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生物化学与生物物理学报 2002年第2期34卷 193-198页

作者：杨劲松郑新民陈诗书上海第二医科大学生化教研室、分子生物学实验室、人类基因治疗研究中心美国康奈尔大学上海第二医科大学生化教研室、分子生物学实验室、人类基因治疗研究中心上海200025 纽约14850

利用蛋白质酪氨酸磷酸酶α(PTPα)基因转染NIH3T3细胞 ,研究PTPα诱导前后细胞生物学行为的变化 ,为肿瘤形成早期机制的研究提供细胞模型。用携带PTPα基因的四环素调控体系转染NIH3T3细胞并诱导 2 4h后 ,用RT PCR和蛋白质印迹法证实PT... 详细信息

利用蛋白质酪氨酸磷酸酶α(PTPα)基因转染NIH3T3细胞 ,研究PTPα诱导前后细胞生物学行为的变化 ,为肿瘤形成早期机制的研究提供细胞模型。用携带PTPα基因的四环素调控体系转染NIH3T3细胞并诱导 2 4h后 ,用RT PCR和蛋白质印迹法证实PTPα在诱导细胞中的表达高于未诱导细胞 ,用RT PCR及蛋白质印迹法发现内源性Src的表达水平在诱导与未诱导细胞中没有变化 ,而Src激酶的活性在诱导细胞中增高 ,并且在诱导细胞中Src的酪氨酸磷酸化水平降低。再用透射式电子显微镜和流式细胞技术观察到诱导细胞的表型已发生变化 ,实验结果表明PTPα诱导 2 4h使细胞的表型开始发生转化 ,这种变化很可能与PTPα表达水平升高使SrcC末端的pTyr52 7去磷酸化而激活Src相关

关键词： PTPα Src 转化

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PTPα高表达致NIH3T3细胞恶变早期相关基因的筛选与鉴定

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生物化学与生物物理学报 2002年第5期34卷 601-607页

利用已建立的蛋白质酪氨酸磷酸酶α(PTPα)诱导表达模型筛选NIH3T3细胞中PTPα诱导表达前后的差别表达基因 ,有利于探索肿瘤早期形成的机制。诱导PTPα表达 2 4h ,用差异显示逆转录PCR获得 6 5条差异片段 ,利用生物信息学方法分析这些... 详细信息

利用已建立的蛋白质酪氨酸磷酸酶α(PTPα)诱导表达模型筛选NIH3T3细胞中PTPα诱导表达前后的差别表达基因 ,有利于探索肿瘤早期形成的机制。诱导PTPα表达 2 4h ,用差异显示逆转录PCR获得 6 5条差异片段 ,利用生物信息学方法分析这些差异片段 ,发现其中含有 2 9种已知基因、1 2种已知EST、6种未知EST ;对已知基因进行功能查询和分析 ,发现它们分别与信号转导、细胞骨架及粘附、转录与翻译、能量代谢、凋亡及核糖体蛋白质相关 ,其中G蛋白基因、TCR基因、类Trx基因、小窝蛋白 1 (caveolin 1 )基因经RT PCR及Northern印迹实验证实了差异表达的真实性。结果表明 ,PTPα诱导表达 2 4h后多种基因发生了表达变化 ,涉及细胞生理多方面的功能 ,其中一些基因在癌变的早期起重要的作用 ,这为深入探讨肿瘤早期形成机制打下基础 ,也可为基因治疗候选靶点的选择提供依据

关键词：蛋白质酪氨酸磷酸酶α 差别表达肿瘤形成机制

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bFGF及其受体的研究进展

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上海免疫学杂志 2002年第5期22卷 357-360页

作者：李劲松赵涵芳陈诗书上海第二医科大学生化教研室分子生物学实验室上海200025

FGF家族是目前已知最大的生长因子家族之一 ,在胚胎发育、血管生成、骨的形成和修复、促进细胞增生等有广泛的作用。FGF家族的原型bFGF在体内广泛分布 ,具有很强的生物学活性 ,本文着重讨论了bFGF的生物学特性。

关键词： bFGF 受体碱性成纤维细胞生长因子 FGFR 创伤愈合生物学特性信号传导

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基因芯片技术及其在肿瘤基因组学中的应用

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生物技术通讯 2002年第2期13卷 S011-S013页

作者：洪靖君何祥火杨劲松安徽农业大学蚕业丝绸系合肥230036 上海市肿瘤研究所癌基因及相关基因国家重点实验室上海第二医科大学生化教研室分子生物学实验室

基因芯片又称DNA微阵列,分为cDNA微阵列和寡聚核苷酸微阵列。DNA微阵列技术是探索基因组功能的一种强有力工具。扼要介绍基因芯片、表达谱芯片技术和原理,以及基因芯片技术在肿瘤基因组学中的应用。

关键词：基因芯片 DNA微阵列表达谱芯片肿瘤基因组学

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转铁蛋白增强脂质体介导基因对肝癌细胞的转染和表达

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胃肠病学 2001年第3期6卷 135-138页

作者：王克敏赵宇夏爱娣陈诗书上海第二医科大学生化教研室分子生物学实验室 200025

目的：检测转铁蛋白能否增强脂持体介导外源基因对肝癌细胞的转染和表达。方法：应用本滓验室构建的含小鼠一细胞介素（ｍｌＬ）－１２的真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３ｍＩＬ－１２和绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３－ ... 详细信息

目的：检测转铁蛋白能否增强脂持体介导外源基因对肝癌细胞的转染和表达。方法：应用本滓验室构建的含小鼠一细胞介素（ｍｌＬ）－１２的真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３ｍＩＬ－１２和绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３－ＥＧＦＰ，观察转铁蛋白增强阳离子脂质体ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ介导上述两种质粒ＤＮＡ对小鼠和不同人肝癌细胞株的转染及表达效率。结果：ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ加转铁蛋白介导ｐｃＤＮＡ３／ＥＧＲＰ对小鼠肝癌细胞株Ｈｅｐｌ－６的转染效率由２％－５％提高至２０％，对４种不同人肝癌细胞株的转染效率由１５％。提高至６５％～７５％；但对小鼠肝癌细胞株ＭＭ４５ＴＬｉ的转染效率并不增加。转铁蛋白可使ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ介导ｐｃＤＮＡ３ｍＩＬ－１２在Ｈｅｐｌ－６中的表达量增强１８倍。结论：转铁蛋白能够与ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ和质粒ＤＮＡ形成复合物，显著增强脂质体介导外源基因对肝癌细胞的转染和表达，但对不同种肝癌细肥株的增强效率不同。

关键词：转铁蛋白白细胞介素12 脂质体肝肿瘤细胞系绿色荧光蛋白

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干扰素-γ基因转导前后人肝癌细胞HepG1表型变化及基因表达图谱差异的研究

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胃肠病学 2001年第4期6卷 211-214页

作者：蒋小陵杨劲松张腾飞陈诗书上海第二医科大学生化教研室分子生物学实验室人类基因治疗研究中心 200025

目的：比较人肝癌细胞经干扰素（ＩＦＮ）－γ基因转导前后细胞表型及基因表达图谱的差异。方法：①用扫描电镜、流式细胞仪等方法观察ＩＦＮ－γ基因转导前后人肝癌细胞ＨｅｐＧ１表型的变化；③应用微阵列膜片分别与未转导及转导了Ｉ... 详细信息

目的：比较人肝癌细胞经干扰素（ＩＦＮ）－γ基因转导前后细胞表型及基因表达图谱的差异。方法：①用扫描电镜、流式细胞仪等方法观察ＩＦＮ－γ基因转导前后人肝癌细胞ＨｅｐＧ１表型的变化；③应用微阵列膜片分别与未转导及转导了ＩＦＮ－γ基因的ＨｅｐＧ１ｍＲＮＡ进行杂交，同时设一转导空白载体ＬＸＳＮ的ＨｅｐＧ１ｍＲＮＡ与膜片杂交作为对照，比较杂交信号，获得表达差异的基因。结果：①ＩＦＮ－γ基因转导的ＨｅｐＧ１细胞生长速度减慢，表面绒毛结构数量增多，绒毛变细、变长，ＨＬＡⅠ类和Ⅱ类分子表达增高；②ＩＦＮ－γ基因转导后，ＨｅｐＧ１细胞有多种基因的表达发生变化，其中一些基因较未转导ＩＦＮ－γ时表达增高，一些较未转导ＩＦＮ－γ时表达减低。表达发生变化的基因主要为与细胞周期和细胞凋亡相关的基因。结论：ＩＦＮ－γ基因修饰ＨｅｐＧ１细胞后使细胞表型发生变化，并且在基因表达上也发生改变。运用微阵列技术为进一步了解这些基因的相互关系及其与肿瘤生物学行为的关系奠定了基础，也可为优化肿瘤免疫基因治疗提供线索。

关键词：肝肿瘤基因表达基因转导干扰素-γ基因基因治疗

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深Ⅱ度烧伤创面细胞bFGF和PDGF对愈合的影响

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上海第二医科大学学报 2001年第2期21卷 113-115页

作者：程枫赵涵芳方培耀史济湘上海第二医科大学生化教研室分子生物学实验室上海200025 瑞金医院烧伤科

目的研究bFGF和PDGF在深Ⅱ度烧伤愈合中的表达特点 ,以及与创面愈合中的关系。为临床合理应用外源性的bFGF和PDGF提供实验依据。　方法采用地高辛细胞原位杂交方法检测SD大鼠深Ⅱ度烫伤模型在伤后不同时段的创面渗出液细胞的bFGF和PDGF... 详细信息

目的研究bFGF和PDGF在深Ⅱ度烧伤愈合中的表达特点 ,以及与创面愈合中的关系。为临床合理应用外源性的bFGF和PDGF提供实验依据。　方法采用地高辛细胞原位杂交方法检测SD大鼠深Ⅱ度烫伤模型在伤后不同时段的创面渗出液细胞的bFGF和PDGF中mRNA表达变化。　结果实验组的bFGF是在 5d开始表达 ,在 7d达到高峰 ,然后缓慢下降 ,至 14d时还有一定水平的表达 ,对照组bFGF的表达水平都较低 ,仅在 5d有低水平表达 ,14d已基本无表达。在检测PDGF时 ,实验组 1～ 3d处于较低水平表达 ,7d开始高水平表达 ,10d是表达的高峰 ,随后下降。对照组PDGF的表达在 1～ 3d处于较低水平 ,5～ 14d有一个低水平的mRNA表达延迟峰段。　结论创面渗出液细胞bFGF、PDGF的mRNA表达的启动、表达的高峰和减弱与深Ⅱ度烧伤的创面愈合状况有关 ,与相关细胞在创面聚集、诱导和分泌bFGF、PDGF有关。

关键词： bFGF PDGF 地高辛原位杂交烧伤愈合 mRNA表达深Ⅱ度烧伤

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转铁蛋白增强脂质体介导基因对肝癌细胞的转染和表达

转铁蛋白增强脂质体介导基因对肝癌细胞的转染和表达

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中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议

作者：王克敏赵宇夏爱娣陈诗书上海第二医科大学生化教研室分子生物学实验室上海第二医科大学生化教研室分子生物学实验室上海第二医科大学生化教研室分子生物学实验室上海第二医科大学生化教研室分子生物学实验室

阳离子脂质体是基因治疗中常用的非病毒载体.其主要优点是不含病毒成分,不会引起机体免疫反应,体内应用安全可靠,但存在着转染效率低、表达时间短的缺点,从而直接影响着肿瘤治疗效果.本文运用转铁蛋白增强脂质体介导外源基因对肝癌细胞... 详细信息

阳离子脂质体是基因治疗中常用的非病毒载体.其主要优点是不含病毒成分,不会引起机体免疫反应,体内应用安全可靠,但存在着转染效率低、表达时间短的缺点,从而直接影响着肿瘤治疗效果.本文运用转铁蛋白增强脂质体介导外源基因对肝癌细胞的转染和表达,从而增强治疗基因的抗肿瘤作用.应用本实验室构建的含小鼠白细胞介素-12的真核表达质粒pcDNA3/mIL-12和绿色荧光蛋白真核表达质粒pcDNA3/

关键词：肝癌细胞铁蛋白阳离子脂质体介导

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提高人胃腺癌组织裸小鼠移植瘤成功率的几种方法选择

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上海实验动物科学 2001年第1期21卷 29-32页

作者：程枫钱关祥陈诗书上海第二医科大学生化教研室分子生物学实验室上海200025

采用 2周龄强制断奶和 3周龄自然断奶的 2组裸鼠用皮下塞入法将手术切除的人肿瘤组织 (肿瘤表面组织和深部组织 )作异体移植 ,并将已长成的人肿瘤的异体瘤切除以残瘤的形式继续在裸鼠皮下增殖 ,观察移植瘤在不同周龄的裸鼠以及肿瘤组织... 详细信息

采用 2周龄强制断奶和 3周龄自然断奶的 2组裸鼠用皮下塞入法将手术切除的人肿瘤组织 (肿瘤表面组织和深部组织 )作异体移植 ,并将已长成的人肿瘤的异体瘤切除以残瘤的形式继续在裸鼠皮下增殖 ,观察移植瘤在不同周龄的裸鼠以及肿瘤组织取材差异的成瘤影响和残瘤的生长特性。结果表明 ,2周龄裸鼠移植瘤的成瘤性较 3周龄裸鼠为优 ,在相同移植天数 ,2周龄的成瘤期比 3周龄的裸鼠提前了约 4d,成瘤率也提高了一倍以上 ( P<0 .0 1 )。移植时取肿瘤表面组织比肿瘤深部组织的成瘤率提高 3倍以上 ( P<0 .0 0 5)。残瘤的传代率 1 0 0 % ,且成瘤期只有 8d。结果提示 ,使用 2周龄的裸小鼠可提高移植瘤的成瘤率 ,如接种时选择肿瘤表面组织更可提高移植瘤的成瘤率。在移植瘤成瘤后用残瘤的方式传代时。

关键词：裸鼠移植瘤肿瘤组织成瘤率胃腺癌

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基因工程生物膜制备的研究

基因工程生物膜制备的研究

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中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议

作者：李劲松赵涵芳陈诗书上海第二医科大学生化教研室分子生物学实验室上海第二医科大学生化教研室分子生物学实验室上海第二医科大学生化教研室分子生物学实验室

创伤愈合的过程是复杂而多变的,其基本过程可以分为止血期、炎症期、增生期、重建期.这个过程可能要持续数月之久.这增加了伤口感染的机会,并且使伤口愈合时瘢痕增加.对于大面积的创伤和溃疡性创伤传统的治疗方式是通过自体或异体的皮... 详细信息

创伤愈合的过程是复杂而多变的,其基本过程可以分为止血期、炎症期、增生期、重建期.这个过程可能要持续数月之久.这增加了伤口感染的机会,并且使伤口愈合时瘢痕增加.对于大面积的创伤和溃疡性创伤传统的治疗方式是通过自体或异体的皮肤移植治疗,但是操作烦琐,受到皮源的限制.给病人带来极大的痛苦和长时间的治疗过程.

关键词：创伤愈合生物膜阳离子脂质体基因工程

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