检索结果-内蒙古大学图书馆

中华创伤骨科杂志 2004年第3期6卷 311-314页

作者：李东崔磊舒朝锋柳向东张英柴岗刘伟曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科上海市组织工程研究与开发中心上海市组织工程研究重点实验室上海市200011

目的通过荧光活性染料DiI标记观察骨髓基质干细胞在部分脱钙骨上的粘附。方法用DiI标记人骨髓基质干细胞,接种于部分脱钙骨上,测定细胞的粘附率。于接种后第2、4、7天激光共聚焦显微镜观察细胞在支架材料上的生长状况。结果DiI标记的骨... 详细信息

目的通过荧光活性染料DiI标记观察骨髓基质干细胞在部分脱钙骨上的粘附。方法用DiI标记人骨髓基质干细胞,接种于部分脱钙骨上,测定细胞的粘附率。于接种后第2、4、7天激光共聚焦显微镜观察细胞在支架材料上的生长状况。结果DiI标记的骨髓基质干细胞的粘附率为(99.9±0.2)%,未标记的骨髓基质干细胞粘附率为(99.1±1)%,两者无统计学差异(P>0.05);第7天时细胞脱钙骨内孔覆盖。结论荧光活性染料DiI标记不影响骨髓基质干细胞在部分脱钙骨支架上的粘附,是观察骨髓基质干细胞在脱钙骨支架上粘附状况的较好方法。

关键词：荧光活性染料 DiI 骨髓基质干细胞脱钙骨支架材料组织工程

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端粒酶基因真核表达载体pEGFP-hTRT构建及表达

端粒酶基因真核表达载体pEGFP-hTRT构建及表达

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中华口腔医学会第六届全国口腔黏膜病学术会

作者：周海文周曾同杨雯君刘德莉刘伟曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院口腔内科上海第二医科大学附属第九人民医院口腔内科上海第二医科大学口腔医学院口腔颌面外科上海第二医科大学组织工程研究中心上海市组织工程重点实验室上海第二医科大学组织工程研究中心上海市组织工程重点实验室上海第二医科大学组织工程研究中心上海市组织工程重点实验室

目的:构建具绿色荧光蛋白报道系统的端粒酶基因真核质粒载体,并研究其在293细胞中的表达情况,为基因转染、延长细胞寿命奠定基础。方法:酶切含人端粒酶逆转录酶(hTRT)基因的pGRN145质粒获取hTRT片段,插入经酶切及磷酸化处理的绿色荧光... 详细信息

目的:构建具绿色荧光蛋白报道系统的端粒酶基因真核质粒载体,并研究其在293细胞中的表达情况,为基因转染、延长细胞寿命奠定基础。方法:酶切含人端粒酶逆转录酶(hTRT)基因的pGRN145质粒获取hTRT片段,插入经酶切及磷酸化处理的绿色荧光蛋白载体pEGFP-C1,形成8.1Kb质粒,经HindⅢ、NotⅠ酶切电泳筛选、鉴定、测序并转染293细胞检测绿色荧光蛋白表达及外源性端粒酶活性。结果:酶切电泳分析,得到3.4Kb及4.7Kb大小的2个片段;测序结果接头两端序列正确;质粒在293细胞中正确表达,测得细胞外源性端粒酶表达。结论:端粒酶基因pEGFP-hTRT质粒成功构建,并可在真核细胞中表达,可用于研究组织工程种子细胞的衰老问题。

关键词：端粒酶绿色荧光蛋白基因转染

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小鼠FasL基因的克隆和在软骨细胞中表达

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细胞与分子免疫学杂志 2003年第4期19卷 326-328,337页

作者：胡洪亮曹谊林刘阳刘伟崔磊商庆新上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科上海市组织工程重点实验室上海200011

目的 :获得小鼠FasL(mFasL)的cDNA克隆 ,通过逆转录病毒表达系统 pLNCX2 在软骨细胞中进行表达 ,并分析其功能。方法 :应用RT PCR和T A克隆技术 ,从激活的小鼠脾脏淋巴细胞总RNA中 ,扩增mFasLcDNA并克隆到T载体中 ,再亚克隆到 pLNCX2 ... 详细信息

目的 :获得小鼠FasL(mFasL)的cDNA克隆 ,通过逆转录病毒表达系统 pLNCX2 在软骨细胞中进行表达 ,并分析其功能。方法 :应用RT PCR和T A克隆技术 ,从激活的小鼠脾脏淋巴细胞总RNA中 ,扩增mFasLcDNA并克隆到T载体中 ,再亚克隆到 pLNCX2 中。转染软骨细胞后 ,以流式细胞仪检测mFasL蛋白的表达 ,以单向混合淋巴细胞反应鉴定其活性。结果 :成功地克隆了 0 .85 5kb的mFasLcDNA ,并经测序确证。通过 pLNCX2 转染软骨细胞 ,转染率为 6 0 .6 4 %。流式细胞仪检测到FasL蛋白的表达 ,并能显著抑制同种异体的单向混合淋巴细胞反应 ,刺激指数下调到未转染软骨细胞的11.71%。结论 :克隆到的mFasL基因 ,并能通过 pLNCX2 有效表达。

关键词：逆转录病毒 FasL RT—PCR 软骨细胞 T—A克隆

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永生化软骨细胞的生物学特性

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实验生物学报 2003年第6期36卷 435-444页

作者：李卿刘伟陈瑾君陆峻泓刘德莉曹谊林上海市组织工程重点实验室上海200011 上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科

本实验为建立永生化的猪耳软骨细胞系并探讨它的生物学特性,以包含人端粒酶逆转录酶催化亚基(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因的逆转录病毒载体(pBABE-hTERT)转染至正常猪耳软骨细胞中。经筛选、挑取克隆,得永生化... 详细信息

本实验为建立永生化的猪耳软骨细胞系并探讨它的生物学特性,以包含人端粒酶逆转录酶催化亚基(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因的逆转录病毒载体(pBABE-hTERT)转染至正常猪耳软骨细胞中。经筛选、挑取克隆,得永生化软骨细胞系(TL1),在体外已连续培养10个月。RT-PCR和PCR-ELISA法测得其有高水平的端粒酶稳定表达。通过生长曲线、HE染色、流式细胞仪分析,以及裸鼠成瘤实验,表明它的细胞增殖能力增加,凋亡率下降并维持在体外培养早期细胞的水平,且细胞无恶变迹象。对软骨特异性分子的RT-PCR、Western杂交和免疫组化的结果分析,发现TL1中有SOX9的表达;无结构完整的aggrecan表达;有低水平的Ⅱ型胶原表达;Ⅰ型胶原的表达随细胞的表型改变而改变。综上所述,通过外源性hTERT的稳定表达,建立了永生化的猪耳软骨细胞系;但是它在单层培养的状态下,软骨细胞特异性的基因表达逐步发生改变,导致其部分丧失软骨细胞的正常表型。

关键词：软骨细胞永生化分化生物学特性人端粒酶逆转录酶催化亚基

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不同类型人软骨细胞体外生物学特性比较

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中华实验外科杂志 2003年第6期20卷 497-498页

作者：张艳柴岗崔磊刘伟曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整形外科上海市组织工程研究重点实验室上海组织工程研究开发中心 200011

目的　通过研究人耳软骨和肋软骨两种不同类型软骨细胞体外分离、增殖、老化规律 ,为选择合适的组织工程种子细胞提供依据。方法　取小耳畸形残耳软骨和肋软骨 ,体外分别用0 .0 5 %和 0 .15 %Ⅱ型胶原酶消化 16h分离 ,台盼蓝染色计活细... 详细信息

目的　通过研究人耳软骨和肋软骨两种不同类型软骨细胞体外分离、增殖、老化规律 ,为选择合适的组织工程种子细胞提供依据。方法　取小耳畸形残耳软骨和肋软骨 ,体外分别用0 .0 5 %和 0 .15 %Ⅱ型胶原酶消化 16h分离 ,台盼蓝染色计活细胞数 ,得原代细胞获得率。体外单层培养 6代 ,观察形态学改变 ,群体倍增时间 (PDT ) ,免疫细胞化学染色及逆转录聚合酶链反应(RT PCR)检测Ⅱ型胶原和Aggrecan评定软骨细胞老化规律。结果　人残耳软骨组织平均细胞获得率为 ( 1.5 4± 0 .14 )× 10 6/ g ,肋软骨平均获得率为 ( 0 .46± 0 .0 9)× 10 6/ g ,两类软骨细胞P1的PDT最短 ,前 3代增殖力较强 ,P3 以后PDT明显延长 ,P6代细胞不再增殖。免疫细胞化学及RT PCR均证实耳软骨细胞 3代内、肋软骨细胞 4代内软骨细胞表型稳定。结论　第 2代的耳软骨细胞与第 3代肋软骨细胞可作为人体内组织工程化软骨构建的种子细胞。

关键词：软骨细胞体外生物学特性组织工程种子细胞

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重组端粒酶pEGFP-hTRT质粒的构建

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中国修复重建外科杂志 2003年第3期17卷 230-232页

作者：周海文周曾同杨雯君刘德莉李卿胡洪亮刘伟崔磊曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院口腔内科口腔研究所上海200011 上海第二医科大学附属第九人民医院口腔颌面外科上海200011 上海第二医科大学组织工程研究中心上海市组织工程重点实验室上海200011

目的　构建具有绿色荧光蛋白报道 (GFP)基因的端粒酶真核质粒载体 ,为转染细胞、延长细胞寿命提供基础。　方法　酶切含人端粒酶逆转录酶 (h TRT)基因的 p GRN14 5质粒获取 h TRT片段 ,插入经酶切及磷酸化处理的 GFP载体 p EGFP- C1,形... 详细信息

目的　构建具有绿色荧光蛋白报道 (GFP)基因的端粒酶真核质粒载体 ,为转染细胞、延长细胞寿命提供基础。　方法　酶切含人端粒酶逆转录酶 (h TRT)基因的 p GRN14 5质粒获取 h TRT片段 ,插入经酶切及磷酸化处理的 GFP载体 p EGFP- C1,形成 8.1kb质粒 ,经 Hind 、Not 酶切电泳筛选、鉴定并测序。　结果　经酶切电泳分析得到3.4 kb及 4 .7kb大小的两片段 ;测序结果显示接头两端序列正确。　结论　重组端粒酶 p EGFP- h TRT质粒的成功构建 ,可用于细胞转染 ,对进一步研究组织工程种子细胞的衰老问题具有重要意义。

关键词：端粒酶 pEGFP-hTRT质粒构建重组质粒绿色荧光蛋白

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组织工程技术构建血管壁的实验研究

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中国临床康复 2003年第6期7卷 922-923,T003页

作者：刘阳张燕中许志成刘伟崔磊曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科上海第二医科大学组织工程重点实验室上海市200011 上海第二医科大学附属仁济医院血管外科上海市200000

目的:构建组织的方法和环境是组织工程研究所涉及的另一重要环节,对于能否最终形成新生组织以及新生组织质量的好坏起着关键作用。探讨运用组织工程技术构建血管中膜组织的方法。方法:将体外培养、扩增的犬平滑肌细胞接种于片状聚羟基乙... 详细信息

目的:构建组织的方法和环境是组织工程研究所涉及的另一重要环节,对于能否最终形成新生组织以及新生组织质量的好坏起着关键作用。探讨运用组织工程技术构建血管中膜组织的方法。方法:将体外培养、扩增的犬平滑肌细胞接种于片状聚羟基乙酸(PGA)材料上,形成细胞-材料复合物,将该复合物包绕于硅胶管使成管状结构后移植于裸鼠皮下,第2,6,11周后行大体及组织学检测。结果:裸鼠皮下形成的组织工程化血管中膜组织学结构在不同的时间点具有不同的特征。结论:运用组织工程技术可形成具有与天然血管中膜组织学结构相似的血管。

关键词：组织工程技术构建血管壁实验研究生物医学工程

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应用组织工程技术构建角膜组织的研究新进展

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生物医学工程与临床 2003年第3期7卷 172-175页

作者：王爱丽曹谊林(审校) 刘伟(审校) 姚康德(审校) 上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科上海市组织工程重点实验室上海200011 天津大学材料科学与工程学院天津300072

组织工程化角膜的研究开展至今已取得长足的进步。在以往的体外单层组织构建的基础上 ,正逐渐向三维体系的多层结构深入 ,在功能和结构上越来越接近于正常的角膜组织。各种细胞共培养技术的改进和新型载体材料的应用也有力地推动其进一... 详细信息

组织工程化角膜的研究开展至今已取得长足的进步。在以往的体外单层组织构建的基础上 ,正逐渐向三维体系的多层结构深入 ,在功能和结构上越来越接近于正常的角膜组织。各种细胞共培养技术的改进和新型载体材料的应用也有力地推动其进一步完善。

关键词：组织工程角膜组织多层结构结构功能载体材料

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自体组织工程化全层皮肤缺损修复实验研究

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中华外科杂志 2002年第1期40卷 24-26,T001页

作者：曹谊林蔡霞崔磊商庆新刘伟关文祥上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科上海第二医科大学组织工程研究重点实验室 210011

目的　为制成含表皮细胞与成纤维细胞的双层皮肤替代物 ,直接用于修复全层皮肤缺损。方法　选用长枫杂交仔猪 10只 ,酶消化法获取皮肤表皮细胞与成纤维细胞 ,将原代培养处于对数生长期的表皮细胞、成纤维细胞分别与 3 0 %氧化异丙烯F 1... 详细信息

目的　为制成含表皮细胞与成纤维细胞的双层皮肤替代物 ,直接用于修复全层皮肤缺损。方法　选用长枫杂交仔猪 10只 ,酶消化法获取皮肤表皮细胞与成纤维细胞 ,将原代培养处于对数生长期的表皮细胞、成纤维细胞分别与 3 0 %氧化异丙烯F 12 7混匀成细胞悬液后 ,种植聚羟基乙酸(polyglycolicacid ,PGA)形成细胞生物材料复合物 ,用于修复自体动物背部直径 4cm全层皮肤缺损 ,以单纯生物材料 (PGA +氧化异丙烯 )充填的创面作为对照组。修复术后 1,2 ,4 ,8周取材 ,通过组织学和基底膜特殊染色等方法对新生组织进行评价。结果　第 1周新生组织即出现表皮与真皮 2层结构 ,特殊染色观察到连续的基底膜。第 2周表皮与真皮均较前增厚。修复后第 8周组织工程化皮肤的形态结构均与正常皮肤相似。对照组则无皮肤形成 ,仅见大量肉芽组织。结论　应用组织工程技术 ,以PGA +氧化异丙烯为表皮细胞。

关键词：人工皮肤皮肤移植成纤维细胞动物实验

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骨髓间质干细胞向软骨细胞表型定向诱导分化的实验研究

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中华整形外科杂志 2002年第1期18卷 12-14页

作者：夏万尧商庆新崔磊徐蓉丁小邦曹谊林上海第二医科大学组织工程研究中心上海市组织工程研究重点实验室上海第二医科大学附属第九人民医院整形外科

目的　研究体外培养的猪骨髓间质干细胞 (BoneMarrowStemCells,MSCs)在特定培养液作用下向软骨细胞表型转化 ,探讨其作为组织工程化软骨的种子细胞的可行性。方法　取成年崇明长枫杂交猪髂骨骨髓 5ml,在低糖DMEM完全培养液培养 2周 ,传... 详细信息

目的　研究体外培养的猪骨髓间质干细胞 (BoneMarrowStemCells,MSCs)在特定培养液作用下向软骨细胞表型转化 ,探讨其作为组织工程化软骨的种子细胞的可行性。方法　取成年崇明长枫杂交猪髂骨骨髓 5ml,在低糖DMEM完全培养液培养 2周 ,传代后以高糖DMEM无血清特定培养液诱导 (含胰岛素 2mg L、转铁蛋白 3mg L、丙酮酸 10 0mg L、地塞米松 10 - 7mol L、TGF β110ng ml) ,在相差显微镜和电镜下进行观察 ,免疫组化检测Ⅱ型胶原分泌 ,原位杂交检测Ⅱ型胶原mRNA表达。结果　细胞形态由成纤维样梭形向多角形、多边形转变 ,透视电镜观察见大量扩张粗面内质网、高尔基体、线粒体。诱导培养后第 7,14dⅡ型胶原免疫组化阳性 ,同时原位杂交检测Ⅱ型胶原mRNA表达呈阳性。结论　MSCs在特定培养液诱导下能向软骨细胞表型转化 ,并能分泌软骨特异性基质 ,有可能成为软骨组织工程较理想的种子细胞来源的应用前景。

关键词：组织工程骨髓间充质干细胞分化软骨细胞表型动物实验

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