检索结果-内蒙古大学图书馆

细胞与分子免疫学杂志 2005年第6期21卷 672-675页

作者：张兴黔梅文瀚钱关祥上海第二医科大学生物化学教研室及分子生物学实验室人类基因治疗研究中心上海200025

目的:克隆人β2微球蛋白(β2m)基因启动子,并研究其在小鼠肥大细胞瘤细胞P815中对下游报告基因的启动活性。方法:用PCR法从基因组内扩增β2m基因启动子。通过基因重组的方法,构建含此启动子的EGFP基因真核表达载体,然后分别瞬时和稳定转... 详细信息

目的:克隆人β2微球蛋白(β2m)基因启动子,并研究其在小鼠肥大细胞瘤细胞P815中对下游报告基因的启动活性。方法:用PCR法从基因组内扩增β2m基因启动子。通过基因重组的方法,构建含此启动子的EGFP基因真核表达载体,然后分别瞬时和稳定转染P815细胞。通过RT-PCR、荧光显微镜摄像和流式细胞术分析,观察IFN-γ作用前后EGFP的表达。结果:从基因组内扩增出302bp的人β2m基因的启动子,成功地构建了含此启动子的真核报告载体。RT-PCR的结果表明,IFN-γ对启动子的活性具有诱导作用,且呈浓度依赖性。流式细胞术的结果显示,在5×105U/LIFN-γ作用下,尽管表达EGFP的细胞数量没有差异,但刺激组EGFP的表达强度是未刺激组的2倍。结论:人β2m基因启动子在小鼠肥大细胞瘤细胞P815中具有高度的启动活性。通过该启动子中所含干扰素刺激反应元件(ISRE),可在IFN-γ诱导作用下调控下游目的基因的表达。

关键词： β2微球蛋白启动子 IFN-1

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增强P18^(INK4C)表达对胃腺癌细胞侵袭的影响(英文)

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中国生物化学与分子生物学报 2004年第1期20卷 13-19页

作者：王楚李锋王建华应磊卢健上海第二医科大学生物化学与分子生物学教研室人类基因治疗研究中心上海200025

在应用基因芯片技术筛选胃腺癌转移相关基因的过程中 ,发现CDK抑制因子P18INK4C在人类胃腺癌转移细胞株RF 4 8中的表达较其原发灶细胞株RF 1明显下调 .这提示P18INK4C表达差异与胃腺癌细胞的侵袭转移可能有一定程度的相关性 .通过构建P1... 详细信息

在应用基因芯片技术筛选胃腺癌转移相关基因的过程中 ,发现CDK抑制因子P18INK4C在人类胃腺癌转移细胞株RF 4 8中的表达较其原发灶细胞株RF 1明显下调 .这提示P18INK4C表达差异与胃腺癌细胞的侵袭转移可能有一定程度的相关性 .通过构建P18INK4C 表达质粒并将其转染入RF 4 8增强P18INK4C的表达 ,研究其对胃腺癌原发灶细胞体外运动、侵袭转移能力以及生长特性的影响 ,进一步明确P18INK4C与人类胃腺癌侵袭转移之间的关系 .结果发现 ,增强P18INK4C表达可以使胃腺癌原发灶细胞的体外侵袭能力明显下降 ,而对RF 4 8的细胞周期和生长增殖能并力未产生影响 .上述结果提示 ,P18INK4C参与人类胃腺癌转移过程 ,在此过程中其主要的作用可能并不是调节细胞周期 ,而是与胃腺癌原发灶细胞侵袭转移能力的调节密切相关 .

关键词： P18^INK4C 表达胃腺癌侵袭转移

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复制缺陷型腺病毒载体介导hVEGF cDNA在C2C12和NIH3T3细胞中的表达

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中国生物化学与分子生物学报 2001年第6期17卷 704-709页

作者：孙欲晓陈诗书上海第二医科大学生物化学教研室分子生物学实验室人类基因治疗研究中心上海200025

为提高hVEGFcDNA在心肌中的表达 ,降低在其它组织中表达可能产生的不良反应 ,用PCR法得到人磷酸肌酸激酶 (MCK)增强子和CMV核心启动子 .利用克隆技术构建了含双拷贝MCK增强子 (m)和人巨细胞病毒 (CMV)核心启动子 (c)的嵌合启动子 (mmc) ... 详细信息

为提高hVEGFcDNA在心肌中的表达 ,降低在其它组织中表达可能产生的不良反应 ,用PCR法得到人磷酸肌酸激酶 (MCK)增强子和CMV核心启动子 .利用克隆技术构建了含双拷贝MCK增强子 (m)和人巨细胞病毒 (CMV)核心启动子 (c)的嵌合启动子 (mmc) ,构建真核表达质粒pK3 mmcLacZ ,制备受mmc嵌合启动子调控的重组腺病毒Ad mmcVEGF .经X gal染色、β 半乳糖苷酶定量分析、RT PCR、hVEGFELISA定量分析、VEGF活性测定等研究表明。

关键词：人磷酸肌酸激酶增强子嵌合启动子肌细胞特异性表达血管内皮生长因子腺病毒载体心肌缺血基因治疗复制

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NIH3T3细胞恶变早期相关新基因的鉴定与功能分析

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中国生物化学与分子生物学报 2003年第2期19卷 173-181页

作者：杨劲松郑新民陈诗书上海第二医科大学生物化学教研室分子生物学实验室人类基因治疗研究中心上海200025 美国康奈尔大学分子生物学和遗传学系纽约14850

利用已建立的蛋白质酪氨酸磷酸酶α(PTPα)诱导表达模型寻找与PTPα高表达导致NIH3T3细胞恶变早期相关的新基因 ,探索肿瘤早期形成的机理 .诱导PTPα表达 2 4h ,用差异显示逆转录PCR获得 65条差异片段 ,利用生物信息学方法分析这些差异... 详细信息

利用已建立的蛋白质酪氨酸磷酸酶α(PTPα)诱导表达模型寻找与PTPα高表达导致NIH3T3细胞恶变早期相关的新基因 ,探索肿瘤早期形成的机理 .诱导PTPα表达 2 4h ,用差异显示逆转录PCR获得 65条差异片段 ,利用生物信息学方法分析这些差异片段 .发现其中含有 2 9种已知基因 ,12种已知ESTs ,6种未知ESTs .对EST片段 ,利用芯片拼接 (insilicocloning)的方法获得 2条新的带有完整开放阅读框 (ORF)的全长cDNA .利用生物信息学方法分析其同源性、二级结构、功能模体(motif)、保守区、结构域和家族分布情况 ,并且对这 2条新全长cDNA进行部分克隆测序鉴定 ,用半定量RT PCR实验证实其差异表达的真实性 .结果表明 ,这 2条全长cDNA为新基因 (GenBankAY0 35 2 12 ,AY0 35 2 13) ,它们在PTPα诱导表达前后确实存在差异表达 ,并与细胞能量代谢及酶功能相关。

关键词：蛋白质酪氨酸磷酸酶α NIH3T3细胞恶变肿瘤早期形成机理基因鉴定功能分析 DDRT-PCR 生物信息学

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H-2K^b cDNA的克隆及其在多种真核细胞中的表达

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上海第二医科大学学报 1999年第3期19卷 193-196,200页

作者：钱书兵钱关祥陈诗书上海第二医科大学生物化学教研室分子生物学实验室人类基因治疗研究中心

目的克隆H－2KbcDNA及研究其在多种真核细胞中的表达。方法RT－PCR法扩增H－2KbcDNA，克隆入双顺反子逆转录病毒载体pGCEN，PA317包装出重组病毒后，分别感染NIH3T3、COS7及***，PCR和RT－PCR分析目的基因表达，FACS分析H－2Kb在细胞膜... 详细信息

目的克隆H－2KbcDNA及研究其在多种真核细胞中的表达。方法RT－PCR法扩增H－2KbcDNA，克隆入双顺反子逆转录病毒载体pGCEN，PA317包装出重组病毒后，分别感染NIH3T3、COS7及***，PCR和RT－PCR分析目的基因表达，FACS分析H－2Kb在细胞膜上的表达。结果以双顺反子逆转录病毒载体pGCEN介导，分别建立了H－2Kb基因转导细胞：NIH3T3／Kb、COS7／Kb及***／Kb。PCR结果表明目的基因已存在于宿主细胞中，RT－PCR结果表明目的基因已获得正确表达。FACS结果表明H－2Kb分子已稳定表达在细胞膜表面。结论MHC分子基因在多种真核细胞中的表达为研究抗原递呈及抗肿瘤作用提供了基础。

关键词： H-2K^b基因克隆逆转录病毒载体真核表达 cDNA

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α-TNF修饰肝癌细胞辐射后增殖性和致瘤性的改变

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上海第二医科大学学报 1997年第3期17卷 182-184页

作者：徐荣婷朱敏张腾飞胡亮吴兆平陈诗书上海第二医科大学生物化学教研室分子生物学实验室人类基因治疗研究中心 200025

将含α－肿瘤坏死因于互补DNA（α－TNFcDNA）的缺陷型逆转录病毒感染人肝癌细胞株（HHCL），经新霉素衍生物（G418）筛选，获得HHCL－TNF基因修饰株，用不同强度60Co辐射后，以不同浓度，分别接种BALB／C裸鼠，定期观察接种处肿瘤的生... 详细信息

将含α－肿瘤坏死因于互补DNA（α－TNFcDNA）的缺陷型逆转录病毒感染人肝癌细胞株（HHCL），经新霉素衍生物（G418）筛选，获得HHCL－TNF基因修饰株，用不同强度60Co辐射后，以不同浓度，分别接种BALB／C裸鼠，定期观察接种处肿瘤的生长情况。发现：（1）未经60Co辐射的HHCL细胞致瘤性明显高于60Co辐射组（P＜0．01）；（2）未经60Co辐射的HHCL－TNF细胞的致瘤性明显高于60Co辐射组（P＜0．01），但不同辐射剂量组间（40Gy～100Gy）无差异；③未经60Co辐射的HHCL细胞的致瘤性明显高于未经60Co辐射的HHCL－TNF组（P＜0．01）。结果显示：经60Co辐射后HHCL和HHCL－TNF细胞的致瘤性均基本消失，为"肿瘤疫苗"用于临床治疗提供参考依据。

关键词：肿瘤坏死因子 ^60Co辐射肿瘤疫苗肝肿瘤

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MHC-肽四聚体的研究进展

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国外医学（免疫学分册） 2005年第6期28卷 350-354页

作者：刘霞卢健 200025 上海第二医科大学生物化学与分子生物学教研室上海第二医科大学生物化学与分子生物学教研室人类基因治疗研究中心

四聚体技术是一种可直接对抗原特异的T淋巴细胞进行标记的新方法。MHC-肽四聚体可被用于抗原特异的T细胞的表位分析,T细胞的直接分离与克隆,T细胞功能检测以及作为激活T细胞的刺激物和进行原位染色等方面的研究。

关键词： MHC 抗原肽四聚体 TCR

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Bcl-2家族中唯BH3域蛋白的研究进展

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生命科学 2005年第5期17卷 411-413页

作者：赵小平钱关祥上海第二医科大学生物化学和分子生物学教研室人类基因治疗研究中心上海200025

Bcl-2家族蛋白质在细胞凋亡的调控机制中起着重要的作用,该家族包括唯BH3结构域的蛋白质(only BH3 domain protein),如Bid、Bik、Puma、Nova、Bmf等。随着凋亡研究的深入,在哺乳动物中现已发现10多种唯BH3结构域的蛋白质,并且在凋亡中... 详细信息

Bcl-2家族蛋白质在细胞凋亡的调控机制中起着重要的作用,该家族包括唯BH3结构域的蛋白质(only BH3 domain protein),如Bid、Bik、Puma、Nova、Bmf等。随着凋亡研究的深入,在哺乳动物中现已发现10多种唯BH3结构域的蛋白质,并且在凋亡中发挥重要的作用。本文主要论述唯BH3域蛋白的作用机制及其应用的研究进展。

关键词：细胞凋亡 BH 3结构域线粒体

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转化生长因子-β细胞周期抑制机制

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生命的化学 2002年第5期22卷 439-442页

作者：王楚卢健上海第二医科大学生物化学和分子生物学教研室人类基因治疗研究中心上海200025

转化生长因子-β(TGF-β)属于二聚多肽类生长因子,参与调节细胞的增殖、分化和凋亡,是一类具有多种生物活性的细胞因子超家族。Smads分子将TGF-β信号由胞膜转导入细胞核内并调节目的基因对TGF-β的应答。作为细胞周期的抑制因子,TGF-... 详细信息

转化生长因子-β(TGF-β)属于二聚多肽类生长因子,参与调节细胞的增殖、分化和凋亡,是一类具有多种生物活性的细胞因子超家族。Smads分子将TGF-β信号由胞膜转导入细胞核内并调节目的基因对TGF-β的应答。作为细胞周期的抑制因子,TGF-β可以通过不同的途径使细胞停留在G1期,从而抑制细胞的生长。TGF-β信号转导通路的异常与肿瘤的发生密切相关。本文对近年TGF-β细胞周期抑制机制的研究作一综述。

关键词：转化生长因子-β 细胞周期抑制机制信号转导

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胃癌侵袭转移相关基因的研究进展

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生命科学 2004年第4期16卷 206-209,225页

作者：蔡蓉卢健上海第二医科大学生物化学和分子生物学教研室人类基因治疗研究中心上海200025

肿瘤的侵袭转移是恶性肿瘤患者死亡的主要原因。目前对胃癌侵袭转移的分子机制尚未查明。胃癌侵袭转移过程中涉及许多特殊基因,包括促进转移的转移基因和控制转移的转移抑制基因。转移基因有细胞粘附分子(CAM)基因、基质金属蛋白酶(MMPs... 详细信息

肿瘤的侵袭转移是恶性肿瘤患者死亡的主要原因。目前对胃癌侵袭转移的分子机制尚未查明。胃癌侵袭转移过程中涉及许多特殊基因,包括促进转移的转移基因和控制转移的转移抑制基因。转移基因有细胞粘附分子(CAM)基因、基质金属蛋白酶(MMPs)基因、肝素酶(heparanase)基因等;转移抑制基因有nm23、组织基质金属蛋白酶抑制因子(TIMPs)基因等。本文对胃癌侵袭转移相关基因及其产物的结构、功能及其在侵袭转移过程中作用的研究进展作一综述。

关键词：胃癌侵袭转移侵袭转移相关基因

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