检索结果-内蒙古大学图书馆

重组牛痘病毒介导的微小基因表达产物OVA257～264在真核细胞中的抗原呈递效率

Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2002年第6期34卷 719-724页

作者：钱丽钱关祥上海第二医科大学生物化学教研室、分子生物学实验室上海200025 上海第二医科大学生物化学教研室、分子生物学实验室

应用含重组OVA微小基因及全长基因的牛痘病毒感染能够稳定表达Kb 分子的多种真核细胞 ,通过构象特异的单克隆抗体 2 5 .D 1.16 (anti OVA2 57～ 2 64/Kb)检测细胞表面复合物的形成情况 ,并借助四聚体技术检测了它们对抗原特异性T细胞的... 详细信息

应用含重组OVA微小基因及全长基因的牛痘病毒感染能够稳定表达Kb 分子的多种真核细胞 ,通过构象特异的单克隆抗体 2 5 .D 1.16 (anti OVA2 57～ 2 64/Kb)检测细胞表面复合物的形成情况 ,并借助四聚体技术检测了它们对抗原特异性T细胞的诱导能力。结果表明四聚体的构建是成功的 ,进一步用已被重组牛痘病毒感染的L92 9 Kb 细胞作为抗原呈递细胞以诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)的产生 ,并对活化后特异性CTL进行检测 ,从胞外IFN γ的分泌情况看 ,诱导后的整个群体细胞发生了活化与增殖 ,H 2Kb OVA四聚体对特异性T细胞进行的结合分析与经典的细胞毒效应相一致。可见 ,重组牛痘病毒介导的微小基因产物OVA2 57～ 2 64不仅能为MHC I类分子的合成提供更有效的肽来源 ,且能更有效诱导特异性CTL的产生。

关键词：四聚体重组牛痘病毒微小基因 CTL 抗原肽

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维甲酸对人胃癌细胞诱导分化的研究

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中华肿瘤杂志 1994年第1期16卷 15-17页

作者：孙月霞何震平程枫陈诗书上海第二医科大学生物化学教研室分子生物学实验室

人胃癌细胞株ＳＧＣ７９０１经１０μｍｏｌ／Ｌ维甲酸（ＲＡ）处理后，将细胞接种裸鼠，观察其移植瘤生成率和瘤体重量比对照胃癌细胞显著降低和减小ｐ＜０．０１。透射电镜发现，胃癌细胞经ＲＡ作用后，其细胞形态发生改变，由椭圆形... 详细信息

人胃癌细胞株ＳＧＣ７９０１经１０μｍｏｌ／Ｌ维甲酸（ＲＡ）处理后，将细胞接种裸鼠，观察其移植瘤生成率和瘤体重量比对照胃癌细胞显著降低和减小ｐ＜０．０１。透射电镜发现，胃癌细胞经ＲＡ作用后，其细胞形态发生改变，由椭圆形、核大、核周边缘凹陷切迹，转变为长圆形或近似梭形、核小、核周边缘光滑无切迹。流式细胞仪检测结果，ＲＡ处理的胃癌细胞，其细胞周期发生改变，停留在Ｇ１／０期细胞百分比率比对照胃癌细胞显著上升Ｐ＜０．０５及Ｐ＜０．０１，而增殖期Ｓ和Ｇ２＋Ｍ期细胞百分比率比对照细胞显著下降Ｐ＜０．０５及Ｐ＜０．０１。结果表明：ＲＡ可从细胞生物学、细胞周期动力学及细胞形态学水平逆转入胃癌细胞表型，使该细胞株有一定程度的诱导分化。

关键词：维甲酸胃肿瘤肿瘤细胞培养

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单纯性生长激素缺乏症的一个家系调查

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中华内分泌代谢杂志 1994年第3期10卷 183-184页

作者：王亚新何友爱张来仪于丽莉陈诗书上海第二医科大学生物化学教研室分子生物学实验室

单纯性生长激素缺乏症的一个家系调查王亚新，何友爱，张来仪，于丽莉，陈诗书人生长激素（ｈｕｍａｎｇｒｏｗｔｈｈｏｒｍｏｎｅ，ｈＧＨ）缺乏可有多种原因引起。ｈＧＨ基因缺失是其中之一，命名为单纯性生长激素缺乏症Ｉ－Ａ型（Ｉ... 详细信息

单纯性生长激素缺乏症的一个家系调查王亚新，何友爱，张来仪，于丽莉，陈诗书人生长激素（ｈｕｍａｎｇｒｏｗｔｈｈｏｒｍｏｎｅ，ｈＧＨ）缺乏可有多种原因引起。ｈＧＨ基因缺失是其中之一，命名为单纯性生长激素缺乏症Ｉ－Ａ型（ＩＧＨＤ－ＩＡ）。我们在１９８８年用...

关键词：遗传病单纯性生长激素缺乏症家系调查

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人SATB1基因5′上游序列的转录激活功能分析

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中国生物化学与分子生物学报 2005年第2期21卷 221-226页

作者：李颖戴冰冰蔡蓉仇全于丽莉卢健上海第二医科大学生物化学与分子生物学教研室上海200025

在对人SATB1基因进行生物信息学分析的基础上 ,采用PCR技术 ,扩增人基因组DNA中SATB1基因 5′上游序列的 - 2 95 5～ - 9片段 ,构建了 3个分别由SATB1基因 5′上游 - 2 95 5～ - 9,- 172 7～ - 9和 - 76 0～ - 9序列片段驱动的报告载体 ... 详细信息

在对人SATB1基因进行生物信息学分析的基础上 ,采用PCR技术 ,扩增人基因组DNA中SATB1基因 5′上游序列的 - 2 95 5～ - 9片段 ,构建了 3个分别由SATB1基因 5′上游 - 2 95 5～ - 9,- 172 7～ - 9和 - 76 0～ - 9序列片段驱动的报告载体 -pGL3 SP2 94 6 luc ,pGL3 SP1718 luc和pGL3 SP75 1 luc ,分别瞬时转染JurkatT ,K5 6 2 ,U937和HeLa细胞 ,通过测定荧光素酶的表达活性 ,观察SATB1基因 5′上游序列片段 3个删除突变体在不同细胞内活性的差异 .结果显示 ,SATB1上游序列- 2 95 5 - 9在 4种细胞中的转录激活能力为U937>JurkatT >K5 6 2 ,在HeLa细胞中基本无激活 ,提示SATB1的转录激活可能具有一定的细胞类型特异性 .3种 5′删除突变体转录激活性由大至小顺序为 - 76 0 - 9>- 2 95 5 - 9>- 172 7 - 9,提示SATB1的核心启动子可能存在于其 5′上游序列的- 76 0至 - 9bp区域中 .

关键词： SATB1基因启动子报告基因分析转录调控

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人原发胃癌,裸鼠人胃癌移植瘤有人胃细胞株中...

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中华肿瘤杂志 1991年第6期13卷 433-435页

作者：孙月霞何震平上海第二医科大学生物化学教研室分子生物学实验室 200025

我们对人原发胃癌组织及相应“正常”胃组织、不同传代的裸鼠人原发性胃癌移植瘤及三种不同人胃癌细胞株进行胃蛋白酶原(PG)和乳酸脱氢酶(LDH)活力及其同功酶谱的比较。结果表明,人“正常”胃组织PG同功酶基因高度表达, PG活力较高; LD... 详细信息

我们对人原发胃癌组织及相应“正常”胃组织、不同传代的裸鼠人原发性胃癌移植瘤及三种不同人胃癌细胞株进行胃蛋白酶原(PG)和乳酸脱氢酶(LDH)活力及其同功酶谱的比较。结果表明,人“正常”胃组织PG同功酶基因高度表达, PG活力较高; LDH同功酶谱呈H型, LDH活力较低。而原发胃癌组织、裸鼠人胃癌移植瘤组织及三种人胃癌细胞株的PG同功酶基因均低度表达, PG活力均比“正常”胃组织呈非常显著性降低(P＜0.001); LDH同功酶均呈M型, LDH活力均比人“正常”胃组织呈非常显著性增高(P＜0.001, P＜0.01)。实验结果提示:裸鼠人胃癌移植瘤与原发胃癌组织性质接近,可作为研究胃癌分子生物学的模型。

关键词：胃蛋白酶原同功酶酶谱胃癌细胞株

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cmv-3′LTR嵌合启动子对逆转录病毒载体MFG滴度及外源基因表达的影响

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病毒学报 2003年第3期19卷 235-239页

作者：戴冰冰梅文瀚王家敏杨蓉钱关祥卢健上海第二医科大学生物化学教研室分子生物学实验室上海200025

为减轻逆转录病毒载体介导的外源基因的沉默,进一步提高逆转录病毒载体MFG介导的外源基因的表达水平,同时探讨逆转录病毒3′端长末端重复序列(long terminalrepeat,LTR)内U3区对病毒基因表达的影响,将逆转录病毒载体3′端LTR内的U3区用... 详细信息

为减轻逆转录病毒载体介导的外源基因的沉默,进一步提高逆转录病毒载体MFG介导的外源基因的表达水平,同时探讨逆转录病毒3′端长末端重复序列(long terminalrepeat,LTR)内U3区对病毒基因表达的影响,将逆转录病毒载体3′端LTR内的U3区用cmv核心增强子、启动子序列替代,同时去除了3个与逆转录病毒载体启动子甲基化有关的序列NCR、DR,并以egfp为报告基因,构建了MFG egfp和MFG egfp cmv表达载体。结果显示:利用cmv启动子替代MFG载体3′端LTR的U3启动子序列,会显著降低MFG载体的病毒滴度及其介导的外源报告基因的表达。提示利用cmv启动子替代病毒载体的3′端LTR内的U3区,并不是提高MoMLV(moloneymurineleukemivirus)逆转录病毒载体介导外源基因的表达及其病毒滴度的理想策略。结果也同时提示:在MoMLV逆转录病毒3′端LTR的U3区,可能存在与病毒RNA加工、成熟及稳定性有关的信号序列。

关键词：嵌合启动子逆转录病毒载体外源基因基因表达

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细胞内RNA的原位杂交

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生物化学与生物物理进展 1989年第4期16卷 284-286页

作者：王敦瑞陈季汪肖钢于丽莉陈诗书上海第二医科大学生物化学教研室医学分子生物学实验室

本文介绍用原位杂交方法测定细胞内的RNA。该方法特异性较高,能保持细胞曲完整性。我们测定了不同细胞的rRNA基因的转录和原癌基因c-myc,c-H-rgs的转录,取得了较满意的结果。RNase处理细胞或质粒pBR322作探针,细胞中显影颗粒很少。本文... 详细信息

本文介绍用原位杂交方法测定细胞内的RNA。该方法特异性较高,能保持细胞曲完整性。我们测定了不同细胞的rRNA基因的转录和原癌基因c-myc,c-H-rgs的转录,取得了较满意的结果。RNase处理细胞或质粒pBR322作探针,细胞中显影颗粒很少。本文对原位杂交方法学进行了初步的讨论。

关键词： RNA 细胞原位杂交

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嘌呤核苷磷酸化酶/氟达拉滨(PNP/fludarabine)自杀基因系统对人肝癌细胞系BEL7402体外杀伤效应的研究

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胃肠病学 2005年第1期10卷 3-9页

作者：李锋王楚张萍钱关祥上海第二医科大学生物化学与分子生物学教研室 200025

背景:肿瘤细胞内表达的自杀基因可将无毒性的前药转化为高毒性代谢产物以杀伤肿瘤细胞,嘌呤核苷磷酸化酶/氟达拉滨(PNP/fludarabine)自杀基因系统具有目前已知最强的旁观者效应,成为基因治疗领域中的研究热点。目的:研究PNP/fludarabin... 详细信息

背景:肿瘤细胞内表达的自杀基因可将无毒性的前药转化为高毒性代谢产物以杀伤肿瘤细胞,嘌呤核苷磷酸化酶/氟达拉滨(PNP/fludarabine)自杀基因系统具有目前已知最强的旁观者效应,成为基因治疗领域中的研究热点。目的:研究PNP/fludarabine自杀基因系统对人肝癌细胞系BEL7402的体外杀伤效应。方法:应用聚合酶链反应(PCR)从大肠杆菌K12菌株基因组DNA扩增PNP基因,通过8个甘氨酸的接头克隆至真核表达载体pEGFP鄄N1。将pEGFP鄄N鄄PNP以Lipofectamine2000转染BEL7402细胞,G418筛选,直至出现抗性克隆,命名为BEL7402/PNP。应用逆转录(RT)鄄PCR和RNA印迹法(Northernblotting)鉴定PNP基因的表达。分别应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和AnnexinV鄄FITC凋亡检测试剂盒检测PNP/fludarabine自杀基因系统对BEL7402细胞的细胞毒效应、旁观者效应和诱导凋亡作用。结果:RT鄄PCR和RNA印迹法证实转染的PNP基因能在BEL7402和BEL7402/PNP细胞中表达。低浓度fludarabine对经PNP基因转染的BEL7402细胞具有明显的细胞毒效应;旁观者效应检测显示,10%的BEL7402/PNP细胞与90%的BEL7402细胞混合,经低浓度fludarabine处理,90%的细胞可被杀死;细胞凋亡检测显示,PNP/fludarabine自杀基因系统对BEL7402细胞具有明显的诱导凋亡作用。结论:PNP/

关键词：嘌呤核苷磷酸化酶氟达拉滨自杀基因系统肝癌细胞系 BEL7402 体外杀伤效应

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人胃癌转移型裸鼠移植瘤cDNA文库构建及分析

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肿瘤 1993年第5期13卷 233-236页

作者：王文芳章有章陈诗书上海第二医科大学生物化学教研室分子生物学实验室上海市200025

从人转移型胃癌裸鼠移植瘤中抽提出总ＲＮＡ，分离出多聚腺苷酸ＲＮＡ，合成双链ｃＤＮＡ，接上ＥＣｏＲＩ接头，以ｐＴ７Ｔ３１８Ｕ质粒为载体，以大肠杆菌ＮＭ５２２为受体菌，构建了人转移型胃癌裸鼠移植瘤ｃＤＮＡ文库。该文库含... 详细信息

从人转移型胃癌裸鼠移植瘤中抽提出总ＲＮＡ，分离出多聚腺苷酸ＲＮＡ，合成双链ｃＤＮＡ，接上ＥＣｏＲＩ接头，以ｐＴ７Ｔ３１８Ｕ质粒为载体，以大肠杆菌ＮＭ５２２为受体菌，构建了人转移型胃癌裸鼠移植瘤ｃＤＮＡ文库。该文库含１．５×１０＾６转化子，插入片段ｃＤＮＡ长度为０．４～６．０Ｋｂ，重组效率为８０％，并用四种癌基因探针筛选了阳性克隆。

关键词： cDNA文库裸鼠移植瘤胃肿瘤癌

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小鼠天然可溶性VEGF受体基因sflt-1的克隆及鉴定

引用

中国生物化学与分子生物学报 2001年第3期17卷 335-339页

作者：糜军陈诗书上海第二医科大学生物化学与分子生物学实验室上海200025

可溶性血管内皮细胞生长因子受体 (sFlt 1 )与膜表面受体Flt 1竞争结合血管内皮细胞生长因子 (VEGF) ,并且与膜表面受体Flt 1及KDR形成异源二聚体 .完全阻断VEGF的生物学活性 ,除与sFlt 1的结合部位结构域有关外 ,还与整个蛋白质分子的... 详细信息

可溶性血管内皮细胞生长因子受体 (sFlt 1 )与膜表面受体Flt 1竞争结合血管内皮细胞生长因子 (VEGF) ,并且与膜表面受体Flt 1及KDR形成异源二聚体 .完全阻断VEGF的生物学活性 ,除与sFlt 1的结合部位结构域有关外 ,还与整个蛋白质分子的高效分泌表达有关 .而蛋白质分子的高效分泌表达与蛋白质在细胞内高尔基体及内质网的加工密切相关 ,基因工程重组可溶性受体由于一些尚未明了的原因 ,往往不能高效表达 ,从而大大影响了其应用价值 .利用RT PCR技术从胚胎小鼠中扩增出天然可溶性VEGF受体基因sflt 1 ,克隆于pcDNA3载体中 ,在COS 7细胞中短暂表达 ;并克隆至pET42b载体中 ,经IPTG诱导后 ,可大量稳定表达与His Tag形成的融合蛋白 ,经HisNi柱纯化 ,可特异性结合VEGF .可溶性受体sFlt 1在肿瘤组织的高效表达可有效阻断新生血管的形成 ,从而为肿瘤的治疗探索一种方法 .

关键词：内皮细胞生长因子受体真核表达原核表达 sflt-1 可溶性受体小鼠克隆鉴定

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