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中华口腔医学会第六届全国口腔黏膜病学术会

作者：周海文周曾同杨雯君刘德莉刘伟曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院口腔内科上海第二医科大学附属第九人民医院口腔内科上海第二医科大学口腔医学院口腔颌面外科上海第二医科大学组织工程研究中心上海市组织工程重点实验室上海第二医科大学组织工程研究中心上海市组织工程重点实验室上海第二医科大学组织工程研究中心上海市组织工程重点实验室

目的:构建具绿色荧光蛋白报道系统的端粒酶基因真核质粒载体,并研究其在293细胞中的表达情况,为基因转染、延长细胞寿命奠定基础。方法:酶切含人端粒酶逆转录酶(hTRT)基因的pGRN145质粒获取hTRT片段,插入经酶切及磷酸化处理的绿色荧光... 详细信息

目的:构建具绿色荧光蛋白报道系统的端粒酶基因真核质粒载体,并研究其在293细胞中的表达情况,为基因转染、延长细胞寿命奠定基础。方法:酶切含人端粒酶逆转录酶(hTRT)基因的pGRN145质粒获取hTRT片段,插入经酶切及磷酸化处理的绿色荧光蛋白载体pEGFP-C1,形成8.1Kb质粒,经HindⅢ、NotⅠ酶切电泳筛选、鉴定、测序并转染293细胞检测绿色荧光蛋白表达及外源性端粒酶活性。结果:酶切电泳分析,得到3.4Kb及4.7Kb大小的2个片段;测序结果接头两端序列正确;质粒在293细胞中正确表达,测得细胞外源性端粒酶表达。结论:端粒酶基因pEGFP-hTRT质粒成功构建,并可在真核细胞中表达,可用于研究组织工程种子细胞的衰老问题。

关键词：端粒酶绿色荧光蛋白基因转染

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转染端粒酶基因延长人口腔黏膜角化细胞寿命的实验研究

转染端粒酶基因延长人口腔黏膜角化细胞寿命的实验研究

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中华口腔医学会第六届全国口腔黏膜病学术会

作者：周海文周曾同黄鹤刘伟上海第二医科大学附属第九人民医院口腔医学院口腔内科上海第二医科大学附属第九人民医院口腔医学院口腔内科上海第二医科大学附属第九人民医院口腔医学院口腔内科上海第二医科大学组织工程研究中心上海市组织工程重点实验室

目的:将端粒酶基因(hTRT)转染入口腔黏膜角化细胞,延长细胞寿命。方法:hTRT cDNA经逆转录病毒pBABE-tert介导转染人人口腔黏膜角化细胞。RT-PCR检测外源性端粒酶,并检测端粒酶活性;通过细胞生物学一般性状包括细胞形态、生长速度和倍增... 详细信息

目的:将端粒酶基因(hTRT)转染入口腔黏膜角化细胞,延长细胞寿命。方法:hTRT cDNA经逆转录病毒pBABE-tert介导转染人人口腔黏膜角化细胞。RT-PCR检测外源性端粒酶,并检测端粒酶活性;通过细胞生物学一般性状包括细胞形态、生长速度和倍增时间及染色体倍性、β半乳糖苷酶染色细胞衰老研究、软琼脂培养、裸鼠接种致瘤试验比较转染前后细胞的生物学性状。结果:转染细胞端粒酶活性检测阳性,hTRT阳性细胞寿命较未转染细胞延长1倍,达8-10代。hTRT阳性细胞的生物学性状及染色体倍性与未转染OKC相同,软琼脂培养、裸鼠接种致瘤试验结果为阴性。结论:转染hTRT细胞寿命延长,较未转染细胞延长1倍,仍维持正常细胞表型及功能,未发生恶性转化。

关键词：口腔黏膜角化细胞上皮细胞端粒酶 hTRT/hTERT 基因转染

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重组端粒酶pEGFP-hTRT质粒的构建

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中国修复重建外科杂志 2003年第3期17卷 230-232页

作者：周海文周曾同杨雯君刘德莉李卿胡洪亮刘伟崔磊曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院口腔内科口腔研究所上海200011 上海第二医科大学附属第九人民医院口腔颌面外科上海200011 上海第二医科大学组织工程研究中心上海市组织工程重点实验室上海200011

目的　构建具有绿色荧光蛋白报道 (GFP)基因的端粒酶真核质粒载体 ,为转染细胞、延长细胞寿命提供基础。　方法　酶切含人端粒酶逆转录酶 (h TRT)基因的 p GRN14 5质粒获取 h TRT片段 ,插入经酶切及磷酸化处理的 GFP载体 p EGFP- C1,形... 详细信息

目的　构建具有绿色荧光蛋白报道 (GFP)基因的端粒酶真核质粒载体 ,为转染细胞、延长细胞寿命提供基础。　方法　酶切含人端粒酶逆转录酶 (h TRT)基因的 p GRN14 5质粒获取 h TRT片段 ,插入经酶切及磷酸化处理的 GFP载体 p EGFP- C1,形成 8.1kb质粒 ,经 Hind 、Not 酶切电泳筛选、鉴定并测序。　结果　经酶切电泳分析得到3.4 kb及 4 .7kb大小的两片段 ;测序结果显示接头两端序列正确。　结论　重组端粒酶 p EGFP- h TRT质粒的成功构建 ,可用于细胞转染 ,对进一步研究组织工程种子细胞的衰老问题具有重要意义。

关键词：端粒酶 pEGFP-hTRT质粒构建重组质粒绿色荧光蛋白

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体外培养口腔黏膜角化细胞生物学的特性

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中国临床康复 2003年第11期7卷 1628-1629页

作者：周海文周曾同商庆新曹谊林上海第二医科大学第九人民医院口腔内科上海第二医科大学第九人民医院口腔研究所上海市200011 上海第二医科大学组织工程研究中心上海市组织工程重点实验室上海市200011

目的一个稳定的人类正常口腔黏膜角化细胞体外培养体系对于研究组织工程化口腔黏膜构建及口腔黏膜上皮癌变及阻断有重要意义。研究体外培养的人正常口腔黏膜角化细胞的细胞生物学特性。方法通过测定细胞生长曲线及克隆形成率了解细胞生... 详细信息

目的一个稳定的人类正常口腔黏膜角化细胞体外培养体系对于研究组织工程化口腔黏膜构建及口腔黏膜上皮癌变及阻断有重要意义。研究体外培养的人正常口腔黏膜角化细胞的细胞生物学特性。方法通过测定细胞生长曲线及克隆形成率了解细胞生长基本规律及其增殖能力,并通过流式细胞仪检测细胞染色体倍性。结果细胞接种后第1～3天为静止生长期,第5～10天处于对数生长期,第12天后进入平台期。倍增时间为24～48h;接种密度为200/cm2时,培养细胞克隆形成率为0.979%。经流式细胞仪检测细胞染色体倍性结果表明原代及传代细胞均为二倍体细胞。结论体外连续培养的口腔黏膜角化细胞为正常上皮细胞,增殖能力良好。

关键词：口腔黏膜角化细胞生物学特性细胞体外培养组织工程角蛋白细胞细胞生长

来源：评论

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骨髓间质干细胞向软骨细胞表型定向诱导分化的实验研究

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中华整形外科杂志 2002年第1期18卷 12-14页

作者：夏万尧商庆新崔磊徐蓉丁小邦曹谊林上海第二医科大学组织工程研究中心上海市组织工程研究重点实验室上海第二医科大学附属第九人民医院整形外科

目的　研究体外培养的猪骨髓间质干细胞 (BoneMarrowStemCells,MSCs)在特定培养液作用下向软骨细胞表型转化 ,探讨其作为组织工程化软骨的种子细胞的可行性。方法　取成年崇明长枫杂交猪髂骨骨髓 5ml,在低糖DMEM完全培养液培养 2周 ,传... 详细信息

目的　研究体外培养的猪骨髓间质干细胞 (BoneMarrowStemCells,MSCs)在特定培养液作用下向软骨细胞表型转化 ,探讨其作为组织工程化软骨的种子细胞的可行性。方法　取成年崇明长枫杂交猪髂骨骨髓 5ml,在低糖DMEM完全培养液培养 2周 ,传代后以高糖DMEM无血清特定培养液诱导 (含胰岛素 2mg L、转铁蛋白 3mg L、丙酮酸 10 0mg L、地塞米松 10 - 7mol L、TGF β110ng ml) ,在相差显微镜和电镜下进行观察 ,免疫组化检测Ⅱ型胶原分泌 ,原位杂交检测Ⅱ型胶原mRNA表达。结果　细胞形态由成纤维样梭形向多角形、多边形转变 ,透视电镜观察见大量扩张粗面内质网、高尔基体、线粒体。诱导培养后第 7,14dⅡ型胶原免疫组化阳性 ,同时原位杂交检测Ⅱ型胶原mRNA表达呈阳性。结论　MSCs在特定培养液诱导下能向软骨细胞表型转化 ,并能分泌软骨特异性基质 ,有可能成为软骨组织工程较理想的种子细胞来源的应用前景。

关键词：组织工程骨髓间充质干细胞分化软骨细胞表型动物实验

来源：评论

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壳聚糖作为组织工程软骨支架的实验研究

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中华显微外科杂志 2002年第1期25卷 34-37页

作者：夏万尧曹谊林商庆新刘彦春钟伟 200011 上海第二医科大学组织工程研究中心上海市组织工程研究重点实验室上海第二医科大学附属第九人民医院整形外科复旦大学高分子科学系

目的　探索壳聚糖作为组织工程技术中软骨细胞培养支架的可行性。　方法　消化分离猪耳郭软骨细胞 ,接种于自制壳聚糖、壳聚糖胶原复合多孔支架上培养 ,从光镜和扫描电镜观察其亲水性和对细胞吸附力 ,MTT检测软骨细胞在壳聚糖、壳聚... 详细信息

目的　探索壳聚糖作为组织工程技术中软骨细胞培养支架的可行性。　方法　消化分离猪耳郭软骨细胞 ,接种于自制壳聚糖、壳聚糖胶原复合多孔支架上培养 ,从光镜和扫描电镜观察其亲水性和对细胞吸附力 ,MTT检测软骨细胞在壳聚糖、壳聚糖胶原上的黏附率及壳聚糖、壳聚糖胶原复合多孔支架对细胞的增殖、功能的影响。　结果　软骨细胞能够在壳聚糖、壳聚糖胶原支架上黏附、伸展、增殖和发挥正常功能 ,MTT测得细胞黏附率分别为 81 2 5 %和 87 5 0 % ,MTT测得软骨细胞在壳聚糖胶原支架中的增殖能力较强。　结论　壳聚糖、壳聚糖胶原复合多孔支架与软骨细胞具有较好的相容性 ,壳聚糖胶原复合多孔支架更适合作为软骨组织工程中的细胞培养支架。

关键词：组织工程软骨细胞壳聚糖支架细胞培养

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In-vitro cultivation of normal human oral keratinocytes

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Chinese Medical Journal 2001年第7期114卷 59-62,107页

作者：周曾同周海文商庆新曹谊林上海第二医科大学第九人民医院口腔内科上海200011 上海第二医科大学组织工程研究中心上海市组织工程重点实验室上海200011

Abstract:Objective To establish a method for culturing normal human oral *** Specimens obtained from healthy humans undergoing oral surgery were dissociated into single cell suspensions by dispase and trypsin. The cells were grown in serum-free medium. Morphological characteristics were studied under light microscope and electron microscope. Cytokeratins were shown by *** Cells could be maintained in culture up to 4-5 passages or 30-50 days. Electron microscope revealed that there were desmosomes and tonofibrils in the oral keratinocytes. The cells showed positive staining for cytokeratin antibody. Conclusion Human oral keratinocytes have been successfully grown in serial culture.

关键词： cell culture · oral keratinocytes/epithelial cells · morphology · cytokeratin

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应用可注射性生物材料再生自体组织工程化软骨组织的实验研究

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中华整形外科杂志 2001年第5期17卷 302-305页

作者：夏万尧曹谊林商庆新刘彦春刘德莉徐蓉吴娟娟上海第二医科大学组织工程研究中心上海市组织工程研究中心重点实验室上海200011 上海第二医科大学附属第九人民医院整形外科上海200011

目的　探讨自体组织工程化软骨在动物自体内形成的最佳细胞浓度 ,为临床应用提供理论依据。方法　取贵州香猪部分耳廓软骨组织 ,于体外消化分离软骨细胞 ,与可注射性生物材料PluronicF12 7混合形成复合物 ,浓度为 10 ,2 0 ,3 0 ,4 0 ,5 ... 详细信息

目的　探讨自体组织工程化软骨在动物自体内形成的最佳细胞浓度 ,为临床应用提供理论依据。方法　取贵州香猪部分耳廓软骨组织 ,于体外消化分离软骨细胞 ,与可注射性生物材料PluronicF12 7混合形成复合物 ,浓度为 10 ,2 0 ,3 0 ,4 0 ,5 0 ,60和 70× 10 6 ml,并将其接种于猪自体腹外侧壁皮下 ,于第 6周取材 ,分别进行大体、组织学、氨基糖氨多糖 (GAG)和Ⅱ型胶原含量检测 ,对再生软骨组织进行评价。结果　细胞浓度为 5 0× 10 6 ml时 ,再生的软骨组织 ,软骨细胞均匀分布 ,包埋在软骨陷窝内 ,与正常软骨组织有相似的组织学特征。而细胞浓度为 10× 10 6 ml、3 0× 10 6 ml则形成软骨组织不完全 ,软骨细胞散在分布 ,并被未降解的生物材料分隔。对所有样本称重 ,在 3 0～ 110mg之间 ,各样本GAG含量在 5 .8%～ 9.2 %之间 ,正常耳软骨含量为 9.2 %。WesternBlot证实所有样本都有Ⅱ型胶原。结论　利用组织工程技术可在具有免疫功能的自体动物内形成软骨组织 ,并确定了软骨组织形成的最佳细胞接种浓度为 5 0× 10 6 ml。

关键词：软骨细胞软骨组织组织工程生物材料软骨修复动物实验

来源：评论

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生物工程领域的崭新前沿-组织工程

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中国组织工程研究与临床康复 2001年第12期10卷 7-9,15页

作者：商庆新曹谊林张涤生上海第二医科大学组织工程研究中心上海200235 上海市组织工程研究重点实验室上海200235 上海市组织工程研究与开发中心上海200235

目前组织工程已得到了迅猛发展，在许多方面已取得重大突破，由于其所孕育的巨大科学价值及广阔的研究和应用前景，成了未来21世纪生命科学研究领域的焦点之一。因此，国内需尽快地建立和开展组织工程研究。

关键词：组织工程生物材料组织缺损组织构建

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正常人口腔粘膜角化细胞体外培养研究

正常人口腔粘膜角化细胞体外培养研究

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第一届全国口腔颌面部肿瘤学术会议

作者：周海文周曾同商庆新曹谊林上海第二医科大学口腔医学院口腔内科上海第二医科大学口腔医学院口腔内科上海第二医科大学组织工程研究中心上海市组织工程重点实验室上海第二医科大学组织工程研究中心上海市组织工程重点实验室

目的:建立一个稳定的人正常口腔粘膜角化细胞体外培养体系。方法:取正常口腔粘膜经 Dispase及胰蛋白酶消化获取粘膜角化细胞,采用角化细胞培养液进行原代及传代培养,并进行形态学观察和角蛋白免疫组化染色等一系列细胞定性研究。结果:... 详细信息

目的:建立一个稳定的人正常口腔粘膜角化细胞体外培养体系。方法:取正常口腔粘膜经 Dispase及胰蛋白酶消化获取粘膜角化细胞,采用角化细胞培养液进行原代及传代培养,并进行形态学观察和角蛋白免疫组化染色等一系列细胞定性研究。结果:获取的细胞为纯的粘膜角化细胞;细胞可传4-5代,成活40-50天;细胞呈铺路石状,电镜下角化细胞具有丰富的张力丝和桥粒等特

关键词：细胞培养角化细胞形态学角蛋白

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