检索结果-内蒙古大学图书馆

分子细胞生物学报 2006年第2期39卷 152-162页

作者：张英周广东杨平尹烁刘德莉崔磊刘伟曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整形外科上海组织工程研究中心上海200011

脂肪组织由整形外科吸脂术获得（19例，31．5±5．8岁）。酶消化法分离抽吸物中细胞，体外扩增至第10代，测定细胞生长曲线、累计倍增数目，明确其体外生长规律和增殖能力：通过对表面抗原CD29、CD105、CD106、CD166、CD49d、CD34、... 详细信息

脂肪组织由整形外科吸脂术获得（19例，31．5±5．8岁）。酶消化法分离抽吸物中细胞，体外扩增至第10代，测定细胞生长曲线、累计倍增数目，明确其体外生长规律和增殖能力：通过对表面抗原CD29、CD105、CD106、CD166、CD49d、CD34、CD31、3G5等的检测分析脂肪来源细胞的群体组成；分别向软骨、骨、脂肪定向诱导，进一步明确该细胞群体定向分化能力。实验表明．每300ml脂肪抽吸物平均可获得5×10^7个有核细胞，体外扩增10代，平均每代倍增数目为1．59±0．224，累计倍增数目为15．53。流式细胞学及免疫细胞化学检测显示，干细胞相关抗原CD29、CD105、CD106、CD166等表达率均〉60％，但与造血系相关的CD34、CD31表达率也分别达到7．3％、29．2％。ADC向软骨诱导可检测到Ⅱ型胶原表达；向成骨诱导可见矿化结节形成．并可检测到AKP、Osteonectin基因表达；向脂肪诱导可检测到PPARr2、GLU-4、Leptin基因表达．细胞内有脂滴形成。脂肪来源的细胞获得量大，体外增殖能力强，并含有具有多向分化潜能细胞．有可能作为组织构建的种子细胞。

关键词：脂肪干细胞增殖分化潜能体外

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组织工程技术修复兔气管软骨缺损的实验研究

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中华胸心血管外科杂志 2006年第1期22卷 45-48页

作者：肖开颜周广东刘伟崔磊曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整形外科上海第二医科大学组织工程研究中心 200011

目的探讨以兔耳廓软骨细胞（auricular chondrocytes）为种子细胞,利用组织工程技术修复其自体气管软骨缺损的可行性.方法取兔耳廓软骨,以Ⅱ型胶原酶消化分离软骨细胞,体外培养并扩增至第2代后,接种于聚羟基乙酸（PGA）纤维支架（3 cm&#... 详细信息

目的探讨以兔耳廓软骨细胞（auricular chondrocytes）为种子细胞,利用组织工程技术修复其自体气管软骨缺损的可行性.方法取兔耳廓软骨,以Ⅱ型胶原酶消化分离软骨细胞,体外培养并扩增至第2代后,接种于聚羟基乙酸（PGA）纤维支架（3 cm×2 cm,约60mg）,形成细胞-材料复合物.体外培养7 d后,细胞-材料复合物环行包裹于直径为0.7cm的硅胶管外表面,置于裸鼠皮下.6周后取出,并将形成的管状软骨用于修复兔自体约1.5cm长的节段性气管软骨全层缺损.结果兔耳廓软骨细胞有较强的体外增殖能力,扩增至第2代时即可满足组织构建所需要的细胞量.软骨细胞种植于PGA后,细胞和材料黏附良好,细胞外基质分泌旺盛.置于裸鼠皮下6周后,细胞-材料复合物可形成弹性、韧性良好的管状软骨;其大体外观,组织学结构均与兔自体气管软骨相似.修复兔气管缺损后,组织工程化气管和周围组织愈合良好,实验动物可自主呼吸,成活1～28d不等,平均12.3d,死亡原因多为痰液积存和气管内肉芽增生.结论以兔耳廓软骨细胞与PGA相复合,利用组织工程学技术可以形成大体外观、组织学结构均与兔自体气管软骨相似的“组织工程化气管”,并能用于修复兔自体气管全层缺损.

关键词：气管组织工程软骨细胞兔气管软骨缺损

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猪气管上皮细胞的分离、培养和鉴定

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中华胸心血管外科杂志 2006年第5期22卷 326-328页

作者：肖开颜周广东刘伟崔磊曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整形外科组织工程研究中心 200011

目的探索猪气管上皮细胞体外适宜的生长、增殖条件,以期为组织工程化气管内壁上皮化提供种子细胞。方法无菌切取猪颈段气管,细菌蛋白酶消化。以明胶作为铺层,接种、培养。待细胞贴壁后,进行光镜观察、广谱角蛋白免疫组化检测、免疫荧光... 详细信息

目的探索猪气管上皮细胞体外适宜的生长、增殖条件,以期为组织工程化气管内壁上皮化提供种子细胞。方法无菌切取猪颈段气管,细菌蛋白酶消化。以明胶作为铺层,接种、培养。待细胞贴壁后,进行光镜观察、广谱角蛋白免疫组化检测、免疫荧光鉴定。结果光镜观察可见细胞呈铺路石样生长。角蛋白检测和免疫荧光检测均呈阳性,而阴性对照组和空白对照组呈阴性。结论以明胶作为铺层可以培养出活力较好、纯度高的气管上皮细胞。

关键词：生物假体上皮细胞明胶气管

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皮肤成纤维细胞构建组织工程肌腱的实验研究

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中华医学杂志 2006年第6期86卷 416-418页

作者：陈兵刘伟邓丹许锋崔磊曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整形外科上海市组织工程研究中心 200011

近年来,研究者们应用类似于骨髓基质干细胞的细胞作为组织工程肌腱的种子细胞[1-3],未获明显进展.皮肤成纤维细胞和肌腱细胞均来源于中胚层,细胞形态相似.如果成纤维细胞能取代肌腱细胞,作为种子细胞应用于肌腱组织工程则可望解决种子... 详细信息

近年来,研究者们应用类似于骨髓基质干细胞的细胞作为组织工程肌腱的种子细胞[1-3],未获明显进展.皮肤成纤维细胞和肌腱细胞均来源于中胚层,细胞形态相似.如果成纤维细胞能取代肌腱细胞,作为种子细胞应用于肌腱组织工程则可望解决种子细胞缺乏的难题.作者曾应用成纤维细胞作为种子细胞修复肌腱缺损取得初步成功[4],但缺乏长期观察结果.本研究旨在长期观察皮肤成纤维细胞构建的组织工程肌腱,并与肌腱细胞作为种子细胞的组织工程肌腱进行比较。

关键词：皮肤成纤维细胞组织工程肌腱细胞构建实验研骨髓基质干细胞种子细胞肌腱细胞肌腱组织工程细胞形态细胞修复

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重组BMP7腺病毒的构建及转染骨髓基质干细胞后的表达

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中国生物医学工程学报 2005年第2期24卷 245-253页

作者：祝联刘伟刘德莉吴娟娟王丹茹崔磊曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整形外科上海市组织工程研究中心上海200011

根据Clonetech公司的腺病毒载体构建流程 ,原核表达载体pBlue- BMP7经一系列特定的限制性内切酶酶切 ,重组成BMP7的腺病毒载体 ,并转染 2 93细胞进行大量扩增、滴度测定。重组Adeno- BMP7经限制性内切酶PI SceⅠ和Ⅰ CeuⅠ双酶切获得B... 详细信息

根据Clonetech公司的腺病毒载体构建流程 ,原核表达载体pBlue- BMP7经一系列特定的限制性内切酶酶切 ,重组成BMP7的腺病毒载体 ,并转染 2 93细胞进行大量扩增、滴度测定。重组Adeno- BMP7经限制性内切酶PI SceⅠ和Ⅰ CeuⅠ双酶切获得BMP7基因片段 ,PCR扩增得到特异的扩增片段 ,表明重组的Adeno-BMP7载体构建成功 ,其中携带有目的基因BMP7cDNA片段。Adeno- Lac- Z的体外转染骨髓基质干细胞 (BMSCs) ,染色表明转染率可达90 %以上 ;RT- PCR、免疫组化证明Adeno -BMP7转染BMSCs后BMP7在基因和蛋白水平上均有表达 ;转染Adeno- BMP7后的BMSCs细胞悬液裸鼠肌肉内注射后 ,x光片和组织学观察都表明BMP7转染可明显促进新骨的形成 ,与没转染Adeno -BMP7的BMSCs有显著差异。

关键词：重组腺病毒骨髓基质干细胞骨形成蛋白7

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组织工程与创伤医学

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中华创伤杂志 2005年第1期21卷 25-28页

作者：曹谊林周广东刘伟崔磊上海第二医科大学附属第九人民医院整形外科上海第二医科大学组织工程研究中心200011

组织工程是近年来逐渐发展起来的一项新型医疗技术.其基本原理是应用细胞生物学和工程学的原理,将体外培养扩增后具有生物学活力及特定功能的细胞与可降解生物支架材料复合,在体内或体外再造组织或器官,用以修复或改善损伤组织或器官的... 详细信息

组织工程是近年来逐渐发展起来的一项新型医疗技术.其基本原理是应用细胞生物学和工程学的原理,将体外培养扩增后具有生物学活力及特定功能的细胞与可降解生物支架材料复合,在体内或体外再造组织或器官,用以修复或改善损伤组织或器官的结构与功能,最终形成有活力的正常组织或器官,达到真正意义上的生物学重建[1]。

关键词：组织工程创伤医学正常组织生物支架材料体内体外医疗技术器官结构与功能细胞生物学

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应用骨髓基质干细胞体外构建组织工程化管状软骨的实验研究

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中华显微外科杂志 2005年第4期28卷 328-330,i0004页

作者：夏万尧刘伟刘天一陈付国崔磊曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整形外科上海第二医科大学组织工程研究中心 200011

目的以骨髓基质干细胞(bone marrow stroma cells,BMSCs)为种子细胞,接种于管状聚羟基乙酸(PGA)支架上,在体外构建组织工程化管状软骨. 方法取长枫杂交仔猪髂骨骨髓,在低糖DMEM完全培养液培养2周,传代后以浓度为5×107/ml细胞悬液... 详细信息

目的以骨髓基质干细胞(bone marrow stroma cells,BMSCs)为种子细胞,接种于管状聚羟基乙酸(PGA)支架上,在体外构建组织工程化管状软骨. 方法取长枫杂交仔猪髂骨骨髓,在低糖DMEM完全培养液培养2周,传代后以浓度为5×107/ml细胞悬液均匀接种于管状PGA支架上,以高糖DMEM低血清特定培养液诱导(含胰岛素2 mg/L、转铁蛋白3 mg/L、丙酮酸100mg/L、地塞米松10-7mol/L、TGF-β 10ng/L、葡萄糖4.5 mg/ml、2%胎牛血清),连续诱导培养10周,从大体、组织学和Ⅱ型胶原免疫组化对再生组织进行评价. 结果 6周时染色见BMSCs-PGA复合物表层为2～4层成纤维样细胞组成的软骨膜,下层为较成熟的软骨组织,软骨细胞包埋在软骨陷窝内,有很多散在PGA纤维,而在中间部分,组织量较少,结构较构散.10周时BMSCs-PGA复合物外观呈乳白色软骨样,管壁较厚,有一定的弹性,但中间部管腔塌陷较明显,苏木素-伊红染色见实验组管状BMSCs-PGA和6周时相似,但结构更致密和规则,细胞数量较正常软骨组织少,还可见少量的未降解的PGA纤维.免疫组化证实形成的组织有Ⅱ型胶原分布. 结论管状BMSCs-PGA复合物在特定培养液诱导下,在体外能形成管状软骨,这为将来临床应用BMSCs作为种子细胞,修复软骨缺损或构建复合组织气管提供了实验基础和技术参数.

关键词：骨髓基质干细胞生物医学工程分化组织工程化体外构建软骨膜实验研管状苏木素-伊红染色 PGA支架

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组织工程学的建立与发展

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组织工程与重建外科杂志 2005年第1期1卷 5-8页

作者：曹谊林上海第二医科大学组织工程研究中心上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科上海200011

组织工程学(tissue engineering)是一门将细胞生物学和材料学相结合进行体外或体内构建组织或器官的新兴学科.其基本原理为从机体获取少量的活体组织,用特殊的酶或其它方法将细胞(又称种子细胞)从组织中分离出来并在体外进行培养扩增,... 详细信息

组织工程学(tissue engineering)是一门将细胞生物学和材料学相结合进行体外或体内构建组织或器官的新兴学科.其基本原理为从机体获取少量的活体组织,用特殊的酶或其它方法将细胞(又称种子细胞)从组织中分离出来并在体外进行培养扩增,然后将扩增的细胞与具有良好生物相容性、可降解和可吸收的生物材料按一定的比例混合,使细胞粘附在生物材料上形成细胞-材料复合物.将该复合物植入机体的组织或器官病损部位,随着生物材料在体内逐渐被降解和吸收,植入的细胞在体内不断增殖并分泌细胞外基质,最终形成相应的组织或器官,达到修复创伤和重建功能的目的.生物材料支架所形成的三维结构不但为细胞获取营养、生长和代谢提供了一个有利的空间,也为植入的细胞分泌细胞外基质并最终形成相应的组织或器官提供了一个良好的环境[1,2].组织工程的发展提供了一种组织再生的技术手段,将改变外科传统的'以创伤修复创伤'的治疗模式,迈入无创修复的新阶段.同时,组织工程的发展也将改变传统的医学模式,使得再生医学得以进一步的发展并最终用于疾病的临床治疗.

关键词：组织工程材料组织工程学生物材料种子细胞组织再生工程研究中心组织构建细胞外基质相结合软骨组织

来源：评论

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自体及异体皮肤肌腱细胞中生长因子分子水平的差异研究

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组织工程与重建外科杂志 2005年第2期1卷 70-72页

作者：翟华玲许锋刘伟曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科上海第二医科大学组织工程研究中心

目的:对自体及异体皮肤成纤维细胞和肌腱细胞的生长因子在分子水平的表达差异进行研究。方法:体外培养自体及异体人肌腱细胞和人皮肤成纤维细胞,用基因芯片的方法对两种细胞的生长因子进行检测及比较,并用RT-PCR的方法进一步验证。结果... 详细信息

目的:对自体及异体皮肤成纤维细胞和肌腱细胞的生长因子在分子水平的表达差异进行研究。方法:体外培养自体及异体人肌腱细胞和人皮肤成纤维细胞,用基因芯片的方法对两种细胞的生长因子进行检测及比较,并用RT-PCR的方法进一步验证。结果:自体皮肤、肌腱细胞生长因子的分子水平表达无差异,而异体皮肤、肌腱细胞生长因子分子水平的表达略有差异。结论:自体皮肤成纤维细胞与肌腱细胞的生长因子表达相似,证实两种细胞具有同源性,自体皮肤成纤维细胞可以成为构建组织工程化肌腱的种子细胞。而异体皮肤成纤维细胞和肌腱细胞的生长因子表达略有差异,可能为个体差异所致。

关键词：生长因子 RT-PCR 肌腱细胞皮肤成纤维细胞基因芯片

来源：评论

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共培养诱导小鼠ES细胞向软骨细胞分化的初步研究

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组织工程与重建外科杂志 2005年第3期1卷 161-164页

作者：谢峰张文杰丛笑倩陆峻泓曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科上海第二医科大学组织工程研究中心 200011

目的探讨软骨共培养体系诱导小鼠ES细胞向软骨细胞分化的可行性。方法GFP标记的小鼠ES细胞初步分化为EB后,将EB消化为单个细胞,同猪关节软骨细胞按一定比例(1:3)混合后接种于PGA材料,体外培养1周后植入裸鼠皮下3周取材。对照组为EB细胞... 详细信息

目的探讨软骨共培养体系诱导小鼠ES细胞向软骨细胞分化的可行性。方法GFP标记的小鼠ES细胞初步分化为EB后,将EB消化为单个细胞,同猪关节软骨细胞按一定比例(1:3)混合后接种于PGA材料,体外培养1周后植入裸鼠皮下3周取材。对照组为EB细胞接种组及软骨细胞接种组。取材后行连续冰冻切片,切片分别做荧光拍照,HE染色及甲苯胺蓝染色。结果组织学结果显示,EB细胞接种组形成畸胎瘤;软骨细胞对照组形成软骨组织;实验组形成软骨组织和畸胎瘤的混合体。甲苯胺蓝染色结果和荧光照片对照结果显示,部分软骨组织GFP阳性,由小鼠ES细胞分化而来。结论软骨其培养体系可以诱导小鼠ES细胞向软骨细胞分化,但得到的软骨组织不纯,混有畸胎瘤组织。

关键词：胚胎干细胞软骨细胞细胞分化共培养诱导

来源：评论

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