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- 1 篇 哲学

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7 篇 上海医科大学
7 篇 广西医科大学
5 篇 中国协和医科大学
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4 篇 重庆医科大学
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3 篇 广州医科大学
3 篇 第二军医大学长海...
3 篇 福建医科大学
3 篇 复旦大学
3 篇 长海医院
3 篇 山西医科大学

作者

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3 篇 蔡在龙
3 篇 王锡智
3 篇 刘玉环
3 篇 崔英
3 篇 章有章
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排序：

1,25（OH）2D3在TDI模型下对人支气管上皮屏障功能的影响及机制探讨

1,25（OH）2D3在TDI模型下对人支气管上皮屏障功能的影响及机制探...

引用

作者：李文嘉南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景及意义：支气管哮喘(简称哮喘)是目前最常见的一种影响人类健康的慢性气道炎症性疾病之一,据研究,全球每20人中就有1人患有哮喘,近年来我国哮喘患病率也在持续增长。哮喘的发病主要是基因与环境复杂的相互作用的结果,目前具体... 详细信息

研究背景及意义：支气管哮喘(简称哮喘)是目前最常见的一种影响人类健康的慢性气道炎症性疾病之一,据研究,全球每20人中就有1人患有哮喘,近年来我国哮喘患病率也在持续增长。哮喘的发病主要是基因与环境复杂的相互作用的结果,目前具体机制仍然不明。因此,现在对哮喘的治疗仍以控制症状为主。但是,多项研究均表明,尽管大部分诊断明确的患者在规范化治疗后症状能够得到有效控制,却仍无法逆转哮喘的自然病程,最终发展为不可逆的气道重塑。因此探讨哮喘发病机制、寻找新的防治靶点是呼吸专业未来必须攻克的重大课题。随着研究的不断拓展和深入,目前认为气道上皮细胞(AEC)不仅在维持气道内环境的平衡和稳定中发挥重要的作用,还在哮喘气道炎症的启动和维持中扮演关键角色。AEC在气道腔面形成一个结构完整的屏障,后者是气道抵御外界损伤因素的第一道屏障。其屏障功能的结构基础是气道上皮细胞间的紧密连接结构。有研究表明：在哮喘患者中,气道上皮细胞紧密连接及粘附连接蛋白的表达量较正常人减少。气道上皮结构及屏障功能的破坏,一方面使AEC处于应激状态,通过分泌炎症介质触发Th2型炎症反应；另一方面可直接导致外界过敏原轻易地通过气道壁粘膜,与树突状细胞(DC)等免疫细胞接触,使机体致敏。甲苯二异氰酸酯(Toluene Diisocyanate, TDI)是一种常见的工业原料,由于价格低廉,广泛用于生产软质聚氨酯泡沫及聚氨酯弹性体、涂料、胶黏剂等,是最常见引起哮喘的过敏原。长期暴露于TDI环境的人群,最终约有5%-15%发展为哮喘。由于其在建筑、家居等各种室内外装修中的广泛应用,在普通人群中,TDI哮喘的发病率也高达0.1%-8%。鉴于其导致的巨大社会和经济负担,TDI哮喘已引起高度重视。 TDI作用于人体的重要靶点是AEC。体外实验发现,气道上皮屏障可被TDI破坏,高浓度的TDI处理可致气道上皮细胞紧密连接及缝隙连接蛋白解体、细胞核固缩、碎裂,气道上皮细胞单层电阻改变甚至细胞的死亡。我们实验室既往研究也表明：TDI-人血清白蛋白(HSA)复合物在不影响细胞活力的情况下,可引起人支气管上皮细胞系(16HBE14o-)细胞通透性的增加,屏障功能受损,该改变与TDI-HSA促进16HBE14o-细胞ERK通路活化及破坏气道上皮细胞粘附连接蛋白E-钙粘蛋白分布有关。 1,25(OH)2D3是维生素D的生物活性代谢产物,其发挥生物学效应主要依赖维生素D受体(Vitamin D receptor, VDR)。研究表明,除了调节机体的钙和磷代谢,维生素D水平(25(OH)D)还与哮喘发生呈负相关,与吸入激素治疗的疗效呈正相关。维生素D对哮喘保护作用的相关机制已经发现的有：1,25(OH)2D3可促进AEC分泌抗菌肽,增强机体固有免疫；抑制DCs成熟,诱导免疫耐受；促进调节性T细胞分化,抗炎因子IL-10分泌,调节Th1/Th2平衡；抑制被动致敏的气道平滑肌增殖及基质金属蛋白酶(MMP-9)分泌,防止哮喘气道重塑等。近期研究还表明,维生素D还可增加肠上皮、角膜上皮等的细胞间紧密连接蛋白表达,起保护屏障功能的作用。但是维生素D是否对支气管上皮细胞也具有同样的作用,维生素D可否保护支气管上皮免受外界有害损伤,这可能为维生素D对哮喘的保护作用增加新的机制,同时为哮喘治疗提供新的靶点。本实验组已经在前期体外实验中证明TDI-HSA可引起人支气管上皮屏障功能受损,并在体内实验中证实维生素D可减轻TDI哮喘小鼠气道炎症。在此基础上,我们拟在体外TDI模型下进一步探索,1,25(OH)2D3预处理对气道上皮屏障功能是否有保护作用,并探讨可能的作用机制。研究材料与方法： 1、甲苯二异氰酸酯(TDI)、分析纯的1,25(OH)2D3、异硫氰酸萤光素-右旋糖酐(FITC-Dx)均购自美国Sigma-Aldrich公司,人支气管上皮细胞系16HBE14o-购白上海复祥生物有限公司,E-钙粘蛋白的多克隆抗体购自美国Santa Cruz公司,ERK信号通路相关抗体购自美国CST公司,兔抗人GAPDH多克隆抗体、羊抗兔二抗、牛血清白蛋白组分V (BSA)等购自北京中杉金桥公司,Bradford法蛋白检测试剂盒购自BIO-RAD公司。 2、制备TDI-HSA抗原结合物：应用改良的Son M方法制备TDI-人血清白蛋白结合物(TDI-HSA)。应用改良的Son et al.'s assay方法测定复合物中TDI及HSA的结合比。 3、人支气管上皮细胞系16HBE14o-细胞的培养。将16HBE14o-细胞接种在含10%胎牛血清的1640培养基中,置于37-C恒温的5%CO2孵箱培养,每2天更换培养液1次。待细胞生长至90%融合后,用0.25%胰酶消化5-7min

关键词：哮喘人支气管上皮细胞屏障功能 E-钙粘蛋白1 25(OH)2D3 甲苯二异氰酸酯 Extracellular Signal-Regulated Kinas

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心肌肌钙蛋白Ⅰ在人非小细胞肺癌组织和肿瘤细胞株中的异常表达

心肌肌钙蛋白Ⅰ在人非小细胞肺癌组织和肿瘤细胞株中的异常表达

引用

作者：陈超南京医科大学

学位级别：硕士

背景：\n 肌钙蛋白(Troponin)是调节横纹肌收缩的蛋白复合物，存在于细肌丝中，由肌钙蛋白Ⅰ（TroponinⅠ，TnⅠ）、肌钙蛋白T(TroponinT，TnT)和肌钙蛋白C(Troponin C，TnC)三个亚基组成。肌钙蛋白Ⅰ(TroponinⅠ，TnⅠ)作为该复合... 详细信息

背景：\n 肌钙蛋白(Troponin)是调节横纹肌收缩的蛋白复合物，存在于细肌丝中，由肌钙蛋白Ⅰ（TroponinⅠ，TnⅠ）、肌钙蛋白T(TroponinT，TnT)和肌钙蛋白C(Troponin C，TnC)三个亚基组成。肌钙蛋白Ⅰ(TroponinⅠ，TnⅠ)作为该复合物的抑制性亚基，具有抑制肌动球蛋白Mg2+-ATP酶的作用。哺乳动物有三种不同基因编码的TnⅠ亚型，分别称为慢骨骼肌亚型（TNNI1）、快骨骼肌亚型（TNNI2）和心肌亚型（TNNI3）。人类TNNI3基因位于19q13.4，编码约由210个氨基酸组成的蛋白质(24 kDa)。与快、慢骨骼肌型TnⅠ氨基酸序列相比，心肌型TnⅠ蛋白(cTnⅠ)在N端另延伸出30个氨基酸残基，使之具有较高的心肌特异性。cTnⅠ以不同形式存在于心肌细胞中，约3％-8％的cTnⅠ分布于心肌细胞胞浆，为游离的胞浆蛋白，大部分与肌钙蛋白T及C亚单位结合以复合体形式存在。近期已有实验研究证实心肌肌钙蛋白Ⅰ在心肌细胞核中也有分布。\n 心肌肌钙蛋白Ⅰ（Cardiac troponinⅠ，cTnⅠ）对诊断心肌损伤具有较高的特异性和敏感性，近年来逐渐取代肌酸激酶同工酶CK-MB，成为判断心肌细胞损伤的金标准。临床上，对于肿瘤病人而言，一系列抗肿瘤治疗如放疗、化疗以及生物治疗等导致的心脏损伤也可通过血清cTnⅠ进行检测和评估。传统观点认为生理情况下cTnⅠ仅在心肌组织中表达，最近有文献报道发育中的骨骼肌一过性表达cTnⅠ。cTnⅠ有高度心肌特异性。迄今为止，没有相关文献资料证实cTnⅠ存在于非肌性细胞中，包括肿瘤细胞。本研究旨在探索人肿瘤组织及肿瘤细胞株中cTnⅠ的表达情况，为研究cTnⅠ与肿瘤的关系及机制提供实验依据。\n 目的：\n 研究人非小细胞肺癌组织及肿瘤细胞株中心肌肌钙蛋白Ⅰ的异常表达。\n 方法：\n 1.抗人cTnⅠ单克隆抗体的表位鉴定本实验室采用经典杂交瘤方法制备抗人cTnⅠ单克隆抗体(Monoclonal antibody，mAb)三株XY15、XY13及XY10。以纯化后的人cTnⅠ(hcTnⅠ)及合成的cTnⅠ肽段(scTnⅠ-P)为抗原，通过间接酶联免疫吸附法(ELⅠSA)及免疫印迹法(Western blot)鉴定mAbs的识别部位及特异性。使用同样方法鉴定*** ***教授赠送本实验室的抗人cTnⅠ单抗2F6.6表位。另外，在本研究中使用的其他三株抗人cTnⅠ单抗19C7、16A11、84（表位41-49、86-90、117-126）购自Hytest公司。\n 2.检测cTnⅠ在人非小细胞肺癌组织中的表达本研究室病理标本库中43例非小细胞肺癌和6例其他肺部疾病患者手术切除的组织，于2007-2008年收集于南京军区总医院心胸外科和呼吸内科。病理学诊断肺鳞癌（21例），肺腺癌（17例），肺腺鳞癌（3例），大细胞肺癌（2例），肺转移性肉瘤（1例），肺结核（3例），肺硬化性血管瘤（1例）和肺炎性假瘤（1例）的病人。在采集标本前，所有患者未接受化疗、放疗或免疫性治疗。用免疫组织化学方法，选用抗人cTnⅠ单抗2F6.6和19C7，检测病理组织中cTnⅠ的表达，根据染色强度分为0（阴性），1（弱阳性），2（中等度阳性），3（强阳性）四级。\n 3.检测cTnⅠ在人肿瘤细胞株中的表达培养人肺腺癌细胞株SPCA-1、人胃腺癌细胞株BGC823及肝癌细胞株Huh-7、MHCC-97L和MHCC-97H。选用上述7株抗人cTnⅠ单克隆抗体，免疫荧光法检测细胞株cTnⅠ的表达及细胞定位。\n 4.人肿瘤细胞株中cTnⅠ mRNA的表达用Trizol试剂盒提取人肺腺癌细胞株SPCA-1、人胃腺癌细胞株BGC823及心肌细胞总RNA。Real-time PCR法比较肿瘤细胞株与心肌细胞cTnⅠ mRNA表达量。目的基因是TNNI3，内参基因是GAPDH,以2-△△Ct方法计算。\n 5.人肿瘤细胞株中cTnⅠ蛋白表达用细胞裂解液提取人肺腺癌细胞株SPCA-1、人胃腺癌细胞株BGC823及心肌细胞总蛋白，BCA法测定蛋白浓度。Western blot法检测cTnⅠ蛋白表达。\n 结果：\n 1.利用酶联免疫吸附法以及免疫印迹法鉴定四株抗人cTnⅠ单克隆抗体XY15、XY13、XY10及2F6.6的表位分别是56-80、76-110、181-210、13-36。其中抗体XY15的亚型为IgG2b，抗体XY13、XY10的亚型为IgG1。\n 2.利用免疫组织化学方法检测人非小细胞肺癌组织中cTnⅠ表达，发现69.4％(34/49)呈阳性，其中35.3％(6/17)肺鳞癌患者呈强阳性，而非癌、非

关键词：心肌肌钙蛋白Ⅰ 基因表达非小细胞肺癌肺腺癌细胞株SPCA-1 胃腺癌细胞株BGC-823

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靶向室管膜区胶原的脑源性神经营养因子治疗大鼠脑出血的实验研究

靶向室管膜区胶原的脑源性神经营养因子治疗大鼠脑出血的实验研究

引用

作者：张晋大连医科大学

学位级别：硕士

研究背景和目的脑出血是严重危害人类健康、致死致残率较高的疾病，发病率每年11-37／10万，占全部卒中的6％-17％，30天死亡率为38％-54％，多数幸存者残留不同程度的神经功能丧失。由于脑组织结构的复杂性及脑出血是通过多种机制引起... 详细信息

研究背景和目的脑出血是严重危害人类健康、致死致残率较高的疾病，发病率每年11-37／10万，占全部卒中的6％-17％，30天死亡率为38％-54％，多数幸存者残留不同程度的神经功能丧失。由于脑组织结构的复杂性及脑出血是通过多种机制引起脑组织损害，单凭血肿清除及传统治疗很难达到神经功能康复的理想效果。寻找有效的治疗途径，最大限度的减少脑出血后死亡率及改善神经功能恢复是目前我们亟需解决的问题[1-4]。脑出血后大量的神经元及神经传导通路的损伤是脑出血损伤的病理机制，一旦神经元损伤往往导致永久性的功能缺失.因此如何有效的控制局部炎症反应、减少神经元不可逆损伤、促进神经元再生，是目前治疗出血性脑损伤亟待解决的问题。目前,随着营养因子治疗在各学科的大量应用,并且在脑出血等疾病中进行了大量基础研究,促进了其向临床应用的转化，并且获得了突飞猛进的进步。在中枢神经系统中，其中最重要的神经营养因子为脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor, BDNF)，其在中枢神经系统中有促进神经元再生和突触联系形成等作用[3-6]。在体外实验中，BDNF可以促进脑室管膜下区神经细胞和皮质神经元存活[7,8]。在体内实验中，BDNF可以促进在脑缺血，脑创伤和中毒性脑损伤中的神经元存活[9-15]。在鼠脑缺血模型中，Wolf-Rüdiger Sch bitz等，静脉注射BDNF30分钟后发现在脑皮质区有梗死面积的减小[13]。Viorica Pencea等在侧脑室注射BDNF，发现可以显著增加神经元增殖、促进神经祖细胞及其分化后细胞的存活[16]。在鼠脑出血模型中，发现BDNF有减小血肿体积、组织损伤面积和促进神经再生[17]。研究发现，BDNF可以使ERK1/2和Akt调节因子磷酸化，分别活化RAS/MAPK途径和PI3K/Akt途径来实现的神经保护作用[18]，通过上调Bcl-2家族蛋白表达，下调Bax蛋白表达实现抗神经元凋亡作用[13]。本课题组前期研究中验证了胶原结合区（CBD）结合BDNF促进大鼠缺血性脑损伤的神经再生作用，在神经元抗凋亡和血管新生方面取得了较好疗效[19]。由于血脑屏障对脑组织的保护，传统的静脉注射不能安全有效地将药物送到脑损伤部位发挥作用，利用病毒、脂质体、壳聚糖等药物载体，可以运送药物进入颅腔，但存在安全性和靶向性差等诸多问题。靶向治疗为药物定向输送和减小药物副作用带来了希望。然而，能否找到靶向治疗的特异性靶点是解决问题的关键，在脑出血损伤区域是否有特异性靶向位点？我们能否找到一种生物材料结合此靶点安全、持续缓慢释放药物？这些结果不仅可以为新型材料靶向治疗提供理论基础而且关系到药物靶向治疗脑出血的临床应用前景。 CBD (collagen-bingding domain),是一种胶原结合区。它是人们研究胶原酶作用位点时发现的多肽结构。应用聚合酶连锁反应（PCR）技术,将基因片段CBD-BDNF扩增,转入载体pET-28a中,然后转染***,使其表达目的蛋白,用CBD修饰BDNF,形成CBD-BDNF。形成BDNF固定于胶原表面的缓释系统。实验结果显示CBD-BDNF对神经损伤的修复作用远远好于单一BDNF。大量胶原（I型）广泛分布于大鼠的室管膜下区(subventricularzone, SVZ)。并且内源性神经祖细胞产生、增殖的主要位置为SVZ区。因此,本课题的目的是探讨靶向SVZ区胶原的BDNF治疗脑出血的效果,探讨CBD-BDNF治疗ICH的过程中，能否具有以下优势。第一，在时间上，形成持续时间较长的缓释系统。第二，在空间上,更加直接的刺激来源于SVZ区的内源性神经祖细胞的增殖,有利于修复脑出血后的损伤,加快了BDNF治疗ICH从基础到临床转化的步伐。研究内容和方法拟建立大鼠ICH模型,研究胶原靶向的BDNF对ICH损伤后的作用。课题研究的主要内容如下：制作SD大鼠ICH模型，以Ⅳ型胶原酶通过立体定向的方法注射到大鼠尾状核的位置。随机分组：磷酸盐缓冲液组（PBS组），BDNF治疗组。在侧脑室内分别注射10ul PBS，10ul NAT-BDNF，10ul CBD-BDNF。治疗后2w,各组分别作行为学评分、小动物PET、龋齿动物SPECT、7.0T小动物MRI扫描、免疫组织化学染色,评价CBD-BDNF治疗大鼠ICH的疗效和作用机制。研究结果 ***-BDNF增强了脑损伤后的修复作用，主要体现在CBD-BDNF治疗组神经功能恢复优于NAT-BDNF组及PBS组。CBD-BDNF治疗组出血周边区的神经元存活数目及新生血管数量明显多于PBS组。 ***-PET结果显示CBD-B

关键词：脑源性神经营养因子功能性显像动物行为学评分胶原神经再生

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心肌肌钙蛋白I在人非小细胞肺癌组织和肿瘤细胞株中的异常表达

心肌肌钙蛋白I在人非小细胞肺癌组织和肿瘤细胞株中的异常表达

引用

作者：陈超南京医科大学

学位级别：硕士

背景肌钙蛋白(Troponin)是调节横纹肌收缩的蛋白复合物,存在于细肌丝中,由肌钙蛋白Ⅰ(Troponin I, TnI)、肌钙蛋白T (Troponin T, TnT)和肌钙蛋白C(Troponin C, TnC)三个亚基组成。肌钙蛋白I(Troponin I, TnI)作为该复合物的抑制性亚基... 详细信息

背景肌钙蛋白(Troponin)是调节横纹肌收缩的蛋白复合物,存在于细肌丝中,由肌钙蛋白Ⅰ(Troponin I, TnI)、肌钙蛋白T (Troponin T, TnT)和肌钙蛋白C(Troponin C, TnC)三个亚基组成。肌钙蛋白I(Troponin I, TnI)作为该复合物的抑制性亚基,具有抑制肌动球蛋白Mg2+-ATP酶的作用。哺乳动物有三种不同基因编码的TnI亚型,分别称为慢骨骼肌亚型(TNNI1)、快骨骼肌亚型(TNNI2)和心肌亚型(TNNI3)。人类TNNI3基因位于19q13.4,编码约由210个氨基酸组成的蛋白质(24kDa)。与快、慢骨骼肌型TnI氨基酸序列相比,心肌型TnI蛋白(cTnI)在N端另延伸出30个氨基酸残基,使之具有较高的心肌特异性。cTnI以不同形式存在于心肌细胞中,约3%-8%的cTnI分布于心肌细胞胞浆,为游离的胞浆蛋白,大部分与肌钙蛋白T及C亚单位结合以复合体形式存在。近期已有实验研究证实心肌肌钙蛋白I在心肌细胞核中也有分布。心肌肌钙蛋白Ⅰ(Cardiac troponin I, cTnI)对诊断心肌损伤具有较高的特异性和敏感性,近年来逐渐取代肌酸激酶同工酶CK-MB,成为判断心肌细胞损伤的金标准。临床上,对于肿瘤病人而言,一系列抗肿瘤治疗如放疗、化疗以及生物治疗等导致的心脏损伤也可通过血清cTnI进行检测和评估。传统观点认为生理情况下cTnI仅在心肌组织中表达,最近有文献报道发育中的骨骼肌一过性表达cTnI。cTnI有高度心肌特异性。迄今为止,没有相关文献资料证实cTnI存在于非肌性细胞中,包括肿瘤细胞。本研究旨在探索人肿瘤组织及肿瘤细胞株中cTnI的表达情况,为研究cTnI与肿瘤的关系及机制提供实验依据。目的研究人非小细胞肺癌组织及肿瘤细胞株中心肌肌钙蛋白Ⅰ的异常表达。方法 1.抗人cTnI单克隆抗体的表位鉴定本实验室采用经典杂交瘤方法制备抗人cTnI单克隆抗体(Monoclonal antibody, mAb)三株XY15、XY13及XY10。以纯化后的人cTnI (hcTnI)及合成的cTnl肽段(scTnI-P)为抗原,通过间接酶联免疫吸附法(ELISA)及免疫印迹法(Western blot)鉴定mAbs的识别部位及特异性。使用同样方法鉴定Dr. Jack H. Ladenson教授赠送本实验室的抗人cTnI单抗2F6.6表位。另外,在本研究中使用的其他三株抗人cTnI单抗19C7、16A11、84(表位41-49、86-90、117-126)购自Hytest公司。 2.检测cTnI在人非小细胞肺癌组织中的表达本研究室病理标本库中43例非小细胞肺癌和6例其他肺部疾病患者手术切除的组织,于2007-2008年收集于南京军区总医院心胸外科和呼吸内科。病理学诊断肺鳞癌(21例),肺腺癌(17例),肺腺鳞癌(3例),大细胞肺癌(2例),肺转移性肉瘤(1例),肺结核(3例),肺硬化性血管瘤(1例)和肺炎性假瘤(1例)的病人。在采集标本前,所有患者未接受化疗、放疗或免疫性治疗。用免疫组织化学方法,选用抗人cTnI单抗2F6.6和19C7,检测病理组织中cTnI的表达,根据染色强度分为0(阴性),1(弱阳性),2(中等度阳性),3(强阳性)四级。 3.检测cTnI在人肿瘤细胞株中的表达培养人肺腺癌细胞株SPCA-1、人胃腺癌细胞株BGC823及肝癌细胞株Huh-7、MHCC-97L和MHCC-97H。选用上述7株抗人cTnI单克隆抗体,免疫荧光法检测细胞株cTnI的表达及细胞定位。 4.人肿瘤细胞株中cTnI mRNA的表达用Trizol试剂盒提取人肺腺癌细胞株SPCA-1、人胃腺癌细胞株BGC823及心肌细胞总RNA。Real-time PCR法比较肿瘤细胞株与心肌细胞cTnI mRNA表达量。目的基因是TNNI3,内参基因是GAPDH,以2-ΔΔCt方法计算。 5.人肿瘤细胞株中cTnI蛋白表达用细胞裂解液提取人肺腺癌细胞株SPCA-1、人胃腺癌细胞株BGC823及心肌细胞总蛋白,BCA法测定蛋白浓度。Western blot法检测cTnI蛋白表达。结果 1.利用酶联免疫吸附法以及免疫印迹法鉴定四株抗人cTnI单克隆抗体XY15、XY13、XY10及2F6.6的表位分别是56-80、76-110、181-210、13-36。其中抗体XY15的亚型为IgG2b,抗体XY13、XY10的亚型为IgGl。 2.利用免疫组织化学方法检测人非小细胞肺癌组织中cTnI表达,发现69.4%(34/49)呈阳性,其中35.3%(6/17)肺鳞癌患者呈强阳性,而非癌、非结核组织(9/9,100%)呈阴性

关键词：心肌肌钙蛋白Ⅰ 非小细胞肺癌人肺腺癌细胞株SPCA-1 人胃腺癌细胞株BGC823

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江苏省中老年男性生殖健康现状评估及健康指导

江苏省中老年男性生殖健康现状评估及健康指导

引用

作者：卿兴荣南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景随着人类社会生活水平和医疗保健水平的提高,全球人均寿命快速增长。同时,伴随着中国社会老龄化进程的不断继续,老年人在社会人群中所占的比例正逐渐增大。更年期是人类从中年进入到老年的过渡期。对男性更年期,医学界争论了多... 详细信息

研究背景随着人类社会生活水平和医疗保健水平的提高,全球人均寿命快速增长。同时,伴随着中国社会老龄化进程的不断继续,老年人在社会人群中所占的比例正逐渐增大。更年期是人类从中年进入到老年的过渡期。对男性更年期,医学界争论了多年,目前意见已趋于一致,认为男性亦存在更年期。如同女性,此时期的男性同样会出现许多心理上和机体上的功能紊乱。但与女性更年期雌激素骤降不同,中老年男性更年期时,其雄激素水平会出现增龄性缓慢下降,且只有部分雄激素缺乏的中老年男性会出现相应的临床症状,即迟发型性腺功能减退症(Late-Onset Hypogonadism, LOH)。 LOH是一种与男性年龄增长相关的临床和生物化学综合征,其特征为血清睾酮(T)水平降低(低于健康年轻成年男性的正常参考值范围)和一定的临床症状,如性功能减退、抑郁、瘦体量下降、骨质疏松及代谢异常等。LOH的诊断应包括以下三个方面：①症状筛查评价：由于LOH发病隐匿、进展缓慢及症状缺乏特异性导致诊断困难。为了筛查LOH、提高诊断的准确性,许多学者将LOH的诸多症状归纳总结、设计了许多症状筛查量表用于临床诊断,取得了较好的效果。目前,用于LOH诊断的筛查量表主要采用AMS量表(the Aging Male Symptoms Scale)用于症状筛查,结合SF-36量表及Beck抑郁量表可对患者的症状进行全面筛查。②血清T测定：血清T水平测定是公认的诊断性腺功能减退症最为可靠的指标,测定T水平的血清标本,应于7：0-9：00时段采集。对于T水平,目前国内外尚无统一的切点值,一般以20～39岁年龄组95%可信区间的下限值或T水平的10%位数作为切点值。国内推荐血清T水平低下的切点值为：总睾酮(TT)≤11.5nmol/L,睾酮分泌指数(TSI=TT/LH)≤208nmol/IU,计算所得游离睾酮(cFT)≤0.3nmol/L,游离睾酮指数(fTI=TT/SHBG)≤0.42nmol/nmol。③试验性睾酮补充治疗的反应：患者出现LOH相关症状并伴有血清T降低,在排除其他疾病或药物影响后,提示症状可能与血清T降低有关,试验性睾酮补充治疗(testosterone supplementary therapy, TST)可以进一步确定症状与T水平的关系(具有潜在或明显T缺乏症状,而T水平处于边缘水平时,且高度怀疑症状由T缺乏引起,可进行诊断性TST)。通过LOH相关症状筛查评价、实验室检查,并且证明试验性TST有效时,才能最后确立LOH的诊断,并根据患者的具体情况,采用相应的治疗方案进行TST。若处理不当,可严重影响患者的生活质量。鉴于中老年男性雄激素缺乏可对多器官、系统造成诸多不利影响,对中老年更年期生殖健康的评估和相关健康指导迫在眉睫。同时,代谢组学(metabolomics或metabonomics)作为继基因组学、转录组学和蛋白质组学之后兴起的系统生物学的一个新的分支,它能通过考察生物体系受刺激或扰动前后(如将某个特定的基因变异或环境变化后)代谢产物图谱及其动态变化研究生物体系的代谢网络。代谢组学的优势在于生物体的代谢物分析可反映机体系统的生理和病理状态,另外,基因和蛋白表达的微小变化会在代谢物水平得到放大。由于较高的生物敏感性,可以用于疾病的先期诊断和新药的早期筛选。因此,利用代谢组学的研究方法,可敏感地检测中老年男性更年期血清T水平的微小变化,评估T变化与多器官、系统效应的关系,并提供可能的生殖激素水平的遗传易感位点。代谢组学技术在中老年男性更年期生殖健康评估中具有非常广阔的应用前景。江苏省目前尚缺乏中老年男性生殖健康的系统调查及评估,而当地具有较为完善的卫生保健体系,其居民亦具有较强的个人保健意识,这为中老年男性生殖健康现状调查提供了有利条件。本课题通过对以南京城区为代表的城镇中老年男性进行随机抽样调查和以金湖县所辖乡镇为代表的农村中老年男性进行整群抽样调查,通过调查问卷、体格检查及实验室检查相结合的方法,获取基线数据,本课题组后续工作将以此为基础结合代谢组学等临床实验检查,多因素相关分析及系统评价分析影响江苏省中老年男性生殖健康的不利影响因素,研究江苏省中老年男性更年期生殖激素水平的遗传易感位点,及更年期早期预警分子,并根据研究数据拟定预防和治疗方案。目的 1、通过对以南京城区为代表的城镇中老年男性进行随机抽样调查和以金湖县所辖乡镇为代表的农村中老年男性进行整群抽样调查,获取江苏省城乡中老年男性生殖健康现状的基线数据； 2、通过对基线数据的初步分析,评估江苏省城乡中老年男性更年期生殖健康现状,探索影响其生殖健康的可能因素,同时给予相应健康指导； 3、通过对基线数据的进一步分析,为本课题组的后续研究提供良好的基础。方法

关键词：江苏省中老年男性 LOH 生殖健康生殖激素现状评估健康指导

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IL1B rs16944基因多态性与2型糖尿病的相关性研究

IL1B rs16944基因多态性与2型糖尿病的相关性研究

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作者：刘畅中国医科大学

学位级别：硕士

前言　　糖尿病(DM)已发展成为全球性的健康问题，根据国际糖尿病联盟(IDF)统计，2000年全球DM患者为1.51亿，而目前已达2.85亿，按照目前的速度增长，估计到2030年全球将有近5亿人患有DM。DM因其严重影响人类的健康而引起世界范围内学... 详细信息

前言　　糖尿病(DM)已发展成为全球性的健康问题，根据国际糖尿病联盟(IDF)统计，2000年全球DM患者为1.51亿，而目前已达2.85亿，按照目前的速度增长，估计到2030年全球将有近5亿人患有DM。DM因其严重影响人类的健康而引起世界范围内学者的关注。目前的研究表明，白介素1B(IL1B)基因家族的遗传变异与血糖稳态及2型糖尿病(T2DM)的发展有关。本文利用提取基因组DNA及MassARRAY分子量阵列技术对辽宁地区汉族健康人群及T2DM人群IL1Brs16944进行基因多态性分析，以探讨IL1Brs16944基因多态性与T2DM的关系。　　研究方法　　一、研究对象的选择及入选标准　　（一）病例组的选择　　选取中国医科大学附属第四医院内分泌科2012年10月至2013年6月住院的T2DM患者583人，均为汉族，其中男290人，女293人，年龄（58±21）岁，病史在1-20年之间，符合1999年WHO糖尿病专家委员会提出的诊断及分型标准，同时根据既往病史、家族史及实验室检查，排除同时合并有垂体瘤、原发性甲状腺功能亢进症等内分泌系统疾病，或患有各种内科急、重症，或进行过胃空肠吻合术等易引起血糖变化等手术的患者。　　（二）对照组的选择　　以2012年10月至2013年6月本院体检者正常汉族对象366人为对照组，其中男179人，女187人，年龄（56±19）岁，两组对象年龄、男女比例无显著性差异（P＞0.05），除外DM及心、肝、肾等疾患。以上试验对象均无血缘关系。　　二、实验方法　　两组对象于晨空腹留取依他酸抗凝血2毫升，同时记录其年龄、性别、身高、体重、血压等基本临床指标，在OlympusAU2700全自动分析仪上酶法测定血糖、总胆固醇、甘油三酯，直接法测定低密度脂蛋白、高密度脂蛋白，在TOSOH全自动分析仪上液相层析法测定糖化血红蛋白，在Elecsys2010全自动分析仪上电化学发光法测定胰岛素及C肽水平，以上检验结果均选用高、中、低3种质控样品进行质控分析。　　提取留取血样DNA，试剂盒为宝生物工程（大连）有限公司生产的TaKaRa9450，并用紫外分光光度法对提取的DNA进行浓度及纯度测定，其浓度和纯度应达到要求（(DNA浓度＞10ng/μl，纯度OD260/280为1.6～2.0)。　　MassARRAY分子量阵列技术进行基因分型，送上海医药临床研究中心检定。　　三、统计学处理　　运用基因计数法计算各组基因频率和等位基因频率，然后用Hardy-Weinberg遗传平衡定律检验确认研究样本的群体代表性。用SPSS19.0软件包进行分析，组间计量指标比较采用t检验，组间基因频率比较采用卡方检验，样本群体代表性采用吻合度检验法计算两组X2值。对照组及病例组不同基因型间临床参数比较采用单因素方差分析。　　研究结果　　一、两组对象一般资料比较　　病例组体质量指数(BMI)显著高于对照组(P＜0.05)，说明T2DM患者的肥胖较明显。病例组收缩压、舒张压均较对照组增高(P＜0.05)，说明T2DM患者更易患有高血压病（见表1）。　　表1，两组对象一般资料比较（(x)±s）┏━━━━━┳━━━━┳━━━━━━━━┳━━━━━━━┳━━━━━┳━━━━━┓┃分组┃例数┃BMI(kg/m2)┃SBP(mmHg)┃DBP┃(mmHg)┃┣━━━━━╋━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━╋━━━━━┫┃病例组┃583┃25.72±3.85┃135.78±18.19┃83.2┃1±10.63┃┣━━━━━╋━━━━╋━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━╋━━━━━┫┃对照组┃366┃23.94±3.41┃126.72±15.16┃76.7┃1±11.07┃┗━━━━━┻━━━━┻━━━━━━━━┻━━━━━━━┻━━━━━┻━━━━━┛　　二、两组对象IL1Brs16944基因多态性检测结果　　IL1Brs16944基因共发现AA、AG、GG三种基因型，基因分型以AG杂合子分布最多，纯合子AA及GG其基因频率分布接近，两组对象各基因型分布无显著性差异(X2=0.025，P=0.746)，其等位基因分布亦无显著性差异(X2=0.572，P=0.449)（见表2）。根据两组X2值，其自由度为2，P值均＞0.05，显示两组人群基因频率符合遗传平衡法则，具有群体代表性。　　表2，两组对象IL1Brs16944基因多态性分布[n/(％)]┏━━━━━┳━━━━━━━━━━┳━━━━━━━┳━━━━━━━┳━━━━━━━━━━━━━━━━┓┃┃┃基因型频率┃┃等位基因频率┃┃分组┃例数┃┃┃┃┣━━━━━╋━━━━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━╋━━━━━━━┳━━━━━━━━┫┃┃AA┃AG┃GG┃A┃G┃

关键词： IL1B rs16944基因多态现象 2型糖尿病电化学发光法

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CRM197和shRNA-VCAM-1联合应用对胶质瘤U87细胞的抗肿瘤作用及其机制研究

CRM197和shRNA-VCAM-1联合应用对胶质瘤U87细胞的抗肿瘤作用及其...

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作者：蔺兴中国医科大学

学位级别：硕士

前言：　　胶质母细胞瘤(gliobastona multiforme，GBM)是胶质瘤中最常见的类型，约占全部胶质瘤的50-60％。近年来，随着对基因组研究的深入，对与胶质瘤发生发展密切相关的分子途径的研究，以及针对特定的受体、关键基因或调控分子进... 详细信息

前言：　　胶质母细胞瘤(gliobastona multiforme，GBM)是胶质瘤中最常见的类型，约占全部胶质瘤的50-60％。近年来，随着对基因组研究的深入，对与胶质瘤发生发展密切相关的分子途径的研究，以及针对特定的受体、关键基因或调控分子进行的胶质瘤基因靶向治疗带来了新的希望。　　交叉反应物质197(cross-reacting material197，CRM197)是一种白喉毒素的无毒突变体，它们能与细胞膜上特定的白喉毒素受体(diphtheria toxin receptor，DTR)即肝素结合表皮生长因子的膜结合前体(pro heparin-binding epidermal growthfactor，PROHB-EGF)结合。我们以前的研究表明，CRM197能够增加血脑屏障(bloodbrain barrier，BBB)的通透性。CRM197可以作为载体蛋白把药物靶向输送到大脑。而应用顺铂联合CRM197化疗能提高对U251胶质瘤细胞的生长抑制和凋亡的影响，因此推断CRM197可能对胶质母细胞瘤也有潜在的治疗作用。　　VCAM-1(vascular cell adhesion molecule1，VCAM-1)是一种粘附分子，其在肿瘤的增殖、凋亡、血管发生以及细胞运动中发挥着重要作用。有研究发现VCAM-1阻滞抗体能够抑制肿瘤细胞的增殖，因此抗VCAM-1有望成为胶质瘤靶向基因治疗的新靶点。磷脂酰肌醇3-激酶(phodphoinositide3-kinases，PI3K)家族参与多种信号通路，调节细胞的增殖、分化、存活和迁移等。研究证明，CRM197可以抑制PI3K/Akt信号通路的激活，引起细胞凋亡。本实验的目的是验证CRM197和shRNA-VCAM-1单独以及联合应用对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响，探讨相关的分子机制，为治疗脑胶质瘤的治疗提供新途径。　　实验材料和方法：　　一、实验材料　　（一）实验细胞株　　人胶质瘤U87细胞株购自于南京凯基生物科技有限公司。应用RNA干扰沉默VCAM1后的U87胶质瘤细胞株由中国医科大学细胞生物重点实验室提供。　　（二）主要试剂　　CRM197，CCK8，DMSO(美国SIGMA公司)，DMEM/F-12培养基（美国Hyclone公司）;胎牛血清（天津灏洋生物科技有限公司）;AnnexinⅤ/PI细胞凋亡检测试剂盒（南京凯基生物科技有限公司），羊抗Akt(1)/2多克隆抗体，兔抗p-Akt1/2/3(Ser473)多克隆抗体，兔抗MMP2多克隆抗体，羊抗MMP9多克隆抗体，兔抗VCAM-1多克隆抗体，小鼠抗单克隆抗体，增强化学发光法试剂盒（美国Santacruz公司），兔抗山羊HRP标记的IGg二抗，山羊抗兔HRP标记的IGg二抗，山羊抗小鼠HRP标记的IGg二抗（北京中山生物技术公司）。　　（三）主要仪器　　细胞培养箱（美国Forma scientific公司）;超净工作台（苏州安泰空气技术有限公司）;倒置显微镜（日本TMS公司）;紫外可见光分光光度计（R本岛津公司）;超声粉碎机（德国***公司）;台式低温超速离心机（德国Sigma公司）;BDFacscalibur流式细胞仪（美国Becton-Dickinson公司）;聚丙烯酰胺凝胶电泳2装置（美国Bio-Rad公司）;转印仪（北京市六一仪器厂）;LAS3000成像系统（日本Fujifilm公司）;凝胶成像分析软件（江苏捷达科技有限公司）;电子分析天平（德国Sartorius公司）;-80℃超低温冰箱（日本Sanyo公司）;恒温震荡水浴（哈尔滨市东联电子技术开发有限公司）;旋涡混合器（上海医科大学仪器厂）。　　二、实验方法　　（一）细胞培养　　（二）实验分组　　1、CRM197对U87细胞增殖、迁移和侵袭的影响　　(1)对照组（相同浓度溶解药物的溶剂）　　(2)shRNA-VCAM-1 U87组　　(3)CRM197(10μg/ml)组　　(4)CRM197(10μg/ml)+shRNA-VCAM-1组　　2、验证shRNA-VCAM-1的沉默效率　　(1)Blank: U87细胞　　(2)NC: U87细胞转染空白质粒　　(3)shRNA-VCAM-1:U87细胞转染沉默VCAM-1质粒　　3、CRM197与shRNA-VCAM-1联合应用对U87细胞增殖、迁移和侵袭的影响　　(1) Control组:U87细胞　　(2) shRNA-VCAM-1组:U87细胞转染沉默VCAM-1质粒　　(3) CRM197组:U87细胞+CRM197(10μg/ml)　　(4) CRM197+shRNA-VCAM-1组:CRM197(10μg/ml)+转染沉默VCAM-1质粒的U87细胞　　（三）细胞培

关键词：胶质母细胞瘤交叉反应物质197 白喉毒素受体粘附分子抗肿瘤作用

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Lamininα5在肺腺癌及A549细胞系不同增殖状态中的表达

Lamininα5在肺腺癌及A549细胞系不同增殖状态中的表达

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作者：尚杨卫中国医科大学

学位级别：硕士

前言：　　全世界每年因恶性肿瘤死亡的病人高达500万，肿瘤已经成为当今威胁人类健康的主要疾病。研究证实肿瘤组织中的血管较正常组织丰富。目前发现肿瘤内血管生成不仅对肿瘤的生长至关重要，而且对肿瘤的转移也发挥重要作用，肿瘤... 详细信息

前言：　　全世界每年因恶性肿瘤死亡的病人高达500万，肿瘤已经成为当今威胁人类健康的主要疾病。研究证实肿瘤组织中的血管较正常组织丰富。目前发现肿瘤内血管生成不仅对肿瘤的生长至关重要，而且对肿瘤的转移也发挥重要作用，肿瘤的转移是恶性肿瘤的主要致死病因之一。　　肿瘤细胞穿越基底膜是转移的关键，基底膜是由层粘连蛋白（Laminin，LN）、Ⅳ型胶原、巢蛋白、硫酸肝素蛋白聚糖等组成的网状结构，其中层粘连蛋白是主要成分。完整的层粘连蛋白是由细胞分泌到细胞外，由α、β、γ三条链组成的异构三聚体，分子量从400kDa到900kDa不等;到目前为止，共发现5种类型的α链、4种类型的β链、3种类型的γ链，有19种组合形式，在机体各组织中广泛表达，诸如血管内皮和平滑肌细胞。层粘连蛋白调控周围血管内皮细胞和平滑肌细胞的黏附、增殖、分化、迁移和凋亡，从而对血管再生和其空间结构的维持发挥重要作用。层粘连蛋白在人体随着时间的变化，在不同组织有不同种表达形式。目前研究表明:人血管内皮细胞仅表达两种层粘连蛋白:LN411(即Lamininα4β1γ1)和LN511(即Lamininα5β1γ1)。所有的内皮细胞各个阶段都表达LN411，其α4G域被抗体封闭时就能触发内皮细胞依赖线粒体的程序性细胞死亡，这表明LN411对内皮细胞的生存是必需的;而LN511只有在生后3-4周的毛细血管和小静脉的内皮细胞基底膜上出现，并且促血管生成的病理因素（如促炎因子TNFα）能够上调其表达，说明LN511或在血管新生过程中起重要作用。　　LN511的膜受体包括整合素受体（Integrin）和非整合素受体(如Lutheran bloodgroup glycoprotein)，以整合素为主。内皮细胞膜上表达几种整合素受体，其中整合素α3β1为LN511的主要特异性受体。LNα5是LN511的亚基。LN511的许多生物学功能都是通过LNα5来实现的，因为它包含与细胞受体相互作用的主要位点。无论是胚胎鼠还是幼鼠，LNα5基因敲除后会表现出多种组织器官发育缺陷，如颅脑畸形，并指，肾小球基底膜、肾小管毛细血管网形成障碍等。这些结果表明LNα5在组织器官的发育和发展中具有多重功能。有意思的是，LNα5同样也是一个调节肿瘤黏附、侵袭和转移的多功能黏附蛋白。一方面，LNα5与肿瘤细胞表面的整合素受体结合，促进肿瘤细胞的黏附;另一方面，LNα5与肿瘤细胞表面的一类非整合素受体(Lutheran blood group glycoprotein)结合，促进肿瘤细胞的迁移，有利于肿瘤侵袭和转移，事实上整合素受体与非整合素受体是一种竞争性地关系。研究表明在乳腺、甲状腺、卵巢、前列腺等组织上的恶性肿瘤高表达LNα5，我们通过免疫组化发现LNα5在肺癌、肾癌、肠癌、胰腺癌等肿瘤组织中也呈现高表达（图1，2）。那么这些肿瘤细胞与LNα5之间的关系又如何呢？我们拟以肺腺癌A549细胞系为例进行研究。　　本实验通过检测LNα5在肺腺癌组织中的表达，从蛋白和mRNA水平上研究LNα5的表达与A549细胞（肺腺癌细胞）的细胞不同增殖状态间的关系，观察表达LNα5的A549细胞的细胞周期。为肺腺癌的临床诊断和治疗提供新的实验依据。　　方法：　　人体组织标本肾癌与其癌旁组织，肺癌与其癌旁组织，结肠癌与其癌旁组织，胰腺癌与其癌旁组织，及其它组织切片均来源于中国医科大学附属第一医院，经中国医科大学伦理委员会批准及供者知情同意。A549细胞购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心。　　A549细胞实验分组:　　当A549细胞在直径为3cm的培养皿中长到约60％时，即绝大部分细胞呈现梭形，处于伸展状态，树突明显突起为A组;当A549细胞在直径为3cm的培养皿中长到约80％-90％时，即细胞数量较多，产生接触抑制为B组。　　1.免疫组织化学法---检测LNα5在人类肿瘤组织及其癌旁组织中的表达。　　2.蛋白质免疫印迹法---检测LNα5在肺腺癌及A、B组A549细胞中的表达。　　3.流式细胞术法---检测A、B组A549细胞的细胞周期及LNα5的表达。　　4.免疫荧光法---检测LNα5在A、B组A549细胞中的表达。　　***-PCR法---检测LNα5在A、B组A549细胞中的mRNA量。　　结果：　　***α5在结肠癌与其癌旁组织，胰腺癌与其癌旁组织，肺癌与其癌旁组织，肾癌与其癌旁组织中均表达，与癌旁组织相比，LNα5在癌组织中高表达，差异有统计学意义(p＜0.05)。　　2.肺腺癌及其癌旁组织均表达LNα5，与癌旁组织相比，LNα5在肺腺癌组织中高表达，差异有统计学意义(p＜0.05)。　　3.A组A549细胞有45％-50％的细胞处于S期，60％-65％的细胞处于非G1期;而B组A549细胞仅有18％-25％的

关键词：肺腺肿瘤细胞增殖层粘连蛋白α5 蛋白表达

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乙型肝炎病毒逆转录酶区预存耐药的研究

乙型肝炎病毒逆转录酶区预存耐药的研究

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作者：罗新月中国医科大学

学位级别：硕士

目的　　探讨未经核苷（酸）类似物治疗的乙型肝炎病毒(HBV)感染者，HBVP基因逆转录酶(RT)区准种异质性及预存耐药情况，为临床抗病毒治疗药物选择提供理论依据。　　材料与方法　　一、材料　　研究对象:2011年10月至2013年4月期间于... 详细信息

目的　　探讨未经核苷（酸）类似物治疗的乙型肝炎病毒(HBV)感染者，HBVP基因逆转录酶(RT)区准种异质性及预存耐药情况，为临床抗病毒治疗药物选择提供理论依据。　　材料与方法　　一、材料　　研究对象:2011年10月至2013年4月期间于中国医科大学盛京医院感染科住院患者60例，其中乙肝肝硬化30例、慢性乙型肝炎20例、乙肝病毒携带者10例。诊断标准符合2010年中国乙肝防治指南制定的诊断标准。10例乙肝病毒携带者均经过肝脏病理检查证实。　　二、实验方法　　1、乙肝病毒血清提取　　2、乙型肝炎病毒血清学标志物及血清ALT检测　　乙肝病毒血清学标志物采用化学发光法（雅培公司，美国），血清ALT测定应用贝克曼8200A全自动生化分析仪（贝克曼公司，美国）检测，由中国医科大学附属盛京医院中心实验室检测。　　3、乙肝病毒载量检测　　应用乙型肝炎病毒核酸检测试剂盒（罗氏公司，瑞士），由中国医科大学附属盛京医院传染病实验室检测。　　4、乙肝病毒逆转录酶区克隆测序及耐药位点分析　　应用克隆测序法，由上海源奇生物有限公司进行检测，选取与核苷（酸）类似物耐药相关的rtL80、rtI169、rtV173、rtL180、rtA181、rtT184、rtA194、rtS202、rtM204、rtN236、rtM250共11个耐药位点进行分析。　　5、数据分析　　计数资料构成比采用R×C表的x2检验，以P＜0.05为差异具有统计学意义。核苷酸序列分析应用DNAstar软件进行。　　结果　　1、一般资料及变异模式　　未经核苷（酸）类似物治疗的患者共60例，男性44例，女性16例，平均年龄45±10.12岁。60例患者中33例(53.3％)检测出RT区基因变异。其中乙肝肝硬化组17例(56.7％)，慢性乙型肝炎组11例(55％)，乙肝病毒携带者组5例(50％)。三组之间两两比较，无显著性差异。对HBVRT区11个耐药位点的核苷酸序列分析，共发现31种变异模式，其中可能导致耐药变异有:rtM204V/I(6例)，rtM250V/I（5例），rtL80（4例），rtL180M（1例），rtA181V/T（6例），rtS202G（3例），rtT184G(1例),rtA181V、rtM250I(1例),rtA181V、rtL80P(1例)。　　2、拉米夫定、恩替卡韦、阿德福韦酯预存耐药　　拉米夫定耐药相关位点变异8例(13.3％)、恩替卡韦耐药相关位点变异5例(8.3％)，阿德福韦酯耐药相关位点变异7例(11.6％)。　　3、HBV不同感染阶段RT区核苷（酸）类似物预存耐药的比较　　乙肝肝硬化组、慢性乙型肝炎组及乙肝携带者组，在检测的11个位点中预存耐药发生率无统计学差异。　　4、HBeAg阳性和HBeAg阴性HBV感染者RT区基因变异的比较　　HBeAg阳性组RT区变异发生率为52.6％，阴性组为54.5％，两组之间无显著性差异(x2=0.015，P=0.9)。　　5、HBV不同感染阶段准种复杂程度的比较　　乙肝肝硬化组发生变异准种数为23(3.83％)，慢性乙型肝炎组发生变异准种数为17(2.83％)，乙肝病毒携带者组发生变异准种数为8(1.33％)，乙肝肝硬化组准种复杂性高于慢性乙型肝炎和乙肝病毒携带者组。　　结论　　1、HBV逆转录酶区预存耐药天然存在。　　2、核苷（酸）类似物预存耐药，拉米夫定耐药相关位点变异率最高。　　3、不同感染阶段准种复杂程度存在差异，乙肝肝硬化组准种变异数最多。

关键词：乙型肝炎病毒 P基因逆转录酶区准种异质性预存耐药

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结直肠癌组织中RUNX3蛋白生物学表达及作用

结直肠癌组织中RUNX3蛋白生物学表达及作用

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作者：于颖剑河北医科大学

学位级别：硕士

目的:结直肠癌(colorectal cancer)又称大肠癌。作为我国常见的恶性消化道肿瘤之一，发病率有不断升高的趋势，且年龄日趋低龄化，社会危害日趋严重，虽然众多学者已对其进行了广泛而深入的临床及实验室研究，但其发生、发展的确切机制... 详细信息

目的:结直肠癌(colorectal cancer)又称大肠癌。作为我国常见的恶性消化道肿瘤之一，发病率有不断升高的趋势，且年龄日趋低龄化，社会危害日趋严重，虽然众多学者已对其进行了广泛而深入的临床及实验室研究，但其发生、发展的确切机制尚不完全明确。　　人类相关转录因子3(human runt related transcription factor3，RUNX3)是新近发现的肿瘤抑制基因，此基因其总长约67kb，是定位在人染色体1p36.1，含有跨越了整条基因总长1/2的内含子1(35kb)，6个外显子，两个启动子(P1、P2)以及开放阅读框1290 bp，P2较P1 GC含量高，更易于位点突变而调控发生异常。P1、P2启动子内转录起始点为多个且彼此分离，从而能起到多位点的基因调控，抑癌基因RUNX3具有复杂的生物学作用，业界认为其是一种新型的抑癌基因而广为关注，其在结直肠癌中表达较正常组织及良性肿瘤中显著减低，关于RUNX3的特性在各种常见临床肿瘤中的研究结果观点纷呈，甚至部分结果在特定的试验条件下与主流结论则完全悖谬。　　本文通过抽样调查的方法选取50例结直肠癌患者，旨在研究部分人群结直肠组织中RUNX3表达的情况，为结直肠癌的临床检测及预后判断提供免疫组织化学依据，丰富RUNX3的研究数据。　　方法:　　1.材料　　2012年3月-2013年3月间50例结直肠腺癌患者，组织取材于河北医大四院结直肠癌专科，根据临床发病规律，取材6例低分化腺癌，取材44例高、中分化腺癌;TNM分期显示T3、T4期43例，T1、T2期7例;淋巴转移:11例（有转移），39例（无转移）。所有组织标本（取材前）均未接受特殊干预治疗，如放化疗、生物免疫等。　　2.研究方法　　免疫组化SP法:RUNX3细胞浆及细胞核中均可出现，RUNX3阳性是二者内出现棕黄色颗粒。通过反应的程度（范围）和强度计算，最终以染色强度及范围的乘积确定得分;RUNX3的阳性率，染色程度即RUNX3阳性染色所占百分率:小于5％为0分，5％～为1分，25％～为2分，50％～为3分，大于75％为4分;染色强度:0分（无色），1分（浅黄色），2分（棕黄色），3分（棕褐色）;强阳性(++)9～12分，弱阳性(+)5～8分，阴性（-）0～4分。RUNX3阳性参照则采用已知阳性切片,RUNX3阴性参照则以PBS替换一抗。　　结果:　　***3蛋白在癌组织中的分布情况:低分化腺癌6例，1例低表达;44例高中分化腺癌，5例低表达。TNM分期:43例≥T3期，1例低表达;7例≤T2期，5例低表达。淋巴转移:11例未见淋巴转移，0例低表达;39例无淋巴转移，5例低表达。年龄分布为＞55岁30例，4例低表达;20例≤55岁，2例低表达。性别:男29例，5例低表达;女21例，1例低表达。部位:结肠癌组织34例中4例为低表达;直肠癌组织16例中2例为低表达。结直肠癌中RUNX3蛋白表达与年龄、性别、肿瘤发生部位、组织学分化程度等均无显著相关(p＞0.05)，而与结直肠肿瘤淋巴结转移呈显著相关性(p＜0.05)，同时结直肠癌病理组织学分级也密切相关(p＜0.05)。　　***3在肠粘膜正常组织中阳性出现率为96％(48/50)，而在结直肠癌组织中的阳性出现率为12％(6/50)，可见癌组织细胞中RUNX3表达率明显低于正常细胞(p＜0.05)。　　结论:　　1.结直肠癌组织细胞中RUNX3低表达乃至失表达，在结直肠腺癌病理演变中可能有其重要作用。　　2.临床病理学结合检测RUNX3或可为结直肠癌早期诊断、判断预后以及术后监测提供新的思路。

关键词：结直肠癌转录因子 RUNX3表达抑癌基因免疫组化预后判断

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