检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：曹谊林崔磊刘伟上海组织工程研究与开发中心上海第二医科大学附属第九人民医院组织工程研究中心

组织工程学是根据细胞生物学和工程学的原理,应用正常具有特定生物学活性的组织细胞与生物材料相结合,在体外或体内构建组织、器官或其生物性替代物,以维持、修复、再生或改善损伤组织和器官功能的一门科学。组织工程学是在多学科交融... 详细信息

组织工程学是根据细胞生物学和工程学的原理,应用正常具有特定生物学活性的组织细胞与生物材料相结合,在体外或体内构建组织、器官或其生物性替代物,以维持、修复、再生或改善损伤组织和器官功能的一门科学。组织工程学是在多学科交融渗透的基础上发展起来的交叉学科。组织工程学的研究与发展需要吸收生物学、现代医学、材料与工程学等多学科的最新研究成果,需要不同领域的科学家共同合作研究。因此,组织工程学的研究可以带动一个国家多种相关交叉学科甚至

关键词：组织工程化骨交叉学科组织工程学骨髓基质干细胞组织工程技术组织工程实验室中国组织工程研究种子细胞组织构建定向分化诱导

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端粒酶基因真核表达载体pEGFP-hTRT构建及表达

端粒酶基因真核表达载体pEGFP-hTRT构建及表达

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中华口腔医学会第六届全国口腔黏膜病学术会

作者：周海文周曾同杨雯君刘德莉刘伟曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院口腔内科上海第二医科大学附属第九人民医院口腔内科上海第二医科大学口腔医学院口腔颌面外科上海第二医科大学组织工程研究中心上海市组织工程重点实验室上海第二医科大学组织工程研究中心上海市组织工程重点实验室上海第二医科大学组织工程研究中心上海市组织工程重点实验室

目的:构建具绿色荧光蛋白报道系统的端粒酶基因真核质粒载体,并研究其在293细胞中的表达情况,为基因转染、延长细胞寿命奠定基础。方法:酶切含人端粒酶逆转录酶(hTRT)基因的pGRN145质粒获取hTRT片段,插入经酶切及磷酸化处理的绿色荧光... 详细信息

目的:构建具绿色荧光蛋白报道系统的端粒酶基因真核质粒载体,并研究其在293细胞中的表达情况,为基因转染、延长细胞寿命奠定基础。方法:酶切含人端粒酶逆转录酶(hTRT)基因的pGRN145质粒获取hTRT片段,插入经酶切及磷酸化处理的绿色荧光蛋白载体pEGFP-C1,形成8.1Kb质粒,经HindⅢ、NotⅠ酶切电泳筛选、鉴定、测序并转染293细胞检测绿色荧光蛋白表达及外源性端粒酶活性。结果:酶切电泳分析,得到3.4Kb及4.7Kb大小的2个片段;测序结果接头两端序列正确;质粒在293细胞中正确表达,测得细胞外源性端粒酶表达。结论:端粒酶基因pEGFP-hTRT质粒成功构建,并可在真核细胞中表达,可用于研究组织工程种子细胞的衰老问题。

关键词：端粒酶绿色荧光蛋白基因转染

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荧光活性染料DiI标记观察人骨髓基质干细胞与部分脱钙骨粘附的实验研究

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中华创伤骨科杂志 2004年第3期6卷 311-314页

作者：李东崔磊舒朝锋柳向东张英柴岗刘伟曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科上海市组织工程研究与开发中心上海市组织工程研究重点实验室上海市200011

目的通过荧光活性染料DiI标记观察骨髓基质干细胞在部分脱钙骨上的粘附。方法用DiI标记人骨髓基质干细胞,接种于部分脱钙骨上,测定细胞的粘附率。于接种后第2、4、7天激光共聚焦显微镜观察细胞在支架材料上的生长状况。结果DiI标记的骨... 详细信息

目的通过荧光活性染料DiI标记观察骨髓基质干细胞在部分脱钙骨上的粘附。方法用DiI标记人骨髓基质干细胞,接种于部分脱钙骨上,测定细胞的粘附率。于接种后第2、4、7天激光共聚焦显微镜观察细胞在支架材料上的生长状况。结果DiI标记的骨髓基质干细胞的粘附率为(99.9±0.2)%,未标记的骨髓基质干细胞粘附率为(99.1±1)%,两者无统计学差异(P>0.05);第7天时细胞脱钙骨内孔覆盖。结论荧光活性染料DiI标记不影响骨髓基质干细胞在部分脱钙骨支架上的粘附,是观察骨髓基质干细胞在脱钙骨支架上粘附状况的较好方法。

关键词：荧光活性染料 DiI 骨髓基质干细胞脱钙骨支架材料组织工程

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转染端粒酶基因延长人口腔黏膜角化细胞寿命的实验研究

转染端粒酶基因延长人口腔黏膜角化细胞寿命的实验研究

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中华口腔医学会第六届全国口腔黏膜病学术会

作者：周海文周曾同黄鹤刘伟上海第二医科大学附属第九人民医院口腔医学院口腔内科上海第二医科大学附属第九人民医院口腔医学院口腔内科上海第二医科大学附属第九人民医院口腔医学院口腔内科上海第二医科大学组织工程研究中心上海市组织工程重点实验室

目的:将端粒酶基因(hTRT)转染入口腔黏膜角化细胞,延长细胞寿命。方法:hTRT cDNA经逆转录病毒pBABE-tert介导转染人人口腔黏膜角化细胞。RT-PCR检测外源性端粒酶,并检测端粒酶活性;通过细胞生物学一般性状包括细胞形态、生长速度和倍增... 详细信息

目的:将端粒酶基因(hTRT)转染入口腔黏膜角化细胞,延长细胞寿命。方法:hTRT cDNA经逆转录病毒pBABE-tert介导转染人人口腔黏膜角化细胞。RT-PCR检测外源性端粒酶,并检测端粒酶活性;通过细胞生物学一般性状包括细胞形态、生长速度和倍增时间及染色体倍性、β半乳糖苷酶染色细胞衰老研究、软琼脂培养、裸鼠接种致瘤试验比较转染前后细胞的生物学性状。结果:转染细胞端粒酶活性检测阳性,hTRT阳性细胞寿命较未转染细胞延长1倍,达8-10代。hTRT阳性细胞的生物学性状及染色体倍性与未转染OKC相同,软琼脂培养、裸鼠接种致瘤试验结果为阴性。结论:转染hTRT细胞寿命延长,较未转染细胞延长1倍,仍维持正常细胞表型及功能,未发生恶性转化。

关键词：口腔黏膜角化细胞上皮细胞端粒酶 hTRT/hTERT 基因转染

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组织工程技术构建小口径血管的实验研究

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中华外科杂志 2003年第9期41卷 679-683页

作者：刘阳张燕中陈瑾君殷德民曹颖许志成刘伟崔磊曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科上海第二医科大学组织工程研究中心 200011

目的　探讨运用组织工程技术构建血管组织的方法。　方法　将体外培养、扩增的新生婴儿脐静脉血管内皮细胞与平滑肌细胞接种于片状聚羟基乙酸材料上 ,形成细胞材料复合物 ,将该复合物包绕于硅胶管使成管状结构后移植于裸鼠皮下 ,第 2... 详细信息

目的　探讨运用组织工程技术构建血管组织的方法。　方法　将体外培养、扩增的新生婴儿脐静脉血管内皮细胞与平滑肌细胞接种于片状聚羟基乙酸材料上 ,形成细胞材料复合物 ,将该复合物包绕于硅胶管使成管状结构后移植于裸鼠皮下 ,第 2及第 6周后行大体及组织学检测。结果　组织工程技术构建的血管组织大体结构与天然血管相似 ,免疫组化显示组织工程化血管最内层有Ⅷ因子阳性细胞覆盖 ,管壁内有大量细胞外基质及散在的α 平滑肌肌动蛋白阳性细胞存在。结论　运用组织工程技术可形成具有与正常血管组织学结构相似的血管。

关键词：组织工程技术构建小口径血管实验研究生物相容性材料

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组织工程技术修复犬牙槽骨缺损的实验研究

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中华医学杂志 2003年第15期83卷 1339-1344页

作者：王敏翁雨来胡晓洁张艳柴岗祝联刘伟崔磊冯希平曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整形外科上海组织工程研究中心 200011 上海第二医科大学附属第九人民医院口腔内科 200011 上海第二医科大学附属第九人民医院口腔预防科 200011

目的　研究以犬骨髓基质细胞 (bonemarrowstromalcells ,BMSC)为种子细胞 ,利用组织工程技术修复水平型牙槽骨缺损的可行性。方法　抽取成年犬骨髓 ,用梯度离心法获取单个核细胞 ,经条件培养液体外诱导培养后 ,进行组织化学、免疫细胞... 详细信息

目的　研究以犬骨髓基质细胞 (bonemarrowstromalcells ,BMSC)为种子细胞 ,利用组织工程技术修复水平型牙槽骨缺损的可行性。方法　抽取成年犬骨髓 ,用梯度离心法获取单个核细胞 ,经条件培养液体外诱导培养后 ,进行组织化学、免疫细胞化学、扫描电镜检测 ,并将培养的第 3代细胞与藻酸钙形成复合物。在犬双侧下颌第 3、4前磨牙和第 1磨牙颊侧制备冠根向深 5mm的水平型牙槽骨缺损 ,用以下方法进行治疗 :(1)细胞藻酸钙复合物修复组 ;(2 )藻酸钙对照组 ;(3)空白对照组。4、12、2 4周后经组织学检查骨缺损修复情况。并比较 12周时实验组与对照组的修复效果。结果在体外经诱导培养的BMSC可表达AKP、cbfa1、Ⅰ型胶原等 ,表现出成骨细胞活性 ;4、12、2 4周细胞藻酸钙复合物修复部位显示逐渐有骨形成 ;第 12周时 ,实验组牙槽嵴高度可增高 2 4mm± 0 9mm ,达到原来的 4 8 5 9% ,空白对照组增高 0 8mm± 0 8mm ,达到原来的 15 76 % ,材料对照组增高 1 0mm± 0 9mm ,达到原来的 19 74 % ,实验组的牙槽嵴增高度和修复率与两对照组均有显著性差异(P <0 0 1)。结论　能以BMSC为种子细胞 ,以藻酸钙为支架材料 ,利用组织工程技术部分修复水平型牙槽骨缺损。

关键词：组织工程技术修复牙槽骨缺损实验研究骨髓细胞藻酸盐

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基因转染技术提高体内构建组织工程化软骨质量的实验研究

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中国临床康复 2003年第6期7卷 918-919,T002页

作者：刘方军曹谊林刘伟崔磊夏万尧钟斌刘德莉吴娟娟上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科上海第二医科大学组织工程研究中心上海市200011

目的:研究转化生长因子β1(TGF-β1)cDNA基因转染对软骨细胞Ⅱ型胶原表达的调控作用,为基因转染技术在软骨组织工程中的应用提供理论依据。方法:利用脂质体Fugene6将含TGF-β1基因的真核表达载体及空白载体分别转染至软骨细胞(基因转染... 详细信息

目的:研究转化生长因子β1(TGF-β1)cDNA基因转染对软骨细胞Ⅱ型胶原表达的调控作用,为基因转染技术在软骨组织工程中的应用提供理论依据。方法:利用脂质体Fugene6将含TGF-β1基因的真核表达载体及空白载体分别转染至软骨细胞(基因转染组和对照组),RT-PCR、Northern-Blots、原位杂交及免疫组化检测TGF-β1调节体外培养软骨细胞Ⅱ型胶原表达的变化。结果:TGF-β1基因转染软骨细胞后,其Ⅱ型前胶原mRNA及其蛋白的表达均显著增强,且随着TGF-β1蛋白表达的丧失,其对软骨细胞Ⅱ型前胶原mRNA表达的促进作用亦逐渐减弱。结论:TGF-β1可以上调体外培养软骨细胞Ⅱ型胶原的表达。

关键词：基因转染技术体内构建组织工程化软骨质量软骨细胞代谢转化生长因子β

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重组端粒酶pEGFP-hTRT质粒的构建

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中国修复重建外科杂志 2003年第3期17卷 230-232页

作者：周海文周曾同杨雯君刘德莉李卿胡洪亮刘伟崔磊曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院口腔内科口腔研究所上海200011 上海第二医科大学附属第九人民医院口腔颌面外科上海200011 上海第二医科大学组织工程研究中心上海市组织工程重点实验室上海200011

目的　构建具有绿色荧光蛋白报道 (GFP)基因的端粒酶真核质粒载体 ,为转染细胞、延长细胞寿命提供基础。　方法　酶切含人端粒酶逆转录酶 (h TRT)基因的 p GRN14 5质粒获取 h TRT片段 ,插入经酶切及磷酸化处理的 GFP载体 p EGFP- C1,形... 详细信息

目的　构建具有绿色荧光蛋白报道 (GFP)基因的端粒酶真核质粒载体 ,为转染细胞、延长细胞寿命提供基础。　方法　酶切含人端粒酶逆转录酶 (h TRT)基因的 p GRN14 5质粒获取 h TRT片段 ,插入经酶切及磷酸化处理的 GFP载体 p EGFP- C1,形成 8.1kb质粒 ,经 Hind 、Not 酶切电泳筛选、鉴定并测序。　结果　经酶切电泳分析得到3.4 kb及 4 .7kb大小的两片段 ;测序结果显示接头两端序列正确。　结论　重组端粒酶 p EGFP- h TRT质粒的成功构建 ,可用于细胞转染 ,对进一步研究组织工程种子细胞的衰老问题具有重要意义。

关键词：端粒酶 pEGFP-hTRT质粒构建重组质粒绿色荧光蛋白

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利用聚羟基乙酸构建组织工程皮肤的实验研究

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中华实验外科杂志 2003年第11期20卷 984-985,T001页

作者：杨光辉崔磊刘伟曹谊林上海组织工程研究与开发中心上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科 200235

目的　以聚羟基乙酸 (PGA)为培养支架 ,用组织工程方法在体外构建双层、有活性皮肤。方法　应用酶消化法分别获取人成纤维细胞 (FB)和表皮角质形成细胞 (KC) ,体外扩增培养。接种HF与PGA上 1周后 ,在复合物表面接种KC ,共培养 1周将复... 详细信息

目的　以聚羟基乙酸 (PGA)为培养支架 ,用组织工程方法在体外构建双层、有活性皮肤。方法　应用酶消化法分别获取人成纤维细胞 (FB)和表皮角质形成细胞 (KC) ,体外扩增培养。接种HF与PGA上 1周后 ,在复合物表面接种KC ,共培养 1周将复合物置于气液界面继续培养。于不同时间段取材 ,行组织学、超微结构及免疫组织化学检测。结果　接种表皮角质形成细胞在“FB PGA”复合物表面 1周后可见 2～ 3层连续的HK在复合物上生长良好 ;4周时PGA已部分降解 ,表皮分层分化较完善 ,抗involucrin染色阳性 ,透射电镜观察可见表皮细胞分层分化良好 ,细胞的相邻面有桥粒连接。结论　采用组织工程技术可以在体外构建双层、有活性的人工皮肤 ;组织工程皮肤具有和正常皮肤相似的组织学特征及生化成分。

关键词：聚羟基乙酸组织工程实验人工皮肤人成纤维细胞人表皮角质形成细胞

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组织工程技术修复全层皮肤缺损的研究

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中华实验外科杂志 2003年第5期20卷 408-410页

作者：杨光辉崔磊刘伟曹谊林上海组织工程研究与开发中心上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科 200011

目的　探讨用异体脱细胞真皮基质 (ADM )复合自体表皮角朊细胞 (AKCs)移植修复全层皮肤缺损的可行性。方法　用DispaseII/TritonX 10 0制备ADM。在猪背部两侧分别作 5cm× 5cm的全层皮肤缺损 ,用ADM覆盖创面。 7～ 10d后 ,将AKCs与P... 详细信息

目的　探讨用异体脱细胞真皮基质 (ADM )复合自体表皮角朊细胞 (AKCs)移植修复全层皮肤缺损的可行性。方法　用DispaseII/TritonX 10 0制备ADM。在猪背部两侧分别作 5cm× 5cm的全层皮肤缺损 ,用ADM覆盖创面。 7～ 10d后 ,将AKCs与Pluronic混匀涂布于一侧ADM表面 ,另一侧单纯ADM组作为对照组。术后观察愈合情况 ,比较创面收缩率 ,取材作组织学及电镜观察。结果　ADM去除了所有细胞成分 ,胶原束结构及排列均保持正常 ;ADM在创面成活 ,能诱导成纤维细胞长入和新生血管形成 ,并支持移植于其表面的AKCs生长。 4周时 ,对照组收缩至原面积的 41% ,实验组为原面积的 65 %。结论　ADM可以作为重建真皮层的诱导支架 ;ADM与AKCs复合移植可以形成新生皮肤并修复全层皮肤缺损。

关键词：组织工程修复全层皮肤缺损表皮角朊细胞移植

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