检索结果-内蒙古大学图书馆

细胞与分子免疫学杂志 2003年第4期19卷 326-328,337页

作者：胡洪亮曹谊林刘阳刘伟崔磊商庆新上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科上海市组织工程重点实验室上海200011

目的 :获得小鼠FasL(mFasL)的cDNA克隆 ,通过逆转录病毒表达系统 pLNCX2 在软骨细胞中进行表达 ,并分析其功能。方法 :应用RT PCR和T A克隆技术 ,从激活的小鼠脾脏淋巴细胞总RNA中 ,扩增mFasLcDNA并克隆到T载体中 ,再亚克隆到 pLNCX2 ... 详细信息

目的 :获得小鼠FasL(mFasL)的cDNA克隆 ,通过逆转录病毒表达系统 pLNCX2 在软骨细胞中进行表达 ,并分析其功能。方法 :应用RT PCR和T A克隆技术 ,从激活的小鼠脾脏淋巴细胞总RNA中 ,扩增mFasLcDNA并克隆到T载体中 ,再亚克隆到 pLNCX2 中。转染软骨细胞后 ,以流式细胞仪检测mFasL蛋白的表达 ,以单向混合淋巴细胞反应鉴定其活性。结果 :成功地克隆了 0 .85 5kb的mFasLcDNA ,并经测序确证。通过 pLNCX2 转染软骨细胞 ,转染率为 6 0 .6 4 %。流式细胞仪检测到FasL蛋白的表达 ,并能显著抑制同种异体的单向混合淋巴细胞反应 ,刺激指数下调到未转染软骨细胞的11.71%。结论 :克隆到的mFasL基因 ,并能通过 pLNCX2 有效表达。

关键词：逆转录病毒 FasL RT—PCR 软骨细胞 T—A克隆

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骨形成蛋白-7基因逆转录病毒载体的构建及其表达

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细胞与分子免疫学杂志 2003年第4期19卷 329-331页

作者：祝联刘伟陈兵刘德莉刘方军吴娟娟陆俊弘曹谊林上海第二医科大学第九人民医院整复外科上海市组织工程重点实验室上海200011

目的 :实现骨形成蛋白 7(BMP 7)基因在骨髓基质干细胞中的稳定、长久表达。方法 :构建重组BMP 7逆转录病毒表达载体。通过PT6 7包装细胞克隆 ,嘌呤霉素筛选、扩增 ,获得含BMP 7基因的逆转录病毒液 ,直接感染骨髓基质干细胞 ,用免疫组化... 详细信息

目的 :实现骨形成蛋白 7(BMP 7)基因在骨髓基质干细胞中的稳定、长久表达。方法 :构建重组BMP 7逆转录病毒表达载体。通过PT6 7包装细胞克隆 ,嘌呤霉素筛选、扩增 ,获得含BMP 7基因的逆转录病毒液 ,直接感染骨髓基质干细胞 ,用免疫组化方法检测BMP 7的表达。结果 :成功地构建了重组BMP 7逆转录病毒表达载体 ,并可在骨髓基质干细胞中表达BMP 7。结论 :重组逆转录病毒表达载体转染的靶细胞可表达BMP 7,为组织工程中骨和软骨种子细胞的研究奠定了基础。

关键词：重组逆转录病毒载体骨形成蛋白—7 组织工程骨髓基质干细胞

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胚胎干细胞在转化生长因子-β1诱导下表达vWF、CD34的研究

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中华实验外科杂志 2003年第1期20卷 49-50,I002页

作者：沈干吴春芳丛笑倩刘晓音刘伟曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科组织工程实验室

目的　探讨胚胎干 (ES)细胞在转化生长因子 β1(TGF β1)诱导条件下的分化表现 ,为组织工程种子细胞来源提供诱导方法。方法　小鼠ES细胞 ,以 1× 10 - 9mol L维甲酸 (RA)和 3μg LTGF β1进行诱导分化。应用逆转录聚合酶链反应 ... 详细信息

目的　探讨胚胎干 (ES)细胞在转化生长因子 β1(TGF β1)诱导条件下的分化表现 ,为组织工程种子细胞来源提供诱导方法。方法　小鼠ES细胞 ,以 1× 10 - 9mol L维甲酸 (RA)和 3μg LTGF β1进行诱导分化。应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)及免疫组织化学验证细胞性质。结果　证实ES细胞经RA和TGF β1的诱导 ,3～ 4d出现圆形前体细胞 ,6d形成管状血管样结构。分化细胞可表达内皮细胞的标志vWF、CD34。结论　ES细胞在特定的条件下可分化为血管内皮细胞 ,有可能为构建组织工程化血管及其他人工血管的内皮化提供种子细胞来源。

关键词：胚胎干细胞转化生长因子-β1 内皮细胞 CD34

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永生化软骨细胞的生物学特性

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实验生物学报 2003年第6期36卷 435-444页

作者：李卿刘伟陈瑾君陆峻泓刘德莉曹谊林上海市组织工程重点实验室上海200011 上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科

本实验为建立永生化的猪耳软骨细胞系并探讨它的生物学特性,以包含人端粒酶逆转录酶催化亚基(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因的逆转录病毒载体(pBABE-hTERT)转染至正常猪耳软骨细胞中。经筛选、挑取克隆,得永生化... 详细信息

本实验为建立永生化的猪耳软骨细胞系并探讨它的生物学特性,以包含人端粒酶逆转录酶催化亚基(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因的逆转录病毒载体(pBABE-hTERT)转染至正常猪耳软骨细胞中。经筛选、挑取克隆,得永生化软骨细胞系(TL1),在体外已连续培养10个月。RT-PCR和PCR-ELISA法测得其有高水平的端粒酶稳定表达。通过生长曲线、HE染色、流式细胞仪分析,以及裸鼠成瘤实验,表明它的细胞增殖能力增加,凋亡率下降并维持在体外培养早期细胞的水平,且细胞无恶变迹象。对软骨特异性分子的RT-PCR、Western杂交和免疫组化的结果分析,发现TL1中有SOX9的表达;无结构完整的aggrecan表达;有低水平的Ⅱ型胶原表达;Ⅰ型胶原的表达随细胞的表型改变而改变。综上所述,通过外源性hTERT的稳定表达,建立了永生化的猪耳软骨细胞系;但是它在单层培养的状态下,软骨细胞特异性的基因表达逐步发生改变,导致其部分丧失软骨细胞的正常表型。

关键词：软骨细胞永生化分化生物学特性人端粒酶逆转录酶催化亚基

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猪软骨细胞老化过程中Aggrecan的表达及其糖链分子结构的改变

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基础医学与临床 2003年第5期23卷 517-520页

作者：李卿刘伟夏万尧崔磊曹谊林上海第二医科大学第九人民医院整复外科上海市组织工程重点实验室上海200011

本实验旨在探讨体外培养软骨细胞在老化过程中 ,aggrecan的表达水平与分子结构的变化及其间的相互关系。取体外培养P1～P5各代猪耳软骨细胞 ,RT PCR检测aggrecan球间区域 (interglobulardomain ,IGD)mRNA的表达状况 ;阿利新兰 (AlcianBl... 详细信息

本实验旨在探讨体外培养软骨细胞在老化过程中 ,aggrecan的表达水平与分子结构的变化及其间的相互关系。取体外培养P1～P5各代猪耳软骨细胞 ,RT PCR检测aggrecan球间区域 (interglobulardomain ,IGD)mRNA的表达状况 ;阿利新兰 (AlcianBlue)法检测糖胺聚糖 (glycosaminoglycan ,GAG)的含量和糖链的分子结构。结果显示aggrecanIGDmRNA的表达在P4、P5细胞内明显降低 (P <0 0 5 ) ;GAG的合成也在P4、P5时显著减少 (P <0 0 5 ) ,但这 2项指标的变化趋势之间无显著相关性。而长链高度硫酸化的GAG由P4软骨细胞开始 ,绝对含量和相对含量均显著减少 (P <0 0 1) ,其与aggrecanIGDmRNA的变化趋势有显著相关性 (P <0 0 1)。由此可见 ,体外培养软骨细胞中ag grecan的表达合成和细胞老化有密切关系。aggrecanIGDmRNA的表达降低与aggrecan中长链高度硫酸化GAG的合成代谢过程受阻可能是影响老化细胞成软骨能力的重要因素之一。

关键词：猪 Aggrecan 糖链细胞老化软骨细胞糖胺聚糖组织工程

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重组端粒酶pEGFP-hTRT质粒的构建

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中国修复重建外科杂志 2003年第3期17卷 230-232页

作者：周海文周曾同杨雯君刘德莉李卿胡洪亮刘伟崔磊曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院口腔内科口腔研究所上海200011 上海第二医科大学附属第九人民医院口腔颌面外科上海200011 上海第二医科大学组织工程研究中心上海市组织工程重点实验室上海200011

目的　构建具有绿色荧光蛋白报道 (GFP)基因的端粒酶真核质粒载体 ,为转染细胞、延长细胞寿命提供基础。　方法　酶切含人端粒酶逆转录酶 (h TRT)基因的 p GRN14 5质粒获取 h TRT片段 ,插入经酶切及磷酸化处理的 GFP载体 p EGFP- C1,形... 详细信息

目的　构建具有绿色荧光蛋白报道 (GFP)基因的端粒酶真核质粒载体 ,为转染细胞、延长细胞寿命提供基础。　方法　酶切含人端粒酶逆转录酶 (h TRT)基因的 p GRN14 5质粒获取 h TRT片段 ,插入经酶切及磷酸化处理的 GFP载体 p EGFP- C1,形成 8.1kb质粒 ,经 Hind 、Not 酶切电泳筛选、鉴定并测序。　结果　经酶切电泳分析得到3.4 kb及 4 .7kb大小的两片段 ;测序结果显示接头两端序列正确。　结论　重组端粒酶 p EGFP- h TRT质粒的成功构建 ,可用于细胞转染 ,对进一步研究组织工程种子细胞的衰老问题具有重要意义。

关键词：端粒酶 pEGFP-hTRT质粒构建重组质粒绿色荧光蛋白

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不同类型人软骨细胞体外生物学特性比较

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中华实验外科杂志 2003年第6期20卷 497-498页

作者：张艳柴岗崔磊刘伟曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整形外科上海市组织工程研究重点实验室上海组织工程研究开发中心 200011

目的　通过研究人耳软骨和肋软骨两种不同类型软骨细胞体外分离、增殖、老化规律 ,为选择合适的组织工程种子细胞提供依据。方法　取小耳畸形残耳软骨和肋软骨 ,体外分别用0 .0 5 %和 0 .15 %Ⅱ型胶原酶消化 16h分离 ,台盼蓝染色计活细... 详细信息

目的　通过研究人耳软骨和肋软骨两种不同类型软骨细胞体外分离、增殖、老化规律 ,为选择合适的组织工程种子细胞提供依据。方法　取小耳畸形残耳软骨和肋软骨 ,体外分别用0 .0 5 %和 0 .15 %Ⅱ型胶原酶消化 16h分离 ,台盼蓝染色计活细胞数 ,得原代细胞获得率。体外单层培养 6代 ,观察形态学改变 ,群体倍增时间 (PDT ) ,免疫细胞化学染色及逆转录聚合酶链反应(RT PCR)检测Ⅱ型胶原和Aggrecan评定软骨细胞老化规律。结果　人残耳软骨组织平均细胞获得率为 ( 1.5 4± 0 .14 )× 10 6/ g ,肋软骨平均获得率为 ( 0 .46± 0 .0 9)× 10 6/ g ,两类软骨细胞P1的PDT最短 ,前 3代增殖力较强 ,P3 以后PDT明显延长 ,P6代细胞不再增殖。免疫细胞化学及RT PCR均证实耳软骨细胞 3代内、肋软骨细胞 4代内软骨细胞表型稳定。结论　第 2代的耳软骨细胞与第 3代肋软骨细胞可作为人体内组织工程化软骨构建的种子细胞。

关键词：软骨细胞体外生物学特性组织工程种子细胞

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组织工程技术构建血管壁的实验研究

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中国临床康复 2003年第6期7卷 922-923,T003页

作者：刘阳张燕中许志成刘伟崔磊曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科上海第二医科大学组织工程重点实验室上海市200011 上海第二医科大学附属仁济医院血管外科上海市200000

目的:构建组织的方法和环境是组织工程研究所涉及的另一重要环节,对于能否最终形成新生组织以及新生组织质量的好坏起着关键作用。探讨运用组织工程技术构建血管中膜组织的方法。方法:将体外培养、扩增的犬平滑肌细胞接种于片状聚羟基乙... 详细信息

目的:构建组织的方法和环境是组织工程研究所涉及的另一重要环节,对于能否最终形成新生组织以及新生组织质量的好坏起着关键作用。探讨运用组织工程技术构建血管中膜组织的方法。方法:将体外培养、扩增的犬平滑肌细胞接种于片状聚羟基乙酸(PGA)材料上,形成细胞-材料复合物,将该复合物包绕于硅胶管使成管状结构后移植于裸鼠皮下,第2,6,11周后行大体及组织学检测。结果:裸鼠皮下形成的组织工程化血管中膜组织学结构在不同的时间点具有不同的特征。结论:运用组织工程技术可形成具有与天然血管中膜组织学结构相似的血管。

关键词：组织工程技术构建血管壁实验研究生物医学工程

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碱性成纤维细胞生长因子在病理性瘢痕形成中的作用

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实用美容整形外科杂志 2003年第2期14卷 100-102页

作者：武晓莉刘伟商庆新上海第二医科大学附属第九人民医院组织工程实验室上海200011

病理性瘢痕的组织学特点为成纤维细胞的过度增生、细胞外基质成分过量沉积、胶原排列紊乱[1].众多细胞因子,包括碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在瘢痕形成过程中发挥重要的作用.现将碱性成纤维细胞生长因子与病理性瘢痕的关系简要介绍如下.

关键词：碱性成纤维细胞生长因子病理性瘢痕形成细胞因子肝素硫酸肝素蛋白多糖

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应用b-FGF刺激的软骨细胞构建自体组织工程化软骨的研究

应用b-FGF刺激的软骨细胞构建自体组织工程化软骨的研究

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中华医学会第七届全国整形外科学术会议

作者：丁小邦程宁新王原路陈兵曹谊林广州市第一人民医院整形外科上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科上海组织工程重点实验室

本文研究了软骨缺损常需自体软骨组织移植修复.然而,自体软骨组织供区有限,且易引起供区损伤,限制了手术的应用.近年来,组织工程的研究为软骨缺损的修复提供了新的方向.然而软骨细胞属于增生能力极弱的终末分化细胞,在体外培养过程中扩... 详细信息

本文研究了软骨缺损常需自体软骨组织移植修复.然而,自体软骨组织供区有限,且易引起供区损伤,限制了手术的应用.近年来,组织工程的研究为软骨缺损的修复提供了新的方向.然而软骨细胞属于增生能力极弱的终末分化细胞,在体外培养过程中扩增有限,且经过一段时间培养后,细胞极易老化,表型发生改变,丧失了成软骨细胞的能力,从而限制了软骨组织工程的临床应用.

关键词：软骨细胞构建自体组织软骨缺损移植修复

来源：评论

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