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第九次全国生殖生物学学术研讨会

作者：徐晨周宗瑶郭强苏胡远新张永莲王一飞上海第二医科大学组织胚胎学教研室上海第二医科大学组织胚胎学教研室上海第二医科大学组织胚胎学教研室中国科学院上海生物化学和细胞生物学研究所分子生物学国家重点实验室中国科学院上海生物化学和细胞生物学研究所分子生物学国家重点实验室上海第二医科大学组织胚胎学教研室

目的:生殖细胞核因子(germ cell nuclear factor,GCNF)是一种孤儿受体,被认为与精子发生、神经发生和胚胎发育有关。本研究目的在于GCNF在小鼠生精细胞表达的时间-空间特性以及GCNF在小鼠附睾头部及附睾尾部精子的表达特性。方法:采用... 详细信息

目的:生殖细胞核因子(germ cell nuclear factor,GCNF)是一种孤儿受体,被认为与精子发生、神经发生和胚胎发育有关。本研究目的在于GCNF在小鼠生精细胞表达的时间-空间特性以及GCNF在小鼠附睾头部及附睾尾部精子的表达特性。方法:采用间接免疫荧光方法分析了GCNF在不同发育阶段(8、10、14、28、35、70和420日龄)的BALB/c小鼠生精细胞表达的特性以及GCNF在小鼠附睾精子的表达特性。结果:GCNF最初表达于出生后8日龄小鼠的极少数生精细胞的细胞核,然后出现在10日龄小鼠的初级精母细胞的细胞核:GCNF首次同时表达于14日龄小鼠的精母细胞和精子细胞的细胞核;以后,GCNF始终表达于小鼠的精母细胞和精子细胞的细胞核(从14

关键词：生精细胞生殖细胞核因子

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重组牛痘病毒介导的微小基因表达产物OVA257～264在真核细胞中的抗原呈递效率

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2002年第6期34卷 719-724页

作者：钱丽钱关祥上海第二医科大学生物化学教研室、分子生物学实验室上海200025 上海第二医科大学生物化学教研室、分子生物学实验室

应用含重组OVA微小基因及全长基因的牛痘病毒感染能够稳定表达Kb 分子的多种真核细胞 ,通过构象特异的单克隆抗体 2 5 .D 1.16 (anti OVA2 57～ 2 64/Kb)检测细胞表面复合物的形成情况 ,并借助四聚体技术检测了它们对抗原特异性T细胞的... 详细信息

应用含重组OVA微小基因及全长基因的牛痘病毒感染能够稳定表达Kb 分子的多种真核细胞 ,通过构象特异的单克隆抗体 2 5 .D 1.16 (anti OVA2 57～ 2 64/Kb)检测细胞表面复合物的形成情况 ,并借助四聚体技术检测了它们对抗原特异性T细胞的诱导能力。结果表明四聚体的构建是成功的 ,进一步用已被重组牛痘病毒感染的L92 9 Kb 细胞作为抗原呈递细胞以诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)的产生 ,并对活化后特异性CTL进行检测 ,从胞外IFN γ的分泌情况看 ,诱导后的整个群体细胞发生了活化与增殖 ,H 2Kb OVA四聚体对特异性T细胞进行的结合分析与经典的细胞毒效应相一致。可见 ,重组牛痘病毒介导的微小基因产物OVA2 57～ 2 64不仅能为MHC I类分子的合成提供更有效的肽来源 ,且能更有效诱导特异性CTL的产生。

关键词：四聚体重组牛痘病毒微小基因 CTL 抗原肽

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转化生长因子-β细胞周期抑制机制

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生命的化学 2002年第5期22卷 439-442页

作者：王楚卢健上海第二医科大学生物化学和分子生物学教研室人类基因治疗研究中心上海200025

转化生长因子-β(TGF-β)属于二聚多肽类生长因子,参与调节细胞的增殖、分化和凋亡,是一类具有多种生物活性的细胞因子超家族。Smads分子将TGF-β信号由胞膜转导入细胞核内并调节目的基因对TGF-β的应答。作为细胞周期的抑制因子,TGF-... 详细信息

转化生长因子-β(TGF-β)属于二聚多肽类生长因子,参与调节细胞的增殖、分化和凋亡,是一类具有多种生物活性的细胞因子超家族。Smads分子将TGF-β信号由胞膜转导入细胞核内并调节目的基因对TGF-β的应答。作为细胞周期的抑制因子,TGF-β可以通过不同的途径使细胞停留在G1期,从而抑制细胞的生长。TGF-β信号转导通路的异常与肿瘤的发生密切相关。本文对近年TGF-β细胞周期抑制机制的研究作一综述。

关键词：转化生长因子-β 细胞周期抑制机制信号转导

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小鼠天然可溶性VEGF受体基因sflt-1的克隆及鉴定

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中国生物化学与分子生物学报 2001年第3期17卷 335-339页

作者：糜军陈诗书上海第二医科大学生物化学与分子生物学实验室上海200025

可溶性血管内皮细胞生长因子受体 (sFlt 1 )与膜表面受体Flt 1竞争结合血管内皮细胞生长因子 (VEGF) ,并且与膜表面受体Flt 1及KDR形成异源二聚体 .完全阻断VEGF的生物学活性 ,除与sFlt 1的结合部位结构域有关外 ,还与整个蛋白质分子的... 详细信息

可溶性血管内皮细胞生长因子受体 (sFlt 1 )与膜表面受体Flt 1竞争结合血管内皮细胞生长因子 (VEGF) ,并且与膜表面受体Flt 1及KDR形成异源二聚体 .完全阻断VEGF的生物学活性 ,除与sFlt 1的结合部位结构域有关外 ,还与整个蛋白质分子的高效分泌表达有关 .而蛋白质分子的高效分泌表达与蛋白质在细胞内高尔基体及内质网的加工密切相关 ,基因工程重组可溶性受体由于一些尚未明了的原因 ,往往不能高效表达 ,从而大大影响了其应用价值 .利用RT PCR技术从胚胎小鼠中扩增出天然可溶性VEGF受体基因sflt 1 ,克隆于pcDNA3载体中 ,在COS 7细胞中短暂表达 ;并克隆至pET42b载体中 ,经IPTG诱导后 ,可大量稳定表达与His Tag形成的融合蛋白 ,经HisNi柱纯化 ,可特异性结合VEGF .可溶性受体sFlt 1在肿瘤组织的高效表达可有效阻断新生血管的形成 ,从而为肿瘤的治疗探索一种方法 .

关键词：内皮细胞生长因子受体真核表达原核表达 sflt-1 可溶性受体小鼠克隆鉴定

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复制缺陷型腺病毒载体介导hVEGF cDNA在C2C12和NIH3T3细胞中的表达

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中国生物化学与分子生物学报 2001年第6期17卷 704-709页

作者：孙欲晓陈诗书上海第二医科大学生物化学教研室分子生物学实验室人类基因治疗研究中心上海200025

为提高hVEGFcDNA在心肌中的表达 ,降低在其它组织中表达可能产生的不良反应 ,用PCR法得到人磷酸肌酸激酶 (MCK)增强子和CMV核心启动子 .利用克隆技术构建了含双拷贝MCK增强子 (m)和人巨细胞病毒 (CMV)核心启动子 (c)的嵌合启动子 (mmc) ... 详细信息

为提高hVEGFcDNA在心肌中的表达 ,降低在其它组织中表达可能产生的不良反应 ,用PCR法得到人磷酸肌酸激酶 (MCK)增强子和CMV核心启动子 .利用克隆技术构建了含双拷贝MCK增强子 (m)和人巨细胞病毒 (CMV)核心启动子 (c)的嵌合启动子 (mmc) ,构建真核表达质粒pK3 mmcLacZ ,制备受mmc嵌合启动子调控的重组腺病毒Ad mmcVEGF .经X gal染色、β 半乳糖苷酶定量分析、RT PCR、hVEGFELISA定量分析、VEGF活性测定等研究表明。

关键词：人磷酸肌酸激酶增强子嵌合启动子肌细胞特异性表达血管内皮生长因子腺病毒载体心肌缺血基因治疗复制

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透析膜和内毒素对单个核细胞白细胞介素-1受体拮抗物产生的协同作用

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复旦学报. 医学版 2001年第3期28卷

作者：丁峰顾勇薛骏郑秀娟赵涵芳林善锬复旦大学附属华山医院上海 200040 复旦大学基础医学院免疫学教研室上海 200032 上海第二医科大学生物化学教研室分子生物学实验室上海 200025

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可溶性H-2K^b与绿色荧光蛋白融合基因的构建及其在COS7中的表达

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上海免疫学杂志 2000年第5期20卷 266-269页

作者：钱书兵陈诗书上海第二医科大学生物化学教研室分子生物学实验室上海200025

本文应用基因工程技术构建了可溶性H 2Kb 分子与绿色荧光蛋白 (GFP)融合基因sKb GFP。在COS7细胞中表达后 ,在内质网区域呈现明显绿色荧光。RT PCR结果显示融合基因获得了正确表达 ,蛋白印迹分析表明细胞内产生了预期大小的融合蛋白。... 详细信息

本文应用基因工程技术构建了可溶性H 2Kb 分子与绿色荧光蛋白 (GFP)融合基因sKb GFP。在COS7细胞中表达后 ,在内质网区域呈现明显绿色荧光。RT PCR结果显示融合基因获得了正确表达 ,蛋白印迹分析表明细胞内产生了预期大小的融合蛋白。细胞培养上清经亲和层析柱纯化后 ,获得了预期大小的重组蛋白。

关键词：可溶性MHCⅠ类分子绿色荧光蛋白基因工程

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H-2K^b cDNA的克隆及其在多种真核细胞中的表达

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上海第二医科大学学报 1999年第3期19卷 193-196,200页

作者：钱书兵钱关祥陈诗书上海第二医科大学生物化学教研室分子生物学实验室人类基因治疗研究中心

目的克隆H－2KbcDNA及研究其在多种真核细胞中的表达。方法RT－PCR法扩增H－2KbcDNA，克隆入双顺反子逆转录病毒载体pGCEN，PA317包装出重组病毒后，分别感染NIH3T3、COS7及***，PCR和RT－PCR分析目的基因表达，FACS分析H－2Kb在细胞膜... 详细信息

目的克隆H－2KbcDNA及研究其在多种真核细胞中的表达。方法RT－PCR法扩增H－2KbcDNA，克隆入双顺反子逆转录病毒载体pGCEN，PA317包装出重组病毒后，分别感染NIH3T3、COS7及***，PCR和RT－PCR分析目的基因表达，FACS分析H－2Kb在细胞膜上的表达。结果以双顺反子逆转录病毒载体pGCEN介导，分别建立了H－2Kb基因转导细胞：NIH3T3／Kb、COS7／Kb及***／Kb。PCR结果表明目的基因已存在于宿主细胞中，RT－PCR结果表明目的基因已获得正确表达。FACS结果表明H－2Kb分子已稳定表达在细胞膜表面。结论MHC分子基因在多种真核细胞中的表达为研究抗原递呈及抗肿瘤作用提供了基础。

关键词： H-2K^b基因克隆逆转录病毒载体真核表达 cDNA

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深Ⅱ度烧伤愈合中TGFβ_1表达变化

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上海第二医科大学学报 1999年第6期19卷 526-528页

作者：程枫赵涵芳梅文瀚王丽赵雁飞廖镇江上海第二医科大学生物化学教研组分子生物学实验室 200025 上海第二医科大学病理教研室 200025 上海第二医科大学附属瑞金医院烧伤科 200025

目的研究ＴＧＦ在深Ⅱ度烧伤愈合中表达变化，为临床合理应用外源性ＴＧＦ提高疗效，缩短疗程提供实验依据。方法在ＳＤ大鼠背部埋入海绵，于热烫伤深Ⅱ度后１、３、５、７、１０ｄ分别取渗出液细胞，采用ＲＴ－ＰＣＲ和地高辛原位杂交... 详细信息

目的研究ＴＧＦ在深Ⅱ度烧伤愈合中表达变化，为临床合理应用外源性ＴＧＦ提高疗效，缩短疗程提供实验依据。方法在ＳＤ大鼠背部埋入海绵，于热烫伤深Ⅱ度后１、３、５、７、１０ｄ分别取渗出液细胞，采用ＲＴ－ＰＣＲ和地高辛原位杂交方法检测渗出液细胞中ＴＧＦβ1；的ｍＲＮＡ表达量的变化；取人深Ⅱ度烧伤后５、７、１２ｄ手术得到烧伤皮肤及其临近的正常皮肤，采用ＲＴ－ＰＣＲ和免疫组化方法各时相烧伤皮肤及其临近的正常皮肤ＴＧＦβ１的ｍＲＮＡ与蛋白质的表达变化。结果在大鼠深Ⅱ度烧伤愈合时渗出液细胞中ＴＧＦβ１在５～１４ｄ有高表达。人深Ⅱ度烧伤后烧伤皮肤ＴＧＦβ１的ｍＲＮＡ和蛋白质在７ｄ出现表达峰，在其临近的正常皮肤中ＴＧＦβ1表达稳定。结论通过该研究说明在深Ⅱ度烧伤早期ＴＧＦβ１较高表达促进愈合，为临床合理应用外源性ＴＧＦβ１提高疗效，缩短疗程提供实验依据。

关键词： TGFβ1 烧伤愈合 RT-PCR 免疫组化

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基因工程可溶性MHC分子的研究和应用

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国外医学（分子生物学分册） 1999年第1期21卷 53-56页

作者：钱书兵陈诗书上海第二医科大学生物化学教研室分子生物学实验室上海200025

为了揭示TCR-抗原肽-MHC三元复合体的识别模式,利用基因工程技术构建的可溶性MHC分子,为此提供了有利工具。可溶性单链MHC分子具有与穿膜型分子相类似的功能,在体外已成功地应用于TCR与MHC分子之间的识别动力学研究及三维空间结构研究,... 详细信息

为了揭示TCR-抗原肽-MHC三元复合体的识别模式,利用基因工程技术构建的可溶性MHC分子,为此提供了有利工具。可溶性单链MHC分子具有与穿膜型分子相类似的功能,在体外已成功地应用于TCR与MHC分子之间的识别动力学研究及三维空间结构研究,并可能作为一种免疫调节分子起到治疗疾病作用。

关键词： MHC 基因工程研究可溶性MHC分子

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