检索结果-内蒙古大学图书馆

中华实验外科杂志 2004年第1期21卷 15-16页

作者：李卿陆峻泓王丹茹苗春雷王爱丽刘伟曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科上海市组织工程重点实验室 200011

目的　通过腺病毒载体将外源性人端粒酶逆转录酶催化亚基 (hTERT)基因导入组织工程常用种子细胞中 ,探讨其对各细胞生存状况的影响。方法　取第 4代的猪耳软骨细胞、猪骨髓基质干细胞和人皮肤成纤维细胞 ,分别以Adeno hTERT和Adeno lac... 详细信息

目的　通过腺病毒载体将外源性人端粒酶逆转录酶催化亚基 (hTERT)基因导入组织工程常用种子细胞中 ,探讨其对各细胞生存状况的影响。方法　取第 4代的猪耳软骨细胞、猪骨髓基质干细胞和人皮肤成纤维细胞 ,分别以Adeno hTERT和Adeno lacZ进行基因转染。 5d后 ,取各组细胞样品 ,以逆转录聚合酶链式反应 (RT PCR)和PCR 酶联免疫吸附法 (PCR ELISA)分别检测各自的hTERTmRNA表达及其hTERT的活性。各组hTERT转染细胞与对照细胞接种于 96孔板中 ,通过MTT法对细胞的生存和活力状况进行检测。结果　各组细胞经hTERT转染后 ,端粒酶的表达和活性均显著上升 (P <0 .0 1)。四甲基偶氮唑盐 (MTT)氧化反应结果显示hTERT转染的细胞中 ,细胞存活和活力状况显著高于对照组的细胞 (P <0 .0 1)。猪耳软骨细胞经hTERT转染后达到空白对照组细胞的 (12 1.75± 5 .3 7) % ;猪骨髓基质干细胞达 (12 5 .2 2± 2 .78) % ;人皮肤成纤维细胞达 (112 .5 7± 3 .99) %。结论　腺病毒载体介导的外源性hTERT基因在组织工程种子细胞中的表达 ,可以提高其在体外的扩增潜力 ,改善组织工程构建中种子细胞来源不足的情况。

关键词：腺病毒载体介导外源性端粒酶组织工程种子细胞表达基因转染 PCR-ELISA

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TGF-β细胞内信号转导与伤口过度愈合

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上海第二医科大学学报 2004年第7期24卷 587-589,596页

作者：蔡泽浩刘伟钱云良关文祥张涤生上海第二医科大学第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室上海200011

作者查阅近期TGF-β信号转导及TGF-β与伤口愈合相关的文献,追溯近阶段国内外有关生长因子TGF-β、TGF-β受体及其信号转导机制和TGF-β及SMAD分子在伤口愈合过程中的作用等方面的最新进展。SMAD分子在TGF-β的信号转导及其生物学效应... 详细信息

作者查阅近期TGF-β信号转导及TGF-β与伤口愈合相关的文献,追溯近阶段国内外有关生长因子TGF-β、TGF-β受体及其信号转导机制和TGF-β及SMAD分子在伤口愈合过程中的作用等方面的最新进展。SMAD分子在TGF-β的信号转导及其生物学效应中起重要作用,可通过人为方法来干扰TGF-β信号转导从而减少TGF-β在伤口愈合过程中的病理性作用。

关键词： TGF-β细胞信号转导伤口愈合 SMAD 纤维化疾病

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角膜基质细胞体外长期培养过程中生物学特性的改变

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上海第二医科大学学报 2004年第4期24卷 307-310,318页

作者：王爱丽胡晓洁李卿崔磊刘伟曹谊林上海第二医科大学第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室上海200011

目的研究兔角膜基质细胞在体外长期培养传代过程中,细胞增殖能力和胞外基质表达水平的改变。方法取体外培养兔角膜基质细胞,由光镜对各代细胞的形态学变化进行观测。通过对各代细胞生长曲线的绘制,得出其各自的群体倍增时间;MTT法比... 详细信息

目的研究兔角膜基质细胞在体外长期培养传代过程中,细胞增殖能力和胞外基质表达水平的改变。方法取体外培养兔角膜基质细胞,由光镜对各代细胞的形态学变化进行观测。通过对各代细胞生长曲线的绘制,得出其各自的群体倍增时间;MTT法比较各代细胞增殖能力的改变。RT-PCR和Western杂交检测各代细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原表达水平的改变;爱茜蓝法检测糖胺聚糖(GAG)的含量。结果体外培养兔角膜基质细胞随着传代的进程,逐渐显现衰老的形态特征。细胞群体倍增时间由第7代起显著延长(P<0.01);MTT比色法的结果亦显示,第7代细胞的增殖能力开始大幅下降(P<0.01)。第9-11代时,Ⅰ、Ⅲ型胶原在mRNA和蛋白水平的表达都有明显减少(P<0.01),降至第1代细胞的30％左右;GAG的含量也降至40％左右。结论兔角膜基质细胞经历长期体外培养后,细胞增殖能力和胞外基质表达水平显著下降,逐渐丧失原有的功能。但作为构建组织工程化角膜的种子细胞,在它的生物学特性未发生改变之前,经3次传代培养,获取的细胞量达到组织块消化所得细胞的240倍左右,已足以用于构建之用。

关键词：角膜基质细胞细胞培养生物学特性细胞外基质细胞增殖 MTT比色法

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重组hBMP7基因转染成纤维细胞及其表达

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上海第二医科大学学报 2004年第4期24卷 238-241页

作者：陈付国祝联刘德莉魏娴刘天一王敏柴岗王晓云周广东夏万尧崔磊刘伟曹谊林上海第二医科大学第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室上海200011

目的探讨重组骨形态发生蛋白-7腺病毒载体(AdCMV-BMP7)在人真皮成纤维细胞获得稳定表达的可行性。方法重组腺病毒载体AdCMV-BMP7经293细胞包装、扩增后,转染人真皮成纤维细胞。转染48 h后以免疫组织化学、RT-PCR等方法检测hBMP7基因在... 详细信息

目的探讨重组骨形态发生蛋白-7腺病毒载体(AdCMV-BMP7)在人真皮成纤维细胞获得稳定表达的可行性。方法重组腺病毒载体AdCMV-BMP7经293细胞包装、扩增后,转染人真皮成纤维细胞。转染48 h后以免疫组织化学、RT-PCR等方法检测hBMP7基因在人真皮成纤维细胞内的表达情况。结果在合适的滴度下,重组腺病毒载体AdCMV-BMP7对成纤维细胞的增殖能力无明显影响。转染48 h后免疫细胞化学显示已转染AdCMV-BMP7的成纤维细胞内有大量的hBMP7表达,RT-PCR也检测到特异的hBMP7基因片段的表达。结论重组腺病毒载体AdCMV-BMP7能够被转导入成纤维细胞内,并稳定表达hBMP7。

关键词：骨形态发生蛋白-7 腺病毒转基因技术成纤维细胞组织工程 RT-PCR

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软骨细胞老化特征及机制的研究进展

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上海第二医科大学学报 2004年第4期24卷 322-324,F003页

作者：张艳柴岗刘伟崔磊曹谊林上海第二医科大学第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室上海200011

软骨细胞的老化是一个极其复杂的过程,其特征包括:细胞不可逆的生长停滞于G1期;老化相关β-半乳糖苷酶的表达;端粒长度缩短;软骨细胞分化特征的改变。目前认为其机制为基因表达的程序性或减进性改变,包括肿瘤抑制基因p53和pRb等在细胞... 详细信息

软骨细胞的老化是一个极其复杂的过程,其特征包括:细胞不可逆的生长停滞于G1期;老化相关β-半乳糖苷酶的表达;端粒长度缩短;软骨细胞分化特征的改变。目前认为其机制为基因表达的程序性或减进性改变,包括肿瘤抑制基因p53和pRb等在细胞生长停滞中的作用;端粒结合蛋白和端粒酶对端粒长度的调节;细胞骨架蛋白的重组使软骨细胞形态的变化;基质降解酶类表达增加以及各种细胞因子的变化对软骨细胞代谢的影响。

关键词：软骨细胞细胞老化细胞增殖去分化 β-半乳糖苷酶肿瘤抑制基因

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生长因子在人肌腱细胞和皮肤成纤维细胞中的表达差异

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上海第二医科大学学报 2004年第4期24卷 271-274页

作者：翟华玲许锋曹德君魏娴崔磊刘伟曹谊林上海第二医科大学第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室上海200011

目的对几种重要的生长因子在正常人体皮肤、肌腱中的表达差异进行研究。方法体外培养人肌腱细胞和人皮肤成纤维细胞,观察细胞的形态特点;用基因芯片、免疫组化、免疫细胞化学、RT-PCR的方法对肌腱细胞和成纤维细胞的几种生长因子进行... 详细信息

目的对几种重要的生长因子在正常人体皮肤、肌腱中的表达差异进行研究。方法体外培养人肌腱细胞和人皮肤成纤维细胞,观察细胞的形态特点;用基因芯片、免疫组化、免疫细胞化学、RT-PCR的方法对肌腱细胞和成纤维细胞的几种生长因子进行检测及比较。结果所测生长因子中除转化生长因子-βⅡ型受体(TGF-βRⅡ)、类胰岛素生长因子-结合蛋白3(IGF-BP3)外,其余在肌腱细胞和成纤维细胞中的表达均无明显的差异。结论人成纤维细胞与人肌腱细胞的生长因子表达基本相似,通过对皮肤成纤维细胞的某些特性的改造,可以使其成为构建组织工程化肌腱的种子细胞。

关键词：生长因子肌腱细胞皮肤成纤维细胞表达差异组织工程种子细胞

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应用GFP标记技术示踪裸鼠体内组织工程化骨的形成

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上海第二医科大学学报 2004年第4期24卷 235-237,266页

作者：袁捷刘德莉周广东苗春雷崔磊刘伟曹谊林上海第二医科大学第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室上海200011

目的应用绿色荧光蛋白(GFP)标记技术,观察组织工程化骨体内形成过程中种子细胞的变化与转归。方法用GFP重组逆转录病毒载体(GFP-RV)转染犬骨髓基质干细胞(BMSCs),将其接种于β-磷酸三钙(β-TCP),形成细胞一材料复合物,移植于裸鼠皮下... 详细信息

目的应用绿色荧光蛋白(GFP)标记技术,观察组织工程化骨体内形成过程中种子细胞的变化与转归。方法用GFP重组逆转录病毒载体(GFP-RV)转染犬骨髓基质干细胞(BMSCs),将其接种于β-磷酸三钙(β-TCP),形成细胞一材料复合物,移植于裸鼠皮下。术后8周,HE染色观察组织结构,碱性磷酸酶(AKP)染色和骨钙素(OCN)免疫组化检测功能蛋白,激光共聚焦显微镜下对GFP进行示踪观察。结果 8周后,大体可见组织工程化新骨形成,组织学示新生骨小梁围绕材料孔隙生成,AKP染色和OCN免疫组化结果阳性,并可见新生组织内有呈绿色的GFP标记细胞,β-TCP部分降解。结论组织工程化骨组织学结构与松质骨小梁类似。新生组织表达GFP,证实组织工程化骨组织的形成来源于供体细胞。

关键词：绿色荧光蛋白标记技术组织工程骨组织重组逆转录病毒载体 β-磷酸三钙供体细胞

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含GFP基因的逆转录病毒与VSV-G蛋白重组形成高滴度假病毒

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上海第二医科大学学报 2004年第4期24卷 315-318页

作者：陈瑾君刘伟刘德莉陆峻泓李卿崔磊曹谊林上海第二医科大学第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室上海200011

目的通过与疱疹性口腔炎病毒糖蛋白G基因(VSV-G)蛋白重组,提高含绿色荧光蛋白(GFP)基因逆转录病毒的感染效率,并使其经受超速离心以达到进一步浓缩。方法应用GFP-RV质粒转染PT67细胞并用G418筛选出GFP阳性克隆,利用其产生的病毒上清... 详细信息

目的通过与疱疹性口腔炎病毒糖蛋白G基因(VSV-G)蛋白重组,提高含绿色荧光蛋白(GFP)基因逆转录病毒的感染效率,并使其经受超速离心以达到进一步浓缩。方法应用GFP-RV质粒转染PT67细胞并用G418筛选出GFP阳性克隆,利用其产生的病毒上清液再转染GP2-293细胞,在G418筛选的同时,瞬时转染VSV-G基因。收集该GP2-293细胞产生的重组病毒作滴度测定,并通过低温超速离心制成含GFP病毒的浓缩液,再感染NIH3T3细胞,观察GFP在NIH3T3细胞内的表达情况。结果 GFP-RV质粒转染PT67细胞产生的GFP阳性克隆,随着细胞传代过程,GFP的表达逐渐减弱。GP2-293细胞转染VSV-G基因后可产生(7.5±1.4)×105cfu/mL的GFP重组假病毒,将其浓缩液转染NIH3T3细胞,可见GFP在细胞内有较强的表达。结论逆转录病毒与VSV-G共转染GP2-293包装细胞可以形成高滴度的假病毒,由此得到含GFP基因的病毒上清液,其在组织工程中应用范围更广泛。

关键词： GFP基因逆转录病毒假病毒疱疹性口腔炎病毒基因转染克隆组织工程

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内皮型一氧化氮合酶腺病毒表达载体的构建与鉴定

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上海第二医科大学学报 2004年第9期24卷 717-719页

作者：陆平蔡文玮盛净刘德莉夏万尧刘伟上海第二医科大学第九人民医院老年病科上海200011 上海市组织工程研究重点实验室整复外科

目的构建重组内皮型一氧化氮合酶(eNOS)腺病毒表达系统载体。方法 eNOS的cDNA插入pcDNA3.1(-)中,进行DNA测序、酶切鉴定;插入片段用Xbal和AflⅡ双酶切后连接到pshuttle中,并予酶切鉴定;用P1-sce Ⅰ和Ⅰ-ceu Ⅰ双酶切下pshuttle中eNOS的... 详细信息

目的构建重组内皮型一氧化氮合酶(eNOS)腺病毒表达系统载体。方法 eNOS的cDNA插入pcDNA3.1(-)中,进行DNA测序、酶切鉴定;插入片段用Xbal和AflⅡ双酶切后连接到pshuttle中,并予酶切鉴定;用P1-sce Ⅰ和Ⅰ-ceu Ⅰ双酶切下pshuttle中eNOS的cDNA插入腺病毒载体,通过PCR鉴定。结果正确构建重组eNOS腺病毒表达系统,并被目的基因的PCR鉴定证实。结论重组腺病毒表达载体构建正确,为其在预防经皮腔内动脉成形术术后再狭窄基因转染奠定基础。

关键词：腺病毒 NOS 内皮型一氧化氮合酶鉴定动脉成形术腔内 PCR 表达系统酶切表达载体

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组织工程技术修复皮肤缺损的动物实验

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中华医学美学美容杂志 2004年第6期10卷 349-351页

作者：蔡霞崔磊刘伟曹谊林关文祥上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科上海第二医科大学组织工程研究重点实验室

目的　探索应用组织工程技术修复包括皮下组织的皮肤缺损的方法。方法　长枫杂交仔猪 2 0只 ,取腹部 2cm× 2cm全厚皮肤 ,酶消化法获取表皮细胞与成纤维细胞。经原代培养 ,将处于对数生长期的表皮细胞、成纤维细胞分别与 30 %氧化... 详细信息

目的　探索应用组织工程技术修复包括皮下组织的皮肤缺损的方法。方法　长枫杂交仔猪 2 0只 ,取腹部 2cm× 2cm全厚皮肤 ,酶消化法获取表皮细胞与成纤维细胞。经原代培养 ,将处于对数生长期的表皮细胞、成纤维细胞分别与 30 %氧化异丙烯F 1 2 7(pluronicF 1 2 7)混匀成细胞悬液后 ,种植于聚羟基乙酸 (polyglycolicacid ,PGA)形成细胞生物材料复合物 ,用于修复自体背部直径 4cm皮肤缺损 ,以单纯生物材料 (PGA +30 %氧化异丙烯F 1 2 7)修复作为对照组。术后 1、2、4、8周取材 ,通过组织学方法评价新生组织。结果　实验组 :第 1周 ,形成含表皮与真皮两层结构的组织工程化皮肤 ;第 2周 ,表皮与真皮均较前增厚 ;第 8周 ,组织工程化皮肤的结构与正常皮肤相似 ,仅缺乏毛发、毛囊和汗腺等附属器。对照组 :则无皮肤形成 ,仅见大量肉芽组织。结论　以原代培养的表皮细胞与成纤维细胞作为种子细胞 ,PGA +30 %氧化异丙烯F 1 2 7为细胞载体的方法可修复皮肤缺损。

关键词：组织工程技术修复皮肤缺损动物实验聚羟基乙酸

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