检索结果-内蒙古大学图书馆

上海第二医科大学学报 2004年第4期24卷 307-310,318页

作者：王爱丽胡晓洁李卿崔磊刘伟曹谊林上海第二医科大学第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室上海200011

目的研究兔角膜基质细胞在体外长期培养传代过程中,细胞增殖能力和胞外基质表达水平的改变。方法取体外培养兔角膜基质细胞,由光镜对各代细胞的形态学变化进行观测。通过对各代细胞生长曲线的绘制,得出其各自的群体倍增时间;MTT法比... 详细信息

目的研究兔角膜基质细胞在体外长期培养传代过程中,细胞增殖能力和胞外基质表达水平的改变。方法取体外培养兔角膜基质细胞,由光镜对各代细胞的形态学变化进行观测。通过对各代细胞生长曲线的绘制,得出其各自的群体倍增时间;MTT法比较各代细胞增殖能力的改变。RT-PCR和Western杂交检测各代细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原表达水平的改变;爱茜蓝法检测糖胺聚糖(GAG)的含量。结果体外培养兔角膜基质细胞随着传代的进程,逐渐显现衰老的形态特征。细胞群体倍增时间由第7代起显著延长(P<0.01);MTT比色法的结果亦显示,第7代细胞的增殖能力开始大幅下降(P<0.01)。第9-11代时,Ⅰ、Ⅲ型胶原在mRNA和蛋白水平的表达都有明显减少(P<0.01),降至第1代细胞的30％左右;GAG的含量也降至40％左右。结论兔角膜基质细胞经历长期体外培养后,细胞增殖能力和胞外基质表达水平显著下降,逐渐丧失原有的功能。但作为构建组织工程化角膜的种子细胞,在它的生物学特性未发生改变之前,经3次传代培养,获取的细胞量达到组织块消化所得细胞的240倍左右,已足以用于构建之用。

关键词：角膜基质细胞细胞培养生物学特性细胞外基质细胞增殖 MTT比色法

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软骨细胞老化特征及机制的研究进展

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上海第二医科大学学报 2004年第4期24卷 322-324,F003页

作者：张艳柴岗刘伟崔磊曹谊林上海第二医科大学第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室上海200011

软骨细胞的老化是一个极其复杂的过程,其特征包括:细胞不可逆的生长停滞于G1期;老化相关β-半乳糖苷酶的表达;端粒长度缩短;软骨细胞分化特征的改变。目前认为其机制为基因表达的程序性或减进性改变,包括肿瘤抑制基因p53和pRb等在细胞... 详细信息

软骨细胞的老化是一个极其复杂的过程,其特征包括:细胞不可逆的生长停滞于G1期;老化相关β-半乳糖苷酶的表达;端粒长度缩短;软骨细胞分化特征的改变。目前认为其机制为基因表达的程序性或减进性改变,包括肿瘤抑制基因p53和pRb等在细胞生长停滞中的作用;端粒结合蛋白和端粒酶对端粒长度的调节;细胞骨架蛋白的重组使软骨细胞形态的变化;基质降解酶类表达增加以及各种细胞因子的变化对软骨细胞代谢的影响。

关键词：软骨细胞细胞老化细胞增殖去分化 β-半乳糖苷酶肿瘤抑制基因

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含GFP基因的逆转录病毒与VSV-G蛋白重组形成高滴度假病毒

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上海第二医科大学学报 2004年第4期24卷 315-318页

作者：陈瑾君刘伟刘德莉陆峻泓李卿崔磊曹谊林上海第二医科大学第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室上海200011

目的通过与疱疹性口腔炎病毒糖蛋白G基因(VSV-G)蛋白重组,提高含绿色荧光蛋白(GFP)基因逆转录病毒的感染效率,并使其经受超速离心以达到进一步浓缩。方法应用GFP-RV质粒转染PT67细胞并用G418筛选出GFP阳性克隆,利用其产生的病毒上清... 详细信息

目的通过与疱疹性口腔炎病毒糖蛋白G基因(VSV-G)蛋白重组,提高含绿色荧光蛋白(GFP)基因逆转录病毒的感染效率,并使其经受超速离心以达到进一步浓缩。方法应用GFP-RV质粒转染PT67细胞并用G418筛选出GFP阳性克隆,利用其产生的病毒上清液再转染GP2-293细胞,在G418筛选的同时,瞬时转染VSV-G基因。收集该GP2-293细胞产生的重组病毒作滴度测定,并通过低温超速离心制成含GFP病毒的浓缩液,再感染NIH3T3细胞,观察GFP在NIH3T3细胞内的表达情况。结果 GFP-RV质粒转染PT67细胞产生的GFP阳性克隆,随着细胞传代过程,GFP的表达逐渐减弱。GP2-293细胞转染VSV-G基因后可产生(7.5±1.4)×105cfu/mL的GFP重组假病毒,将其浓缩液转染NIH3T3细胞,可见GFP在细胞内有较强的表达。结论逆转录病毒与VSV-G共转染GP2-293包装细胞可以形成高滴度的假病毒,由此得到含GFP基因的病毒上清液,其在组织工程中应用范围更广泛。

关键词： GFP基因逆转录病毒假病毒疱疹性口腔炎病毒基因转染克隆组织工程

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生长因子在人肌腱细胞和皮肤成纤维细胞中的表达差异

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上海第二医科大学学报 2004年第4期24卷 271-274页

作者：翟华玲许锋曹德君魏娴崔磊刘伟曹谊林上海第二医科大学第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室上海200011

目的对几种重要的生长因子在正常人体皮肤、肌腱中的表达差异进行研究。方法体外培养人肌腱细胞和人皮肤成纤维细胞,观察细胞的形态特点;用基因芯片、免疫组化、免疫细胞化学、RT-PCR的方法对肌腱细胞和成纤维细胞的几种生长因子进行... 详细信息

目的对几种重要的生长因子在正常人体皮肤、肌腱中的表达差异进行研究。方法体外培养人肌腱细胞和人皮肤成纤维细胞,观察细胞的形态特点;用基因芯片、免疫组化、免疫细胞化学、RT-PCR的方法对肌腱细胞和成纤维细胞的几种生长因子进行检测及比较。结果所测生长因子中除转化生长因子-βⅡ型受体(TGF-βRⅡ)、类胰岛素生长因子-结合蛋白3(IGF-BP3)外,其余在肌腱细胞和成纤维细胞中的表达均无明显的差异。结论人成纤维细胞与人肌腱细胞的生长因子表达基本相似,通过对皮肤成纤维细胞的某些特性的改造,可以使其成为构建组织工程化肌腱的种子细胞。

关键词：生长因子肌腱细胞皮肤成纤维细胞表达差异组织工程种子细胞

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应用GFP标记技术示踪裸鼠体内组织工程化骨的形成

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上海第二医科大学学报 2004年第4期24卷 235-237,266页

作者：袁捷刘德莉周广东苗春雷崔磊刘伟曹谊林上海第二医科大学第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室上海200011

目的应用绿色荧光蛋白(GFP)标记技术,观察组织工程化骨体内形成过程中种子细胞的变化与转归。方法用GFP重组逆转录病毒载体(GFP-RV)转染犬骨髓基质干细胞(BMSCs),将其接种于β-磷酸三钙(β-TCP),形成细胞一材料复合物,移植于裸鼠皮下... 详细信息

目的应用绿色荧光蛋白(GFP)标记技术,观察组织工程化骨体内形成过程中种子细胞的变化与转归。方法用GFP重组逆转录病毒载体(GFP-RV)转染犬骨髓基质干细胞(BMSCs),将其接种于β-磷酸三钙(β-TCP),形成细胞一材料复合物,移植于裸鼠皮下。术后8周,HE染色观察组织结构,碱性磷酸酶(AKP)染色和骨钙素(OCN)免疫组化检测功能蛋白,激光共聚焦显微镜下对GFP进行示踪观察。结果 8周后,大体可见组织工程化新骨形成,组织学示新生骨小梁围绕材料孔隙生成,AKP染色和OCN免疫组化结果阳性,并可见新生组织内有呈绿色的GFP标记细胞,β-TCP部分降解。结论组织工程化骨组织学结构与松质骨小梁类似。新生组织表达GFP,证实组织工程化骨组织的形成来源于供体细胞。

关键词：绿色荧光蛋白标记技术组织工程骨组织重组逆转录病毒载体 β-磷酸三钙供体细胞

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内皮型一氧化氮合酶腺病毒表达载体的构建与鉴定

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上海第二医科大学学报 2004年第9期24卷 717-719页

作者：陆平蔡文玮盛净刘德莉夏万尧刘伟上海第二医科大学第九人民医院老年病科上海200011 上海市组织工程研究重点实验室整复外科

目的构建重组内皮型一氧化氮合酶(eNOS)腺病毒表达系统载体。方法 eNOS的cDNA插入pcDNA3.1(-)中,进行DNA测序、酶切鉴定;插入片段用Xbal和AflⅡ双酶切后连接到pshuttle中,并予酶切鉴定;用P1-sce Ⅰ和Ⅰ-ceu Ⅰ双酶切下pshuttle中eNOS的... 详细信息

目的构建重组内皮型一氧化氮合酶(eNOS)腺病毒表达系统载体。方法 eNOS的cDNA插入pcDNA3.1(-)中,进行DNA测序、酶切鉴定;插入片段用Xbal和AflⅡ双酶切后连接到pshuttle中,并予酶切鉴定;用P1-sce Ⅰ和Ⅰ-ceu Ⅰ双酶切下pshuttle中eNOS的cDNA插入腺病毒载体,通过PCR鉴定。结果正确构建重组eNOS腺病毒表达系统,并被目的基因的PCR鉴定证实。结论重组腺病毒表达载体构建正确,为其在预防经皮腔内动脉成形术术后再狭窄基因转染奠定基础。

关键词：腺病毒 NOS 内皮型一氧化氮合酶鉴定动脉成形术腔内 PCR 表达系统酶切表达载体

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角质干细胞及其在皮肤组织工程中的应用前景

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中国实用美容整形外科杂志 2004年第1期15卷 40-43页

作者：张杰刘伟曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科上海200011 上海市组织工程研究重点实验室

表皮是一种持续更新的组织，其更新过程始于基底层的角质干细胞的增殖与定向分化。在向上迁移的过程中，经历程序化的终末分化，最后成为死亡的角化扁平细胞从皮肤表面脱落。在正常稳定状态下，干细胞的增殖与表层细胞的丢失保持着精确... 详细信息

表皮是一种持续更新的组织，其更新过程始于基底层的角质干细胞的增殖与定向分化。在向上迁移的过程中，经历程序化的终末分化，最后成为死亡的角化扁平细胞从皮肤表面脱落。在正常稳定状态下，干细胞的增殖与表层细胞的丢失保持着精确的平衡^[1]。角质干细胞有两个重要特征：一是在体内属于静止的或慢细胞周期的细胞；二是具有无限的增

关键词：角质干细胞皮肤组织工程表皮生物学基因治疗

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荧光活性染料DiI标记观察人骨髓基质干细胞与部分脱钙骨粘附的实验研究

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中华创伤骨科杂志 2004年第3期6卷 311-314页

作者：李东崔磊舒朝锋柳向东张英柴岗刘伟曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科上海市组织工程研究与开发中心上海市组织工程研究重点实验室上海市200011

目的通过荧光活性染料DiI标记观察骨髓基质干细胞在部分脱钙骨上的粘附。方法用DiI标记人骨髓基质干细胞,接种于部分脱钙骨上,测定细胞的粘附率。于接种后第2、4、7天激光共聚焦显微镜观察细胞在支架材料上的生长状况。结果DiI标记的骨... 详细信息

目的通过荧光活性染料DiI标记观察骨髓基质干细胞在部分脱钙骨上的粘附。方法用DiI标记人骨髓基质干细胞,接种于部分脱钙骨上,测定细胞的粘附率。于接种后第2、4、7天激光共聚焦显微镜观察细胞在支架材料上的生长状况。结果DiI标记的骨髓基质干细胞的粘附率为(99.9±0.2)%,未标记的骨髓基质干细胞粘附率为(99.1±1)%,两者无统计学差异(P>0.05);第7天时细胞脱钙骨内孔覆盖。结论荧光活性染料DiI标记不影响骨髓基质干细胞在部分脱钙骨支架上的粘附,是观察骨髓基质干细胞在脱钙骨支架上粘附状况的较好方法。

关键词：荧光活性染料 DiI 骨髓基质干细胞脱钙骨支架材料组织工程

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端粒酶基因真核表达载体pEGFP-hTRT构建及表达

端粒酶基因真核表达载体pEGFP-hTRT构建及表达

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中华口腔医学会第六届全国口腔黏膜病学术会

作者：周海文周曾同杨雯君刘德莉刘伟曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院口腔内科上海第二医科大学附属第九人民医院口腔内科上海第二医科大学口腔医学院口腔颌面外科上海第二医科大学组织工程研究中心上海市组织工程重点实验室上海第二医科大学组织工程研究中心上海市组织工程重点实验室上海第二医科大学组织工程研究中心上海市组织工程重点实验室

目的:构建具绿色荧光蛋白报道系统的端粒酶基因真核质粒载体,并研究其在293细胞中的表达情况,为基因转染、延长细胞寿命奠定基础。方法:酶切含人端粒酶逆转录酶(hTRT)基因的pGRN145质粒获取hTRT片段,插入经酶切及磷酸化处理的绿色荧光... 详细信息

目的:构建具绿色荧光蛋白报道系统的端粒酶基因真核质粒载体,并研究其在293细胞中的表达情况,为基因转染、延长细胞寿命奠定基础。方法:酶切含人端粒酶逆转录酶(hTRT)基因的pGRN145质粒获取hTRT片段,插入经酶切及磷酸化处理的绿色荧光蛋白载体pEGFP-C1,形成8.1Kb质粒,经HindⅢ、NotⅠ酶切电泳筛选、鉴定、测序并转染293细胞检测绿色荧光蛋白表达及外源性端粒酶活性。结果:酶切电泳分析,得到3.4Kb及4.7Kb大小的2个片段;测序结果接头两端序列正确;质粒在293细胞中正确表达,测得细胞外源性端粒酶表达。结论:端粒酶基因pEGFP-hTRT质粒成功构建,并可在真核细胞中表达,可用于研究组织工程种子细胞的衰老问题。

关键词：端粒酶绿色荧光蛋白基因转染

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骨形成蛋白-7基因逆转录病毒载体的构建及其表达

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细胞与分子免疫学杂志 2003年第4期19卷 329-331页

作者：祝联刘伟陈兵刘德莉刘方军吴娟娟陆俊弘曹谊林上海第二医科大学第九人民医院整复外科上海市组织工程重点实验室上海200011

目的 :实现骨形成蛋白 7(BMP 7)基因在骨髓基质干细胞中的稳定、长久表达。方法 :构建重组BMP 7逆转录病毒表达载体。通过PT6 7包装细胞克隆 ,嘌呤霉素筛选、扩增 ,获得含BMP 7基因的逆转录病毒液 ,直接感染骨髓基质干细胞 ,用免疫组化... 详细信息

目的 :实现骨形成蛋白 7(BMP 7)基因在骨髓基质干细胞中的稳定、长久表达。方法 :构建重组BMP 7逆转录病毒表达载体。通过PT6 7包装细胞克隆 ,嘌呤霉素筛选、扩增 ,获得含BMP 7基因的逆转录病毒液 ,直接感染骨髓基质干细胞 ,用免疫组化方法检测BMP 7的表达。结果 :成功地构建了重组BMP 7逆转录病毒表达载体 ,并可在骨髓基质干细胞中表达BMP 7。结论 :重组逆转录病毒表达载体转染的靶细胞可表达BMP 7,为组织工程中骨和软骨种子细胞的研究奠定了基础。

关键词：重组逆转录病毒载体骨形成蛋白—7 组织工程骨髓基质干细胞

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