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中华内科杂志 2005年第2期44卷 106-110页

作者：汤建平顾越英沈南钱捷陈晓翔黄新芳黄向阳梁栋郭强杨程德鲍春德陈顺乐上海第二医科大学附属仁济医院风湿免疫科上海市风湿病研究所 200001

　目的　探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血中IFN α、 β、 ω和 γmRNA与蛋白的定量表达水平与SLE疾病特异性和病情活动性是否相关。方法　对 144例SLE患者、27例非SLE患者与 59例正常人取外周血抽提总RNA并逆转录成cDNA,运用实时定... 详细信息

　目的　探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血中IFN α、 β、 ω和 γmRNA与蛋白的定量表达水平与SLE疾病特异性和病情活动性是否相关。方法　对 144例SLE患者、27例非SLE患者与 59例正常人取外周血抽提总RNA并逆转录成cDNA,运用实时定量PCR法在基因测序仪上检测 4种IFN的mRNA表达水平,分离血浆,用ELISA法检测 4种蛋白水平,并与病情特异性和活动性进行分组比较,分析其意义。结果　(1)SLE患者组的 4种IFNmRNA定量表达水平均显著低于正常对照组, 差异有统计学意义 (P值均<0 01);SLE患者组的IFN αmRNA定量表达水平同时显著高于非SLE对照组 (P<0 01 )。(2)SLE活动组与非活动组之间的 4种IFN表达水平差异无统计学意义(P值均>0 05),SLE患者组的 4种IFNmRNA表达水平与有无肾、肺、脑损害无相关性。(3)SLE患者组的IFN积分显著低于正常对照组, 差异有统计学意义 (P<0 01 )。(4)SLE患者组和正常对照组组内的 4种IFN表达水平之间均呈强正相关 (各组间P<0 01 )。(5)IFN α、 β和 ω的蛋白水平在正常对照和SLE患者中差异均无统计学意义 (P值均 >0 05),IFN α的蛋白水平在活动期SLE患者比非活动期显著增高 (P<0 01 )。IFN γ的蛋白水平在SLE患者中有升高趋势。结论　IFN α、 β、 ω和

关键词：系统性红斑狼疮患者定量表达外周血干扰素基因 SLE患者 IFN-α ELISA法检测 mRNA表达正常对照组蛋白水平定量PCR法 SLE活动期病情活动性 αmRNA IFN-γ 特异性统计学 cDNA 总RNA 基因测序分离血浆逆转录正常人

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干扰素诱导表达的淋巴细胞抗原6复合体E和干扰素诱导蛋白1基因与系统性红斑狼疮患者病情活动性的关系

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中华医学杂志 2004年第14期84卷 1157-1160页

作者：汤建平顾越英沈南叶霜钱捷华晶陈兴国陈顺乐鲍春德王元张巍上海第二医科大学附属仁济医院风湿免疫科上海市风湿病研究所 200001

目的　探讨系统性红斑狼疮 (SLE)患者外周血单个核细胞 (PBMC)中干扰素诱导表达的淋巴细胞抗原 6复合体E(LY6E)基因与干扰素诱导蛋白 1(IFIT1)基因的实时定量表达水平与SLE疾病特异性和病情活动的相关性。方法　收集 14 4例SLE患者、2 ... 详细信息

目的　探讨系统性红斑狼疮 (SLE)患者外周血单个核细胞 (PBMC)中干扰素诱导表达的淋巴细胞抗原 6复合体E(LY6E)基因与干扰素诱导蛋白 1(IFIT1)基因的实时定量表达水平与SLE疾病特异性和病情活动的相关性。方法　收集 14 4例SLE患者、2 7例非SLE患者与 5 9名正常对照人群的临床资料 ,取外周血抽提总RNA并逆转录成cDNA ,运用SYBRgreendyeⅠ实时定量聚合酶链反应 (PCR)在ABIPRISM 790 0H基因测序仪上检测患者组和对照组的LY6E和IFIT1mRNA定量表达水平 (以 -ΔΔCT值表示 )的差异 ,并与病情活动度进行分组比较 ,分析其意义。结果　 ( 1)SLE患者总体的LY6EmRNA -ΔΔCT值 ( 5 5± 2 0 )显著高于非SLE患者 ( 3 4± 1 7,P =0 0 0 0 )和正常人 ( 4 5± 1 6 ,P =0 0 0 1)。 ( 2 )SLE活动组的LY6E和IFIT1的mRNA -ΔΔCT值 ( 6 2± 1 8,6 5±2 6 )均显著高于SLE非活动组 ( 4 4± 1 8,4 1± 2 6 ) (均P =0 0 0 0 )。 ( 3)SLE患者组的LY6E和IFIT1mRNA -ΔΔCT值与SLEDAI积分、符合SLE分类标准的条数之间有相关性 (P <0 0 0 1)。结论　作为干扰素诱导表达的基因 ,LY6EmRNA定量水平的升高对SLE患者的诊断有一定的特异性 ,LY6EmRNA和IFIT1mRNA的实时表达水平对SLE患者的病情活动度判断均有较大价值。

关键词：干扰素基因表达系统性红斑狼疮 SEE 淋巴细胞抗原6复合体E 诱导蛋白1基因活动性聚合酶链反应

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应用荧光定量PCR验证干扰素诱导表达基因在系统性红斑狼疮患者中的表达

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上海医学 2004年第8期27卷 584-586页

作者：华晶沈南陈顺乐黄新芳冯学兵钱捷张巍上海第二医科大学附属仁济医院风湿学科上海市风湿病研究所 200001

目的　应用荧光定量聚合酶链反应技术验证由基因芯片发现的干扰素 (IFN)诱导基因表达谱在系统性红斑狼疮 (SLE)、类风湿关节炎 (RA)和正常人中的表达。方法　测定 4 0例SLE患者、2 8例RA患者和2 9名正常人外周血白细胞Ly6e、IFIT1、OAS2... 详细信息

目的　应用荧光定量聚合酶链反应技术验证由基因芯片发现的干扰素 (IFN)诱导基因表达谱在系统性红斑狼疮 (SLE)、类风湿关节炎 (RA)和正常人中的表达。方法　测定 4 0例SLE患者、2 8例RA患者和2 9名正常人外周血白细胞Ly6e、IFIT1、OAS2IFNw、IFNa13表达 ,初步分析外周血分离出来的T、B及单核细胞中这些基因的表达。结果　与正常人相比 ,SLE组的Ly6e、IFIT1、OAS2基因表达显著增高 ,其中Ly6e、OAS2基因的表达较RA组也显著增高 ,但IFNw、IFNa13基因表达反而降低 .这组基因在单核细胞的表达最高。结论　IFN诱导的基因在SLE患者中呈高表达。

关键词：荧光定量PCR 干扰素诱导表达基因系统性红斑狼疮

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系统性红斑狼疮患者Th1/Th2细胞及白介素12、18及其受体mRNA的表达

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中华皮肤科杂志 2002年第4期35卷 263-265页

作者：黎莉王晓栋陈顺乐沈南鲍春德顾越英上海第二医科大学附属仁济医院上海市风湿病研究所 200001

目的探讨未经药物治疗的初发系统性红斑狼疮患者Th1/Th2细胞亚群分布,白介素12、白介素18及其受体的基因表达。方法运用三色荧光标记流式细胞术检测35例初发SLE患者、10例正常人Th1/Th2细胞亚群分布;ABI7700Real-TimePCR法同时检测38例... 详细信息

目的探讨未经药物治疗的初发系统性红斑狼疮患者Th1/Th2细胞亚群分布,白介素12、白介素18及其受体的基因表达。方法运用三色荧光标记流式细胞术检测35例初发SLE患者、10例正常人Th1/Th2细胞亚群分布;ABI7700Real-TimePCR法同时检测38例患者和28例正常人IL-12、IL-18及其受体mRNA表达水平。结果①初发狼疮患者Th1较正常人明显减低(P<0.05),但Th1/Th2无显著性改变。②与正常人组相比,SLE组患者IL-12、IL-18mRNA及其受体表达较正常人明显降低(P值均<0.05);③面部红斑组患者Th1/Th2、IL-12P35较正常人组降低(P均<0.05);④RNP阳性组患者IL-12P40较正常人组升高,IL-12P35、IL-18较正常人组降低(P均<0.05)。结论SLE是一种以Th1细胞下降,Th2细胞相对占优势的自身免疫性疾病,源于诱导向Th1细胞分化的一系列细胞因子及其受体减少和细胞因子间失衡所致。

关键词：系统性红斑狼疮 Th1细胞 Th2细胞白细胞介素12 白细胞介素18 白细胞介素受体 SLE

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重组自身抗原U1RNP多肽的制备及在风湿病诊断中的意义

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中华医学杂志 1997年第5期77卷 340-343页

作者：薛峰沈南陆瑜陈顺乐上海第二医科大学附属仁济医院风湿病学科上海市免疫研究所临床免疫研究室

制备重组核抗原Ｕ１ＲＮＰ多肽，为探讨自身免疫性疾病的机理及提高临床自身抗体检测敏感特异性奠定基础。方法对１２０例经对流免疫电泳证实的ＲＮＰ抗体阳性血清，以重组抗原为基质进行了印迹法测定。结果重组抗原具有分子量７０００... 详细信息

制备重组核抗原Ｕ１ＲＮＰ多肽，为探讨自身免疫性疾病的机理及提高临床自身抗体检测敏感特异性奠定基础。方法对１２０例经对流免疫电泳证实的ＲＮＰ抗体阳性血清，以重组抗原为基质进行了印迹法测定。结果重组抗原具有分子量７００００多肽抗原性，１１５例抗ＲＮＰ７００００抗体阳性血清中有１１２例可识别重组抗原，分子量为７００００（ｒ７００００），阳性率为９７．４％，而５例ＲＮＰ阴性血清及５例正常人血清均不识别ｒ７００００。结论ｒ７００００具有良好的核抗原ＲＮＰ７００００多肽的特异性，可进一步作为抗原表位研究的手段。

关键词：抗原U1RNP 多肽风湿病诊断

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要重视系统性红斑狼疮合并心血管事件的危险性

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中华医学杂志 2005年第14期85卷 942-943页

作者：陈顺乐第二医科大学附属仁济医院风湿病学科上海市风湿病研究所上海200001

1976年Urowitz等[1]最早提出了系统性红斑狼疮(SLE)死亡率曲线呈"双峰"模式,即早期死于感染和狼疮活动,晚期则死于心肌梗死.30年来大量的临床资料证实冠状动脉粥样硬化是影响SLE远期死亡率的主要因素.目前,我国SLE病人的预后... 详细信息

1976年Urowitz等[1]最早提出了系统性红斑狼疮(SLE)死亡率曲线呈"双峰"模式,即早期死于感染和狼疮活动,晚期则死于心肌梗死.30年来大量的临床资料证实冠状动脉粥样硬化是影响SLE远期死亡率的主要因素.目前,我国SLE病人的预后已显著改善,10年生存率已近85%,但随着SLE病人生存期的延长,动脉粥样硬化对病人的危害已逐渐凸显,因此动脉粥样硬化的危险性应该受到广泛重视[2]。

关键词：系统性红斑狼疮心血管事件冠状动脉粥样硬化 10年生存率远期死亡率 SLE 狼疮活动心肌梗死临床资料即早期病人生存期

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PBX1基因剪切体表达与SLE的相关研究

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现代免疫学 2004年第2期24卷 120-123页

作者：孙莉王元沈南鲍春德顾越英陈顺乐上海第二医科大学附属仁济医院风湿病研究所上海200001

了解PBX1基因各种剪切体的表达在SLE患者和正常人中是否存在差异 ,探讨PBX1的表达与SLE发病的相关性。通过PCR扩增及毛细管芯片电泳 ,确证剪切体h、k、l存在于人体 ;通过实时荧光定量PCR技术 ,对剪切体h、k、l分别进行SLE患者组和正常组... 详细信息

了解PBX1基因各种剪切体的表达在SLE患者和正常人中是否存在差异 ,探讨PBX1的表达与SLE发病的相关性。通过PCR扩增及毛细管芯片电泳 ,确证剪切体h、k、l存在于人体 ;通过实时荧光定量PCR技术 ,对剪切体h、k、l分别进行SLE患者组和正常组的mRNA表达定量比较。结果发现这 3种剪切体在患者组中的表达较正常人明显降低 ,正常人的表达是SLE的 9～ 12倍。重度患者的k、l剪切体与轻中度的病人相比表达明显降低 ,并发狼疮性肾炎的病人k剪切体的表达较无肾累及的病人显著降低。说明PBX1基因剪切体h、k、l在SLE患者中mRNA表达水平下降 ,并与SLE活动度及肾累及有关。

关键词： PBX1基因剪切体系统性红斑狼疮实时荧光定量PCR技术发病机制

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β_2糖蛋白I基因转染HEp-2细胞株中融合蛋白的表达及临床应用

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中华医学杂志 2002年第6期82卷 413-417页

作者：吕良敬陈顺乐顾越英沈南鲍春德王元杨程德叶萍俞翀曌上海第二医科大学附属仁济医院风湿病学科上海市免疫所临床免疫研究室200001

目的　观察 β2 糖蛋白I( β2 GPI)基因转染的HEp 2细胞 (HEp β2 GPI)中 β2 GPI融合蛋白的过度表达。探讨以HEp β2 GPI为底物间接免疫荧光 (IIF)法检测抗β2 GPI抗体的可行性。方法　应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)扩增人源 β2 GP... 详细信息

目的　观察 β2 糖蛋白I( β2 GPI)基因转染的HEp 2细胞 (HEp β2 GPI)中 β2 GPI融合蛋白的过度表达。探讨以HEp β2 GPI为底物间接免疫荧光 (IIF)法检测抗β2 GPI抗体的可行性。方法　应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)扩增人源 β2 GPIcDNA ,克隆入pEGFP C1 ,并转染HEp 2细胞。通过RT PCR、共焦荧光显微镜、免疫印迹法 (IBT)及IIF鉴定β2 GPI 绿色荧光蛋白 (GFP)融合蛋白的表达和抗原性。以转染细胞为底物IIF检测 1 9份疑诊继发性抗磷脂综合征 (APS)病人、1份原发性APS病人及 1 0份正常人血清的IgG β2 GPI,与同时进行的ELISA法检测IgG ACL、IgG β2 GPI的结果作比较。结果　 ( 1 )获得的HEp β2 GPI细胞传十几代后仍具有较强的 β2 GPI GFP表达 ,融合蛋白保持 β2 GPI的抗原性 ,其IIF表型具有特征性。 ( 2 )IIF法测血清IgG β2 GPI的结果显示 :7份病人血清出现特征性免疫荧光表型 ,而正常人血清均无荧光染色。 3种方法的比较性研究显示IIF法测IgG β2 GPI与ELISA法测IgG β2 GPI的一致性程度最佳 (Kappa值 0 .886 )。 ( 3)HEp β2 GPI保持了原型HEp 2细胞检测抗核抗体 (ANA)的荧光特性 ,且检出 2例原型HEp 2细胞IIFANA是阴性的血清。结论　HEp β2 GPI转染细胞株可用于IIF检测抗 β2 GPI,而且仍可作?

关键词： β2糖蛋白基因转染 HEp-2细胞免疫荧光技术自身抗体临床应用

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抗磷脂抗体与动脉粥样硬化的关系

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上海第二医科大学学报 2004年第5期24卷 397-400页

作者：陈晓翔王元上海第二医科大学仁济医院风湿病研究所上海200001

抗磷脂抗体(aPL)是一组异质性自身抗体,β2糖蛋白Ⅰ(β2-GP Ⅰ)和氧化低密度脂蛋白(oxLDL)复合物是导致动脉粥样硬化的自身抗原。抗磷脂抗体能抑制芳香烷基磷酸酯酶(PON)活性,降低总抗氧化能力(TAC),并Fcγ受体介导单核巨噬细胞摄入oxLD... 详细信息

抗磷脂抗体(aPL)是一组异质性自身抗体,β2糖蛋白Ⅰ(β2-GP Ⅰ)和氧化低密度脂蛋白(oxLDL)复合物是导致动脉粥样硬化的自身抗原。抗磷脂抗体能抑制芳香烷基磷酸酯酶(PON)活性,降低总抗氧化能力(TAC),并Fcγ受体介导单核巨噬细胞摄入oxLDL而促进动脉硬化的进程。本文就aPL在动脉粥样硬化发生过程中的作用和分子基础进行综述。

关键词：抗磷脂抗体动脉粥样硬化氧化负荷免疫学发病机制 β2糖蛋白Ⅰ 氧化低密度脂蛋白总抗氧化能力

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kinectin抗体免疫荧光检测方法的建立与应用

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中华检验医学杂志 2004年第6期27卷 348-351页

作者：冯修高陈顺乐陆瑜沈南叶萍叶霜俞翀曌钱捷耿文勤上海市风湿病研究所上海第二医科大学附属仁济医院风湿科上海市仁济医院风湿病学科南京军区福州总医院风湿科200001

目的　探讨kinectin蛋白在真核细胞的定位 ,并建立kinectin抗体免疫荧光检测方法(IFA)。方法　从人喉癌上皮细胞 (HepG2 )抽提RNA ,用逆转录聚合酶链反应扩增kinectin编码区序列 ,并连接到真核表达载体pEGFP C2中 ;将构建的 pEGFP kinec... 详细信息

目的　探讨kinectin蛋白在真核细胞的定位 ,并建立kinectin抗体免疫荧光检测方法(IFA)。方法　从人喉癌上皮细胞 (HepG2 )抽提RNA ,用逆转录聚合酶链反应扩增kinectin编码区序列 ,并连接到真核表达载体pEGFP C2中 ;将构建的 pEGFP kinectin载体导入HepG2细胞中 ,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白 (GFP)的荧光及其细胞定位。然后 ,用此转染细胞制成的底片 ,建立检测kinectin抗体的IFA。同时用IFA对 5 1名正常人及 4 6例白塞病 (BD)患者血清进行初步检测。结果经EcoRI单酶切和测序证实 ,成功地构建了表达kinectin的真核表达载体 ;pEGFP kinectin载体转染的细胞经 3次克隆筛选后 ,10 0 %的细胞胞浆内发出特征性荧光。用kinectin抗体阳性血清染色 ,也得到类似特征的荧光。IFA检测显示 ,BD患者kinectin抗体的阳性率为 32 7% ( 15 /4 6 ) ,正常人均为阴性。结论　构建kinectin表达的载体可在HepG2细胞中进行表达 ,并成功地用 pEGFP kinectin转染的HepG2细胞建立了检测kinectin抗体的IFA。

关键词： kinectin抗体免疫荧光检测方法建立应用

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