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中华创伤骨科杂志 2003年第3期5卷 225-228页

作者：陆峻泓李卿刘伟陈瑾君刘德莉吴娟娟崔磊曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院上海市组织工程重点实验室200011

目的研究猪耳软骨细胞在体外培养传代过程中,细胞老化相关基因和胞外基质相关基因表达水平的改变。方法取体外培养猪耳软骨细胞,通过光镜,对各代细胞的形态学变化进行观测。RT-PCR检测各代细胞中bcl-2、端粒酶、Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原在mRN... 详细信息

目的研究猪耳软骨细胞在体外培养传代过程中,细胞老化相关基因和胞外基质相关基因表达水平的改变。方法取体外培养猪耳软骨细胞,通过光镜,对各代细胞的形态学变化进行观测。RT-PCR检测各代细胞中bcl-2、端粒酶、Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原在mRNA表达水平上的改变。结果体外培养软骨细胞随着老化的进程,逐渐显现衰老和凋亡的特征。凋亡抑制基因bcl-2和控制细胞分裂的端粒酶的表达显著下降(P<0.01)。软骨细胞的特征性基质分子Ⅱ型胶原在第3代时表达水平有显著下降(P<0.01),降至原代细胞的5.47%±1.04%,在第4代几乎不再表达。而Ⅰ型胶原在第5代时,有显著上升(P<0.01);在第9代时又显著下降(P<0.01)。结论猪软骨细胞经体外培养,由第4代起逐渐发生去分化,丧失软骨细胞的表型。同时,细胞的增殖分裂能力亦逐步减退,细胞凋亡现象明显增加。

关键词：软骨细胞细胞老化胞外基质基因表达细胞分裂

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爱茜蓝法检测组织工程化软骨及软骨细胞中蛋白聚糖的含量

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中华实验外科杂志 2003年第1期20卷 89-89页

作者：李卿刘伟夏万尧崔磊曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院上海市组织工程重点实验室 200011

我们应用爱莤蓝法对生物样品中蛋白聚糖进行定量测定，判断组织工程化软骨的生化构成是否正常。

关键词：爱茜蓝法组织工程化软骨软骨细胞蛋白聚糖含量检测生化构成

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小鼠胚胎干细胞建系及GFP标记

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东南大学学报（医学版） 2003年第2期22卷 71-74,88页

作者：沈干从笑倩汪铮吴春芳曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科组织工程实验室中国科学院上海生物化学细胞研究所上海200031

目的 :为组织工程提供新型种子细胞 ,建立胚胎干 (ES)细胞系。方法 :取 12 9/svj白色小鼠 4.5d的囊胚 ,分离囊胚的内细胞团 (ICM )细胞 ;在条件培养液及小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF)作铺层下 ,细胞扩增传代 ,碱性磷酸酶 (AKP)染色及oct4、s... 详细信息

目的 :为组织工程提供新型种子细胞 ,建立胚胎干 (ES)细胞系。方法 :取 12 9/svj白色小鼠 4.5d的囊胚 ,分离囊胚的内细胞团 (ICM )细胞 ;在条件培养液及小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF)作铺层下 ,细胞扩增传代 ,碱性磷酸酶 (AKP)染色及oct4、ssea 1等特异性抗体鉴定细胞 ,并将细胞注射至裸鼠皮下观察细胞在动物体内的生长变化。结果 :细胞体外培养呈“巢状”生长 ,可以持续传代 ;AKP染色及oct4、ssea 1等特异性抗体免疫反应均阳性 ;裸鼠皮下注射的细胞发育生长为包含各胚层细胞成分的畸胎瘤。在此基础上以基因转染方法将细胞标记绿色荧光蛋白 (GFP)。结论 :从小鼠ICM所分离的细胞为小鼠胚胎干细胞 ,且标记GFP的ES细胞在传代及形成胚体的过程中均能显示GFP 。

关键词：胚胎干细胞细胞系绿色荧光蛋白小鼠

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应用b-FGF刺激的软骨细胞构建自体组织工程化软骨的研究

应用b-FGF刺激的软骨细胞构建自体组织工程化软骨的研究

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中华医学会第七届全国整形外科学术会议

作者：丁小邦程宁新王原路陈兵曹谊林广州市第一人民医院整形外科上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科上海组织工程重点实验室

本文研究了软骨缺损常需自体软骨组织移植修复.然而,自体软骨组织供区有限,且易引起供区损伤,限制了手术的应用.近年来,组织工程的研究为软骨缺损的修复提供了新的方向.然而软骨细胞属于增生能力极弱的终末分化细胞,在体外培养过程中扩... 详细信息

本文研究了软骨缺损常需自体软骨组织移植修复.然而,自体软骨组织供区有限,且易引起供区损伤,限制了手术的应用.近年来,组织工程的研究为软骨缺损的修复提供了新的方向.然而软骨细胞属于增生能力极弱的终末分化细胞,在体外培养过程中扩增有限,且经过一段时间培养后,细胞极易老化,表型发生改变,丧失了成软骨细胞的能力,从而限制了软骨组织工程的临床应用.

关键词：软骨细胞构建自体组织软骨缺损移植修复

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应用组织工程技术构建角膜组织的研究新进展

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生物医学工程与临床 2003年第3期7卷 172-175页

作者：王爱丽曹谊林(审校) 刘伟(审校) 姚康德(审校) 上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科上海市组织工程重点实验室上海200011 天津大学材料科学与工程学院天津300072

组织工程化角膜的研究开展至今已取得长足的进步。在以往的体外单层组织构建的基础上 ,正逐渐向三维体系的多层结构深入 ,在功能和结构上越来越接近于正常的角膜组织。各种细胞共培养技术的改进和新型载体材料的应用也有力地推动其进一... 详细信息

组织工程化角膜的研究开展至今已取得长足的进步。在以往的体外单层组织构建的基础上 ,正逐渐向三维体系的多层结构深入 ,在功能和结构上越来越接近于正常的角膜组织。各种细胞共培养技术的改进和新型载体材料的应用也有力地推动其进一步完善。

关键词：组织工程角膜组织多层结构结构功能载体材料

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自体组织工程化全层皮肤缺损修复实验研究

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中华外科杂志 2002年第1期40卷 24-26,T001页

作者：曹谊林蔡霞崔磊商庆新刘伟关文祥上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科上海第二医科大学组织工程研究重点实验室 210011

目的　为制成含表皮细胞与成纤维细胞的双层皮肤替代物 ,直接用于修复全层皮肤缺损。方法　选用长枫杂交仔猪 10只 ,酶消化法获取皮肤表皮细胞与成纤维细胞 ,将原代培养处于对数生长期的表皮细胞、成纤维细胞分别与 3 0 %氧化异丙烯F 1... 详细信息

目的　为制成含表皮细胞与成纤维细胞的双层皮肤替代物 ,直接用于修复全层皮肤缺损。方法　选用长枫杂交仔猪 10只 ,酶消化法获取皮肤表皮细胞与成纤维细胞 ,将原代培养处于对数生长期的表皮细胞、成纤维细胞分别与 3 0 %氧化异丙烯F 12 7混匀成细胞悬液后 ,种植聚羟基乙酸(polyglycolicacid ,PGA)形成细胞生物材料复合物 ,用于修复自体动物背部直径 4cm全层皮肤缺损 ,以单纯生物材料 (PGA +氧化异丙烯 )充填的创面作为对照组。修复术后 1,2 ,4 ,8周取材 ,通过组织学和基底膜特殊染色等方法对新生组织进行评价。结果　第 1周新生组织即出现表皮与真皮 2层结构 ,特殊染色观察到连续的基底膜。第 2周表皮与真皮均较前增厚。修复后第 8周组织工程化皮肤的形态结构均与正常皮肤相似。对照组则无皮肤形成 ,仅见大量肉芽组织。结论　应用组织工程技术 ,以PGA +氧化异丙烯为表皮细胞。

关键词：人工皮肤皮肤移植成纤维细胞动物实验

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骨髓间质干细胞向软骨细胞表型定向诱导分化的实验研究

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中华整形外科杂志 2002年第1期18卷 12-14页

作者：夏万尧商庆新崔磊徐蓉丁小邦曹谊林上海第二医科大学组织工程研究中心上海市组织工程研究重点实验室上海第二医科大学附属第九人民医院整形外科

目的　研究体外培养的猪骨髓间质干细胞 (BoneMarrowStemCells,MSCs)在特定培养液作用下向软骨细胞表型转化 ,探讨其作为组织工程化软骨的种子细胞的可行性。方法　取成年崇明长枫杂交猪髂骨骨髓 5ml,在低糖DMEM完全培养液培养 2周 ,传... 详细信息

目的　研究体外培养的猪骨髓间质干细胞 (BoneMarrowStemCells,MSCs)在特定培养液作用下向软骨细胞表型转化 ,探讨其作为组织工程化软骨的种子细胞的可行性。方法　取成年崇明长枫杂交猪髂骨骨髓 5ml,在低糖DMEM完全培养液培养 2周 ,传代后以高糖DMEM无血清特定培养液诱导 (含胰岛素 2mg L、转铁蛋白 3mg L、丙酮酸 10 0mg L、地塞米松 10 - 7mol L、TGF β110ng ml) ,在相差显微镜和电镜下进行观察 ,免疫组化检测Ⅱ型胶原分泌 ,原位杂交检测Ⅱ型胶原mRNA表达。结果　细胞形态由成纤维样梭形向多角形、多边形转变 ,透视电镜观察见大量扩张粗面内质网、高尔基体、线粒体。诱导培养后第 7,14dⅡ型胶原免疫组化阳性 ,同时原位杂交检测Ⅱ型胶原mRNA表达呈阳性。结论　MSCs在特定培养液诱导下能向软骨细胞表型转化 ,并能分泌软骨特异性基质 ,有可能成为软骨组织工程较理想的种子细胞来源的应用前景。

关键词：组织工程骨髓间充质干细胞分化软骨细胞表型动物实验

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增强型绿色荧光蛋白表达在同种异体组织工程软骨构建中的示踪作用

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中华实验外科杂志 2002年第5期19卷 456-457页

作者：胡洪亮曹谊林刘德莉胡晓洁崔磊刘伟商庆新上海第二医科大学附属第九人民医院组织工程重点实验室 200011

目的　观察重组逆转录病毒载体转染的软骨细胞能否形成同种异体组织工程化软骨并示踪构建过程。方法　利用重组逆转录病毒载体转染的软骨细胞和组织工程材料 pluronicF 1 2 7复合物构建兔同种异体组织工程软骨 ,荧光显微镜和激光共聚焦... 详细信息

目的　观察重组逆转录病毒载体转染的软骨细胞能否形成同种异体组织工程化软骨并示踪构建过程。方法　利用重组逆转录病毒载体转染的软骨细胞和组织工程材料 pluronicF 1 2 7复合物构建兔同种异体组织工程软骨 ,荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察其构建过程。结果　重组逆转录病毒载体转染的软骨细胞能形成组织工程软骨 ,增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)在 3周和 6周后均得到了明显表达 ,且未影响软骨组织的形成过程。结论　重组逆转录病毒载体转染的软骨细胞能形成组织工程软骨 ,EGFP是组织工程化软骨形成过程的良好示踪剂 ,且不影响组织的形成。

关键词：生物医学工程软骨逆转录病毒免疫监测

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碱性成纤维细胞因子对猪弹性软骨细胞增殖和成软骨能力的影响

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中华实验外科杂志 2002年第6期19卷 573-574,I004页

作者：丁小邦夏万尧陈兵崔磊刘伟商庆新曹谊林第二医科大学附属第九人民医院整复外科上海市组织工程重点实验室上海200011

目的　研究碱性成纤维细胞因子 (b FGF)对体外培养的弹性软骨细胞增殖和成软骨能力的影响 ,探讨b FGF对软骨组织工程的意义。方法　细胞取自猪耳软骨 ,用含 1 0、2 5、50 μg/L3种浓度b FGF的培养液 ,体外培养至第 3代 ,从细胞形态、数... 详细信息

目的　研究碱性成纤维细胞因子 (b FGF)对体外培养的弹性软骨细胞增殖和成软骨能力的影响 ,探讨b FGF对软骨组织工程的意义。方法　细胞取自猪耳软骨 ,用含 1 0、2 5、50 μg/L3种浓度b FGF的培养液 ,体外培养至第 3代 ,从细胞形态、数量和基质分泌等方面进行研究。结果　含b FGF组细胞贴壁呈类成纤维细胞样 ,撤去b FGF ,细胞形态可恢复正常 ;含b FGF各组在第 3代 ,细胞总数是无b FGF组的 60～ 70倍 (P <0 .0 1 ) ,但 3种不同浓度b FGF对细胞增殖差异无显著性 ;培养液氨基糖氨多糖 (GAG)含量测定各组差异无显著性 ;免疫组织化学和原位杂交示各组第 3代软骨细胞仍有Ⅱ型胶原表达。结论　应用b FGF能在 3周内从少量软骨组织获取大量软骨细胞 ,且未改变细胞表型和功能 ,对软骨组织工程有重要意义 ;在 1 0、2 5、50 μg/L 3种浓度中 ,1 0μg/L为b

关键词：碱性成纤维细胞因子猪弹性软骨细胞成软骨能力组织工程细胞增殖

来源：评论

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壳聚糖作为组织工程软骨支架的实验研究

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中华显微外科杂志 2002年第1期25卷 34-37页

作者：夏万尧曹谊林商庆新刘彦春钟伟 200011 上海第二医科大学组织工程研究中心上海市组织工程研究重点实验室上海第二医科大学附属第九人民医院整形外科复旦大学高分子科学系

目的　探索壳聚糖作为组织工程技术中软骨细胞培养支架的可行性。　方法　消化分离猪耳郭软骨细胞 ,接种于自制壳聚糖、壳聚糖胶原复合多孔支架上培养 ,从光镜和扫描电镜观察其亲水性和对细胞吸附力 ,MTT检测软骨细胞在壳聚糖、壳聚... 详细信息

目的　探索壳聚糖作为组织工程技术中软骨细胞培养支架的可行性。　方法　消化分离猪耳郭软骨细胞 ,接种于自制壳聚糖、壳聚糖胶原复合多孔支架上培养 ,从光镜和扫描电镜观察其亲水性和对细胞吸附力 ,MTT检测软骨细胞在壳聚糖、壳聚糖胶原上的黏附率及壳聚糖、壳聚糖胶原复合多孔支架对细胞的增殖、功能的影响。　结果　软骨细胞能够在壳聚糖、壳聚糖胶原支架上黏附、伸展、增殖和发挥正常功能 ,MTT测得细胞黏附率分别为 81 2 5 %和 87 5 0 % ,MTT测得软骨细胞在壳聚糖胶原支架中的增殖能力较强。　结论　壳聚糖、壳聚糖胶原复合多孔支架与软骨细胞具有较好的相容性 ,壳聚糖胶原复合多孔支架更适合作为软骨组织工程中的细胞培养支架。

关键词：组织工程软骨细胞壳聚糖支架细胞培养

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