检索结果-内蒙古大学图书馆

上海第二医科大学学报 2004年第4期24卷 235-237,266页

作者：袁捷刘德莉周广东苗春雷崔磊刘伟曹谊林上海第二医科大学第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室上海200011

目的应用绿色荧光蛋白(GFP)标记技术,观察组织工程化骨体内形成过程中种子细胞的变化与转归。方法用GFP重组逆转录病毒载体(GFP-RV)转染犬骨髓基质干细胞(BMSCs),将其接种于β-磷酸三钙(β-TCP),形成细胞一材料复合物,移植于裸鼠皮下... 详细信息

目的应用绿色荧光蛋白(GFP)标记技术,观察组织工程化骨体内形成过程中种子细胞的变化与转归。方法用GFP重组逆转录病毒载体(GFP-RV)转染犬骨髓基质干细胞(BMSCs),将其接种于β-磷酸三钙(β-TCP),形成细胞一材料复合物,移植于裸鼠皮下。术后8周,HE染色观察组织结构,碱性磷酸酶(AKP)染色和骨钙素(OCN)免疫组化检测功能蛋白,激光共聚焦显微镜下对GFP进行示踪观察。结果 8周后,大体可见组织工程化新骨形成,组织学示新生骨小梁围绕材料孔隙生成,AKP染色和OCN免疫组化结果阳性,并可见新生组织内有呈绿色的GFP标记细胞,β-TCP部分降解。结论组织工程化骨组织学结构与松质骨小梁类似。新生组织表达GFP,证实组织工程化骨组织的形成来源于供体细胞。

关键词：绿色荧光蛋白标记技术组织工程骨组织重组逆转录病毒载体 β-磷酸三钙供体细胞

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含GFP基因的逆转录病毒与VSV-G蛋白重组形成高滴度假病毒

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上海第二医科大学学报 2004年第4期24卷 315-318页

作者：陈瑾君刘伟刘德莉陆峻泓李卿崔磊曹谊林上海第二医科大学第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室上海200011

目的通过与疱疹性口腔炎病毒糖蛋白G基因(VSV-G)蛋白重组,提高含绿色荧光蛋白(GFP)基因逆转录病毒的感染效率,并使其经受超速离心以达到进一步浓缩。方法应用GFP-RV质粒转染PT67细胞并用G418筛选出GFP阳性克隆,利用其产生的病毒上清... 详细信息

目的通过与疱疹性口腔炎病毒糖蛋白G基因(VSV-G)蛋白重组,提高含绿色荧光蛋白(GFP)基因逆转录病毒的感染效率,并使其经受超速离心以达到进一步浓缩。方法应用GFP-RV质粒转染PT67细胞并用G418筛选出GFP阳性克隆,利用其产生的病毒上清液再转染GP2-293细胞,在G418筛选的同时,瞬时转染VSV-G基因。收集该GP2-293细胞产生的重组病毒作滴度测定,并通过低温超速离心制成含GFP病毒的浓缩液,再感染NIH3T3细胞,观察GFP在NIH3T3细胞内的表达情况。结果 GFP-RV质粒转染PT67细胞产生的GFP阳性克隆,随着细胞传代过程,GFP的表达逐渐减弱。GP2-293细胞转染VSV-G基因后可产生(7.5±1.4)×105cfu/mL的GFP重组假病毒,将其浓缩液转染NIH3T3细胞,可见GFP在细胞内有较强的表达。结论逆转录病毒与VSV-G共转染GP2-293包装细胞可以形成高滴度的假病毒,由此得到含GFP基因的病毒上清液,其在组织工程中应用范围更广泛。

关键词： GFP基因逆转录病毒假病毒疱疹性口腔炎病毒基因转染克隆组织工程

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角膜基质细胞-PGA生物支架复合物体外培养研究

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眼科研究 2001年第4期19卷 308-311页

作者：胡晓洁商庆新曹谊林上海市第二医科大学附属第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室 200011

目的　　研究角膜基质细胞与ＰＧＡ亲和力，为组织工程技术构建角膜提供重要的理论依据和参数。方法体外分离获得角膜基质细胞，经培养扩增后接种于ＰＧＡ，并对细胞－生物材料复合物进行体外培养，观察细胞生长代谢。应用ＭＴＴ技术测... 详细信息

目的　　研究角膜基质细胞与ＰＧＡ亲和力，为组织工程技术构建角膜提供重要的理论依据和参数。方法体外分离获得角膜基质细胞，经培养扩增后接种于ＰＧＡ，并对细胞－生物材料复合物进行体外培养，观察细胞生长代谢。应用ＭＴＴ技术测定角膜基质细胞与ＰＧＡ的黏附率。结果　角膜基质细胞能够在ＰＧＡ中黏附、伸展和分泌基质，ＭＴＴ测得细胞黏附率为７１．４０％。结论　　角膜基质细胞与ＰＧＡ具有较好的亲和力，ＰＧＡ可以作为构建角膜的生物材料。

关键词：组织工程角膜基质细胞生物支架聚羟基乙酸角膜疾病实验研究

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人胚胎干细胞培养建系及其应用

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细胞生物学杂志 2005年第4期27卷 374-378页

作者：王彦丛笑倩曹谊林上海第二医科大学第九人民医院整形修复外科上海市组织工程研究重点实验室上海200011

简要概述了自1998年首次建立hES细胞系以来近6￣7年国内外的现况、分离培养建系、鉴定标准和冻存技术发展、定向诱导分化及其应用等方面的研究进展。

关键词：人胚胎干细胞内细胞团培养建系定向分化细胞干细胞培养应用建系人胚胎定向诱导分化 ES细胞系

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内皮型一氧化氮合酶腺病毒表达载体的构建与鉴定

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上海第二医科大学学报 2004年第9期24卷 717-719页

作者：陆平蔡文玮盛净刘德莉夏万尧刘伟上海第二医科大学第九人民医院老年病科上海200011 上海市组织工程研究重点实验室整复外科

目的构建重组内皮型一氧化氮合酶(eNOS)腺病毒表达系统载体。方法 eNOS的cDNA插入pcDNA3.1(-)中,进行DNA测序、酶切鉴定;插入片段用Xbal和AflⅡ双酶切后连接到pshuttle中,并予酶切鉴定;用P1-sce Ⅰ和Ⅰ-ceu Ⅰ双酶切下pshuttle中eNOS的... 详细信息

目的构建重组内皮型一氧化氮合酶(eNOS)腺病毒表达系统载体。方法 eNOS的cDNA插入pcDNA3.1(-)中,进行DNA测序、酶切鉴定;插入片段用Xbal和AflⅡ双酶切后连接到pshuttle中,并予酶切鉴定;用P1-sce Ⅰ和Ⅰ-ceu Ⅰ双酶切下pshuttle中eNOS的cDNA插入腺病毒载体,通过PCR鉴定。结果正确构建重组eNOS腺病毒表达系统,并被目的基因的PCR鉴定证实。结论重组腺病毒表达载体构建正确,为其在预防经皮腔内动脉成形术术后再狭窄基因转染奠定基础。

关键词：腺病毒 NOS 内皮型一氧化氮合酶鉴定动脉成形术腔内 PCR 表达系统酶切表达载体

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小鼠胚胎干细胞分化为血管内皮细胞的永生化研究

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实验生物学报 2002年第3期35卷 218-228页

作者：沈干丛笑倩杜忠伟吴春芳刘晓音刘伟曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科上海市组织工程重点实验室中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所上海200031

本文探讨了小鼠胚胎干细胞(ES细胞)诱导分化的血管内皮细胞永生化。在体外培养系统中,以维甲酸(RA)和转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导小鼠胚胎干细胞(ES细胞)的拟胚体(EB)分化为“圆形细胞”和由这些“圆形细胞”组成的血管样结构。经光... 详细信息

本文探讨了小鼠胚胎干细胞(ES细胞)诱导分化的血管内皮细胞永生化。在体外培养系统中,以维甲酸(RA)和转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导小鼠胚胎干细胞(ES细胞)的拟胚体(EB)分化为“圆形细胞”和由这些“圆形细胞”组成的血管样结构。经光学和扫描电镜及免疫荧光等法分析检测,证明组成血管样结构的细胞具有专一性vWF荧光染色,表明是血管内皮样细胞。利用脂质体将人端粒酶催化亚基逆转录酶(hTERT)基因转染诱导分化中的“圆形细胞”。应用Dot-blot,RT-PCR,Western blot及免疫组织化学等方法分析、观察和证明了诱导分化的组成血管样结构的园形细胞和被hTERT基因转染的“圆形”细胞的形态和生物学特性。结果表明,携带hTERT基因的从ES细胞分化来的圆形细胞在体外可大量增殖,持续传代,95%具有血管内皮细胞的一些特有标志和管道化生长特性。因此,通过人端粒酶基因的转染途径可解决由ES细胞诱导分化而来的内皮细胞扩增和永生化问题,为构建组织工程化血管及其它人工血管的内皮化提供种子细胞来源打下基础。

关键词：小鼠胚胎干细胞分化血管内皮细胞永生化 ES细胞诱导分化组织工程人端粒酶催化亚基逆转录酶

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组织工程技术修复皮肤缺损的动物实验

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中华医学美学美容杂志 2004年第6期10卷 349-351页

作者：蔡霞崔磊刘伟曹谊林关文祥上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科上海第二医科大学组织工程研究重点实验室

目的　探索应用组织工程技术修复包括皮下组织的皮肤缺损的方法。方法　长枫杂交仔猪 2 0只 ,取腹部 2cm× 2cm全厚皮肤 ,酶消化法获取表皮细胞与成纤维细胞。经原代培养 ,将处于对数生长期的表皮细胞、成纤维细胞分别与 30 %氧化... 详细信息

目的　探索应用组织工程技术修复包括皮下组织的皮肤缺损的方法。方法　长枫杂交仔猪 2 0只 ,取腹部 2cm× 2cm全厚皮肤 ,酶消化法获取表皮细胞与成纤维细胞。经原代培养 ,将处于对数生长期的表皮细胞、成纤维细胞分别与 30 %氧化异丙烯F 1 2 7(pluronicF 1 2 7)混匀成细胞悬液后 ,种植于聚羟基乙酸 (polyglycolicacid ,PGA)形成细胞生物材料复合物 ,用于修复自体背部直径 4cm皮肤缺损 ,以单纯生物材料 (PGA +30 %氧化异丙烯F 1 2 7)修复作为对照组。术后 1、2、4、8周取材 ,通过组织学方法评价新生组织。结果　实验组 :第 1周 ,形成含表皮与真皮两层结构的组织工程化皮肤 ;第 2周 ,表皮与真皮均较前增厚 ;第 8周 ,组织工程化皮肤的结构与正常皮肤相似 ,仅缺乏毛发、毛囊和汗腺等附属器。对照组 :则无皮肤形成 ,仅见大量肉芽组织。结论　以原代培养的表皮细胞与成纤维细胞作为种子细胞 ,PGA +30 %氧化异丙烯F 1 2 7为细胞载体的方法可修复皮肤缺损。

关键词：组织工程技术修复皮肤缺损动物实验聚羟基乙酸

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生物工程领域的崭新前沿—组织工程

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引进国外医药技术与设备 1999年第11期5卷 11-15,27页

作者：商庆新曹谊林张涤生上海第二医科大学组织工程研究中心上海市组织工程研究重点实验室上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科

组织工程是应用细胞生物学和工程学的原理,研究和开发、修复和改善损伤组织和功能的生物替代物的一门科学,是继细胞生物学和分子生物学之后,生命科学发展史上又一新的里程碑,标志着医学将走出器官移植的范畴,步入制造组织和器官的新时代... 详细信息

组织工程是应用细胞生物学和工程学的原理,研究和开发、修复和改善损伤组织和功能的生物替代物的一门科学,是继细胞生物学和分子生物学之后,生命科学发展史上又一新的里程碑,标志着医学将走出器官移植的范畴,步入制造组织和器官的新时代。组织工程是在组织水平上操作的生物工程,主要致力于组织和器官的形成和再生,它是对外科领域中组织、器官缺损和功能障碍传统治疗方法和模式的一次革命。同时组织工程是一门多学科交叉的边缘学科,将是21世纪具有巨大潜力的高技术产业,必将产生巨大的社会和经济效益。目前组织工程己得到了迅猛发展,在许多方面已取得重大突破,由于其所孕育的巨大科学价值及广阔的研究和应用前景,成了未来21世纪生命科学研究领域的焦点之一。因此,在国内尽快地建立和开展组织工程研究,对加快我国医学科学事业和国民经济的发展具有重大意义。

关键词：生物工程组织工程生物可降解材料研究

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组织工程技术修复犬腹主动脉缺损的初步研究

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组织工程与重建外科杂志 2005年第4期1卷 210-213页

作者：刘阳张燕中刘伟崔磊曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科、上海第二医科大学组织工程重点实验室 200011

目的探讨应用组织工程学技术修复犬腹主动脉缺损的可行性。方法将体外培养、扩增的犬自体血管平滑肌细胞与内皮细胞接种于管型PGA支架上,形成细胞-材料复合物,将该复合物回植修复自体犬腹主动脉缺损,术后螺旋CT等检测血流通畅情况。结... 详细信息

目的探讨应用组织工程学技术修复犬腹主动脉缺损的可行性。方法将体外培养、扩增的犬自体血管平滑肌细胞与内皮细胞接种于管型PGA支架上,形成细胞-材料复合物,将该复合物回植修复自体犬腹主动脉缺损,术后螺旋CT等检测血流通畅情况。结果对照组血管在回植后24小时内即发生了栓塞,而实验组则维持血流通畅至少达术后1周。结论应在组织工程化血管体外培养过程中加入适当力学刺激促使其成熟后再回植修复缺损。

关键词：组织工程血管内皮细胞平滑肌细胞生物材料犬血管移植

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组织工程研究中的胚胎干细胞问题

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世界科技研究与发展 2000年第6期22卷 54-59页

作者：曹谊林汪铮李晓红商庆新上海第二医科大学组织工程研究中心上海市组织工程研究重点实验室上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科上海200011

胚胎干细胞研究是组织工程基本科学问题中一个重要的组成部分。本文回顾了近年来胚胎干细胞领域的研究进程 ,尤其是人体胚胎干细胞研究的最新成果 ;提出了组织工程中“治疗性克隆”的战略目标。并且确立了未来人体胚胎干细胞研究解决组... 详细信息

胚胎干细胞研究是组织工程基本科学问题中一个重要的组成部分。本文回顾了近年来胚胎干细胞领域的研究进程 ,尤其是人体胚胎干细胞研究的最新成果 ;提出了组织工程中“治疗性克隆”的战略目标。并且确立了未来人体胚胎干细胞研究解决组织工程种子细胞问题的具体步骤 ;指出了每项具体研究中所要解决的关键问题。

关键词：组织工程胚胎干细胞治疗性克隆核移植

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