检索结果-内蒙古大学图书馆

上海第二医科大学学报 2004年第4期24卷 288-292页

作者：张杰刘伟丛笑倩徐展远殷德民曹颖崔磊曹谊林上海第二医科大学第九人民医院整复外科上海市组织工程研究与开发中心上海200011 上海市儿童医院泌尿外科

目的评价细胞外基质差速粘附法在分选表皮干细胞中的作用。方法人角质形成细胞接种在Ⅳ 型胶原涂被的培养皿上进行粘附试验。粘附细胞为实验组,未粘附细胞及未分选的细胞分别为对照组1和对照组2。三组细胞分别进行克隆形成率测定、细... 详细信息

目的评价细胞外基质差速粘附法在分选表皮干细胞中的作用。方法人角质形成细胞接种在Ⅳ 型胶原涂被的培养皿上进行粘附试验。粘附细胞为实验组,未粘附细胞及未分选的细胞分别为对照组1和对照组2。三组细胞分别进行克隆形成率测定、细胞周期测定和细胞超微结构观察;应用免疫细胞化学、免疫荧光和流式细胞仪检测β1整合素、细胞角蛋白K19、外皮蛋白(Involucrin)等标记物的表达。结果与对照组1相比,实验组细胞较小,细胞表面的微绒毛较长而密。实验组细胞克隆形成率明显高于对照组1(P<0.05)。β1整合素、K19、Involucrin在不同组别和不同代次的细胞间表达有显著差别。细胞周期分析显示,实验组细胞86.9％处于G0/G1,8.8％在S期。对照组1和对照组2的细胞处于G0/G1期分别为74％和79.5％,处于S期分别为19.2％和12.3％。结论细胞外基质差速粘附法可用于分选表皮干细胞。但要达到较高纯度,还需辅以其它手段。

关键词：表皮干细胞粘附试验细胞外基质克隆细胞周期流式细胞仪

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人表皮干细胞在两种培养体系中生长增殖的比较研究

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上海第二医科大学学报 2004年第4期24卷 284-287,295页

作者：张杰刘伟丛笑倩徐展远马东瑞滕晓进崔磊曹谊林上海第二医科大学第九人民医院整复外科上海市组织工程研究与开发中心上海200011 上海市儿童医院泌尿外科

目的比较表皮干细胞(KSC)在两种体外培养体系中的生长增殖状况。方法用差速粘附法分离出的KSC,分别置于无饲养层、无血清培养基以及有饲养层、有血清培养基的培养条件下培养。比较KSC在两种培养体系中的生长增殖、克隆形成率、生长曲... 详细信息

目的比较表皮干细胞(KSC)在两种体外培养体系中的生长增殖状况。方法用差速粘附法分离出的KSC,分别置于无饲养层、无血清培养基以及有饲养层、有血清培养基的培养条件下培养。比较KSC在两种培养体系中的生长增殖、克隆形成率、生长曲线和KSC相关标记物的表达等指标。结果在第二种培养条件下,KSC在生长过程中不存在明显的接触抑制,在较长的体外培养时间内始终保持较高的增殖潜能。两种培养体系间KSC的克隆形成率有显著差异(P<0.01)。流式细胞仪检测两种培养体系间整合素β1阳性率无显著差异,而强阳性率则有显著性差异(P<0.05)。结论体外培养和扩增KSC时,使用人成纤维制备的饲养层和含胎牛血清的培养基,较无饲养层、无血清的培养基,更有利于KSC的扩增及其表型的维持。

关键词：表皮干细胞细胞培养细胞增殖差速粘附法流式细胞仪

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软骨细胞与骨髓基质细胞共培养体外构建软骨的初步研究

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上海第二医科大学学报 2004年第4期24卷 246-249,283页

作者：苗春雷周广东刘天一王晓云崔磊刘伟唐胜建曹谊林上海第二医科大学第九人民医院整复外科上海市组织工程研究与开发中心上海200235 潍坊医学院整形外科医院

目的探讨不同浓度软骨细胞提供的软骨微环境诱导骨髓基质干细胞(BMSC)体外构建软骨的可行性。方法将体外分别培养扩增的猪BMSC与耳软骨细胞按不同比例混合(9:1,8:2),均以5.0×107/mL的细胞终浓度接种于聚羟基乙酸/聚乳酸(PGA/PLA... 详细信息

目的探讨不同浓度软骨细胞提供的软骨微环境诱导骨髓基质干细胞(BMSC)体外构建软骨的可行性。方法将体外分别培养扩增的猪BMSC与耳软骨细胞按不同比例混合(9:1,8:2),均以5.0×107/mL的细胞终浓度接种于聚羟基乙酸/聚乳酸(PGA/PLA)支架作为共培养组,以相同终浓度的单纯软骨细胞和单纯BMSC分别接种作为阳性及阴性对照,以20％上述浓度的单纯软骨细胞接种作为低软骨细胞浓度对照。各标本于体外培养4周时取材,通过大体观察、组织学以及免疫组化等方法对新生软骨进行初步评价。结果各组细胞均与材料粘附良好。8:2共培养组及阳性对照组在体外培养4周时,外观已类似软骨组织并基本保持了材料的大小和形状,组织学显示有较连续的成熟软骨形成,免疫组化也均显示有大量Ⅱ型胶原分泌。9:1共培养组在培养过程中稍有缩小和变形,组织学上仅在培养物的边缘可见到连续的软骨样组织。阴性对照组明显皱缩变形,组织学未见成熟软骨陷窝。低软骨细胞浓度组复合物明显变薄,只在局部形成了不连续的软骨组织,新生软骨量明显少于共培养各组及阳性对照组。结论软骨细胞能够提供软骨微环境诱导BMSC成软骨分化并形成软骨,20％浓度的软骨细胞已能够达到良好的诱导效果。

关键词：软骨细胞骨髓基质细胞细胞共培养组织工程微环境胶原软骨缺损生物材料

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体外诱导大鼠骨髓内皮祖细胞(EPCs)成内皮细胞的实验研究

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中华创伤骨科杂志 2004年第10期6卷 1154-1159页

作者：崔磊于海莹尹烁刘伟曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整形外科上海组织工程研究与开发中心上海市200011

目的体外诱导大鼠骨髓内皮祖细胞(EPCs)成内皮细胞,探索其作为血管组织工程内皮种子细胞的可行性。方法冲洗大鼠骨髓腔,通过密度梯度离心得到单个核细胞;按诱导(M199,20%FBS,VEGF10ng/mL,bFGF2ng/mL)和未诱导(M199,20%FBS)分组培养骨髓... 详细信息

目的体外诱导大鼠骨髓内皮祖细胞(EPCs)成内皮细胞,探索其作为血管组织工程内皮种子细胞的可行性。方法冲洗大鼠骨髓腔,通过密度梯度离心得到单个核细胞;按诱导(M199,20%FBS,VEGF10ng/mL,bFGF2ng/mL)和未诱导(M199,20%FBS)分组培养骨髓单个核细胞,体外培养至第二代;免疫细胞荧光分别检测诱导组和未诱导组细胞VWF、VEGFR-2、VE-cadherin和PECAM-1的表达;流式细胞仪分别检测骨髓单个核细胞、诱导组细胞和未诱导组细胞VEGFR-2、VE-cadherin和PECAM-1表达率;诱导组细胞接种于胶原凝胶中三维培养,观察血管生成能力。结果诱导组原代细胞呈小梭形,5～7d时出现典型的线样结构,P2、P3细胞逐渐成内皮细胞典型铺路石样结构,未诱导细胞未见这两种典型结构;免疫细胞荧光发现,诱导组细胞有VWF、VEGFR-2、VE-cadherin和PECAM-1表达,未诱导组未见明显表达;流式细胞仪检测显示三种标记(VEGFR-2、VE-cadherin和PECAM-1)在原代时的比例均不到总细胞数5%,经两代培养后,诱导组中阳性细胞率高于35%,未诱导组阳性细胞率明显低于诱导组(P<0.01);三维培养状态下诱导组细胞集落在胶原内有“出芽式”生长。结论本实验建立了一套骨髓EPCs分离、诱导培养和表型检测的方法;以VEGF和bFGF为主要诱导因子的诱导体系,对骨髓EPCs成内皮细胞?

关键词：骨髓内皮祖细胞内皮细胞组织工程

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人骨髓间充质干细胞向软骨细胞诱导分化的实验研究

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中华创伤骨科杂志 2004年第2期6卷 194-198页

作者：舒朝锋崔磊刘伟曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科上海市组织工程研究与开发中心上海市200233

目的研究人骨髓间充质干细胞(humanmarrowmesenchymalstemcells,hMSCs)在体外单层培养条件下诱导分化为软骨细胞的可行性。方法取志愿者骨髓9例,密度梯度离心获得hMSCs,进行诱导培养。光镜下观察诱导细胞形态学的改变,免疫组化、原位杂... 详细信息

目的研究人骨髓间充质干细胞(humanmarrowmesenchymalstemcells,hMSCs)在体外单层培养条件下诱导分化为软骨细胞的可行性。方法取志愿者骨髓9例,密度梯度离心获得hMSCs,进行诱导培养。光镜下观察诱导细胞形态学的改变,免疫组化、原位杂交、RT-PCR等方法检测胶原和糖蛋白的体外表达情况。结果经诱导后hMSCs形态由长梭形逐渐向多角形转变,原位杂交、免疫组化等检测到Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原表达,RT-PCR检测到Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅹ、Ⅺ型胶原、aggrecan等mRNA表达。结论hMSCs单层诱导培养条件下,能分泌软骨细胞特征性细胞外基质如Ⅱ型胶原、aggrecan等,具有作为软骨组织工程种子细胞来源的可能。

关键词：骨髓间充质干细胞软骨细胞细胞形态学细胞分化细胞培养细胞外基质组织工程种子细胞

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组织工程化表皮膜片构建及其在供皮区的应用研究

组织工程化表皮膜片构建及其在供皮区的应用研究

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中国康复医学会修复重建外科专业委员会第十四次全国学术交流会

作者：杨光辉杨军崔磊刘伟曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科上海组织工程研究与开发中心

目的:构建组织工程化表皮细胞膜片并应用于供皮区创面治疗。方法:利用患者少量自体或同种异体正常皮肤分离、培养、扩增的表皮细胞,接种于壳聚糖,明胶膜构建成表皮细胞膜片;将膜片移植于供皮区创面、适度加压,同时设立对照组:空白材料... 详细信息

目的:构建组织工程化表皮细胞膜片并应用于供皮区创面治疗。方法:利用患者少量自体或同种异体正常皮肤分离、培养、扩增的表皮细胞,接种于壳聚糖,明胶膜构建成表皮细胞膜片;将膜片移植于供皮区创面、适度加压,同时设立对照组:空白材料对照区以及传统油纱布区覆盖创面。术后5天--10天、30天、90天行大体观察、组织学检查、广谱角蛋白、外皮蛋白、层粘连蛋白、免疫组织化学检测以及Ⅰ、Ⅲ型胶原比值测定(偏光显微镜、RT-PCR)、异体移植后的Y染色体鉴定(RT-PCR)。结果:利用自体及异体表皮细胞和壳聚糖/明胶膜能够构建出人表皮细胞膜片,应用于临床供皮区创面治疗15例,经过3月随访,疗效肯定(创面愈合时间8.1±1.3天、空白材料对照区为16.2±3.8天、空白油纱布对照区为23.0±5.8天。移植膜片存活良好、结构较完整、术后30天及90天观察:12例无明显增生,3例有轻度增生(20.0%)而空白油纱布对照区11例遗留增生性瘢痕(74.4%)(X2=16.25,P<0.01);)结论:表皮细胞-壳聚糖/明胶膜片能促进供皮区创面早期愈合并减少后期瘢痕增生,具有良好治疗效果。

关键词：供皮区创面细胞膜片明胶膜壳聚糖组织工程化对照区

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天衣无缝补颅骨

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大众医学 2004年第1期 10-11页

作者：柴岗上海第二医科大学附属上海第九人民医院整形外科上海组织工程研究与开发中心博士

那天,正逢整形外科主任曹教授坐诊.一进门,老伯指着手中的报纸对曹教授说:'报纸上介绍你们医院可以用细胞来修补人的头盖骨.我孙子的病情和报纸上说的一模一样,请你们一定要帮忙修补好我孙子的头盖骨.'

关键词：

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荧光活性染料DiI标记观察人骨髓基质干细胞与部分脱钙骨粘附的实验研究

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中华创伤骨科杂志 2004年第3期6卷 311-314页

作者：李东崔磊舒朝锋柳向东张英柴岗刘伟曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科上海市组织工程研究与开发中心上海市组织工程研究重点实验室上海市200011

目的通过荧光活性染料DiI标记观察骨髓基质干细胞在部分脱钙骨上的粘附。方法用DiI标记人骨髓基质干细胞,接种于部分脱钙骨上,测定细胞的粘附率。于接种后第2、4、7天激光共聚焦显微镜观察细胞在支架材料上的生长状况。结果DiI标记的骨... 详细信息

目的通过荧光活性染料DiI标记观察骨髓基质干细胞在部分脱钙骨上的粘附。方法用DiI标记人骨髓基质干细胞,接种于部分脱钙骨上,测定细胞的粘附率。于接种后第2、4、7天激光共聚焦显微镜观察细胞在支架材料上的生长状况。结果DiI标记的骨髓基质干细胞的粘附率为(99.9±0.2)%,未标记的骨髓基质干细胞粘附率为(99.1±1)%,两者无统计学差异(P>0.05);第7天时细胞脱钙骨内孔覆盖。结论荧光活性染料DiI标记不影响骨髓基质干细胞在部分脱钙骨支架上的粘附,是观察骨髓基质干细胞在脱钙骨支架上粘附状况的较好方法。

关键词：荧光活性染料 DiI 骨髓基质干细胞脱钙骨支架材料组织工程

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利用聚羟基乙酸构建组织工程皮肤的实验研究

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中华实验外科杂志 2003年第11期20卷 984-985,T001页

作者：杨光辉崔磊刘伟曹谊林上海组织工程研究与开发中心上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科 200235

目的　以聚羟基乙酸 (PGA)为培养支架 ,用组织工程方法在体外构建双层、有活性皮肤。方法　应用酶消化法分别获取人成纤维细胞 (FB)和表皮角质形成细胞 (KC) ,体外扩增培养。接种HF与PGA上 1周后 ,在复合物表面接种KC ,共培养 1周将复... 详细信息

目的　以聚羟基乙酸 (PGA)为培养支架 ,用组织工程方法在体外构建双层、有活性皮肤。方法　应用酶消化法分别获取人成纤维细胞 (FB)和表皮角质形成细胞 (KC) ,体外扩增培养。接种HF与PGA上 1周后 ,在复合物表面接种KC ,共培养 1周将复合物置于气液界面继续培养。于不同时间段取材 ,行组织学、超微结构及免疫组织化学检测。结果　接种表皮角质形成细胞在“FB PGA”复合物表面 1周后可见 2～ 3层连续的HK在复合物上生长良好 ;4周时PGA已部分降解 ,表皮分层分化较完善 ,抗involucrin染色阳性 ,透射电镜观察可见表皮细胞分层分化良好 ,细胞的相邻面有桥粒连接。结论　采用组织工程技术可以在体外构建双层、有活性的人工皮肤 ;组织工程皮肤具有和正常皮肤相似的组织学特征及生化成分。

关键词：聚羟基乙酸组织工程实验人工皮肤人成纤维细胞人表皮角质形成细胞

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组织工程技术修复全层皮肤缺损的研究

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中华实验外科杂志 2003年第5期20卷 408-410页

作者：杨光辉崔磊刘伟曹谊林上海组织工程研究与开发中心上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科 200011

目的　探讨用异体脱细胞真皮基质 (ADM )复合自体表皮角朊细胞 (AKCs)移植修复全层皮肤缺损的可行性。方法　用DispaseII/TritonX 10 0制备ADM。在猪背部两侧分别作 5cm× 5cm的全层皮肤缺损 ,用ADM覆盖创面。 7～ 10d后 ,将AKCs与P... 详细信息

目的　探讨用异体脱细胞真皮基质 (ADM )复合自体表皮角朊细胞 (AKCs)移植修复全层皮肤缺损的可行性。方法　用DispaseII/TritonX 10 0制备ADM。在猪背部两侧分别作 5cm× 5cm的全层皮肤缺损 ,用ADM覆盖创面。 7～ 10d后 ,将AKCs与Pluronic混匀涂布于一侧ADM表面 ,另一侧单纯ADM组作为对照组。术后观察愈合情况 ,比较创面收缩率 ,取材作组织学及电镜观察。结果　ADM去除了所有细胞成分 ,胶原束结构及排列均保持正常 ;ADM在创面成活 ,能诱导成纤维细胞长入和新生血管形成 ,并支持移植于其表面的AKCs生长。 4周时 ,对照组收缩至原面积的 41% ,实验组为原面积的 65 %。结论　ADM可以作为重建真皮层的诱导支架 ;ADM与AKCs复合移植可以形成新生皮肤并修复全层皮肤缺损。

关键词：组织工程修复全层皮肤缺损表皮角朊细胞移植

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