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重组牛痘病毒介导的微小基因表达产物OVA257～264在真核细胞中的抗原呈递效率

Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2002年第6期34卷 719-724页

作者：钱丽钱关祥上海第二医科大学生物化学教研室、分子生物学实验室上海200025 上海第二医科大学生物化学教研室、分子生物学实验室

应用含重组OVA微小基因及全长基因的牛痘病毒感染能够稳定表达Kb 分子的多种真核细胞 ,通过构象特异的单克隆抗体 2 5 .D 1.16 (anti OVA2 57～ 2 64/Kb)检测细胞表面复合物的形成情况 ,并借助四聚体技术检测了它们对抗原特异性T细胞的... 详细信息

应用含重组OVA微小基因及全长基因的牛痘病毒感染能够稳定表达Kb 分子的多种真核细胞 ,通过构象特异的单克隆抗体 2 5 .D 1.16 (anti OVA2 57～ 2 64/Kb)检测细胞表面复合物的形成情况 ,并借助四聚体技术检测了它们对抗原特异性T细胞的诱导能力。结果表明四聚体的构建是成功的 ,进一步用已被重组牛痘病毒感染的L92 9 Kb 细胞作为抗原呈递细胞以诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)的产生 ,并对活化后特异性CTL进行检测 ,从胞外IFN γ的分泌情况看 ,诱导后的整个群体细胞发生了活化与增殖 ,H 2Kb OVA四聚体对特异性T细胞进行的结合分析与经典的细胞毒效应相一致。可见 ,重组牛痘病毒介导的微小基因产物OVA2 57～ 2 64不仅能为MHC I类分子的合成提供更有效的肽来源 ,且能更有效诱导特异性CTL的产生。

关键词：四聚体重组牛痘病毒微小基因 CTL 抗原肽

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维甲酸对人胃癌细胞诱导分化的研究

引用

中华肿瘤杂志 1994年第1期16卷 15-17页

作者：孙月霞何震平程枫陈诗书上海第二医科大学生物化学教研室分子生物学实验室

人胃癌细胞株ＳＧＣ７９０１经１０μｍｏｌ／Ｌ维甲酸（ＲＡ）处理后，将细胞接种裸鼠，观察其移植瘤生成率和瘤体重量比对照胃癌细胞显著降低和减小ｐ＜０．０１。透射电镜发现，胃癌细胞经ＲＡ作用后，其细胞形态发生改变，由椭圆形... 详细信息

人胃癌细胞株ＳＧＣ７９０１经１０μｍｏｌ／Ｌ维甲酸（ＲＡ）处理后，将细胞接种裸鼠，观察其移植瘤生成率和瘤体重量比对照胃癌细胞显著降低和减小ｐ＜０．０１。透射电镜发现，胃癌细胞经ＲＡ作用后，其细胞形态发生改变，由椭圆形、核大、核周边缘凹陷切迹，转变为长圆形或近似梭形、核小、核周边缘光滑无切迹。流式细胞仪检测结果，ＲＡ处理的胃癌细胞，其细胞周期发生改变，停留在Ｇ１／０期细胞百分比率比对照胃癌细胞显著上升Ｐ＜０．０５及Ｐ＜０．０１，而增殖期Ｓ和Ｇ２＋Ｍ期细胞百分比率比对照细胞显著下降Ｐ＜０．０５及Ｐ＜０．０１。结果表明：ＲＡ可从细胞生物学、细胞周期动力学及细胞形态学水平逆转入胃癌细胞表型，使该细胞株有一定程度的诱导分化。

关键词：维甲酸胃肿瘤肿瘤细胞培养

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细胞内RNA的原位杂交

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生物化学与生物物理进展 1989年第4期16卷 284-286页

作者：王敦瑞陈季汪肖钢于丽莉陈诗书上海第二医科大学生物化学教研室医学分子生物学实验室

本文介绍用原位杂交方法测定细胞内的RNA。该方法特异性较高,能保持细胞曲完整性。我们测定了不同细胞的rRNA基因的转录和原癌基因c-myc,c-H-rgs的转录,取得了较满意的结果。RNase处理细胞或质粒pBR322作探针,细胞中显影颗粒很少。本文... 详细信息

本文介绍用原位杂交方法测定细胞内的RNA。该方法特异性较高,能保持细胞曲完整性。我们测定了不同细胞的rRNA基因的转录和原癌基因c-myc,c-H-rgs的转录,取得了较满意的结果。RNase处理细胞或质粒pBR322作探针,细胞中显影颗粒很少。本文对原位杂交方法学进行了初步的讨论。

关键词： RNA 细胞原位杂交

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造血系统来源的细胞株和人急性淋巴细胞白血病细胞...

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中华微生物学和免疫学杂志 1989年第5期9卷 277-281页

作者：仇一华陈诗书上海第二医科大学生物化学教研室分子生物学实验室

本文报导用Southern、Northern印迹法及快速mRNA检测法，对4株处于分化较早阶段的造血系统来源的HL-60、Jurkat、Daudi、Raji细胞株及17例急性淋巴细胞白血病（ALL）中的T细胞受体（TCR）β基因的重排及转录物进行测定。①Jurkat细胞的T... 详细信息

本文报导用Southern、Northern印迹法及快速mRNA检测法，对4株处于分化较早阶段的造血系统来源的HL-60、Jurkat、Daudi、Raji细胞株及17例急性淋巴细胞白血病（ALL）中的T细胞受体（TCR）β基因的重排及转录物进行测定。①Jurkat细胞的TCR β基因有重排，而HL-60、Daudi及Raji细胞无重排。②9例T-ALL中有8例发生TCR β基因重排，但在3例B-ALL中有2例，5例非T非B-ALL中也有3例发生TCRβ基因重排。③Jurkat细胞的TCRβ转录物为1.3Kb及1.0Kb（不完全产物）。部分B细胞出现不完全转录物。④8例T-ALL有6例表达，5例非T非B-ALL中有4例表达，3例B-ALL有1例表达。但表达水平有明显差异。说明向T系发育分化的细胞大多数发生TCRβ基因的重排和表达；但有些非T系的白血病细胞也有TCRβ基因的重排。某些T-ALL细胞TCRβ基因重排后无转录物测出，反之有些白血病细胞无明显重排却有部分转录。这些现象可能与细胞异常分化和白血病发生、发展有关。

关键词：白血病 T细胞受体基因

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单纯性生长激素缺乏症的一个家系调查

引用

中华内分泌代谢杂志 1994年第3期10卷 183-184页

作者：王亚新何友爱张来仪于丽莉陈诗书上海第二医科大学生物化学教研室分子生物学实验室

单纯性生长激素缺乏症的一个家系调查王亚新，何友爱，张来仪，于丽莉，陈诗书人生长激素（ｈｕｍａｎｇｒｏｗｔｈｈｏｒｍｏｎｅ，ｈＧＨ）缺乏可有多种原因引起。ｈＧＨ基因缺失是其中之一，命名为单纯性生长激素缺乏症Ｉ－Ａ型（Ｉ... 详细信息

单纯性生长激素缺乏症的一个家系调查王亚新，何友爱，张来仪，于丽莉，陈诗书人生长激素（ｈｕｍａｎｇｒｏｗｔｈｈｏｒｍｏｎｅ，ｈＧＨ）缺乏可有多种原因引起。ｈＧＨ基因缺失是其中之一，命名为单纯性生长激素缺乏症Ｉ－Ａ型（ＩＧＨＤ－ＩＡ）。我们在１９８８年用...

关键词：遗传病单纯性生长激素缺乏症家系调查

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人原发胃癌,裸鼠人胃癌移植瘤有人胃细胞株中...

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中华肿瘤杂志 1991年第6期13卷 433-435页

作者：孙月霞何震平上海第二医科大学生物化学教研室分子生物学实验室 200025

我们对人原发胃癌组织及相应“正常”胃组织、不同传代的裸鼠人原发性胃癌移植瘤及三种不同人胃癌细胞株进行胃蛋白酶原(PG)和乳酸脱氢酶(LDH)活力及其同功酶谱的比较。结果表明,人“正常”胃组织PG同功酶基因高度表达, PG活力较高; LD... 详细信息

我们对人原发胃癌组织及相应“正常”胃组织、不同传代的裸鼠人原发性胃癌移植瘤及三种不同人胃癌细胞株进行胃蛋白酶原(PG)和乳酸脱氢酶(LDH)活力及其同功酶谱的比较。结果表明,人“正常”胃组织PG同功酶基因高度表达, PG活力较高; LDH同功酶谱呈H型, LDH活力较低。而原发胃癌组织、裸鼠人胃癌移植瘤组织及三种人胃癌细胞株的PG同功酶基因均低度表达, PG活力均比“正常”胃组织呈非常显著性降低(P＜0.001); LDH同功酶均呈M型, LDH活力均比人“正常”胃组织呈非常显著性增高(P＜0.001, P＜0.01)。实验结果提示:裸鼠人胃癌移植瘤与原发胃癌组织性质接近,可作为研究胃癌分子生物学的模型。

关键词：胃蛋白酶原同功酶酶谱胃癌细胞株

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cmv-3′LTR嵌合启动子对逆转录病毒载体MFG滴度及外源基因表达的影响

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病毒学报 2003年第3期19卷 235-239页

作者：戴冰冰梅文瀚王家敏杨蓉钱关祥卢健上海第二医科大学生物化学教研室分子生物学实验室上海200025

为减轻逆转录病毒载体介导的外源基因的沉默,进一步提高逆转录病毒载体MFG介导的外源基因的表达水平,同时探讨逆转录病毒3′端长末端重复序列(long terminalrepeat,LTR)内U3区对病毒基因表达的影响,将逆转录病毒载体3′端LTR内的U3区用... 详细信息

为减轻逆转录病毒载体介导的外源基因的沉默,进一步提高逆转录病毒载体MFG介导的外源基因的表达水平,同时探讨逆转录病毒3′端长末端重复序列(long terminalrepeat,LTR)内U3区对病毒基因表达的影响,将逆转录病毒载体3′端LTR内的U3区用cmv核心增强子、启动子序列替代,同时去除了3个与逆转录病毒载体启动子甲基化有关的序列NCR、DR,并以egfp为报告基因,构建了MFG egfp和MFG egfp cmv表达载体。结果显示:利用cmv启动子替代MFG载体3′端LTR的U3启动子序列,会显著降低MFG载体的病毒滴度及其介导的外源报告基因的表达。提示利用cmv启动子替代病毒载体的3′端LTR内的U3区,并不是提高MoMLV(moloneymurineleukemivirus)逆转录病毒载体介导外源基因的表达及其病毒滴度的理想策略。结果也同时提示:在MoMLV逆转录病毒3′端LTR的U3区,可能存在与病毒RNA加工、成熟及稳定性有关的信号序列。

关键词：嵌合启动子逆转录病毒载体外源基因基因表达

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人胃癌转移型裸鼠移植瘤cDNA文库构建及分析

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肿瘤 1993年第5期13卷 233-236页

作者：王文芳章有章陈诗书上海第二医科大学生物化学教研室分子生物学实验室上海市200025

从人转移型胃癌裸鼠移植瘤中抽提出总ＲＮＡ，分离出多聚腺苷酸ＲＮＡ，合成双链ｃＤＮＡ，接上ＥＣｏＲＩ接头，以ｐＴ７Ｔ３１８Ｕ质粒为载体，以大肠杆菌ＮＭ５２２为受体菌，构建了人转移型胃癌裸鼠移植瘤ｃＤＮＡ文库。该文库含... 详细信息

从人转移型胃癌裸鼠移植瘤中抽提出总ＲＮＡ，分离出多聚腺苷酸ＲＮＡ，合成双链ｃＤＮＡ，接上ＥＣｏＲＩ接头，以ｐＴ７Ｔ３１８Ｕ质粒为载体，以大肠杆菌ＮＭ５２２为受体菌，构建了人转移型胃癌裸鼠移植瘤ｃＤＮＡ文库。该文库含１．５×１０＾６转化子，插入片段ｃＤＮＡ长度为０．４～６．０Ｋｂ，重组效率为８０％，并用四种癌基因探针筛选了阳性克隆。

关键词： cDNA文库裸鼠移植瘤胃肿瘤癌

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风疹病毒感染与优生

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国外医学（微生物学分册） 1995年第2期18卷 10-12页

作者：龚若沐上海第二医科大学生物化学教研室分子生物学实验室

风疹病毒是引起先天异常的主要病原体之一,本文从风疹病毒的致病作用、发病机理作一综述,以期对风疹病毒先天感染及其严重危害有较全面的认识。

关键词：优生风疹病毒感染病理致病机理先天性畸形

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鼻咽癌中Epetein－Barr病毒基因结构特点

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中国病毒学 1995年第1期10卷 28-33页

作者：姜志龙卢健陈诗书上海第二医科大学生物化学教研室分子生物学实验室

鼻咽癌中感染的ＥＢＶ以潜伏态存在，只有少数基因得到表达。我们从分子生物学水平研究其潜伏机制。已知ＢＺＬＦｌ基因和ＢａｍＨＩＥＺ片段内部分基因对ＥＢＶ的复制激活起关键作用。我们用体外基因扩增（ＰＣＲ）法扩增ＢＺＬＦｌ基... 详细信息

鼻咽癌中感染的ＥＢＶ以潜伏态存在，只有少数基因得到表达。我们从分子生物学水平研究其潜伏机制。已知ＢＺＬＦｌ基因和ＢａｍＨＩＥＺ片段内部分基因对ＥＢＶ的复制激活起关键作用。我们用体外基因扩增（ＰＣＲ）法扩增ＢＺＬＦｌ基因外显子－１序列，并用序列分析法研究了该基因结构特点。此外，检测了ＢａｍＨＩＥＺ片段内缺失，结果发现２１例鼻咽癌（ＮＰＣ）组织中，ｌｌ例有ＢａｍＨＩＥＺ片段内缺失，长２．９９ｋｂ，与潜伏态存在的ＲａｊｉＥＢＶ类似。提示鼻咽癌小的ＥＢＶ以潜伏态存在，与ＮＰＣ发病有关。

关键词：鼻咽肿瘤 EB病毒基因结构聚合酶链反应

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