNα5的表达与A549细胞（肺腺癌细胞）的细胞不同增殖状态间的关系，观察表达LNα5的A549细胞的细胞周期。为肺腺癌的临床诊断和治疗提供新的实验依据。　　方法：　　人体组织标本肾癌与其癌旁组织，肺癌与其癌旁组织，结肠癌与其癌旁组织，胰腺癌与其癌旁组织，及其它组织切片均来源于中国医科大学附属第一医院，经中国医科大学伦理委员会批准及供者知情同意。A549细胞购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心。　　A549细胞实验分组:　　当A549细胞在直径为3cm的培养皿中长到约60％时，即绝大部分细胞呈现梭形，处于伸展状态，树突明显突起为A组;当A549细胞在直径为3cm的培养皿中长到约80％-90％时，即细胞数量较多，产生接触抑制为B组。　　1.免疫组织化学法---检测LNα5在人类肿瘤组织及其癌旁组织中的表达。　　2.蛋白质免疫印迹法---检测LNα5在肺腺癌及A、B组A549细胞中的表达。　　3.流式细胞术法---检测A、B组A549细胞的细胞周期及LNα5的表达。　　4.免疫荧光法---检测LNα5在A、B组A549细胞中的表达。　　***-PCR法---检测LNα5在A、B组A549细胞中的mRNA量。　　结果：　　***α5在结肠癌与其癌旁组织，胰腺癌与其癌旁组织，肺癌与其癌旁组织，肾癌与其癌旁组织中均表达，与癌旁组织相比，LNα5在癌组织中高表达，差异有统计学意义(p＜0.05)。　　2.肺腺癌及其癌旁组织均表达LNα5，与癌旁组织相比，LNα5在肺腺癌组织中高表达，差异有统计学意义(p＜0.05)。　　3.A组A549细胞有45％-50％的细胞处于S期，60％-65％的细胞处于非G1期;而B组A549细胞仅有18％-25％的

关键词：肺腺肿瘤细胞增殖层粘连蛋白α5 蛋白表达

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人类肠道微生物组与相关疾病研究进展

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生命科学 2014年第7期26卷 768-772页

作者：张泽刘翠花赵晓航海军总医院基础医学研究中心南方医科大学第三临床医学院清华大学生命科学院中国医学科学院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室

人体肠道共生着数以万亿计的微生物,肠道微生物在维持宿主正常生理功能中发挥重要作用,其成分和功能变化可导致严重的肠道和全身性疾病。以新一代测序技术和生物信息学分析为基础的元基因组学研究不仅极大地推动了对人类肠道微生物的整... 详细信息

人体肠道共生着数以万亿计的微生物,肠道微生物在维持宿主正常生理功能中发挥重要作用,其成分和功能变化可导致严重的肠道和全身性疾病。以新一代测序技术和生物信息学分析为基础的元基因组学研究不仅极大地推动了对人类肠道微生物的整体认识,还加深了对肠道微生物代谢产物促进人类健康机理的理解,为肠道炎症、代谢性疾病和癌症等人类疾病的诊断与治疗提供了新思路。就肠道微生物元基因组学与肠道相关疾病的研究进展作一综述。

关键词：肠道微生物组元基因组学新一代测序技术 16S rRNA

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KLF5调控上皮细胞极性影响肺管腔发育的机制

KLF5调控上皮细胞极性影响肺管腔发育的机制

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第三届“模式生物与人类健康”发育遗传学全国学术研讨会

作者：廖勇董友志 Jeffrey A.Whitsett 郑毅姜伟 Shailaja Akunuru Inderpreet Sur 万华靖四川大学华西第二医院西部妇幼医学研究院辛辛那提儿童医院围产医学中心辛辛那提儿童医院实验血液系哈尔滨医科大学生物信息科学与技术学院卡罗林斯卡学院生物科学与营养系

肺依赖于其高度分支的管腔系统实现与外界的气体和物质交换。我们的前期研究显示转录因子KLF5的组织特异性的敲除会分别导致肺,肠、肾脏等多个器官的发育障碍。尽管KLF5调控组织特异性基因表达的机制有初步了解,但是其影响多个器官形态... 详细信息

肺依赖于其高度分支的管腔系统实现与外界的气体和物质交换。我们的前期研究显示转录因子KLF5的组织特异性的敲除会分别导致肺,肠、肾脏等多个器官的发育障碍。尽管KLF5调控组织特异性基因表达的机制有初步了解,但是其影响多个器官形态发育的细胞生物学分子机制还不清楚。本研究通过肺上皮特异性转基因和基因敲除小鼠及体外细胞模型,深入研究KLF5影响上皮管腔形态发育的分子机制。我们的研究发现KLF5是调控肺上皮形状的关键基因,其可以

关键词：上皮细胞

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从单羰基姜黄素类似物中设计、合成与发现靶向MD2的抗炎化合物

从单羰基姜黄素类似物中设计、合成与发现靶向MD2的抗炎化合物

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第八届全国化学生物学学术会议

作者：梁广化学生物学研究中心药学院温州医科大学

甾体类和环氧化酶抑制剂被长期用于治疗性抗炎药物,但是它们均显示出严重的副作用。因此,发展独特的抗炎药物有着重要的价值和意义。姜黄素是中药姜黄中的一个主要的活性化合物。近30年来,姜黄素被发现具有多种药理活性,如抗肿瘤、抗炎... 详细信息

甾体类和环氧化酶抑制剂被长期用于治疗性抗炎药物,但是它们均显示出严重的副作用。因此,发展独特的抗炎药物有着重要的价值和意义。姜黄素是中药姜黄中的一个主要的活性化合物。近30年来,姜黄素被发现具有多种药理活性,如抗肿瘤、抗炎、抗病毒、心血管保护等;同时,有研究发现姜黄素抑制炎症因子表达是通过直接作用于LPS-TLR4炎症信号通路中的MD-2或IKKβ靶点而实现的。然而,极差的药代性能和体内快速降解限制了姜黄素的临床应用。本研究中,我们根据之前的构效关系研究结果,合理地设计了以一系列具有肉桂酰胺结构的单羰基姜黄素类似物。我们共合成了37个新化合物,并评估了它们在原代巨噬细胞中抑制LPS诱导TNF-α释放的能力,根据测试结果,我们进一步分析了这类化合物的构效关系和定量构效关系。其中4个活性化合物被用于进一步地研究,它们剂量依赖性地抑制LPS诱导的TNF-α和IL-6表达。化合物D33被发现是活性最好的化合物。随后,我们发现D33可以抑制LPS诱导的TNF-α,IL-1β,IL-6,COX-2和PGES等炎性蛋白基因的mRNA表达,并逆转LPS诱导的IκBα降解,干扰NF-κB p65浆核转移,以及剂量依赖性抑制ERK和p38的磷酸化激活。在体内,D33显著缓解LPS诱导的脓毒血症小鼠死亡,说明D33是一个有着开发前景的抗炎化合物。更重要的是,我们进一步的数据显示D33可以直接与MD-2蛋白发生相互作用而结合,且这种结合在细胞以及分子层面上均可阻断脂多糖LPS与MD-2蛋白的结合,同时D33在体外激酶实验中并没有表现出对IKKβ抑制活性。这些数据表明D33的抗炎活性可能来自于其对MD2的直接作用,而不是对IKKβ的抑制。这些实验结果提出了一类新型MD2靶向的抗炎先导物和候选药物。

关键词： LPS-TLR4炎症信号通路、MD-2 肉桂酰胺结构单羰基姜黄素类似物

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miR-150再表达通过靶向c-Myb诱导EBV阳性Burkitt淋巴瘤分化

miR-150再表达通过靶向c-Myb诱导EBV阳性Burkitt淋巴瘤分化

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作者：陈少红南方医科大学

学位级别：博士

研究背景Burkitt淋巴瘤是一种高度侵袭性B细胞性淋巴瘤,根据发病区域及临床表现可分为三种类型：地方性、散发性和免疫缺陷相关性；根据EB病毒感染情况还可分为EBV阳性和EBV阴性Burkitt淋巴瘤。至于Burkitt淋巴瘤的起源,有研究报道,EBV... 详细信息

研究背景 Burkitt淋巴瘤是一种高度侵袭性B细胞性淋巴瘤,根据发病区域及临床表现可分为三种类型：地方性、散发性和免疫缺陷相关性；根据EB病毒感染情况还可分为EBV阳性和EBV阴性Burkitt淋巴瘤。至于Burkitt淋巴瘤的起源,有研究报道,EBV阳性的肿瘤细胞可能起源于中心母细胞,而EBV阴性的肿瘤细胞可能起源于后中心细胞或记忆B细胞。近年来,虽然在肿瘤治疗方面做了许多努力,如抑制肿瘤细胞快速增殖及高强度短期的联合化疗,但还是会有明显的副作用,如细胞毒性和肿瘤溶解综合征。因此,迫切需要寻找更有效的治疗方法。肿瘤细胞的发生是正常细胞在各种内外环境因素影响下细胞分化发生紊乱的结果,而细胞分化紊乱是一个多基因、多步骤的过程,单独改变某种基因的表达很难对细胞分化产生实质性的影响。miRNAs(miRNAs)是一类普遍存在于动植物中的长度约为22个核苷酸的内源性非编码小分子RNA,迄今为止,大约有2000多种miRNAs被发现鉴定,它们参与细胞增殖、分化、凋亡、和胚胎发育等一系列重要的生命过程。一种miRNA可以调控数百种靶基因,而且它所调控的基因中相当一部分是转录因子,后者本身就扮演一个调控者的角色。因此,改变一种miRNA的表达就会对细胞产生剧烈的效应。种种研究迹象表明,miRNAs具有强烈的调控细胞分化的作用,调整其表达能诱导肿瘤细胞向正常细胞分化,很有可能成为诱导分化治疗的新型诱导分化剂。诱导分化治疗又称为肿瘤细胞的再分化(redifferentiation),是在某些诱导分化剂的作用下诱导肿瘤细胞向正常细胞方向分化,改变肿瘤细胞的增殖、浸润、侵袭、转移等恶性特征,达到治疗肿瘤的目的。诱导分化将会成为肿瘤治疗的一个新的发展方向。值得一提的是,淋巴造血系统肿瘤是研究诱导分化的较好的模式肿瘤,因为该系统肿瘤的发生是由于淋巴造血细胞分化紊乱或分化阻滞的结果,在淋巴造血细胞发育分化的不同阶段都可以产生相对应类型的肿瘤,不同分化阶段的淋巴造血细胞都有其特定的免疫表型及基因特征,便于鉴别和检测。在淋巴造血细胞发生过程中,miRNAs的动态表达模式提示其在决定造血细胞分化过程中发挥重要的作用,其中最引人注目的是miR-150,该基因位于19q13.33,成熟的miR-150由22个核酸组成,它随着B细胞发育的成熟表达量逐步升高,是B淋巴细胞分化的关键因子。有研究发现,与正常B细胞相比,不同亚类的弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)肿瘤细胞miR-150普遍低表达。同时也有研究发现,与正常NK/T细胞相比,在NK/T细胞淋巴瘤细胞株和临床标本中,miR-150低表达或表达缺失。然而在不同类型的淋巴瘤细胞miR-150表达情况怎样?在Burkitt淋巴瘤细胞中纠正miR-150的表达后,能否诱导细胞向成熟浆细胞方向分化了? 新近研究表明,在老鼠动物模型内,miR-150通过负性调节c-Myb表达来控制pro-B向pre-B细胞分化。c-myb是一种原癌基因,编码核DNA结合蛋白,行使转录活化和抑制功能。随着造血细胞的成熟分化,其表达逐渐下降,与miR-150的表达模式刚好相反。那么在人类Burkitt淋巴瘤中,miR-150和c-Myb的关系又如何了?需要进一步探究。目的 1.观测hsa-miR-150和c-Myb在人类正常不同分化阶段B淋巴细胞和不同淋巴瘤细胞系表达谱。 2.构建Burkitt淋巴瘤细胞株稳定表达hsa-miR-150细胞亚系Raji-miR-150, Daudi-miR-150, Ramos-miR-150和BJAB-miR-150。 3.探究miR-150再表达诱导Burkitt淋巴瘤细胞向末端浆细胞方向分化的可能性及其机制。方法 1. hsa-miR-150和c-Myb在人类正常不同分化阶段B淋巴细胞亚群和不同淋巴瘤细胞系表达模式采用流式细胞技术从扁桃体炎患者中的扁桃体内分选出不同分化阶段B淋巴细胞群,包括naive细胞,中心母细胞,中心细胞和记忆B细胞；运用real-time PCR检测hsa-miR-150和c-Myb在正常不同分化阶段B淋巴细胞群和各株淋巴瘤细胞中的表达水平；利用Western Blot在蛋白水平检测正常B细胞各株淋巴瘤细胞c-Myb的表达水平。 2.稳定表达hsa-miR-150的Burkitt淋巴瘤细胞亚系Raji-miR-150, Daudi-miR-150, Ramos-miR-150和BJAB-miR-150的构建及其生物学特性含目的基因(hsa-miR-150)的慢病毒表达载体购自上海吉凯公司；将含有重组慢病毒质粒(实验组,对照组)的病毒上清分别转染Burki

关键词： Burkitt淋巴瘤 c-Myb EBV hsa-miR-150 诱导分化

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Wnt/β-catenin信号通路在肝纤维化中的作用及中药肝复康的干预机制

Wnt/β-catenin信号通路在肝纤维化中的作用及中药肝复康的干预机...

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作者：张彩华大连医科大学

学位级别：博士

研究背景和目的:　　慢性肝损伤引起肝纤维化,最终导致肝硬化甚至肝癌,已成为世界范围内的一类重大疾病。肝纤维化十分复杂的病理过程,其本质是肝星状细胞(hepaticstellate cells,HSCs)的活化和细胞外基质(extracellular matrix,ECM)... 详细信息

研究背景和目的:　　慢性肝损伤引起肝纤维化,最终导致肝硬化甚至肝癌,已成为世界范围内的一类重大疾病。肝纤维化十分复杂的病理过程,其本质是肝星状细胞(hepaticstellate cells,HSCs)的活化和细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的过度沉积。国内外的研究均证明肝纤维化是可以逆转的,有效的治疗肝纤维化可以防止各种慢性肝病向肝硬化发展。正常情况下肝星状细胞处于静止状态,当致肝病因子造成肝细胞损伤时,经多种信号转导途径使肝星状细胞激活,并转化为肌成纤维细胞,即导致HSC的活化。活化的HSC的主要特征包括HSC增殖和HSC内α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达。因此,研究肝纤维化的发生机制,有效阻止HSC的增殖和活化是治疗和逆转肝纤维化的重大课题。　　 Wnt信号转导通路是一种对细胞增殖和分化等多种功能具有重要调节作用的信号转导系统,涉及到胚胎生长,组织细胞增殖,维持内环境稳态等多种生命活动过程,是一个由多种分子参与、互相影响互相制约的复杂体系。目前,Wnt信号转导通路异常与肿瘤及多种人类疾病的发生发展相关,成为分子生物学、细胞生物学和肿瘤研究的热点。研究证实的Wnt信号转导通路有4条,分别为:经典的Wnt信号转导通路(又称为Wnt/β-catenin通路);Wnt/Ca2+通路;平面的细胞极性通路(Planar cell polarity pathway,PCP)又称Wnt/JNK通路;调节纺锤体定向和不对称细胞分裂的通路。其中Wnt/β-catenin信号转导通路是目前研究比较多、比较深入的一条分支。　　近年来,肝纤维化的治疗并没有取得显著进展,西药由于抗纤维化作用靶位单一,疗效并不理想,而且有些药物的毒副作用大于治疗作用,不宜用于临床,因此,中医药抗肝纤维化治疗研究现正受到世界肝病学界的广泛重视。大量的临床试验和动物模型已证实中药肝复康具有改善肝功、减轻炎症、抑制纤维增生等功能,但其具体治疗机制仍需进一步探讨。　　本课题采用CCL4诱导大鼠肝纤维化的动物模型,培养肝星状细胞HSC-T6,观察:1)中药肝复康对肝纤维化大鼠肝脏组织形态学及细胞外基质相关基因表达的影响;2)经典的Wnt/β-catenin信号转导通路在肝纤维化动物模型中的作用及中药肝复康对它的影响;3)中药肝复康药物血清对肝星状细胞HSC-T6中经典的Wnt/β-catenin信号转导通路的干预作用。　　方法:　　健康的SD大鼠(雌雄不限),体重180-220克,清洁级,由大连医科大学动物实验中心提供。正常喂养一周后,随机分为正常对照组(C),模型组(M),低剂量治疗组(LT)、中剂量治疗组(MT)、高剂量治疗组(HT)。除正常对照组外,余鼠造模。皮下注射以橄榄油稀释的10％的四氯化碳,5ml/kg,每周两次,共12周,正常对照组以同样方法皮下注射生理盐水。高、中、低剂量治疗组则于造模第9周后开始分别以3125mg/kg·d、312.5mg/kg·d、31.25mg/kg·d剂量的肝复康灌胃至20周。以上各剂量药物均溶于10ml/kg的生理盐水中。于12周末处死模型组,第20周末处死其他各组,取肝组织称取肝脏湿重,从肝右叶的中部切取2块肝组织,一块用10%的甲醛固定后制备石蜡切片,另一块于-70℃冰箱保存用于分子生物学检测。HE染色来反映肝纤维化的程度,双盲发采用Isak评分系统对肝纤维化程度进行评分。　　大鼠肝星状细胞(HSC-T6)细胞株由上海中医药大学肝病研究所徐列明教授惠赠,中剂量药物血清依照既定工艺制备。　　免疫组化法观察大鼠肝组织中TIMP-1,Tcf-4,α-SMA和β-catenin的表达;反转录-聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测大鼠肝组织和肝星状细胞中Wnt1,Wnt3a,Wnt10b,Frizzled-1,Frizzled-2,GSK-3B,β-catenin,Tcf-4,CyclinD1,PPARγ,α-SMA,CollagenⅠ,CollagenⅢ,MMP2,TIMP-1的表达水平。免疫蛋白印迹(Western-Blot)方法检测β-catenin,Tcf-4,α-SMA,CollagenⅠ,TIMP-1在大鼠肝组织和肝星状细胞中的表达。实验结果均以均数±标准差((-x)±s)表示,采用SPSS统计软件,组间比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA),然后用LSD法进行两两比较。用Pearson方法进行相关分析。P＜0.05为差异有意义,P＜0.01为差异有显著性意义。　　实验结果如下:　　一、中药肝复康对肝纤维

关键词：肝纤维化 Wnt信号转导通路中药肝复康肝星状细胞动物模型

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CCL3L1基因拷贝数变异与汉族狼疮肾炎的关系及患者的生存分析

CCL3L1基因拷贝数变异与汉族狼疮肾炎的关系及患者的生存分析

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作者：郑朝晖郑州大学

学位级别：博士

引言:　　系统性红斑狼疮(systemiclupuserythematosus，SLE)是自身免疫性疾病的原型，以体内产生多种致病性抗体、累及多系统、多脏器为临床特征。该病在中国的患病率在36.03-84.43/10万之间，好发于育龄期妇女，男女患病率之比约为1... 详细信息

引言:　　系统性红斑狼疮(systemiclupuserythematosus，SLE)是自身免疫性疾病的原型，以体内产生多种致病性抗体、累及多系统、多脏器为临床特征。该病在中国的患病率在36.03-84.43/10万之间，好发于育龄期妇女，男女患病率之比约为1∶9，其发病机制迄今尚未完全阐明，目前认为与遗传、性激素、感染、环境等因素相互作用引起机体免疫调节紊乱相关。狼疮肾炎(lupusnephritis，LN)是SLE常见的临床表现，是影响SLE预后的重要因素之一。近50％的SLE患者在病程早期即出现尿检异常或肾功能异常，80％患者在以后的病程中出现明显的肾功能异常[1]。10％-20％的LN患者最终发展成终末期肾脏病[2-4]。由于狼疮肾炎的临床表现及预后在不同种族、不同地区存在差异，甚至同一种族不同群体之间也存在差异，这种异质性可能与多种因素相关。因此确定本民族、本地区狼疮肾炎的临床特点，了解影响预后的因素是十分必要的。我们收集河南汉族狼疮肾炎的临床资料分析其临床特征，并进行长期随访，了解影响其生存的因素，以便更好指导临床，使更多的患者受益。　　从遗传学角度上讲，系统性红斑狼疮又是一个多基因病，单核苷酸多态性（singlenucleotidepolymorphisms，SNPs）和拷贝数变异(copynumbervariants，CNVs)是人类基因变异的两个重要遗传基础。近几年对SLE的基因关联分析研究(genome-wideassociationstudy，GWAS)发现了许多新的易感基因/位点。但是SNPs对于SLE这一复杂性状疾病来讲，仅能解释相对一小部分疾病风险，即使再扩大样本量，遗传因素如何导致疾病的发病仍然解释不清。在SNP-GWAS的热潮过后，如何进一步挖掘SNP芯片数据的剩余价值是许多研究机构关心的问题，CNV成为研究热点，基于SNP的全基因组关联研究结果，选择具有遗传风险性的基因进行CNV的研究，发现补体C4(complementcomponent4)、FCGR3B(FcgammareceptorⅢBgene)、TLR7(toll-likereceptor7)、CCL3L1(CCchemokineligand3-like-1)等基因拷贝数变异与系统性红斑狼疮发病相关，但这些研究大都来自其他种族。目前有关趋化因子CCL3L1与SLE相关性研究结果存在较大差异，并且不同群体之间基因拷贝数分布也存在差异，中国人群CCL3L1拷贝数的分布及是否与SLE相关尚未见报道。　　因此，本研究在分析河南汉族狼疮肾炎流行病学、临床病理资料及预后因素的同时，应用多重基因拷贝数检测的生物学技术分析了患者的遗传信息，探索CCL3L1基因拷贝数变异与河南汉族狼疮肾炎及其临床表型是否存在相关性，为进一步阐明系统性红斑狼疮的遗传发病机制提供理论基础。　　目的:　　 1.分析河南汉族狼疮肾炎临床病理特点、生存率及预后因素。　　 2.了解CCL3L1基因拷贝数在河南狼疮肾炎及正常人群分布情况;探索CCL3L1基因拷贝数变异与河南狼疮肾炎及其临床表型是否存在相关性。　　方法:　　 1研究对象　　 1.1研究对象来自2003年1月～2010年12月间就诊于郑州大学第一附属医院肾病风湿科的狼疮肾炎患者491例，其中男性52例，女性439例，均符合1997年ACR系统性红斑狼疮分类标准，采集人口学资料、临床及病理资料，每3-6月进行一次随访，终点事件定义为死亡。其中血液标本保存完好的LN患者共337例，女性307例，男性30例。　　 1.2健康对照者来自郑州大学学生志愿者及郑州大学第一附属医院体检中心的健康志愿者，共338例，其中女性309例，男性29例，采集血样标本。年龄性别均与狼疮肾炎组匹配，所有入选者均来自河南汉族。　　 2实验方法　　 2.1对所有临床病理资料进行总结，建立excel表格，每3-6个月门诊或者电话随诊1次，或按病情随诊，终点事件为死亡。记录患者主要的临床表现、病情变化、实验室检查、治疗方案、并发症及死亡原因。　　 2.2用酚-氯仿法提取外周血基因组DNA，采用上海天昊生物科技有限公司开发的AccuCopyTM多重基因拷贝数检测专利技术，进行病例-对照分析，确定狼疮肾炎和健康对照CCL3L1基因拷贝数变异分布情况及CCL3L1拷贝数变异对狼疮肾炎所贡献的风险大小。　　 2.3采用病例-病例对照研究，进一步探索CCL3L1基因拷贝数变异是否与狼疮临床表型具有相关性。　　 3统计分析　　采用SPSS17.0统计软件包进行实验数据的统计分析，定量资料以均数±标准差表示，定性资料以频数（百分比）表示;计量资料满足正态分布用t-test，偏态分布用Mann-WhitneyTest。定性资料

关键词：狼疮性肾炎临床表现病理类型预后因素生存率 CCL3L1基因拷贝数生存变异

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脂多糖、前列腺素E<,2>在骨再生中的作用

脂多糖、前列腺素E<,2>在骨再生中的作用

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作者：王乐禹南方医科大学

学位级别：博士

研究背景:骨再生是由成骨细胞、破骨细胞和其他多种细胞及细胞因子参与的复杂的修复过程,其核心是破骨细胞介导的骨吸收和成骨细胞介导的骨形成的一个动态平衡过程。骨折后的愈合和贯穿人一生的骨代谢都是靠骨再生过程来完成的。然而,... 详细信息

研究背景:骨再生是由成骨细胞、破骨细胞和其他多种细胞及细胞因子参与的复杂的修复过程,其核心是破骨细胞介导的骨吸收和成骨细胞介导的骨形成的一个动态平衡过程。骨折后的愈合和贯穿人一生的骨代谢都是靠骨再生过程来完成的。然而,中年后随着年龄增长由于骨吸收速度大于骨形成速度所造成的骨质疏松、以及由于骨形成停滞造成的骨折后延迟愈合甚至骨不连等疾病一直是困扰医务工作者的难题。近年来,参与及调控骨再生过程中的细胞因子已成为人们研究的热点,而作为激发骨折愈合起始阶段并起着重要作用的促炎症因子在骨再生中的作用机理还未被很好地阐明。脂多糖(lipopolysaccharide,LPS),前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)都是骨再生过程中重要的促炎症因子。　　 LPS,可诱导多种炎症因子的释放。LPS对细胞及组织的作用被喻为“双刃剑”。早期的研究表明LPS能直接导致细胞及组织的凋亡或坏死,而最新的研究发现低浓度的LPS又可促进细胞或组织的增殖。而低浓度的LPS是否能促使成骨细胞增殖还鲜有报道。PGE2,一直是研究骨再生过程中的热点,内源性和外源性的PGE2、体外和体内PGE2在骨再生过程中的作用各不相同。PGE2促进骨吸收的作用研究已相对成熟,而其在成骨方面的作用机制还未被阐明。NF-κB,是广泛存在于胞浆中的一种快反应转录因子,通常以p65-p50二聚体的形式存在,在LPS等外界因素刺激成骨细胞分泌PGE2的同时,往往伴随着NF-κB的活化,而抑制其活化可阻碍由于雌激素缺乏造成的骨丢失。本课题将研究LPS、PGE2和NF-κB在成骨细胞增殖和分化以及在体内骨折愈合中的相互作用。　　目的:探讨LPS和PGE2两种促炎症因子在骨再生过程中的作用及信号途径,试图找到一个关键性的靶点,为以后基因治疗骨不连、骨延迟愈合等疾病提供基础实验支持。　　方法:　　 1.采用500 ng/mL的LPS、500 ng/mL的LPS和COX-2抑制剂sc791、500ng/mL的LPS和NF-κB抑制剂BAY11-7082分别处理MC3T3-E1成骨细胞1h、6h和12h。采用流式细胞仪检测各组细胞的细胞周期,利用RT-PCR和westernblot法检测和比较LPS对成骨细胞NF-κB mRNA和蛋白水平的变化,采用western blot法检测各组细胞NF-κB、COX-2蛋白表达的变化,利用免疫荧光和EMSA法检测各组细胞NF-κB蛋白核转移情况和活力的变化情况。　　 2.采用10 μmol/L PGE2、5 μmol/L BAY 11-7082和10 μmol/L PGE2分别处理MC3T3-E1成骨细胞30 min,2 h和4 h。通过MTT法检测细胞增殖活力,利用流式细胞检测法检测各组的细胞周期和凋亡率变化,通过检测细胞ALP活力了解细胞的分化情况,采用western blot法检测各组细胞NF-κB、BMP-7和Id2蛋白的表达、利用免疫荧光和EMSA法检测各组细胞NF-κB蛋白的核转移和活力变化。　　 3.采用wistar大鼠造桡骨骨折模型,用BAY11-7082进行局部骨折部位注射干预,分别于3d,7d,14d和28d取出骨痂组织,检测骨痂组织ALP活力了解其成骨情况,采用elisa法检测骨痂组织PGE2含量,利用western blot法检测骨痂组织中NF-κB、BMP-7和Id2蛋白的表达情况,利用组织切片HE染色法观察14d和28d时处理组和非处理组骨痂组织结构。　　 4.10 μmol/L PGE2处理细胞30 min后,收集正常对照组和处理组的细胞,用。TRIZOL 冰上悬浮后立即转交至上海生物芯片公司做RNA的提取、RNA的检测和基因芯片的杂交。本课题采用的基因芯片为美国西北大学基因芯片中心实验室制备的人类全基因组芯片,芯片包含34995个基因探针点。芯片结果采用Agilent扫描仪进行扫描,Feature extraction软件读取数据后进行Normalize处理分析。将Ratio≥2或≤0.5,p Value Log Ratio＜0.01作为表达差异显著的基因。　　结果:　　 1.500 ng/mL LPS处理细胞6 h、12 h后,细胞的增殖指数有显著性增高(P<0.01),COX-2抑制剂sc791不能抑制由LPS诱导的成骨细胞增殖,NF-κB抑制剂BAY 11-7082可显著抑制由LPS诱导的成骨细胞增殖。LPS处理成骨细胞6 h后,NF-κB的mRNA表达与对照组比较无显著差异(P>0.05),蛋白表达水平与对照组相比有显著的增高(P<0.01),说明LPS作用在成骨细胞NF-κB的蛋白水平,而不是在mRNA水平。LPS处理成骨细胞后NF-κB发生核易位和活力的增强,而COX-2蛋

关键词：脂多糖骨再生前列腺素E2

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CD24通过激活整合素β1调节肠癌细胞黏附

CD24通过激活整合素β1调节肠癌细胞黏附

引用

作者：邓启亮南方医科大学

学位级别：硕士

大肠癌是常见的消化道恶性肿瘤，严重威胁人类的生命健康。在北美、西欧各国大肠癌占全部癌症死亡原因的第3位，在我国大部分省市占全部死亡原因的第5-6位。恶性肿瘤的生物学特性包括自主性、可移植性、转移性、去分化等，其中最关键的... 详细信息

大肠癌是常见的消化道恶性肿瘤，严重威胁人类的生命健康。在北美、西欧各国大肠癌占全部癌症死亡原因的第3位，在我国大部分省市占全部死亡原因的第5-6位。恶性肿瘤的生物学特性包括自主性、可移植性、转移性、去分化等，其中最关键的是转移性。大肠癌的死亡率高，主要与其转移有关，而黏附是作为转移的一个重要的因素，现在很多的研究都集中在肿瘤细胞的黏附和去黏附上面。大肠癌的黏附是一个十分复杂、多步骤的过程，虽然有些大肠癌黏附的分子机制已有所阐明，但尚存在许多不确定的因素。研究报道有百余种基因参与调控大肠癌的黏附过程，其中整合素是影响肿瘤细胞黏附的最重要的分子。 CD24是HAS在人类中的同源分子，其定位于染色体的6q21，表现出等位基因的多态现象，具有2194个碱基。这个分子被发现出现在鼠造血细胞，胸腺细胞，发育中的神经细胞中，而且最近的研究表明它在人类各种肿瘤中都高表达。CD24是一个粘蛋白样黏附分子，具有一个27个氨基酸的的小蛋白核心，通过GPI锚定在细胞膜上，具有一个P-选择素配基和0-连接糖基化部位，P-选择素配基可能与肿瘤在内皮中的黏附，滚动有关，而0-连接位点可以被大量糖基化，糖基在CD24的分子结构和功能发挥中起重要作用，充当细胞连接位点上分子间相互作用的媒介，介导细胞间，细胞与基质间黏附。研究表明，CD24在卵巢肿瘤，乳腺癌，前列腺癌，胰腺癌，肝细胞癌，结肠癌，膀胱上皮细胞癌，胆管癌中是具有高表达的。最近Sagiv等发现在90.7%的结直肠腺瘤和86.3%的结直肠腺癌表达CD24。在膀胱癌中，CD24是Ral信号通路的下游目标基因，RalA/B的敲低能降低CD24的含量从而影响细胞肌动蛋白骨架，使细胞失去黏附能力，利用荧光显微镜观察发现肌动蛋白张力丝形态紊乱消失。将转移能力较弱的1AS细胞株转染入CD24质粒，接种于裸鼠，与对照组相比，CD24表达可显著增加肺部结节的数量。MTLYCD24mut细胞（CD24缺失细胞）与纤维连接蛋白，层黏连蛋白，胶原Ⅰ和胶原Ⅳ的结合能力下降，以纤维连接蛋白最为明显，诱导MTLYCD24mut细胞株表达CD24后，肿瘤细胞与纤维连接蛋白的结合能力显著增强。CD24可以和整合素形成复合物，在鼠的乳腺癌细胞中发现CD24可以通过其连接部位的脂筏结构来激活整合素β1，脂筏是细胞膜上的微区域，是信号转导的一个重要功能集团，其中CD24可能是起到一个分子开关的作用，在CD24高表达的时候，可以过多的激活整合素β1，影响细胞骨架结构，从而改变细胞的黏附能力。研究目的: 本研究检测了DLD1，HT29，HepG2，SW480，SW620中CD24的表达差异，通过高表达SW480中CD24的表达量和敲低SW620中CD24的表达量来观察CD24对细胞黏附能力的影响，并初步探讨了下CD24是通过激活整合素β1来调节细胞的黏附。为阐明大肠癌的发生发展机制及肿瘤的治疗提供了研究资料。材料与方法: 1. 材料：HT29，SW480，SW620及HepG2细胞株均来自ATCC（美国组织培养保藏中心），由中国科学院上海细胞生物学研究所提供。DLD1细胞为王继德教授从香港提供。 2. CD24在消化道肿瘤细胞中的基因表达情况：RT-PCR。 3. CD24在消化道肿瘤细胞中的蛋白表达情况：流式细胞术。 4. CD24稳定和瞬时转染SW480细胞系的构建。 5. 上调CD24后对细胞黏附能力的影响：黏附实验加MTT方法。 6. 脂质体CD24小RNA干扰并筛选出最有效片段：RT-PCR。 7. 下调CD24后对细胞黏附能力的影响：黏附实验加MTT方法。 8. 检测FAK，及P-FAK的表达：Western blotting。 9. 过表达CD24后整合素β1的表达量：流式细胞术。 10. 统计学处理：应用SPSS13.0软件包处理数据。RT-PCR，Western blotting，流式细胞术采用ONE-ANOVE多重比较;MTT采取2样本t检验以P<0.05为有统计学意义。结果: 1. RT-PCR结果显示在消化道肿瘤细胞株中，CD24的表达是有差异的，其中SW620，HT29，HepG2中CD24的基因表达量高，而SW480及DLD1中CD24的基因表达量低。流式细胞术结果显示，肿瘤细胞中CD24的蛋白表达水平与其mRNA水平相一致。 2. 高表达CD24后促进了SW480细胞对四种不同介质的黏附能力（collagenⅣ t=4.005，P<0.01;FN t=14.005，P<0.001;LN t=11.686，P<0.001;Collagen Ⅰ

关键词：大肠癌癌细胞粘蛋白样黏附分子CD24 整合素β1

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人摄入海产品中的砷与饮水中的无机砷尿砷代谢产物的比较

人摄入海产品中的砷与饮水中的无机砷尿砷代谢产物的比较

引用

作者：徐磊中国医科大学

学位级别：硕士

目的砷是环境中广泛存在的有毒类金属元素之一,已被美国疾病预防控制中心和国际防癌研究机构确定为人类致癌物。人类在生产生活中会通过消化道、呼吸道和皮肤等途径接触到砷的化合物。到目前为止,全世界已有接近2亿人处在饮用高砷水的... 详细信息

目的砷是环境中广泛存在的有毒类金属元素之一,已被美国疾病预防控制中心和国际防癌研究机构确定为人类致癌物。人类在生产生活中会通过消化道、呼吸道和皮肤等途径接触到砷的化合物。到目前为止,全世界已有接近2亿人处在饮用高砷水的健康损害中,所以饮水中含有高浓度的砷而导致的砷中毒是全世界广泛关注的公共卫生问题。慢性砷中毒的典型病变是皮肤色素异常和角化,甚至癌变,此外还可累及多器官系统,如呼吸系统,消化系统,循环系统,中枢神经系统等,严重的后果可诱发多脏器的肿瘤。研究无机砷在体内的代谢规律对研究无机砷的致病机理,寻找慢性砷中毒的有效治疗手段都有重要的提示意义。因此,无机砷在体内的代谢规律成为砷中毒研究的热点问题之一。研究表明:无机砷在人体内的代谢迅速,其半衰期很短,约为4天。目前科学研究中广泛采用尿砷作为评价近期砷暴露的指标。因为尿是人体摄入砷主要的排泄途径,每日摄入砷的60%-70%直接排泄在尿中,所以尿中砷的种类和含量是研究人体砷代谢模式的重要指标。现场流行病学调查中通常使用尿砷来评价人群砷暴露情况,为确定其病情提供一定的参考依据。除饮水途径之外,人类还可以通过饮食途径,特别是食用海产品发生砷暴露。研究表明,海产品中还有大量复杂的有机砷复合物和少量的无机砷,尽管海产品中含有总砷水平很高,但是目前认为摄入海产品对人体没有毒性。所以,本研究重点关注的问题是:在大量食用海产品后尿砷的排泄规律,并通过比较食用海产品后尿砷含量、慢性饮水型砷中毒病区人群和对照人群中尿砷种类和含量的差异,进一步探讨食用海产品对使用尿砷进行无机砷暴露评价和无机砷代谢机制研究的影响。方法一、实验方法 1、海产品中砷代谢规律研究选取志愿者30名同学,男女各15人,均为自中国医科大学预防医学专业本科在校学生,身体健康,无不良嗜好。30名志愿者禁食海产品3天后,分成海苔组和紫菜组。海苔组10人,同早餐一起,一次性食入海苔20g(上海兰光海苔有限公司)。紫菜组20人,同早餐一起,一次性食入紫菜20g(购自沃尔马超市)。各组分别于食用海产品前1小时和食用紫菜后1、3、5、8、12、24、36、48、60和72小时,收集尿样于10ml采尿管中,封口,-20℃冰冻保存。 2、现场调查渔村组选取辽宁省丹东市安康村为调查地区,选取身体健康近3天食用海产品的当地居民50人。慢性砷中毒病区组选取中国内蒙古呼和浩特市附近口肯板村和乃莫板村(水砷浓度分别为0.09mg/l,0.16mg/l)中身体健康、、近3天没有食用海产品的当地居民各30人。对照组选取中国内蒙古呼和浩特市附近塔布塞村(水砷浓度低于0.05 mg/l)身体健康、近3天没有食用海产品的当地居民共40人为对照。现场收集尿样于10ml采尿管中,-20℃冰箱保存。 3、主要试剂与仪器 (1)主要试剂: 2mol/L氢氧化钠(日本和光纯药工业株式会社)、1%盐酸(北京化学试剂研究所)、10%硼酸钠(日本和光纯药工业株式会社)。 (2)试验仪器: 多砷形态检测专用仪器冷阱捕集氢化物发生原子分光光度计(日本SHIMADZU公司生产)。 4、尿样测定融化冷冻尿样,经过消化处理,iAs、MMA、DMA在消化处理后形态不发生改变。以1%的盐酸和10%的硼酸钠为反应液,使用冷阱捕集氢化物发生原子分光光度计测定待测样品中的砷含量。该方法测定3种形态砷化物检测限均为1 ng,变异系数＜5%。标准物质为日本环境研究所人尿。二、统计学处理采用SPSS 11.5统计软件进行分析,组与组之间用两组独立样本t-test;组间比较采用单因素方差分析(ANOVA),两两比较采用LSD-t检验。结果 1、海产品中砷代谢规律实验的结果 (1)尿总砷浓度随时间的变化海苔组在食用海苔后8h、24h,尿总砷浓度与食用前相比显著升高(p＜0.05),紫菜组在食用紫菜后8h、12h、24h、36h、48h,尿总砷浓度与食用前相比显著升高(p＜0.05)。 (2)尿iAs浓度随时间的变化海苔组在食用海苔后3h,尿iAs浓度与食用前相比显著升高(p＜0.05),紫菜组在食用紫菜后3h、8h、12h、36h、60h、72h,尿iAs浓度与食用前相比显著升高(p＜0.05)。 (3)尿MMA浓度随时间的变化海苔组在食用海苔后3h、5h、8h、12h、24h,尿MMA浓度与食用前相比显著升高(p＜0.05),紫菜组在食用紫菜后3h、8h、24h、36h、48h、60h、72h,尿MMA浓度与食用前

关键词：海产品砷代谢无机砷有机砷一甲基砷酸二甲基砷酸三甲基砷酸海苔紫菜尿砷

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