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Differentiation of NIH3T3 fibroblasts into adipocytes induced by peroxisome proliferator activated receptor γ2 expression

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Chinese Medical Journal 2001年第9期114卷 20-24,103页

作者：左祥生李果骆天红李纪平刘贇罗敏上海第二医科大学附属瑞金医院上海内分泌研究所上海200025

Objective　To express mouse peroxisome proliferator activated receptor γ2 (mPPARγ2) in NIH3T3 fibroblasts mediated by the recombinant retrovirus and study its ***　The mPPARγ2 gene was subcloned into retrovirus vector pGCEN to generate the recombinant pGCEN/mPPARγ2. Then it was packaged into PA317 cells and selected with G418. Viral supernatants were harvested and then used to infect NIH3T3 fibroblasts. PPARγ activator 5,8,11,14-eicosatetraynoic acid (ETYA) was used to induce the mPPARγ2-expressing NIH3T3 cells into adipocyte ***　The recombinant retrovirus pGCEN/mPPARγ2 was constructed, and the higher titers of the viral supernatants were obtained. mPPARγ2 was expressed in NIH3T3 cells mediated by the recombinant retrovirus. Lipid accumulation obviously existed in these induced adipocytes which morphologically resembled mature adipocytes in vivo and expressed tissue specific adipocyte P2 (AP2) and Leptin ***　An adipocyte differentiation model in vitro was successfully established. The work is the basis for further research on the molecular mechanism of adipocyte differentiation induced by PPARγ2.

关键词： peroaisome proliferator activated receptor γ2 · fibroblast · retrovirus · adipocyte

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过氧化物酶体增殖体激活受体γ2表达诱导NIH3T3细胞向脂肪细胞分化

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中华内科杂志 2001年第4期40卷 247-250,T002页

作者：左祥生李果骆天红李纪平刘赟孙卫华罗敏上海第二医科大学附属瑞金医院上海内分泌研究所 200025

目的　通过应用重组逆转录病毒介导小鼠过氧化物酶体增殖体激活受体γ２（ｍＰＰＡＲγ２）基因整合入ＮＩＨ３Ｔ３细胞基因组中进行表达，并研究其功能。方法　从经测序证实含正确序列ｍＰＰＡＲγ２的重组质粒ｐｃＤＮＡ３／ｍＰＰＡ... 详细信息

目的　通过应用重组逆转录病毒介导小鼠过氧化物酶体增殖体激活受体γ２（ｍＰＰＡＲγ２）基因整合入ＮＩＨ３Ｔ３细胞基因组中进行表达，并研究其功能。方法　从经测序证实含正确序列ｍＰＰＡＲγ２的重组质粒ｐｃＤＮＡ３／ｍＰＰＡＲγ２中，双酶切下ｍＰＰＡＲγ２全长ｃＤＮＡ序列，亚克隆入逆转录病毒载体ｐＧＣＥＮ中构建重组逆转录病毒载体ｐＧＣＥＮ／ｍＰＰＡＲγ２。对ｐＧＣＥＮ／ｍＰＰＡＲγ２及ｐＧＣＥＮ进行包装及Ｇ４１８抗性筛选，收集病毒上清，感染靶细胞ＮＩＨ３Ｔ３细胞，进行Ｇ４１８抗性筛选并进行扩增。在含过氧化物酶体增殖体激活受体γ（ＰＰＡＲγ）激活物５，８，１１，１４二十碳四烯酸等分化介质中，诱导ＰＰＡγ２表达增加，使ＮＩＨ３Ｔ３细胞向脂肪细胞分化。结果　构建了含ｍＰＰＡＲγ２全长ｃＤＮＡ重组逆转录病毒载体，获得了滴度分别为５ｘ１０４ＣＦＵ／ｍｌ和６ｘ１０５ＣＦＵ／ｍｌ的ｐＧＣＥＮ／ｍＰＰＡＲγ２及ｐＧＣＥＮ的病毒上清。经油红Ｏ染色证实分化１０ｄ的表达ｍＰＰＡＲγ２的ＮＩＨ３Ｔ３细胞中明显积聚了较多的中性脂肪，其细胞形态也与体内成熟脂肪细胞相似。结论　本研究在体外建立了由ＰＰＡＲγ２诱导ＮＩＨ３Ｔ３细胞向脂肪细胞分?

关键词：过氧化物酶体增殖体激活受体-γ2 NIH3T3细胞逆转录病毒科脂肪细胞分化肥胖

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一例家族性Carney综合征临床及分子生物学研究

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中华内科杂志 2004年第10期43卷 764-768页

作者：顾燕云陈瑛宋怀东李小英骆天红乔建鸥张毅肖家诚祝宇赵咏桔罗邦尧宁光上海第二医科大学附属瑞金医院内分泌代谢科上海市内分泌代谢病临床医学中心上海内分泌研究所200025 上海第二医科大学附属瑞金医院病理科 200025 上海第二医科大学附属瑞金医院泌尿外科 200025

目的　对原发性色素性结节样肾上腺病 (primarypigmentednodularadernaldisease,PPNAD)所致的库欣综合征患者进行家系调查及分子生物学研究。方法　患者入院后例行病史询问及各项相关检查。采集患者及其家系成员共 8份全血DNA样本。对PR... 详细信息

目的　对原发性色素性结节样肾上腺病 (primarypigmentednodularadernaldisease,PPNAD)所致的库欣综合征患者进行家系调查及分子生物学研究。方法　患者入院后例行病史询问及各项相关检查。采集患者及其家系成员共 8份全血DNA样本。对PRKAR1A基因各外显子PCR扩增 ,ABI 370 0测序。手术切除患者右侧肾上腺 ,部分液氮保存以备抽提RNA/DNA ,部分送病理。结果　患者临床表现为不典型库欣综合征 ,其父有心脏黏液瘤病史。患者地塞米松抑制试验结果显示皮质醇不受抑制 ,影像学检查发现肾上腺结节样增生。手术切除肾上腺组织呈现色素结节样病变 ,结合病理所见为PPNAD。测序发现患者及其父亲的PRKAR1A基因有一个新的杂合突变———S14 7N。结论　先证者及其父因分别患有PPNAD及心房黏液瘤并共同携带PRKAR1A的基因突变 ,最终共同确诊为家族性Carney综合征。

关键词：家族性Camey综合征分子生物学原发性色素性结节样肾上腺病库欣综合征家系调查

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糖尿病性高血压大鼠肾损害相关基因cDNA片段的克隆与初步鉴定

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生物化学与生物物理进展 2002年第1期29卷 94-99页

作者：张芳林李果叶传忠丁伟刘优萍谢超张迪孙卫华罗敏上海第二医科大学附属瑞金医院上海市内分泌研究所上海200025 复旦大学附属中山医院泌尿外科上海200032

为筛选大鼠糖尿病性高血压病所致的肾损害相关基因 ,自发性高血压大鼠以STZ 5 0mg/kg一次性尾静脉注射 ,建立糖尿病性高血压大鼠模型 ,4周后该模型大鼠尿蛋白持续阳性 ,电镜观察到肾小球基质增生、足突融合或扁平 .应用荧光标记的差异... 详细信息

为筛选大鼠糖尿病性高血压病所致的肾损害相关基因 ,自发性高血压大鼠以STZ 5 0mg/kg一次性尾静脉注射 ,建立糖尿病性高血压大鼠模型 ,4周后该模型大鼠尿蛋白持续阳性 ,电镜观察到肾小球基质增生、足突融合或扁平 .应用荧光标记的差异显示反转录聚合酶链反应 (DDRT PCR)及RNA印迹技术 ,比较两种模型大鼠肾皮质的基因表达差异 ,并进行差异条带的cDNA序列生物信息学分析 .其中 4个差异条带与Genbank数据库比较 ,2个为未知基因 ,2个为已知基因 ,即成淀粉样糖蛋白 (amyloidogenicglycoprotein ,AGG)、CDK10 9,两者可能与糖尿病性高血压肾损害的发生相关 ,对它们的进一步研究将为肾损害发病机理的发现提供思路 .

关键词：差异显示糖尿病性高血压肾损害生物信息学相关基因 cDNA片段克隆

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2型糖尿病性心脏病变早期相关基因的筛选和分析

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中华内科杂志 2002年第8期41卷 530-533页

作者：张芳林李果丁伟刘优萍谢超张迪周文中孙卫华杨架林罗敏上海第二医科大学附属瑞金医院上海市内分泌研究所 200025

目的　筛选 2型糖尿病性心脏病变早期相关基因并探讨其发病机制。方法　 (1)SD大鼠高热量饮食 2个月后链脲佐菌素 (STZ ,15mg/kg)一次性尾静脉注射 ,建立 2型糖尿病大鼠模型。(2 )分别于模型建立后 0 5、1 5、6 0个月取大鼠心脏组织... 详细信息

目的　筛选 2型糖尿病性心脏病变早期相关基因并探讨其发病机制。方法　 (1)SD大鼠高热量饮食 2个月后链脲佐菌素 (STZ ,15mg/kg)一次性尾静脉注射 ,建立 2型糖尿病大鼠模型。(2 )分别于模型建立后 0 5、1 5、6 0个月取大鼠心脏组织进行电镜观察。 (3)模型建立后 15d抽提大鼠心脏组织总RNA进行荧光标记的mRNA差异显示分析 ,用Northernblot证实差异表达基因并对未知序列进行生物信息学分析。结果　 (1)建立的 2型糖尿病模型大鼠 ,具有外周胰岛素抵抗和胰岛功能仅轻微受损等特征。 (2 )心肌超微结构观察结果证实糖尿病心脏病变出现于模型建立后 1 5个月的大鼠心脏 ,并随着病程延长而加重。 (3)应用mRNA差异显示分析技术筛选得到的克隆中 ,已知序列有肌型肉碱棕榈酰转移酶 ;未知序列分别命名为DCM1、2、5、6、8、11、12、16 ,已提交Genbank。结论　糖尿病心脏病变早期在超微结构发生改变前已出现能量代谢途径相关酶类基因表达差异 ,对其进一步研究将为早期干预逆转糖尿病心脏病变提供思路。

关键词： 2型糖尿病性心脏病变相关基因基因筛选发病机制动物模型超微结构

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脂联素水平分泌的节律性及其与糖皮质激素、胰岛素、瘦素的关系

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中华内科杂志 2004年第7期43卷 515-518页

作者：杨颖唐金凤汪启迪李凤英张一波周丽斌陈名道上海第二医科大学附属瑞金医院上海市内分泌研究所 200025

目的　观察库欣综合征患者、肥胖症者和正常人血清脂联素昼夜节律及糖皮质激素、胰岛素和瘦素对其影响。方法　 15例库欣综合征病人、10例单纯性肥胖症病人和 9例正常人 ,每 4h抽血 1次 ,测定 1d内的血清脂联素、皮质醇、胰岛素和瘦素... 详细信息

目的　观察库欣综合征患者、肥胖症者和正常人血清脂联素昼夜节律及糖皮质激素、胰岛素和瘦素对其影响。方法　 15例库欣综合征病人、10例单纯性肥胖症病人和 9例正常人 ,每 4h抽血 1次 ,测定 1d内的血清脂联素、皮质醇、胰岛素和瘦素的昼夜节律。同时观察地塞米松抑制试验对脂联素水平的影响。结果　库欣综合征病人、肥胖症者及正常人血清脂联素昼夜节律皆不明显 ,但肥胖症者 6个时间点脂联素水平显著低于正常人。脂联素曲线下面积与体重指数 (BMI)、腰围、腰臀围比和胰岛素曲线下面积呈显著负相关 (r值分别为 - 0 4 6、- 0 33、- 0 38、- 0 36 ,P值均 <0 0 5 ) ,而与瘦素的相关性尚未达到统计学差异 ,与皮质醇曲线下面积亦无相关性。 1、2、8mg地塞米松抑制试验对血清脂联素的影响皆不大 ,但库欣综合征病人术后第 1天脂联素水平明显低于术前。结论　血清脂联素水平与BMI、腰围呈负相关 ,既不受皮质醇昼高夜低的分泌节律影响 ,也不随餐后胰岛素释放的增加而变化 ,但术后的应激反应可能减少脂联素的分泌。

关键词：脂联素糖皮质激素胰岛素瘦素昼夜节律库欣综合征肥胖症

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口服糖耐量试验中血糖和胰岛素动态变化对瘦素的影响

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中华内科杂志 1999年第11期38卷 740-743页

作者：陈名道顾卫琼唐金凤李凤英陈春荣胡仁明许曼音陈家伦上海第二医科大学附属瑞金医院内分泌科上海市内分泌研究所200025

目的　利用口服葡萄糖耐量试验（ＯＧＴＴ）中体内血糖和胰岛素浓度的改变，探讨血糖和胰岛素对瘦素可能存在的即时和短时效应。方法　５０例Ⅱ型糖尿病和５０例非糖尿病个体（年龄、性别和体重指数相匹配）做ＯＧＴＴ，测定０、３... 详细信息

目的　利用口服葡萄糖耐量试验（ＯＧＴＴ）中体内血糖和胰岛素浓度的改变，探讨血糖和胰岛素对瘦素可能存在的即时和短时效应。方法　５０例Ⅱ型糖尿病和５０例非糖尿病个体（年龄、性别和体重指数相匹配）做ＯＧＴＴ，测定０、３０、６０、１２０、１８０分钟时相的血浆葡萄糖、血清胰岛素和瘦素水平。结果　糖尿病组空腹血清瘦素水平男性为（３．８８ ±０．６４） μｇ／Ｌ，女性为（８．３０ ±１．０６） μｇ／Ｌ；非糖尿病组男性为（５．０１ ±０．６４） μｇ／Ｌ，女性为（１０．４８±１．３０） μｇ／Ｌ，两组差别无显著性。与非糖尿病组相比，糖尿病组ＯＧＴＴ血糖升高明显，而胰岛素释放曲线呈反应低平，高峰不明显或延迟相。瘦素释放曲线两组均呈下降趋势，糖尿病组这种趋势更为明显。结论　血瘦素水平未曾随着胰岛素浓度的升高而升高，相反表现为昼夜节律性的下降，提示胰岛素促瘦素分泌的效应相对较弱，未能影响瘦素白天下降的趋势。

关键词：血糖胰岛素瘦素糖尿病病理

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糖皮质激素、胰岛素对血清瘦素及其昼夜节律的影响

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中华内科杂志 2002年第2期41卷 104-108页

作者：汪启迪陈名道胡仁明唐金凤李凤英罗邦尧上海第二医科大学附属瑞金医院内分泌科 200025 上海市内分泌研究所

目的　了解在库欣综合征病人、肥胖症者及正常人体内糖皮质激素、胰岛素对瘦素及其昼夜节律的影响。方法　 15例库欣综合征病人、10例单纯性肥胖症病人、9例正常人 ,每 4h抽血 1次 ,测定 1d内的血清瘦素、皮质醇、胰岛素昼夜节律。结果... 详细信息

目的　了解在库欣综合征病人、肥胖症者及正常人体内糖皮质激素、胰岛素对瘦素及其昼夜节律的影响。方法　 15例库欣综合征病人、10例单纯性肥胖症病人、9例正常人 ,每 4h抽血 1次 ,测定 1d内的血清瘦素、皮质醇、胰岛素昼夜节律。结果　库欣综合征病人、肥胖症者及正常人瘦素昼夜节律的高峰出现在 2 4∶0 0～ 3∶0 0 ,波谷出现在 8∶0 0～ 12∶0 0。瘦素昼夜节律的变化幅度与体重指数呈反比。胰岛素对瘦素的最大正向作用出现在 4～ 8h后。结论　糖皮质激素可增加瘦素的分泌 ,但并不影响瘦素的昼夜节律改变。瘦素昼夜节律变化幅度与体脂成反比 ,即越是肥胖的人 ,其瘦素昼夜节律越是低钝。胰岛素对瘦素的分泌有延迟效应。

关键词：昼夜节律糖皮质激素胰岛素瘦素血清肥胖症

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小檗碱对脂肪细胞分化的影响

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中华医学杂志 2003年第4期83卷 338-340页

作者：周丽斌陈名道王晓宋怀东杨颖唐金凤李凤英许曼音陈家伦上海第二医科大学瑞金医院上海市内分泌研究所 200025

目的探讨小檗碱对脂肪细胞分化的影响和其机制。方法培养3T3-L1前脂肪细胞。以四甲基偶氮唑盐(MTT)方法检测3T3-L1前脂肪细胞的增殖,以油红O染色检测3T3-L1脂肪细胞分化过程中胞浆脂肪的堆积,同时采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和... 详细信息

目的探讨小檗碱对脂肪细胞分化的影响和其机制。方法培养3T3-L1前脂肪细胞。以四甲基偶氮唑盐(MTT)方法检测3T3-L1前脂肪细胞的增殖,以油红O染色检测3T3-L1脂肪细胞分化过程中胞浆脂肪的堆积,同时采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹技术检测小檗碱对过氧化脂质体增殖激活受体γ2(PPARγ2)mRNA和蛋白质表达的影响。结果 10μmol/L小檗碱使3T3-L1前脂肪细胞的MTT值增加36%(P<0.001),小檗碱处理的脂肪细胞胞浆中,脂肪的堆积明显少于对照组,仅10％～20％的细胞出现较大脂滴。RT-PCR结果显示,在3T3-L1脂肪细胞分化过程中,小檗碱组脂肪细胞的PPARγ2 mRNR较对照组低48％(P<0.01),蛋白质免疫印迹结果也显示小檗碱抑制PPARγ2蛋白质的表达。结论小檗碱促进前脂肪细胞的增殖,小檗碱减少脂肪细胞分化过程中脂质的堆积、抑制脂肪细胞的分化,可能与其降低PPARγ2mRNA和蛋白质的表达有关,这提示小檗碱在临床上可能适合于治疗肥胖的2型糖尿病患者。

关键词：小檗碱脂肪细胞分化基因表达

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Clinical and gene mutation studies on a Chinese pedigree with glucocorticoid-remediable aldosteronism

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Chinese Medical Journal 2002年第7期115卷 979-982,142-143页

作者：丁伟刘礼斌胡仁明许曼音陈家伦上海第二医科大学附属瑞金医院上海市内分泌研究所上海200025 福建医科大学附属省协和医院内分泌科福州350001

OBJECTIVE: To report the clinical characteristics, biochemical profiles, diagnosis and treatment of one Chinese pedigree with glucocorticoid-remediable aldosteronism (GRA) and to study its molecular mechanism. METHODS: Plasma and urinary aldosterone, cortisol and plasma renin activities were dynamically tested and diagnostic therapy with dexamethasone was undergone in 3 affected subjects. Long-distance PCR as well as DNA sequencing were applied to detect the fusion gene in this pedigree. RESULTS: In this GRA pedigree, there were 4 affected subjects who had hypertension, hypokalemia and low basic and provoked renin activity. Three patients were given dexamethasone treatment, and had a significant decrease in plasma aldosterone concentrations (PACs) (from 192 +/- 9 ng/L to 87 +/- 7ng/L, P

关键词： Mutation Adult Aldosterone Corticotropin Female Glucocorticoids Humans Hyperaldosteronism Pedigree Research Support, Non-U.S. Gov't

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