检索结果-内蒙古大学图书馆

中国肿瘤生物治疗杂志 2013年第1期20卷 110-114页

作者：倪长伟王梁华尹剑大连医科大学附属第二医院神经内科辽宁大连116027 第二军医大学生物化学与分子生物学教研室上海200433 大连医科大学附属第二医院神经外科辽宁大连116027

随着分子生物学技术的进步和在分子水平上对恶性肿瘤发病机制认识的不断加深,以细胞受体、表面抗原、关键基因和细胞内调控分子为靶点的分子靶向治疗已成为辅助传统治疗的合理选择。抗体导向治疗是一种新颖的分子靶向治疗手段。目前已... 详细信息

随着分子生物学技术的进步和在分子水平上对恶性肿瘤发病机制认识的不断加深,以细胞受体、表面抗原、关键基因和细胞内调控分子为靶点的分子靶向治疗已成为辅助传统治疗的合理选择。抗体导向治疗是一种新颖的分子靶向治疗手段。目前已研发多种抗体导向类抗癌药物,这类药物由特异性识别肿瘤细胞的靶向部分和杀伤肿瘤的效应部分组成,因而具有较强的靶向杀伤肿瘤细胞作用,同时可有效降低药物对局部正常组织和全身的系统性毒性作用。利用基因工程技术将人类血清可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(serum-soluble TNF-related apoptosis-inducing ligand,sTRAIL)与抗肿瘤单链抗体(single chain antibody fragment,scFv)融合,构建scFv-sTRAIL融合蛋白,是一种理想的抗体导向治疗策略。通过scFv与肿瘤细胞所特有的细胞表面抗原的特异结合,加强sTRAIL在肿瘤病灶的富集,靶向诱导肿瘤细胞凋亡,从而获得增强抗体的疗效和更高的药物安全性。

关键词：单链抗体肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体融合蛋白凋亡

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信号接头蛋白CrkL下调对小鼠Hca-P细胞恶性行为的影响

信号接头蛋白CrkL下调对小鼠Hca-P细胞恶性行为的影响

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第八届全国医学生物化学与分子生物学第五届全国临床应用生物化学与分子生物学2013华东六省一市生物化学与分子生物学联合学术研讨会

作者：石际孙明忠郭春梅彭博雅李妲刘淑清大连医科大学生物化学与分子生物学教研室大连医科大学生物技术系

恶性肿瘤的早期淋巴道转移致患者死亡率高、预后差,其发生机制一直是肿瘤学研究难题。小鼠肝癌细胞Hca-F和Hca-P遗传背景相同,但Hca-F为高淋巴道转移力细胞(淋巴结转移率约75%),Hca-P为低淋巴道转移力细胞(淋巴结转移率约25%),是研究肿... 详细信息

恶性肿瘤的早期淋巴道转移致患者死亡率高、预后差,其发生机制一直是肿瘤学研究难题。小鼠肝癌细胞Hca-F和Hca-P遗传背景相同,但Hca-F为高淋巴道转移力细胞(淋巴结转移率约75%),Hca-P为低淋巴道转移力细胞(淋巴结转移率约25%),是研究肿瘤淋巴道转移的理想细胞模型。信号接头蛋白CrkL(Crk-Like)最初作为一种癌基因产物被发现于禽类肉瘤病毒CT10(chicken tumor 10)中,由SH2(src homology 2)和SH3结构域组成。本研究组Western blot结果显示,CrkL在小鼠高、低淋巴道转移力细胞Hca-F和Hca-P中均有表达,其中在Hca-P中的表达要高于Hca-F,且高达3.05倍左右(P<0.05),表明CrkL的过表达可能与肿瘤淋巴道转移密切相关。为研究CrkL对肿瘤细胞淋巴道转移的潜能,我们构建了表达载体pGPU6/GFP/Neo-shRNA-CrkL,利用脂质体介导法稳定转染至Hca-P细胞中,利用有限稀释法筛选单克隆细胞株;采用Western blot方法筛选siRNA干扰效果好的单克隆细胞株用于后续功能实验。实验结果表明干扰效果最好的细胞株在蛋白质水平上下降了80.4%,CCK-8法结果显示CrkL表达下调抑制了Hca-P细胞的增殖能力;Transwell小室实验结果证实CrkL蛋白表达下降会抑制Hca-P细胞的迁移与侵袭能力;Hoechst凋亡实验结果表明了CrkL下调会抑制Hca-P细胞的凋亡。我们的研究结果表明:CrkL可影响Hca-P的增殖、迁移与侵袭、凋亡等恶性行为,可作为调控肿瘤细胞淋巴道转移能力的靶标蛋白,为恶性肿瘤的研究和治疗提供一定线索。

关键词：信号接头蛋白CrkL 肿瘤淋巴道转移 RNA干扰

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肿瘤坏死因子α诱导蛋白8在胃腺癌侵袭转移中的作用研究

肿瘤坏死因子α诱导蛋白8在胃腺癌侵袭转移中的作用研究

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作者：陈玲山东大学

学位级别：博士

[研究背景与目的]：胃癌(gastric cancer, GC)是消化系统最常见的恶性肿瘤,也是全球范围内发病率第四位,死亡率第二位的肿瘤。在中国,居消化道恶性肿瘤发病率、死亡率首位。胃癌大多发病隐匿、恶性程度高、病情发展较迅速且容易发生远... 详细信息

[研究背景与目的]：胃癌(gastric cancer, GC)是消化系统最常见的恶性肿瘤,也是全球范围内发病率第四位,死亡率第二位的肿瘤。在中国,居消化道恶性肿瘤发病率、死亡率首位。胃癌大多发病隐匿、恶性程度高、病情发展较迅速且容易发生远处转移,尽管随着医疗水平不断提高,在早期诊断及综合治疗方面取得了巨大进步,但手术切除依然是目前治愈胃癌的唯一手段。胃癌在不同区域间发病率变化较大,这与胃癌危险因素的分布息息相关。胃癌的危险因素主要包括：幽门螺杆菌感染、不良的生活习惯(吸烟、饮酒、烟熏盐渍食物等)、慢性萎缩性胃炎及胃溃疡等。胃癌的早期诊断率仍不足10%,中晚期胃癌预后很差。胃癌包括多种病理类型,其中胃腺癌占到了胃癌总数的90%,是本课题组的主要研究对象。胃癌的发生、发展和转移是多因素、多阶段、多基因参与的,研究参与此过程的易感基因以及相关细胞因子必定有助于了解胃癌的生物学行为和判定评估患者的预后。寻求有利于早期诊断、治疗及评价预后的有效生物学靶标是当前胃癌研究的重要内容之一。肿瘤坏死因子α诱导蛋白(tumor necrosis factor-alpha-induced protein,TNFAIP)家族,是由肿瘤坏死因子a (tumor necrosis factor a, TNFα)诱导产生的,通过NF-κB的激活而发挥作用,参与多种生物学过程。TNFAIP8家族蛋白属于此家族中新发现的一类,包括TIPE(TNFAIP8), TIPE1 (TNFAIP8L1), TIPE2 (TNFAIP8L2)和TIPE3(TNFAIP8L3)。其蛋白质结构域中含有一个死亡结构域(death effecter domain, DED),在调节细胞增殖、调亡炎症发生发展等方面发挥重要作用,国内外相关研究表明,在人类多种实体肿瘤中,TNFAIP8过表达能加速细胞增殖,从而促使肿瘤生长；沉默TNFAIP8基因后,肿瘤细胞的增殖、生长明显减弱。认为TNFAIP8的表达与其发生、发展、浸润、转移以及不良预后有明显的相关性。由此可见,TNFAIP8在肿瘤浸润转移过程中可能起关键作用。但是,有关TNFAIP8在我国高发疾病胃癌中的相关研究报道较少,特别是目前国内外尚没有关于TNFAIP8的表达情况与临床病理特征包括肿瘤标志物血清CA72-4及预后关系的研究。同时TNFAIP8在胃癌侵袭转移中是如何发挥作用的机制尚不明确。本研究通过免疫组织化学方法检测TNFAIP8在胃腺癌原发灶、癌旁正常胃粘膜组织及相应淋巴结转移灶中的表达情况,并详细分析其表达水平与临床病理特征包括预后的关系。进一步采用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术,合成TNFAIP8基因小干扰RNA (small interfering RNA, siRNA)转染干扰胃癌细胞,观察TNFAIP8 siRNA转染对胃癌细胞增殖、侵袭及转移能力的影响,并分析探讨TNFAIP8参与侵袭、转移的可能机制。[方法]：1. TNFAIP8在胃腺癌中的表达情况：选取山东省医科院附院病理科存档的106例胃腺癌原发灶及癌旁正常胃粘膜组织和相应60例淋巴结转移灶,这106例患者的临场资料也被统计。应用免疫组化方法检测TNFAIP8表达,分析TNFAIP8表达水平与胃腺癌患者临床病理特征的关系。生存分析方法评价TNFAIP8表达对胃腺癌患者预后的影响。2. TNFAIP8基因的干扰RNA体外合成及对胃癌细胞系的干预：使用Western Blot方法检测胃癌细胞株SGC7901、MGC803、BGC823中TNFAIP8基因的表达量,筛选出TNFAIP8基因表达量最高的细胞系,合成TNFAIP8基因的干扰RNA(TNFAIP8 siRNA1、TNFAIP8 siRNA2、TNFAIP8 siRNA3),并利用基因转染技术将三组干扰RNA分别转染进该胃癌细胞株,应用流式细胞仪观察转染效率,分别采用实时荧光定量PCR和Western Blot方法检测基因转染后的TNFAIP8 mRNA和蛋白的表达,评价干扰效果。3. TNFAIP8对胃癌细胞侵袭转移能力的影响及机制探讨：筛选出沉默效率最高的一组序列,采用平板实验检测各组细胞单克隆形成能力,CCK-8的方法检测细胞增殖能力的变化,采用Transwe11小室方法分别检测细胞侵袭能力及转移能力的变化,采用Western Blot方法检测细胞TNFAIP8基因转染前后胃癌相关基因(MMP-2、MMP-9)在蛋白水平上的表达变化,探讨TNFAIP8促进肿瘤细胞侵袭转移的可能机制。[结果]：1. TNFAIP8在癌旁相应淋巴结转移灶、胃腺癌原发灶、和正常胃粘膜组织中高表达率依次下降,分别为81.7%(49/60),47.2%(50/106)和0,三组间有统计

关键词： TNFAIP8 胃癌 RNA干扰侵袭转移基质金属蛋白酶

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白纹伊蚊嗅觉结合蛋白的克隆、鉴定和功能分析

白纹伊蚊嗅觉结合蛋白的克隆、鉴定和功能分析

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作者：邓裕华南方医科大学

学位级别：博士

研究背景:蚊是一类重要的医学昆虫，不仅叮咬骚扰人类，同时还可能传播多种疾病，如疟疾、丝虫病、登革热、流行性乙型脑炎、黄热病等，对人类的健康产生极大的危害。蚊媒病流行范围广，传播力强，发病率高，全球每年有上亿人感染疟疾... 详细信息

研究背景:蚊是一类重要的医学昆虫，不仅叮咬骚扰人类，同时还可能传播多种疾病，如疟疾、丝虫病、登革热、流行性乙型脑炎、黄热病等，对人类的健康产生极大的危害。蚊媒病流行范围广，传播力强，发病率高，全球每年有上亿人感染疟疾、登革热等蚊媒病，死亡人数过百万。据统计，在世界范围内，每年有成百上千万人感染疟疾，每年有多达一百万的儿童死于疟疾，疟疾的流行给人类造成了巨大灾难并带来难以承受的经济负担[1]。在我国每年也因为蚊子的叮咬而发生多种疾病，蚊媒传染病仍然是威胁人们健康的主要因素之一[2，3]。媒介蚊虫防制是控制蚊媒传染病流行的重要措施。目前，对于登革热、黄热病、西尼罗病毒病等蚊媒病毒传染病尚无特效治疗方法或特异性预防手段，而疟原虫对传统药物抗药性也逐渐凸显，媒介控制在预防其发生和流行方面的重要性就显得更加突出，而寻求有效的控制方法则成为世界医学界面临的重要课题。虽然媒介化学防制由于其突出的效果在蚊媒防制中一直占有统治地位，但是化学农药所造成严重的环境污染，易引起蚊虫药物抗性的产生等弊端日益显现，因此，控制蚊虫的种群数量和密度，从而减少蚊媒传染病的发生率和死亡率则显得意义重大。蚊虫对周围环境的识别，主要依赖于自身的感官系统，如嗅觉系统、味觉系统等。对嗅觉系统的深入研究，有利于我们了解蚊虫的生活习性，同时也有利于我们探讨各种不同的化合物对蚊虫的趋避活性。　　白纹伊蚊要进行生存与繁殖，其行为在很大程度上依赖于嗅觉系统。近年来，国际上在蚊嗅觉结合蛋白领域取得了一些突破性的进展，如在致倦库蚊（Culex quinquefasciatus）、冈比亚按蚊(Anopheles gambiae)和埃及伊蚊(Aedesaegypti)中已经发现的经典OBPs(classic OBPs)分别有33，34和55个[4-6]。尽管如此，由于白纹伊蚊的基因组序列还未公布，限制了对该种蚊属的全方位研究，尤其对白纹伊蚊嗅觉系统的研究，包括对嗅觉结合蛋白和嗅觉受体的了解都知之甚少。　　研究目的:本课题研究拟初步探讨白纹伊蚊嗅觉系统的主要组成成分之一—嗅觉结合蛋白(OBP)，通过实验室研究分析其分子结构特征，掌握其时空特异性表达谱，探讨其在白纹伊蚊嗅觉发生过程中的重要作用，阐明嗅觉结合蛋白对气味分子的识别作用及其调控的分子机制，从而为新型的、环保的、高效的蚊引诱剂或驱避剂的筛选奠定科学的理论基础。　　研究方法:　　 1.对部分白纹伊蚊基因组DNA序列进行测序分析（此部分由陈晓光教授等完成）;2.利用tBLASTn的方法，以埃及伊蚊OBPs的氨基酸序列作为索引，对白纹伊蚊基因组DNA序列进行同源比对比对分析;3.通过RACE法，利用巢式PCR(nest PCR)扩增白纹伊蚊OBP的全长cDNA序列(包括其N端的非编码序列(untranslated region，UTR)与C末端的PolyA终止序列）;4.对所获得的白纹伊蚊OBPs进行一系列的分子生物信息学分析，如预测OBPs的分子量、等电点(isoelectric points，IP)和N端的信号肽(signal peptides，SP)及其长度;5.利用网络数据库分析OBP蛋白的保守结构域(conserved domains database，CDD)及进行氨基酸序列比对，分析它们的分子结构特征;6.利用软件MEGA4.0对白纹伊蚊OBP进行系统进化树分析，分析它们与及埃及伊蚊、冈比亚按蚊、致倦库蚊OBP的亲缘关系;7.通过RT-PCR，分析白纹伊蚊OBP的组织特异性表达谱（触角、喙、下颚须、足和躯干），同时还分析了AalbOBP37和AalbOBP39的时间表达谱和性别特异性表达谱;8.构建原核表达载体pET-22(b)-OBP37和pET-22(b)-OBP39，并进行PCR鉴定和测序分析;9.靶标蛋白AalbOBP37和AalbOBP39的诱导表达、纯化，并通过SDS-PAGE和western blot鉴定;10.通过软件SwissPdb Viewer programme“Deep-View”分析靶标蛋白OBP37和OBP39的3D空间结构;11.蛋白-荧光配体结合分析实验(Fluorescent binding assay)分析靶标蛋白OBP37和OBP39与不同气味分子的亲和力，同时还分析靶标蛋白OBP37和OBP39在不同pH环境中与配体吲哚(indole)的亲和能力;12.通过胸腔注射靶标基因OBP37和OBP39的dsRNA，进行RNA干扰(RNAinterference，RNAi)，并通过荧光定量PCR检测RNAi的效果;13.触角电位（Electroantennogram，EAG）分析白纹伊蚊对不同化合物的识别能力;14.通过RNAi将靶标基因OBP37和OBP39 knockdown

关键词：嗅觉结合蛋白白纹伊蚊蚊媒传染病分子机制气味分子识别能力

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微流控芯片细胞共培养平台的构建及其在肺癌化疗耐药研究中的应用

微流控芯片细胞共培养平台的构建及其在肺癌化疗耐药研究中的应用

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作者：郝媛媛大连医科大学

学位级别：博士

背景：微流控芯片技术（Microfluidics），又称“芯片实验室”（Lab-on-a-chip，LOC）是把生物学、化学、医学实验室的基本功能和操作单元集成到一块几平方厘米的芯片上，将样品制备、反应、分离、检测等基本操作单元浓缩于微米级的通... 详细信息

背景：微流控芯片技术（Microfluidics），又称“芯片实验室”（Lab-on-a-chip，LOC）是把生物学、化学、医学实验室的基本功能和操作单元集成到一块几平方厘米的芯片上，将样品制备、反应、分离、检测等基本操作单元浓缩于微米级的通道中从而实现对样品快速、准确、便捷的检测，并实现自动化的分析方法。与传统平台相比，它具有集成度高、成本低、灵敏度高、试剂消耗少和检测时间短等优点。逐渐发展起来的微流控芯片技术以其微米级的通道和灵活的设计在目前对细胞的研究中占据非常重要的地位。肺癌是危害人类健康的常见恶性肿瘤。尽管目前治疗手段不断进步，但由于肺癌易复发和转移并且对化疗药物产生耐药性，死亡率仍然居高不下，其发病机制仍需深入研究。肿瘤的发病机制十分复杂，除了与肿瘤细胞基因的特异性有关，肿瘤微环境对耐药的影响也引起了广泛的关注。研究发现，肿瘤在缺氧、低糖、酸中毒时可以产生内质网应激反应，使细胞内葡萄糖调节蛋白(GRPs)表达增多，它们可能是肿瘤细胞产生耐药的潜在因素，最具代表性的是GRP78这种内质网分子伴侣。本研究小组曾经采用传统实验平台方法对GRP78蛋白表达与肺癌细胞化疗耐药的相关性进行了分析和探讨，但是GRP78蛋白在间质成纤维细胞中的表达及其与间质细胞化疗药物耐药性分析的报道很少。由于传统平台的方法步骤繁琐，实验耗时、耗材较多，灵敏度欠佳。因此，在本研究中我们采用微流控芯片这一新兴的技术平台，利用微流控芯片的手段对肿瘤细胞进行操作和控制，进行肺癌细胞化疗耐药性研究；通过对从芯片平台收集的肿瘤细胞分泌物进行检测分析，以期得到肿瘤微环境中扮演重要角色的物质的结构和含量信息；通过肺癌细胞与肺成纤维细胞非直接接触共培养，探索细胞间信号传导的研究，观察共培养过程中成纤维细胞GRP78蛋白表达的变化，通过对肺成纤维细胞以化疗药物刺激，进行了间质细胞化疗耐药性研究。本研究内容分为四个部分。研究内容： 1、微流控芯片细胞共培养检测平台的构建。选取PDMS为芯片材料，制作了含有不同形状的上游二维细胞培养池，筛选出最利于细胞生长的芯片通道条件，构建上游二维的细胞培养体系。制作了不同下游培养基灌流模式的三维培养池，筛选出最适合三维细胞培养的生存微环境，构建下游三维细胞培养体系。位于上游二维培养池和下游三维培养池之间设计了一排微柱结构，微柱结构的设计能够有效的拦截上游细胞在二维培养池内，而细胞分泌的细胞因子能够随着培养基的连续供给，像下游区域流动，连续为下游的三维培养池内细胞提供细胞分泌的细胞因子，实现了细胞非直接接触共培养模式。 2、微流控芯片细胞共培养平台中细胞的培养及药物干预研究。分别在不同细胞培养体系中进行了肺癌细胞的二维培养、肺成纤维细胞的三维培养、肺癌细胞/肺成纤维细胞非直接接触共培养，通过显微镜下动态观察不同培养模式下细胞的生长状态。在细胞处于良好生长状态的前提下，分别于不同的培养模式中进行细胞分组及药物干预，以实现不同的平行对照实验条件。 3、微流控芯片细胞共培养平台的细胞耐药性检测及分析。在二维细胞培养体系中，NCI-H460肺癌细胞培养及分组药物干预后，用免疫荧光细胞化学的方法检测细胞GRP78蛋白的表达水平，用Western-blotting方法进一步证明它们的表达水平；Hoechst33342染色方法确定细胞在化疗药物VP-16作用下的生存率。在肺癌细胞、肺成纤维细胞共培养体系中，同样采用免疫荧光细胞化学的方法检测肺成纤维细胞经肺癌细胞诱导后α-SMA和GRP78蛋白的表达，采用Hoechst33342、PI双染色法确定肺成纤维细胞经肺癌细胞诱导后在VP-16药物作用下的生存率。根据耐药相关蛋白的表达及细胞在化疗药物作用下的生存率分析GRP78蛋白的表达在肺癌细胞及肺间质成纤维细胞对VP-16化疗耐药中的作用。 4、基于微流控检测平台的细胞因子筛选及验证。在二维细胞培养体系中，NCI-H460肺癌细胞贴壁培养6小时后，在培养基出口处于不同的时间点收集培养基的上清液，应用ELISA的方法检测上清液中细胞因子TGF-β1的分泌水平。在三维细胞培养体系中，HFL1肺成纤维细胞培养及分组药物干预后，采用免疫荧光细胞化学的方法检测肺成纤维细胞中α-SMA和GRP78蛋白的表达，明确细胞因子TGF-β1在肺成纤维细胞转化及耐药中的作用。结果： 1、微流控芯片细胞共培养检测平台的构建。在芯片上设计了两组平行的培养单元，可以实现平行对照实验条件。根据二维细胞培养池形状条件及三维细胞灌注模式的筛选结果，构建了1)适合NCI-H460肺癌细胞生长的圆形细胞培养池。2)微柱的设计，能够有效的拦截肺癌细胞在圆形培养池区域，微

关键词：微流控芯片肺癌癌相关成纤维细胞细胞共培养化疗耐药 GRP78

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慢病毒载体携带自杀基因Dm-dNK(果蝇脱氧核糖核苷酸激酶)对肿瘤细胞杀伤作用的研究

慢病毒载体携带自杀基因Dm-dNK(果蝇脱氧核糖核苷酸激酶)对肿瘤细...

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作者：张念劬中国医科大学

学位级别：博士

目的：　　尽管肿瘤的治疗策略在不断改进，传统的肿瘤治疗方法，如外科切除、放射治疗和化学药物治疗并不能完全地治愈肿瘤。随着生物学技术的发展，基因技术开始应用于肿瘤治疗，其中对自杀基因疗法应用的研究较为广泛。自杀基因又... 详细信息

目的：　　尽管肿瘤的治疗策略在不断改进，传统的肿瘤治疗方法，如外科切除、放射治疗和化学药物治疗并不能完全地治愈肿瘤。随着生物学技术的发展，基因技术开始应用于肿瘤治疗，其中对自杀基因疗法应用的研究较为广泛。自杀基因又称药物敏感基因(drug sensitivity gene)，它可以在体内将无毒性的前体药物转化为有毒性药物，从而达到杀死肿瘤细胞的目的。由于这种方法常以病毒作为载体进行基因转导，故称为病毒介导的酶解药物前体治疗(VDEPT)。　　与哺乳动物的四种脱氧核苷酸激酶不同的是，黑腹果蝇只有一种脱氧核苷酸激酶，Dm-dNK(deoxyribonucleoside kinase of Drosophila melanogaster)。它具有广泛的底物特异性，能够催化自然界所有嘌呤、嘧啶脱氧核糖核酸的磷酸化反应，并且这种激酶还表现出惊人的催化效率，要高出我们所曾了解的核酸激酶效率的10-100倍。研究者们研究显示Dm-dNK可以在人类癌细胞中表达并存留其活性，如在骨肉瘤中，表达Dm-dNK的肿瘤细胞还显示出它对多种化疗药物敏感性的增强。Dm-dN通过磷酸化核苷酸类似物，使其从一磷酸化形式随后被细胞内的其他酶类二三步磷酸化，三磷酸化核苷酸类似物通过DNA复制的终止而引起细胞的凋亡。另有研究显示，基因突变可以提高自杀基因Dm-dNK的酶活性，从而更有效地杀伤肿瘤细胞。　　慢病毒载体是近来受到广泛注意的一种逆转录病毒载体，由于具有可感染分裂细胞和非分裂细胞、目的基因整合至靶细胞基因组长期表达等优点，适于基因治疗，因此有望成为理想的基因转移载体。　　我们构建了慢病毒载体携带Dm-dNK，进一步我们在体外，体内试验中检测Dm-dNK的抗肿瘤特性。　　研究资料与方法：　　一、细胞培养　　肿瘤细胞系购买于上海细胞库，正常细胞购买ATCC.细胞使用RPM1640培养基或高糖DMEM培养。培养基中含有10％的血清，双抗。培养环境为37℃，5％CO2.　　二、慢病毒载体的构建及转染　　根据Dm-dNK的cDNA，在其两端设计出带EcoRI和BamH的酶切位点的引物，利用聚合酶链式反应(PCR)将Dm-dNK克隆到慢病毒载体PGC-FU中，成为PGC-FU-dNK。另外，将绿色荧光蛋白基因(GFP)克隆到慢病毒载体PGC-FU中，成为PGC-FU-GFP，使得转染率能够通过荧光来观察。用Lipofectamine2000将PGC-FU-dNK质粒与两种包装质粒Phelper1.0和Phelper2.0共转染至293细胞，9-14天出现病毒空斑，应用DNA提取试剂盒提取慢病毒DNA，通过PCR验证后命名为Lenti-CMV-dNK，即CMV调控的带dNK基因的慢病毒。Lenti-GFP用于比较不同细胞系间感染率的区别。　　三、Dm-dNK基因的表达及酶活性的检测　　用TRIZOL方法提取纯化Bcap37，SGC-7901和WI-38，感染慢病毒Lenti-CMV-dNK后的细胞系Bcap37，SGC-7901和WI-38，使用反转录PCR试剂盒及Western blotting对目的基因的表达进行检测，　　酶活性测定通过提取细胞的蛋白，用放射性[3H]标记作为底物的核苷酸药物，混合液在Whatman DE-81滤纸上反应不同时间后经液闪测量仪测定放射活性。　　四、Dm-dNK基因与核苷类似物联合对癌细胞的杀伤作用　　稳定转染的细胞Bcap37，SGC-7901和WI-38及未转染的对照细胞铺板，加入不同浓度的dFdC共培养5天后采用MTT法检测细胞增殖情况。　　癌细胞系Bcap37，SGC-7901以及正常细胞系WI-38铺板，培养基在第二天分别替换为病毒溶液Lenti-CMV-dNK.感染3后，加入不同浓度的dFdC，浓度为0，0.001，0.01，0.1，1，和10μM，共培养3天后采用MTT法检测细胞增殖情况。　　采用Annexin ***双染凋亡检测试剂盒观察治疗后细胞凋亡情况及凋亡比例。各种细胞铺6孔板加入核苷类药物处理，经Annexin ***和碘化丙锭双重染色后用流式细胞仪分析凋亡比例。　　五、Dm-dNK基因与核苷类似物联合对裸鼠移植瘤的抑制作用　　采用100-150 mm3裸鼠皮下种植肿瘤模型，6-7周龄的BALB/C裸鼠皮下注射转染Lenti-CMV-dNK的Bcap37和对照Bcap37细胞.所有治疗组动物在成瘤注射6天后腹腔给药dFdC治疗一个月。对照组动物成瘤注射6天后腹腔给PBS。治疗条件满足后，裸鼠处死剥离瘤体根据公式ab2/2测量瘤体积（a为长径）。　　结果：　　 Dm-dNK经慢病毒转染至肿瘤细胞后呈高水平表达，并保持其激酶活性。

关键词：果蝇脱氧核糖核苷酸激酶慢病毒载体自杀基因抗肿瘤特性肿瘤细胞杀伤作用

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Diversin通过JNK促进非小细胞肺癌的增殖和侵袭能力

Diversin通过JNK促进非小细胞肺癌的增殖和侵袭能力

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作者：栾岚中国医科大学

学位级别：博士

前言：　　Diversin也被称作锚蛋白重复序列包含蛋白6(ANKRD6)，它是果蝇属Diego蛋白在哺乳动物中的同源异构体，同时参与经典Wnt/beta-catenin通路和非经典Wnt/JNK通路（即PCP通路）。而Diego则是PCP通路的核心蛋白，它与Fz-Dsh信号相... 详细信息

前言：　　Diversin也被称作锚蛋白重复序列包含蛋白6(ANKRD6)，它是果蝇属Diego蛋白在哺乳动物中的同源异构体，同时参与经典Wnt/beta-catenin通路和非经典Wnt/JNK通路（即PCP通路）。而Diego则是PCP通路的核心蛋白，它与Fz-Dsh信号相关。研究发现在新生小鼠和成鼠脑内，Diversin表达于室下区和海马区的神经母细胞和成熟神经元，并证实Diversin可以促进其增殖活性。在胚胎发育过程中Diversin通过非经典Wnt/JNK通路调节斑马鱼胚胎的原肠胚运动以及控制心脏前体的融合。Diversin作为一个分子开关，可以抑制经典的Wnt/β-catenin通路，促进非经典的Wnt/JNK通路。另外，Diversin含有一些核定位信号，转移入核后可以和转录因子AF9相互作用，而AF9能够显著增加Diversin引起的JNK活性增加。Wnt和PCP信号成员可以调控Diversin的亚细胞定位从而影响其在通路中的作用。Diversin蛋白位于细胞的中心小体，这种独特的细胞器以及衍生的纤毛在许多信号通路，包括Hedgehog, Wnt，PDGF和FGF中扮演了重要的角色。　　目前Diversin在人类肿瘤中的表达情况及意义尚不清楚，其是否具有调控肿瘤细胞增殖或侵袭的能力及分子机制等都有待于进一步探讨。在本研究中，我们用免疫组化和western blot等方法检测了Diversin蛋白在肺癌组织和细胞系中的表达，通过双向调控Diversin的表达，分别检测Diversin对经典和非经典Wnt通路中重要蛋白的影响，初步探讨了Diversin对肺癌细胞增殖侵袭的影响和可能的作用机制。　　材料与方法：　　一、组织标本与患者资料　　167例非小细胞肺癌(NSCLC)组织和38例癌旁正常肺组织均来自于中国医科大学附属第一医院病理科2004-2006年存档蜡块。在167例肺癌病例中具有完整随访资料的74例。随访是从手术之日起到随访结束日期或由于复发、转移而死亡之日止。患者（106例男性，61例女性）年龄29-81岁，中位年龄60岁。根据第七版国际抗癌联盟肺癌TNM分期标准，Ⅰ期56例，Ⅱ期32例，Ⅲ期74例，Ⅳ期5例。根据WHO2004肺癌组织学分类标准，腺癌94例，鳞癌73例。所有患者术前均未接受化疗或放射治疗。为用于蛋白质分析，另收集20例新鲜的肺癌组织及相对应的癌旁正常的肺组织，保存在-70℃冰箱内。　　二、免疫组织化学染色　　手术切除的组织均经过10％中性福尔马林固定后，石蜡包埋，制成4μm切片，采用SP免疫组化法进行染色。一抗使用鼠源性的Diversin，以1∶100(Anti-Diversin购于Santa Cruz Biotechnology， USA)4℃孵育过夜。以PBS代替一抗作为空白对照。生物素标记的二抗IgG(Fuzhou，China)37℃孵育20min，DAB显色。结果判定:每张切片随机选择5个视野，每个视野计数100个瘤细胞。根据计数细胞着色的百分比，将Diversin的表达划分为5个等级:无着色为0分，1％-25％为1分，26％-50％为2分，51％-75％为3分，76％以上为4分。再根据细胞着色的强度，将Diversin的表达划分3个等级:无着色为0分，浅黄色颗粒为1分，深黄色或者黄褐色颗粒为2分。将二者相乘，所得乘积即为该切片的最终得分。Diversin阳性表达定位于胞浆和胞膜。根据38例正常的支气管上皮染色后，其得分均为＜3分，于是实验中将得分＜3分的计为阴性表达（正常表达），而得分≥3分的计为阳性表达（高表达）。　　三、细胞培养　　A549，H1299 and H157细胞系购于美国标准细胞培养所(Manassas,VA，USA);SPC-A-1、LTEP-A-2和正常支气管上皮细胞系HBE购于上海细胞库（Shanghai，China）;PG-BE1和PG-LH7由北医郑杰教授馈赠。细胞培养基采用RPMI1640(Invitrogen，Carlsbad，CA，USA)，其中含10％热灭活新鲜小牛血清(Invitrogen)，用25cm培养瓶在5％CO2培养箱中培养，每两天用0.25％胰酶(Invitrogen)消化传代。　　四、质粒构建与转染　　pcDNA3.1-HA-Diversin质粒由Walter Birchmeier教授(Max Delbrueck-Centerfor Molecular Medicine，Berlin，Germany)惠赠。 Diversin siRNA由上海吉玛合成，转染试剂lipo2000购于Invitrogen(Carlsbad，CA，USA).siRNA干扰序列如下:ANKRD6-HOMO-2171:5'GAGGCACUCAAACUAAG

关键词：非小细胞肺癌锚蛋白重复序列包含蛋白6 细胞增殖分子机制

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RNF146在非小细胞肺癌中的表达及其调节肺癌增殖侵袭机制研究

RNF146在非小细胞肺癌中的表达及其调节肺癌增殖侵袭机制研究

引用

作者：高英中国医科大学

学位级别：博士

目的：　　肺癌是最常见的恶性肿瘤之一，肺癌的发病率和死亡率已跃居各类恶性肿瘤的首位，而非小细胞肺癌(NSCLC)约占肺癌总数的75-80％。目前肺癌的治疗效果及肺癌患者的长期生存率仍不尽人意。肺癌发展进程中多种因子的激活、抑制、... 详细信息

目的：　　肺癌是最常见的恶性肿瘤之一，肺癌的发病率和死亡率已跃居各类恶性肿瘤的首位，而非小细胞肺癌(NSCLC)约占肺癌总数的75-80％。目前肺癌的治疗效果及肺癌患者的长期生存率仍不尽人意。肺癌发展进程中多种因子的激活、抑制、相互协同或拮抗均对肺癌的发生和转移产生影响。因此，寻找肺癌发生、转移过程中的有用的生物学标记物，揭示肺癌新的治疗靶点是目前肿瘤分子生物学研究的热点。　　E3泛素连接酶能够调节多种细胞功能，如细胞增殖、细胞周期阻滞和细胞凋亡等。一些E3泛素连接酶及其相关的泛素网的失调通常与人类疾病有关，特别是肿瘤和神经退行性疾病。E3泛素连接酶可以是癌基因，也可以是抑癌基因，主要取决于它们所降解的靶蛋白是抑癌蛋白还是促癌蛋白。许多含有RING-finger结构域的蛋白都拥有泛素连接酶活性，其中有些参与了肿瘤的生成和转移。　　RNF146(RING finger protein146)基因定位于人类染色体6q22，33上。其蛋白含有WWE和N末端RING finger结构域，被鉴定是一种E3泛素连接酶。研究发现，RNF146通过与PAR结合而抑制Parthanators，具有神经保护作用。RNF146还能够促进DNA修复，防止DNA损伤性药物或γ射线诱导的细胞死亡。在细胞损伤之后，RNF146能转移到核内，促进参与DNA损伤修复的各种核蛋白的泛素化和降解。更重要的是，RNF146能够作为PAR核糖基化调控下的E3泛素连接酶，调节tankyrase依赖的axin的降解，从而正向调节Wnt信号通路。　　Wnt信号转导通路与肺癌的转移、扩散、复发密切相关，是在肺癌细胞和已扩散肺癌细胞中保持高活性的通路。Wnt信号转导通路激活后可增加肺癌细胞转移和增殖的能力。Wnt通路可以通过多种机制异常活化，其主要功能是抑制磷酸化调控下的β-catenin的蛋白水解。从APC/Axin/GSK-3β/β-catenin降解复合体中被释放的β-catenin能够进入细胞核，激活Wnt的靶基因。在这一过程中Axin作为一种构架蛋白参与β-catenin降解复合体的形成，其稳定性至关重要。Tankyrase(PARP5)能够催化PAR转移至Axin的残基上，导致Axin的PAR核糖基化。RNF146能够通过自身的PAR结合域与PAR核糖基化的Axin结合，然后发挥其E3连接酶的作用，降解Axin，从而引起β-catenin降解复合体的解散，胞质内β-catenin聚集，促进Wnt信号通路。之前的研究已经证明Axin与肺癌的侵袭和增殖能力密切相关，因此我们推测，RNF146可能通过调节Axin的稳定性而影响肺癌中β-catenin的表达与定位，从而对肺癌细胞的增殖、侵袭和转移产生影响。　　为了证实我们的推测，我们首先采用RT-PCR、Western-Blot和免疫组织化学方法检测手术切除的肺癌和癌旁肺组织中RNF146的表达水平及其与临床病理因素和肺癌预后的关系、并分析RNF146与Axin和β-catenin表达的相关性。然后在人非小细胞肺癌细胞系中转染RNF146过表达或者干扰质粒，通过上调或干扰RNF146检测肺癌细胞中Axin和β-catenin的变化，以及上调和干扰RNF146后对肺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响，并探讨其可能的分子机制。　　方法：　　1、组织来源　　133例NSCLC肺癌组织和40例癌旁肺组织石蜡标本来自2005年1月至2008年12月在中国医科大学附属第四医院行外科手术切除的标本。其中鳞癌62例，腺癌71例，有淋巴结转移60例，无淋巴结转移73例。Ⅰ期69例，Ⅱ-Ⅲ期64例。20例新鲜肺癌组织和癌旁肺组织来自2010-2011年原发性肺癌患者外科手术切除标本。癌旁组织距离癌巢达5cm以上。一部分标本在切除后5分钟内取材并迅速置液氮中速冻，然后置于-80℃深冻冰箱保存备用。另一部分标本离体后用中性福尔马林固定。　　2、支气管上皮、肺鳞癌和肺腺癌细胞系　　正常支气管上皮细胞系HBE，腺癌细胞系A549、H1299购自美国标准菌种收藏所。肺鳞癌细胞系LK2、LH7和腺癌细胞系LTE、SPC购自中国科学院上海细胞库。　　3、免疫组织化学染色　　将石蜡组织切成4μm厚切片，脱蜡，脱水，在PH6柠檬酸盐修复液中高温高压修复3分钟，3％H2O2孵育20分钟。抗RNF146多克隆抗体、抗Axin和抗β-catenin多克隆抗体4℃孵育过夜。采用EnVision试剂盒检测抗体结合。以PBS代替一抗作为阴性对照。DAB显色，苏木素复染细胞核，封片。　　4、质粒构建　　pEX4-hRNF146和对照pEX4质粒，pGPHI-shhRNF146和对照质粒空载体pGPHI shNC均由GenePharma公司构建。si Axin、siβ-cateni

关键词： RNF146基因非小细胞肺癌细胞增殖细胞侵袭

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p120ctn-1和3亚型通过不同的机制促进肺癌细胞增殖

p120ctn-1和3亚型通过不同的机制促进肺癌细胞增殖

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作者：姜贵洋中国医科大学

学位级别：博士

在肿瘤细胞中，经典Wnt信号通路的关键因子β-catenin在细胞质中发生蓄积，进而转移入细胞核内与转录因子Lef/TCF(Lef, lymphoid enhancer factor;TCF，T-cell factor protein)结合形成转录复合体，激活包括cyclin D1等一系列Wnt下游靶... 详细信息

在肿瘤细胞中，经典Wnt信号通路的关键因子β-catenin在细胞质中发生蓄积，进而转移入细胞核内与转录因子Lef/TCF(Lef, lymphoid enhancer factor;TCF，T-cell factor protein)结合形成转录复合体，激活包括cyclin D1等一系列Wnt下游靶基因的转录。我们先前已经报道了p120ctn-1亚型能够上调β-catenin的表达，而p120ctn-3却不能。但有趣的是，p120ctn-1和3两种亚型均可以通过调节cycinD1进而影响细胞增殖和细胞周期的进程。有理由推测p120ctn-1是通过调节β-catenin而上调cyclin D1进而影响细胞增殖和细胞周期的。然而到目前为止，p120ctn-3亚型调节细胞增殖和周期的潜在分子机制仍不清楚。　　我们先前的研究已经证实，在肺癌组织和肺癌细胞系中核BTB/POZ-ZF转录抑制因子Kaiso能够与p120ctn结合。尽管从理论上讲，不同p120ctn亚型均有与Kaiso结合形成复合体的能力，但每一种p120ctn亚型与Kaiso的粘附能力很可能是不同的。有意思的是，cyclin D1的启动子区恰好含有KBS序列(Kaiso-bindingsites)，Kaiso可以识别该序列并与之结合，发挥转录抑制因子的功能。因此，cyclinD1很可能是Kaiso潜在的下游靶基因之一。　　由于Kaiso与p120ctn的结合部位—锌指结构恰恰也是Kaiso与cyclin D1启动子区KBS序列的结合部位。我们设想:p120ctn-3很可能是通过与Kaiso的结合，占据了Kaiso与KBS结合的位点，解除了Kaiso对cyclinD1的转录抑制作用，进而上调了cyclinE的表达，而影响细胞周期。为此，我们拟通过干扰p120ctn后分别恢复p120ctn-1A和3A，以及过表达和敲除Kaiso和β-catenin，探讨p120ctn-1和3亚型调控肺癌细胞增殖和周期的潜在的不同机制。并构建两种p120ctn-1和3亚型结构差异的氨基端剪切体质粒，以明确p120ctn-1和3亚型功能差异的具体分子机制。　　材料与方法　　一、细胞培养　　人类肺腺癌细胞系SPC和A549购买于美国ATCC(Manassas，VA，USA)。分别在含有10％胎牛血清(GBICO Inc.，NY, USA)的RPMI1640培养基(GBICO Inc.，NY,USA)和含有10％胎牛血清的DMEM培养基(GBICO Inc.，NY, USA)中培养(37℃，5％ CO2)。　　二、质粒构建及转染　　 p120ctn-siRNA(由上海吉凯基因化学技术有限公司构建，GeneBank＃:001331)，p120ctn-1A和p120ctn-3A(Reynold教授惠赠)，核定位质粒NLS-p120ctn-1和NLS-p120ctn-3（由大连宝生物公司构建），两个p120ctn-1氨基端剪切体质粒M1(氨基端1-55氨基酸残基缺失)和M2(氨基端56-101氨基酸残基缺失)由大连宝生物公司构建，Kaiso(Juliet ***教授惠赠)、siRNA-Kaiso（干扰序列由美国冷泉港实验室CSHL权威数据库提供，由大连宝生物公司合成）和siRNA-β-catenin、siRNA-cyclin D1和siRNA-cyclin E(Santa Cruz Biotechnology Inc,CA,USA)，以转染空质粒和未转染的细胞为对照。转染用试剂Lipofectamine2000(Invitrogen，CA,USA)或Attractene Transfection Reagent(QIAGEN GmbH,Hilden,Germany)，具体操作步骤按说明书进行。取各转染组细胞及未转染细胞，进行各项检测。　　三、四甲基偶氮唑盐(tetrazolium，MTT)法检测细胞增殖　　接种24小时后加入各种处理因素。处理后第24、48、72、96小时分别加入MTT(5mg/ml)20μl，继续孵育4小时后，每孔加入150μlDMSO溶解结晶，选择波长550nm在酶联免疫(ELISA)检测仪上测定各孔吸光度。取3次实验的平均值绘制细胞生长曲线。　　四、流式细胞仪检测细胞周期　　收集对数生长期细胞制成1×107个/ml细胞悬液。取1ml细胞悬液于75％冷乙醇中4℃固定过夜、离心后制成500μl的细胞悬液，加碘化丙啶染液(Sigma)于4℃避光孵育45分钟后上机检测(BD Biosciences)，ModFitLT3.0软件分析细胞周期。　　五、RT-PCR　　 Trizol Reagent(Invitrogen，CA，USA)提

关键词：非小细胞肺癌细胞增殖 p120ctn-3亚型分子机制生物学功能

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Mig-6在非小细胞肺癌增殖、侵袭及凋亡中的作用研究

Mig-6在非小细胞肺癌增殖、侵袭及凋亡中的作用研究

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作者：李紫璇中国医科大学

学位级别：博士

肺癌是当今世界上对人类健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一，也是临床治疗疗效最差的恶性肿瘤之一。2012年美国癌症死因统计显示肺癌的死亡率在过去的30年内上升了200％，死亡率居恶性肿瘤之首。我国肺癌发病率近年来持续上升，2011年... 详细信息

肺癌是当今世界上对人类健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一，也是临床治疗疗效最差的恶性肿瘤之一。2012年美国癌症死因统计显示肺癌的死亡率在过去的30年内上升了200％，死亡率居恶性肿瘤之首。我国肺癌发病率近年来持续上升，2011年卫生部统计结果显示，肺癌位居我国癌症死因的第一位。肺癌的防治是全世界共同面对的一项难题。大约有85％的肺癌为非小细胞肺癌(NSCLC)，主要分为两种组织学类型:腺癌和鳞癌。　　关于肺癌的病理学研究很多，目的是发现新的治疗靶点。近年来有EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKIs)在含有EGFR突变的肺癌中使用，并取得了很好的治疗效果。　　 Mig-6又称做RALT或Errfil最早是在对细胞周期的研究中发现的。Mig-6的表达在许多生理和病理状态下被一些因子如激素、生长因子等强烈诱导。它是EGFR通路的负向调控因子，能够通过负反馈抑制EGFR信号的激活并影响它的稳定性。它在人体分布广泛，与多种肿瘤的发生有密切关系。　　但是，Mig-6在非小细胞肺癌中的表达及其与临床病理因素的关系并未见文献报道，Mig-6的变化影响肺癌细胞生物学功能及其作用机制也未有研究。为了明确以上问题，我们检测了NSCLC中Mig-6的表达情况，分析了Mig-6表达与临床病理因素的关系，通过干扰肺癌细胞系H1299和BE1中Mig-6基因的表达，探讨了Mig-6对肺癌细胞侵袭、增殖能力的影响及其相关机制。　　材料和方法：　　 1、患者及标本　　这项研究在中国医科大学伦理委员会的批准下进行。来自2008-20101年在中国医科大学附属第一医院手术的病人，组织经10％中性福尔马林固定，石蜡包埋。这些患者在手术前均未接受放化疗。组织学诊断和分化程度根据WHO分类标准进行判定，按国际抗癌联盟的肺癌P-TNM分期标准.　　 2、免疫组织化学染色　　将石蜡包埋的肺癌组织块切成4μm厚切片，癌旁的正常支气管上皮作为阴性对照。使用即用型非生物素免疫组化EliVisionTMplus检测试剂盒.结果判定:两位病理医生对切片分别作出判定，每张片子随机选五个高倍镜视野。　　 3、细胞培养　　肺癌细胞系H1299，A549，H157购自ATCC，BE1来自郑洁教授的惠赠。细胞使用RPMI1640培养基含10％的灭活小牛血清.37℃、5％CO2的条件下培养，每两天换一次液，并用0.25％的胰酶进行传代。　　 4、EGFR突变分析　　 75例石蜡包埋的肺癌标本用于EGFR突变检测，原发肺癌组织均来自2009-2011年在中国医科大学附属第一医院手术的病人.　　 5、小干扰RNA实验　　转染前24h将细胞按50％密度接种于24孔板，Mig-6的特异性siRNA及阴阳性对照均购自上海吉玛公司，采用DharmaFECT1转染试剂进行转染，转然后48h使用PCR和Western blot检测干扰效率。　　 6、real-time PCR(SYBR Green method)　　对于新鲜培养的细胞或新鲜肺癌组织采用RNeasy plus Mini kit提取总RNA.使用SYBR Green PCR master mix进行定量real-time PCR扩增，总体积20μl。使用7900HT实时定量PCR仪。　　 7、Westem blot法检测蛋白表达　　收集细胞并加入裂解液充分裂解，提取上清为总蛋白。凝胶电泳、转印、室温封闭抗体4℃孵育过夜。二抗室温孵育2h显色，结果经自动电泳凝胶成像分析仪采集进行灰度测定。　　 8、细胞增殖能力实验　　使用Cell Counting Kit-8(R) solution(Dojindo，Gaithersburg，MD)检测细胞的增殖能力.　　 9、细胞侵袭能力检测　　使用24孔Transwell小室，孔径8μm(Costar)进行细胞侵袭能力检测随机选取10个高倍镜视野取平均值。每个实验组重复三次实验。　　 10、数据分析　　采用SPSS16.0统计软件分析。　　结果：　　 1、Mig-6蛋白表达的临床意义　　我们用免疫组化的方法检测了150例非小细胞肺癌及其癌旁正常组织中Mig-6和EGFR蛋白表达情况。EGFR主要在细胞膜上表达，Mig-6主要在细胞浆和细胞核中表达。Mig-6的表达通过分析其在胞浆表达、胞膜的表达以及联合分析胞浆和胞膜的表达情况。　　在正常支气管上皮中Mig-6表现出胞浆和胞核的强阳性表达而在肿瘤细胞中Mig-6的蛋白表达下调。我们又分析了Mig-6的表达和临床病理因素之间的关系发现，Mig-6的下调与患者的年龄(p=1.000)、性别(p=0.324)和淋巴结转移(p=0.323)无显著关系。我们发现Mig-6的表达和TNM分期(p=

关键词：丝裂原诱导基因6 非小细胞肺癌信号转导细胞侵袭增殖能力临床病理

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