自人脑胶质瘤手术标本中提取mRNA,逆转录合成cDNA,在T_4DNA 连接酶作用下,与一头是平末端,另一头是EcoR I 粘性末端、内含Not I 切点的插头相连,经T_4多聚核苷酸激酶磷酸化后,再与脱磷酸处理过的λgt11 臂连接,形成重组λgt11DNA。体外...
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自人脑胶质瘤手术标本中提取mRNA,逆转录合成cDNA,在T_4DNA 连接酶作用下,与一头是平末端,另一头是EcoR I 粘性末端、内含Not I 切点的插头相连,经T_4多聚核苷酸激酶磷酸化后,再与脱磷酸处理过的λgt11 臂连接,形成重组λgt11DNA。体外包装,构建了一个库容量含1.02×10~6重组子的人脑胶质瘤cDNA 基因文库。克隆效率为1.08×10~7pfu/μg cDNA。重组百分比为96.2%。
我们用聚合酶链反应(PCR)检测弓形虫基因组的方法诊断弓形虫病具有特异、灵敏、快速的优点。从弓形虫(ZS株)基因组文库中筛选出弓形虫特异DNA 片段的克隆(1.1kb),对该克隆的片段以噬菌体M13mp18为载体,用双脱氧核苷酸末端终止法进行了部分顺序分析。根据所得 DNA 顺序的数据,设计并合成若干长度为19—20NT 的特异的寡核苷酸引物对,并建立体外扩增弓形虫特异 DNA 顺序的聚合酶链反应
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