检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：张凯丽河北医科大学

学位级别：博士

乳腺癌(breastcancer)是女性最常见的恶性肿瘤之一，全世界每年有120万妇女发生乳腺癌。北美和欧洲等西方国家是乳腺癌高发区，据统计，美国妇女平均每9人中将有1人最终患乳腺癌。从20世纪70年代起，原为乳腺癌低发区的亚洲国家发病率... 详细信息

乳腺癌(breastcancer)是女性最常见的恶性肿瘤之一，全世界每年有120万妇女发生乳腺癌。北美和欧洲等西方国家是乳腺癌高发区，据统计，美国妇女平均每9人中将有1人最终患乳腺癌。从20世纪70年代起，原为乳腺癌低发区的亚洲国家发病率逐年上升，在我国，特别是在北京、上海等发达城区己成为危害妇女健康的主要恶性肿瘤。随着分子生物学的飞速发展及各种高新技术的不断涌现，乳腺癌基础研究取得了长足的进步。乳腺癌的早期发现是提高乳腺癌生存率和降低转移复发率的重要手段，而乳腺癌的治疗也从单一的手术治疗发展为结合手术、化疗、放疗、内分泌治疗及免疫治疗、基因治疗的综合治疗体系，进一步提高了乳腺癌的治愈率和生存率。在乳腺癌的基础研究新进展中，筛选特异性肿瘤标志物成为重要的一个方面。筛选特异性肿瘤标志(tumormarker)可用于肿瘤的早期发现与疗效评价，并且可以针对特异性肿瘤标志物研制特异性抗体，携带化学药物、生物毒素、放射性核素示踪迹等“生物导弹”定向杀伤肿瘤细胞，还可以研制免疫瘤苗开展对于肿瘤的生物治疗。近年研究发现的粘蛋白家族成为之一，MUC1在乳腺癌组织中的异常表达和糖基化，为免疫学诊断与生物治疗提供了新的靶点。粘蛋白1(MUC1)又称多形上皮粘蛋白(polymorphicepithelialmucin，PEM)，是一种主要分布于腺上皮细胞的跨膜糖蛋白，最先由Shimiza于1982年从人的乳汁中分离得到。2000年6月，人类白细胞分化抗原工作组将MUC1归类于白细胞分化抗原(clusterofdifferentiation，CD)，命名为CD227。研究证明,MUC1在肿瘤细胞上的表达与正常细胞是不同的，主要体现在以下几个方面：(1)MUC1在肿瘤细胞表面的表达量较正常细胞显著升高;(2)MUC1在正常细胞上呈极性分布，集中位于腺上皮细胞的腺腔面;而在肿瘤细胞上MUC1却呈失极性，均匀地分布于细胞的表面;(3)MUC1在肿瘤细胞与正常细胞中的糖基化有不同的格局，使得MUC1核心序列表位暴露，刺激机体产生免疫应答。由于MUC1在肿瘤细胞上表达的量和质都发生了变化，因此MUC1成为一种重要的肿瘤标志物，在乳腺癌诊断和治疗中具有潜在的临床应用价值。由于MUC1作为一个肿瘤相关抗原能够有效的诱导机体产生肿瘤免疫应答，因此NUC1一直是研究抗肿瘤免疫的一个热门话题。继上世纪80年代成功制备了针对MUC1单克隆抗体后，以单克隆抗体为载体，对乳腺癌的抗体治疗研究方兴未艾。乳腺癌的特异性主动免疫治疗的一个重要的突破性进展是单克隆抗体herceptin的研究和应用。而另一个进展是双特异性抗体介导效应细胞的抗肿瘤作用的研究，已成为近年来肿瘤新型免疫治疗的主要研究方向之一。本研究分以下三个部分：第一部分：粘蛋白MUC1在乳腺癌诊断、预后及侵袭转移中的作用机制研究目的：a.检测粘蛋白MUC1在乳腺癌组织及乳腺良性组织中的表达，探讨MUC1作为一种新型乳腺癌肿瘤标志物的可能性;b.检测粘蛋白MUC1在乳腺癌组织中的表达，并与乳腺癌组织中ER、PR、c-erbB2及乳腺癌患者临床病理学指标及预后指标进行相关性分析，探讨MUC1作为乳腺癌临床预后指标的意义;c.检测粘蛋白MUC1在乳腺癌组织中的表达，并同时检测黏附分子E-cadherin的表达，探讨MUC1在乳腺癌侵袭、转移中的作用机制。方法：应用免疫组织化学SP法检测5例乳腺纤维腺瘤标本、5例正常乳腺标本和40例手术切除的乳腺癌标本原发病灶中MUC1、ER、PR、C-erbB-2和E-cadherin的表达情况。依据乳腺癌的侵袭性、临床分期、癌细胞分化程度、腋窝淋巴结转移情况、肿瘤直径、患者的月经状态对40例乳腺癌组织标本进行分组，通过光学显微镜观察免疫组织化学染色情况，并应用统计学方法对结果进行分析。结果：a.乳腺良性病变组织中可见MUC1阳性表达，阳性表达主要在腺腔上皮游离缘;而乳腺癌组织中的MUC1高表达，阳性表达为深棕色及棕黄色颗粒，主要表达位于胞质内。正常乳腺上皮细胞可见MUC1弱阳性表达。MUC1在乳腺癌组织的高表达与乳腺良性病变组织及乳腺正常组织的低表达之间存在显著性差异(p＜0.05);b.粘蛋白MUC1在乳腺癌的表达与乳腺癌的类型、分期、肿瘤大小、月经状态均无显著相关性(p＞0.05);与组织学分级、有无淋巴结转移及ER、PR有相关性(p＜0.05);MUC1表达与c-erbB2表达有相关性且MUC1在乳腺癌组织中的表达率明显高于c-erbB2表达(p＜0.05);c.乳腺癌原发肿瘤组织中E-cadherin表达缺失率与正常乳腺组织之间的差异非常显著(P＜0.001)。E-cadherin表达强度在乳腺癌Ⅰ～

关键词：乳腺癌粘蛋白MUC1 微转移双特异性抗体免疫治疗免疫诊断

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人多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAc-T2):RNA干扰载体的构建及其功能的初步研究

人多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAc-T2):RNA干扰载体的构...

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华东六省一市生物化学与分子生物学学会2006年学术交流会

作者：朱燕仇灏刘可人吴士良苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室

目的:人类多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶(ppGalNAcT)催化O-聚糖合成的第一步反应,将 UDP-GalNAc中的GalNAc基转移至蛋白多肽链上特定序列中的Set或Thr,从而合成GalNAcα-O- Ser／Thr,初步研究提示该酶可能与肿瘤的生长和转移有关。ppGalN... 详细信息

目的:人类多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶(ppGalNAcT)催化O-聚糖合成的第一步反应,将 UDP-GalNAc中的GalNAc基转移至蛋白多肽链上特定序列中的Set或Thr,从而合成GalNAcα-O- Ser／Thr,初步研究提示该酶可能与肿瘤的生长和转移有关。ppGalNAc-T2是该家族中组织分布及底物谱较广的成员,作为O-糖链合成的起始酶,很有可能是O-糖链合成的限速酶,有着重要的生物学意义。本文旨在探讨ppGalNAc-T2在肿瘤浸润转移及增殖中的作用。方法:RNA干扰技术是2001年首次应用于哺乳动物细胞的新的分子生物学技术,是研究转录后调控的有效工具,可用于功能基因组研究以及基因治疗等临床应用。遵循RNA干扰目标序列的选取原则,利用互联网资源,对ppGalNAc-T2基因 mRNA序列设计五条可能的小干扰RNA(siRNA),并且由PCR方法扩增得到带有RNA pol Ⅱ启动子的siRNA内源表达系统,脂质体介导转染至人胃癌细胞株SOC7901,运用RT-PCR方法检测转染后各细胞株ppGalNAc-T2 mRNA水平的表达变化,筛选出对ppGalNAc-T2 mRNA水平表达抑制效率最高的siRNA;化学合成带荧光标记的该段RNA Oligo,转染细胞并用荧光显微镜观察转染情况,RTPCR 方法检测转染后细胞ppGalNAc-T2的表达,进一步鉴定该siRNA对ppGalNAc-T2的抑制作用;将这段siRNA插入到RNA干扰真核表达载体pSilenCircle中,脂质体介导转染人胃癌细胞株 SGC7901,经G418筛选后,利用RT-PCR和Western blot方法检测MMP2、MMP14、TGF-β1等肿瘤浸润转移相关基因的表达变化,通过MTT法检测对细胞增殖的影响。结果:筛选得到能高效引起ppGalNAc -T2基因表达沉默的siRNA,成功构建了ppGalNAc-T2的RNA干扰真核表达载体并转染入细胞,得到稳定的ppGalNAc-T2基因敲减细胞株。转染了重组载体后的细胞,随着ppGalNAc-T2表达的下调,MMP2、MMP14、TGF-β1等基因在mRNA和蛋白质水平的表达不同程度地增高了,细胞增殖水平则较原细胞株有所降低。结论:稳定的ppGalNAc-T2基因敲减细胞株为今后进一步深入研究PPGalNAc -T2的生物学功能开辟了新道路。同时由于TGF-β1、MMP2、MMP14都是与肿瘤的浸润转移、增殖相关的指标,因此推测ppGalNAc-T2与肿瘤的浸润转移、增殖密切相关。

关键词： RNA 肿瘤浸润转移半乳糖转移酶 ppGalNAc-T2 乙酰氨基干扰载体初步研究

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多聚免疫球蛋白受体（PIGR/SC）的肺癌组织表达和血浆水平分析研究

多聚免疫球蛋白受体（PIGR/SC）的肺癌组织表达和血浆水平分析研究

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作者：易胜中中国协和医科大学

学位级别：博士

目前肺癌是威胁人类最大的恶性肿瘤之一，尽管影像诊断和治疗方法有很大的提高，但近几十年来肺癌的五年生存率一直未得到改善，大约为12-14％。早期发现、早期诊断和早期治疗是提高肺癌生存率关键。因此寻找新的有效方法，如利用肺癌... 详细信息

目前肺癌是威胁人类最大的恶性肿瘤之一，尽管影像诊断和治疗方法有很大的提高，但近几十年来肺癌的五年生存率一直未得到改善，大约为12-14％。早期发现、早期诊断和早期治疗是提高肺癌生存率关键。因此寻找新的有效方法，如利用肺癌生物标志物来发现早期肺癌成为研究热点。我们实验室在前期工作中建立了一个新的模型来检测肿瘤细胞释放到血液中游离蛋白。将肺癌及其正常对照支气管上皮组织进行短期体外原代培养，收集培养所用无血清条件培养基。随后，分别对肺癌及其对照组织的条件培养基经过透析除盐浓缩后的总蛋白进行质谱(Q-TOF)鉴定。采用这种方法，我们已经发现100多个肺癌相关的差异表达蛋白，多聚免疫球蛋白受体(polymeric immunoglobulin receptor/secretory component, PIGR/SC)即为其中之一。为了验证前期实验提供的信息和质谱鉴定结果，了解PIGR／SC蛋白与肺癌的相关性，我们一方面采用对组织芯片进行免疫组织化学(immunohistochemistry, IHC)染色的方法，针对460例肺癌组织检查PIGP／SC蛋白的表达情况，并进一步探讨PIGR／SC蛋白表达与肺癌临床特征(如病理类型、临床分期以及肿瘤分化程度等)之间的关系；另一方面，以酶联免疫吸附分析(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检查肺癌患者和对照人群外周血血浆中的PIGR／SC的蛋白水平。本项研究我们采用自行包被的ELISA检测板，取450／570nm吸光度值(OD值)来半定量PIGR／SC蛋白的血浆水平。研究结果显示，PIGR／SC蛋白在非小细胞肺癌肿瘤组织中的表达水平显著高于正常对照组织；在不同组织类型的肺癌组织中表达阳性率依次为：鳞癌66.28％，腺癌34.41％，小细胞癌4.3％——在不同组织病理类型之间存在明显差异(P＜0.001)，在正常肺组织表达阳性率3.33％。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期肺癌PIGR／SC表达率分别为58.52％，56.70％，49.45％和50.00％，各分期之间无显著性差异。高、中、低分化的肺癌PIGR／SC表达率分别为68.18％，57.01％和62.50％，组织分级之间亦无显著性差异。除此之外，消化道鳞癌PIGR／SC表达阳性率为52.27％，与肺鳞癌相比无明显差异；消化道腺癌PIGR／SC表达阳性率为33.33％，

关键词：肺癌组织基因表达谱病理类型肿瘤标志物肺腺癌 PIGR/SC 肺鳞癌多聚免疫球蛋白受体

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嘌呤核苷磷酸化酶/氟达拉滨(PNP/fludarabine)自杀基因系统对人肝癌细胞系BEL7402体外杀伤效应的研究

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胃肠病学 2005年第1期10卷 3-9页

作者：李锋王楚张萍钱关祥上海第二医科大学生物化学与分子生物学教研室 200025

背景:肿瘤细胞内表达的自杀基因可将无毒性的前药转化为高毒性代谢产物以杀伤肿瘤细胞,嘌呤核苷磷酸化酶/氟达拉滨(PNP/fludarabine)自杀基因系统具有目前已知最强的旁观者效应,成为基因治疗领域中的研究热点。目的:研究PNP/fludarabin... 详细信息

背景:肿瘤细胞内表达的自杀基因可将无毒性的前药转化为高毒性代谢产物以杀伤肿瘤细胞,嘌呤核苷磷酸化酶/氟达拉滨(PNP/fludarabine)自杀基因系统具有目前已知最强的旁观者效应,成为基因治疗领域中的研究热点。目的:研究PNP/fludarabine自杀基因系统对人肝癌细胞系BEL7402的体外杀伤效应。方法:应用聚合酶链反应(PCR)从大肠杆菌K12菌株基因组DNA扩增PNP基因,通过8个甘氨酸的接头克隆至真核表达载体pEGFP鄄N1。将pEGFP鄄N鄄PNP以Lipofectamine2000转染BEL7402细胞,G418筛选,直至出现抗性克隆,命名为BEL7402/PNP。应用逆转录(RT)鄄PCR和RNA印迹法(Northernblotting)鉴定PNP基因的表达。分别应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和AnnexinV鄄FITC凋亡检测试剂盒检测PNP/fludarabine自杀基因系统对BEL7402细胞的细胞毒效应、旁观者效应和诱导凋亡作用。结果:RT鄄PCR和RNA印迹法证实转染的PNP基因能在BEL7402和BEL7402/PNP细胞中表达。低浓度fludarabine对经PNP基因转染的BEL7402细胞具有明显的细胞毒效应;旁观者效应检测显示,10%的BEL7402/PNP细胞与90%的BEL7402细胞混合,经低浓度fludarabine处理,90%的细胞可被杀死;细胞凋亡检测显示,PNP/fludarabine自杀基因系统对BEL7402细胞具有明显的诱导凋亡作用。结论:PNP/

关键词：嘌呤核苷磷酸化酶氟达拉滨自杀基因系统肝癌细胞系 BEL7402 体外杀伤效应

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精浆中白介素23的含量测定及与精液质量的关系

精浆中白介素23的含量测定及与精液质量的关系

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作者：张晗浙江大学

学位级别：硕士

细胞因子与人类生殖的关系正得到广泛的研究,因为它们涉及到生殖生理和生育调节的各个方面。人的精浆中含有转化生长因子（transforming growthfactor,TGF）、表皮生长因子（epidermal growth factor,EGF）、肿瘤坏死因子α（tumor necr... 详细信息

细胞因子与人类生殖的关系正得到广泛的研究,因为它们涉及到生殖生理和生育调节的各个方面。人的精浆中含有转化生长因子（transforming growthfactor,TGF）、表皮生长因子（epidermal growth factor,EGF）、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白介素（interleukine,IL）、干扰素γ（interferon-γ,IFN-γ）以及一些可溶性受体,它们来自于男性生殖道的不同部位,可能对生殖系统的甾体激素合成、精子细胞的发育、及精子功能产生影响。人精浆中存在炎症性细胞因子,主要来自于白细胞中的巨噬细胞,在外来抗原、病原体和慢性炎症的情况下激活产生。这些细胞因子主要包括IL-1、IL-6、IL-8、IL-12、TNF-α、IFN-γ等。在体外实验中,一些细胞因子,如IL-1、IL-6、TNF-α、IFN-γ等,可影响人精子活动力,增加精子细胞活性氧的产生,降低精子的穿卵能力;IL-1、TNF-α可以抑制睾丸酮（T）的产生;TNF-α可以显著抑制精子的顶体酶活性和顶体反应。IL-23是2000年新发现的炎症性细胞因子,自身独特的p19亚基与IL-12的p40亚基通过二硫键形成异源二聚体细胞因子（p40p19）,它主要来源于活化单核巨噬细胞和树突细胞,通过作用于记忆性T细胞和炎症性巨噬细胞的IL-23受体而发挥功能。IL-23具有多种生物学功能,能促进T细胞尤其是CD4+T细胞增殖,促进T细胞、抗原提呈细胞产生IFN-γ与IL-12,对树突细胞的共刺激功能起调节作用,具有抗肿瘤和抗转移活性,而且与自身免疫和炎症反应疾病密切相关。在转基因小鼠实验中,广泛表达p19的转基因小鼠有严重的生长和生育方面的缺陷。至今,国内外未发现有关IL-23与人精液质量关系的文献报道。本课题在对研究对象进行精液常规参数、精子形态检查的基础上,检测了人精浆中IL-23、IL-6、IL-8、TNF-α的含量,同时检测了其血清T、FSH、LH值,并对IL-23与精浆中IL-6、IL-8、TNF-α含量的关系及其与精液常规参数、精子形态、血生殖激素之间的关系进行了分析。现将结果报道如下。 1材料与方法 1.1标本来源 1.1.1 2007年5～6月共收集57份人类精液标本,其中45份来自浙江省人类精子库的供精志愿者,共45例,年龄20～25周岁,平均（21.8±1.1）周岁,全部为在校学生,未婚;其余12份来自浙江省计划生育专科门诊部就诊的男性不育症病人,未经抗生素治疗,共12例,年龄26～38周岁,平均（30.1±3.6）周岁。 1.1.2分组:根据WHO正常人前向运动精子（a级+b级）百分率和精子密度参考值将57份人类精液标本分成两组,其中精子密度≥20×10～6/ml且a+b≥50%作为精液质量正常组（35份）;密度＜20×10～6/ml或a+b＜50%、或密度＜20×10～6/ml且a+b＜50%为异常组（22份）。本研究中不包括无精子症和白细胞精子症病人,所有研究对象外生殖器检查均无异常;双侧睾丸均≥12ml;尿常规检查白细胞阴性。 1.2方法 1.2.1精液标本收集:所有受试者均禁欲3-5天,以手淫法采集精液于无菌烧杯内,置37℃水浴箱内液化后备查。 1.2.2精液常规分析:待精液完全液化后,按《WHO人类精液及精子-宫颈粘液相互作用实验室检验手册》（第四版）进行精液分析,内容包括精液量、PH值、液化时间、外观、精子密度、精子活力、活动率等指标。 1.2.3精子形态染色及分析:待精液液化后,将精液滴于洁净玻片上,推成薄片,自然干燥后,改良巴氏染色,树胶封固。精子形态分析按《WHO人类精液及精子-宫颈粘液相互作用实验室检验手册》（第四版）进行。油镜下观察,计数至少200个精子以上,按标准对精子形态进行分类,并分别记录其结果。包括正常精子百分率、头部异常百分率、颈部及中段异常百分率、尾部异常百分率、胞浆小滴百分率。 1.2.4精浆中IL-23、IL-6、IL-8及TNF-α水平测定:取部分完全液化后的精液以3 000 rpm/分钟离心20分钟,分离精浆保存于-20℃待行各种细胞因子的检测。采用上海博光生物科技有限公司进口分装试剂盒,应用ELISA夹心法测定精浆中IL-23、IL-6、IL-8及TNF-α含量。 1.2.5血清T、FSH、LH测定:所用仪器为德国拜耳（Bayer）公司ACS:180 SE全自动化学发光免疫分析系统（Automated chemiluminescence,system）,其灵敏度可达10-12g/L;所用试剂均为随机配套试剂。 1.2.6统计学分析:

关键词：细胞因子白介素肿瘤坏死因子精浆精液质量生殖激素

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HBV基因分型生物传感器基因芯片的制备及初步临床研究

HBV基因分型生物传感器基因芯片的制备及初步临床研究

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作者：唐健熹中山大学

学位级别：硕士

乙型肝炎仍是全球最严重的公共卫生问题之一，严重的危害人类的健康。全世界目前有超过3.5亿人感染乙肝病毒，导致慢性乙型肝炎，肝硬化甚至肝癌，每年世界范围内因感染乙肝病毒(hepatitis B virus，HBV)导致的死亡和后遗症人数达120万... 详细信息

乙型肝炎仍是全球最严重的公共卫生问题之一，严重的危害人类的健康。全世界目前有超过3.5亿人感染乙肝病毒，导致慢性乙型肝炎，肝硬化甚至肝癌，每年世界范围内因感染乙肝病毒(hepatitis B virus，HBV)导致的死亡和后遗症人数达120万人。中国、东南亚、非洲的50﹪的肝硬化和70﹪-90﹪肝癌是由HBV感染引起的。每年导致一百余万人的死亡。我国在世界上属于HBV感染的高发区，目前全国约有1.3亿人是HBV携带者，慢性肝炎病人约2300万。目前HBV分型有血清学分型与基因分型。血清型的区分只是根据乙肝表面抗原上的某几个氨基酸的免疫活性来区分，通过对不同亚型的HBV DNA的全基因序列进行比对分析后发现血清型的区分仅是S基因区两个核苷酸位点的差异，血清型的区别并不能真正反映HBV基因序列的异质性。于是提出HBV基因分型的概念，即HBV基因分型的标准为，HBV基因组全序列测定，对比，如果基因序列异质性≥8﹪，或者说同源性<92﹪，即可分为不同的基因型。由于基因分型能真正反映病毒基因组的变异，并且有研究表明不同的HBV基因型导致的肝炎，其疾病的严重程度、并发症的发生如肝硬化、肝细胞肝癌以及对治疗的反应性都有显著不同，因此研究HBV基因分型及其方法有重要的意义。本课题研究基于生物传感器基因芯片技术平台，通过设计引物和型特异性探针，构造一种新的基因芯片，并对其敏感性与可靠性进行检测分析，它克服了传统基因芯片需要激光扫描仪扫描观察结果的缺点，使杂交信号可通过肉眼观察，同时具有杂交信号有或无的判读、操作简便、并且能检测HBV的混合感染的特点。为HBV基因分型提供了一个很好的解决办法。同时，通过对临床标本的检测，为本地HBV基因型的分布提供一份参考资料。材料和方法: 1．材料 1.1 研究标本 110例中山大学附属第五医院2006年1月-2007年1月住院病人，经检验科检测乙肝病毒DNA阳性的血清(病毒量范围为10<'3>-10<'7>/ml)。血清标本收集后存于-80℃中备用。 1.2 标准基因型质粒 pBlue 991 E-Dimer T7，genotype A(Gen Bank：X 51970)[25]。pHTD，enotype B(GenBank：X98077)[26]。plasmid D1dimer,genotype C(GenBank：D16666)[27]。pSM2，genotype D，(GenBank：V01460)[28]。由Kirschberg教授惠赠[29]。 1.3 试剂和主要仪器主要试剂： (1) 生物传感基因芯片(购于珠海赛乐奇生物技术有限公司);(2) 核酸提取液(杭州艾康生物技术有限公司);(3) PCR相关试剂(10mm dNTP，10x PCR buffcr，25mm MgCl2，5U/ul Taq酶)购于北京鼎国生物技术有限责任公司;(4) 琼脂糖，分析纯(购于北京索莱宝科技有限公司);(5) 6x上样缓冲液(北京赛百盛基因技术有限公司);(6) DNA marker(北京赛百盛基因技术有限公司);(7) 10mg/ml溴化乙锭(EB)(北京赛百盛基因技术有限公司);(8) 连接酶(购于珠海赛乐奇生物技术有限公司);(9) 纯甘油、PBS (pH8.3)、NaOH、NaCl、柠檬酸钠、Triton X-100(聚乙二醇辛基苯基醚)液、SDS、EDTA、KCI、Tris等化学试剂均为分析纯，购于上海生工生物技术有限公司;(10) 所有用水均为实验室自制的三蒸水。 (11) 引物和探针：PCR引物，P1探针，P2探针(3‘端连接生物素biotin)。(上海生工生物公司合成) 主要仪器：PCR扩增仪： MJ Research PTC200;凝胶成像仪：Hema UV-紫外线分析凝胶成像仪 2．实验方法 2.1 通过NCBI等数据库及多种生物信息学软件分析HBV基因组序列，设计引物和型特异性分型探针。 2.2 芯片基片的准备和HBV基因分型生物传感器基因芯片制备。 2.3 用裂解液，煮沸裂解法提取血清中HBV DNA作为模板。 2.4 PCR扩增样本，产生目标序列。 2.5 PCR产物与芯片进行杂交。 2.5.1 比较不同的变性方法(热变性法和碱变性法)使PCR产物变为单链对杂交结果的影响，确定要使用的变性方法。 2.5.2 根据芯片杂交结果摸索最佳反应时间，使杂交信号稳定、明显。 2.6 芯片检测的特异性、重复性研究。 2.7 不同浓度的病毒DNA作为模板的检测。结果: 1．各分型探针设计

关键词：生物传感器基因芯片乙肝病毒基因分型临床检测

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携带野生型PTEN基因的重组腺病毒治疗子宫内膜癌的体外研究

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第二军医大学学报 2005年第9期26卷 997-1001页

作者：刘玉环杨培丽蔡在龙崔英俞超琴王锡智惠宁古航沙金燕第二军医大学长海医院妇产科上海200433 基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 长海医院中医科长海医院泌尿外科

目的:观察携带野生型PTEN基因的重组腺病毒(Ad-PTEN)体外转染子宫内膜癌细胞后的表达,并探讨其对肿瘤细胞产生抑制增殖、诱导凋亡的作用及机制。方法:细菌内同源重组方法构建Ad-PTEN,体外转染PTEN基因突变的子宫内膜腺癌RL95-2细胞中,X-... 详细信息

目的:观察携带野生型PTEN基因的重组腺病毒(Ad-PTEN)体外转染子宫内膜癌细胞后的表达,并探讨其对肿瘤细胞产生抑制增殖、诱导凋亡的作用及机制。方法:细菌内同源重组方法构建Ad-PTEN,体外转染PTEN基因突变的子宫内膜腺癌RL95-2细胞中,X-gal染色检测转染效率。应用RT-PCR、Western印迹、细胞免疫组化检测Ad-PTEN在RL95-2细胞中的转录及表达;应用细胞计数、MTT实验,观察Ad-PTEN对RL95-2细胞生长的影响;应用光镜、透射电镜观察外源性PTEN基因表达对RL95-2细胞形态学及超微结构的影响;应用流式细胞分析仪(FCM)检测Ad-PTEN对RL95-2细胞周期分布的影响、凋亡诱导作用及半胱氨酸天冬氨酸特异蛋白酶casapase-3的激活。结果:外源性野生型PTEN基因经腺病毒介导成功转入RL95-2细胞,3种方法均检测出有PTENmRNA及PTEN蛋白的表达,当感染复数(MOI)为50时,体外转染效率达到100%。Ad-PTEN显著抑制RL95-2细胞生长并诱导其凋亡。此外,Ad-PTEN还能诱导RL95-2细胞周期G0/G1期阻滞以及caspase-3的激活。结论:重组腺病毒Ad-PTEN是高效的基因转移系统,能将PTEN目的基因转移到丧失该基因功能的子宫内膜癌RL95-2细胞中,对RL95-2细胞产生强有力的生长抑制及凋亡诱导作用,其机制可能包括细胞周期G0/G1阻滞及caspase-3蛋白酶的激活。

关键词：子宫内膜癌基因治疗 PTEN基因腺病毒细胞周期细胞凋亡体外研究

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携带野生型PTEN基因的重组腺病毒治疗子宫内膜癌的体内研究

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第二军医大学学报 2005年第9期26卷 1002-1005页

作者：刘玉环崔英杨培丽蔡在龙俞超琴王锡智惠宁古航石书芳第二军医大学长海医院妇产科上海200433 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 长海医院中医科长海医院泌尿外科

目的:探讨携带野生型PTEN基因的重组腺病毒(Ad-PTEN)进行子宫内膜癌基因治疗的可行性.方法:BALB/c裸鼠随机分3组,每组8只, 以空载体Ad-CMV转染或未转染作为对照组,观察Ad-PTEN体外转染后体内接种对子宫内膜癌细胞致瘤能力的影响.应用La... 详细信息

目的:探讨携带野生型PTEN基因的重组腺病毒(Ad-PTEN)进行子宫内膜癌基因治疗的可行性.方法:BALB/c裸鼠随机分3组,每组8只, 以空载体Ad-CMV转染或未转染作为对照组,观察Ad-PTEN体外转染后体内接种对子宫内膜癌细胞致瘤能力的影响.应用LacZ 作为报告基因,X-gal染色检测Ad-PTEN 体内转染效率.皮下荷人子宫内膜癌BALB/c裸鼠15只,随机分为对照组、Ad-CMV组及Ad-PTEN治疗组,每组5只,每只裸鼠皮下有2个移植瘤.待皮下移植瘤长至4～5 mm时,治疗组Ad-PTEN肿瘤内注射,每个移植瘤5×108 pfu/100 μl,隔日1次,共3次,观察裸鼠肿瘤体积的变化及有无不良反应,最后1次治疗后15 d处死裸鼠,取肿瘤组织及治疗组裸鼠肝脏病理检查.结果:Ad-PTEN体外转染子宫内膜癌RL 95-2细胞,子宫内膜癌细胞致瘤能力完全抑制,裸鼠成瘤率为0;而空载体转染组和PBS对照组裸鼠成瘤率均为100%.重组腺病毒在裸鼠体内具有较高的转染效率,Ad-CMV-LacZ肿瘤内注射后96 h,转染效率可达到80%. Ad-PTEN肿瘤内注射可使裸鼠皮下移植瘤生长速度显著减慢,肿瘤体积较对照组明显缩小(P<0.05),Ad-PTEN基因治疗未发现明显不良反应. 结论:PTEN基因治疗有可能成为子宫内膜癌非手术治疗的一个新方法,具有潜在的应用价值.

关键词：子宫内膜癌 PTEN 基因治疗裸鼠体内研究

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PTEN基因突变与遗传性癌症综合征及其相关疾病的研究进展

引用

第二军医大学学报 2005年第1期26卷 90-92页

作者：刘玉环王锡智蔡在龙俞超芹崔英沙金燕第二军医大学长海医院妇产科上海200433 长海医院泌尿外科基础医学部生物化学与分子生物学教研室长海医院中医科

PTEN基因是具有双重特异性磷酸酶功能的抑癌基因,其脂质磷酸酶活性降调PKB/Akt信号转导,使细胞周期阻滞在G1期,诱导其凋亡。已证实在人类许多恶性肿瘤中存在体细胞PTEN基因突变,如神经胶质细胞瘤、子宫内膜癌、前列腺癌、肾癌、乳腺癌... 详细信息

PTEN基因是具有双重特异性磷酸酶功能的抑癌基因,其脂质磷酸酶活性降调PKB/Akt信号转导,使细胞周期阻滞在G1期,诱导其凋亡。已证实在人类许多恶性肿瘤中存在体细胞PTEN基因突变,如神经胶质细胞瘤、子宫内膜癌、前列腺癌、肾癌、乳腺癌等。近年来的研究发现,PTEN基因种系突变与人类多种遗传性癌症综合征有关。本文概括介绍了PTEN基因种系突变与人类遗传性癌症综合征及其相关疾病的关系,重点介绍了考登综合征(Cowden syndrome, CS)、Bannayan Ri ley Ruvalcaba syndrome(BRRS)、Proteus syndrome (PS)、Proteus like syndromes(PS like)等疾病。随着对这些综合征认识的加深,应用基因突变分析作为分子诊断工具,将有可能对这些患者极其家庭成员进行疾病的早期诊断及必要的癌症监测。

关键词： PTEN基因基因突变遗传性癌症综合征

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系统生物学对医学研究和药物发现的影响

系统生物学对医学研究和药物发现的影响

引用

中国药理学会第九次全国会员代表大会暨全国药理学术会议

作者：李学军北京大学基础医学院药理学系

人类基因组计划完成之后,生物学领域出现了一个新兴的整合型大学科——系统生物学,它集合了各种学科的力量,使人们对复杂的生命体系有更深刻地认识,而它必将成为21世纪最具活力的生命学科之一。系统生物学的定义是研究一个生物系统中所... 详细信息

人类基因组计划完成之后,生物学领域出现了一个新兴的整合型大学科——系统生物学,它集合了各种学科的力量,使人们对复杂的生命体系有更深刻地认识,而它必将成为21世纪最具活力的生命学科之一。系统生物学的定义是研究一个生物系统中所有组成成分(基因、mRNA、蛋白质等) 的构成,以及在特定条件下这些组分间的相互关系,并通过计算生物学建立数学模型来定量描述和预测生物功能、表型和行为的学科。20世纪90年代开始,兴起了许多组学研究,正是这些组学为理解系统结构积累了大量的数据。系统生物学在医学研究方面,将使用系统理论方法来解决复杂的生物系统,使医学具有预测性和个性化：预测个体患者对特定疾病的易感性;寻找更有效的诊断和治疗途径;为患者提供健康和预防疾病的个体化方案;如,利用基因多态性图谱预测患者对药物的应答,包括不良反应和疗效等。它将为现代重大疾病如癌症、艾滋病和糖尿病等的研究做出贡献。系统生物学在新药发现领域的意义在于：加速药物的发现;加速靶点的发现与确认;发现标志物跟踪临床疗效;建立个性化用药方案;全面评价药物的毒副作用。基于结构的柔性分子对接和虚拟配体筛选技术是基于系统生物学理论发现药物的一个重要的手段,它能从化合物库中筛选出可能的先导化合物,并找到这些小分子与靶蛋白结合的可能位点。但计算机方法常会产生太多的噪声,因此生物学研究如高通量药物筛选(HTS)和高内涵药物筛选(HCS)此会有更多的优点。从系统生物学的观点,高通量选择靶点最好在细胞水平。成功的范例是通过建立 EGF 受体的网络模型结合高效的筛选技术,找到了表及生长因子(EGF)受体抑制剂 Herceptin 和 Iressa 并使之成为新药。中医理论的辨证、整体和动态的观点与系统生物学的理论有共同之处。中医的基础理论可以借用系统生物学的某些理论来解释。而中医理论又在一定程度上可以提供思路去指导认识系统生物内部规律。西方医学比较关注特定疾病的病理学,注重特定的器官结构的变化,治疗上主张采用选择性强的治疗药物,而中医强调个体的整功能状态,阴阳平衡,且中药的应用常为复方,强调整体调节。但中医理论缺乏对系统内部各水平的认识,系统生物学则旨在将系统由“暗箱”变为“白箱”,揭示内部的组成成分以及各成分间的动力学特征。此外,现代生物技术也为中药的发展提供了极好的机会。在化学方面,将来需要以天然产物(植物、微生物、海洋生物等)的基本骨架为主作结构优化。另外,现代中药研究的中心问题是有效药物靶点的研究。应用蛋白质组学技术,对中药复方多组分的多环节、多靶点进行研究,有望解释中药复方的作用机制。《Nature》(2007,448：126-128)刊出题为《A Culture in the Balance》的文章,讨论了系统生物学在中医药研究中的可能应用,介绍了上海交通大学系统生物医学研究院的研究进展。他们的研究显示用代谢组学这样的系统生物学方法深入研究中医药作用机制具有巨大的潜力。最近几年,笔者所在实验室结合几种新发展的技术,特别是蛋白质组学技术去研究可能的蛋白靶。已经分离、纯化和结合质谱技术鉴定了30多个药物作用相关的蛋白。其中葡萄糖调节蛋白(glucose regulated protein,GRP78),血清淀粉样蛋白(serum amyloid A,SAA),能够被丹酚酸 B(salvianolic acid B,SalB)和灵芝多糖(Ganoderma lucidum polysaccharides GlPS)所调节。这些蛋白可能是它们抗氧化、抗肿瘤转移等保护作用的蛋白靶点。此外,笔者也采用高内涵技术以及其他基于细胞的技术研究药物的作用,应用计算机辅助药物设计和虚拟筛选与北京大学合作实施新药的设计和研究。总之,虽然系统生物学还处在发展初期,但其表现出来的优势和活力是不可比拟的。未来系统生物学理论和技术的发展必将极大的促进现代医药的研究,不仅在药物靶点的确认,也会在药物作用机制以及新药的发现方面起到不可比拟的作用。

关键词：系统生物学药物发现药物靶点

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