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第五次全国医学分子微生物学学术研讨会

作者：刘德莉刘方军吴娟娟胡晓洁祝联刘伟崔磊曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科上海第二医科大学组织工程研究中心 200011

本文应用基因工程技术,构建二种重组病毒载体;一类是缺陷型逆转录病毒重组载体,另一类是缺陷性腺病毒重组载体;分别通过293细胞及PT67包装细胞筛选克隆,获得假病毒上清液,经浓缩纯化后转染靶细胞。研究结论:通过有效的含目的基因重组载... 详细信息

本文应用基因工程技术,构建二种重组病毒载体;一类是缺陷型逆转录病毒重组载体,另一类是缺陷性腺病毒重组载体;分别通过293细胞及PT67包装细胞筛选克隆,获得假病毒上清液,经浓缩纯化后转染靶细胞。研究结论:通过有效的含目的基因重组载体转染种子细胞,延缓体外培养细胞的老化及促进细胞的增殖与分泌,获得组织工程所需要的大量种子细胞,为组织工程构建奠定了基础。

关键词：基因转染重组病毒载体种子细胞靶细胞转染

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组织工程技术构建小口径血管的实验研究

组织工程技术构建小口径血管的实验研究

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中华医学会第七届全国整形外科学术会议

作者：刘阳张燕中陈瑾君殷德民曹颖许志成刘伟崔磊曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科、上海第二医科大学组织工程研究中心上海第二医科大学附属仁济医院血管外科

本文探讨应用组织工程技术构建小口径血管的方法,以期解决临床理想血管移植替代物匮乏的难题.

关键词：组织工程技术小口径血管血管移植

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^(99m)Tc-MDP核素显像在高压电损伤组织活性判断中的应用

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中华烧伤杂志 2003年第S1期19卷 59-页

作者：刘天一毕波朱志祥许晓光朱志军徐国士邱明昕王野许庆健周翔上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科组织工程研究中心 200011 复旦大学华山医院临床检验中心深圳市第二人民医院烧伤整形科青岛市立医院烧伤整形科

对高压电损伤程度的准确判断有利于临床治疗.笔者单位应用99mTc-MDP核素显像评估受损组织活性,效果较好,介绍如下.

关键词：核素显像电损伤 Tc-MDP 高压电高电压 TBSA 粉碎性骨折粉碎骨折摄片

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软骨组织工程基础及临床应用研究

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医学研究通讯 2003年第8期32卷 15-15页

作者：曹谊林崔磊刘伟上海第二医科大学附属第九人民医院整形外科上海第二医科大学组织工程研究中心上海组织工程研究与开发中心 200011

软骨组织工程是组织工程研究领域开展最早、发展最快的研究内容之一,目前主要经历了两个阶段的发展,第一阶段主要是应用组织工程技术在免疫功能缺陷的裸鼠体内构建软骨组织,探讨软骨组织工程构建的可行性;第二阶段是在全面进行软骨组织... 详细信息

软骨组织工程是组织工程研究领域开展最早、发展最快的研究内容之一,目前主要经历了两个阶段的发展,第一阶段主要是应用组织工程技术在免疫功能缺陷的裸鼠体内构建软骨组织,探讨软骨组织工程构建的可行性;第二阶段是在全面进行软骨组织工程研究的基础上,重点解决制约软骨组织工程发展的关键性问题,同时应用组织工程技术,在具有完全免疫功能的高等大型哺乳动物体内构建软骨组织并修复组织缺损,为组织工程化软骨的临床应用奠定基础.目前阻碍组织工程发展的瓶颈性问题主要包括以下几个方面:①软骨种子细胞来源有限:软骨细胞体外培养扩增困难且极易老化,难以获得大量的细胞满足软骨组织构建的需要,严重制约了临床应用;②针对众多应用于软骨组织工程的生物材料,尚缺乏系统的对照研究与统一标准,寻找适用于软骨组织构建的生物材料已经成为软骨组织工程生物材料研究的重中之重;③应用组织工程技术,在具有完全免疫功能的高等大型哺乳动物体内构建软骨组织并修复组织缺损,是组织工程技术向临床应用过渡的关键步骤与必要技术准备,而国际上相关工作尚未开展;④应用组织工程技术在人体内形成组织工程化软骨是组织工程研究的近期科学目标,也是组织工程技术临床修复软骨组织缺损的关键所在,相关研究尚未见报道.

关键词：软骨组织工程基础研究临床应用组织工程

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皮肤成纤维细胞构建组织工程化肌腱的初步研究

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中华医学杂志 2002年第16期82卷 1105-1107页

作者：陈兵丁小邦刘方军崔磊刘伟商庆新曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整形外科上海市组织工程研究中心 200011

目的　探讨以皮肤成纤维细胞为种子细胞的组织工程化肌腱体内形成。方法　取猪自体皮肤成纤维细胞经体外培养、扩增 ,与可吸收生物材料聚羟基乙酸形成细胞—生物材料复合物 ,将该复合物植入手术缺损的右侧趾浅屈肌腱处 ,6周取材 ,对标... 详细信息

目的　探讨以皮肤成纤维细胞为种子细胞的组织工程化肌腱体内形成。方法　取猪自体皮肤成纤维细胞经体外培养、扩增 ,与可吸收生物材料聚羟基乙酸形成细胞—生物材料复合物 ,将该复合物植入手术缺损的右侧趾浅屈肌腱处 ,6周取材 ,对标本进行大体、组织学、电镜检查及生物力学评价。结果　新生组织在大体形态、细胞与胶原排列方式上与正常肌腱相似。新生组织的最大张力和最大应力分别为 1 73 0± 1 8 2与 1 8 9± 1 9N/mm2 ,分别达到左侧同一部位正常肌腱的 57 4%与51 9%。

关键词：皮肤肌腱人体组织工程成纤维细胞种子细胞体外培养

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骨髓间质干细胞向软骨细胞表型定向诱导分化的实验研究

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中华整形外科杂志 2002年第1期18卷 12-14页

作者：夏万尧商庆新崔磊徐蓉丁小邦曹谊林上海第二医科大学组织工程研究中心上海市组织工程研究重点实验室上海第二医科大学附属第九人民医院整形外科

目的　研究体外培养的猪骨髓间质干细胞 (BoneMarrowStemCells,MSCs)在特定培养液作用下向软骨细胞表型转化 ,探讨其作为组织工程化软骨的种子细胞的可行性。方法　取成年崇明长枫杂交猪髂骨骨髓 5ml,在低糖DMEM完全培养液培养 2周 ,传... 详细信息

目的　研究体外培养的猪骨髓间质干细胞 (BoneMarrowStemCells,MSCs)在特定培养液作用下向软骨细胞表型转化 ,探讨其作为组织工程化软骨的种子细胞的可行性。方法　取成年崇明长枫杂交猪髂骨骨髓 5ml,在低糖DMEM完全培养液培养 2周 ,传代后以高糖DMEM无血清特定培养液诱导 (含胰岛素 2mg L、转铁蛋白 3mg L、丙酮酸 10 0mg L、地塞米松 10 - 7mol L、TGF β110ng ml) ,在相差显微镜和电镜下进行观察 ,免疫组化检测Ⅱ型胶原分泌 ,原位杂交检测Ⅱ型胶原mRNA表达。结果　细胞形态由成纤维样梭形向多角形、多边形转变 ,透视电镜观察见大量扩张粗面内质网、高尔基体、线粒体。诱导培养后第 7,14dⅡ型胶原免疫组化阳性 ,同时原位杂交检测Ⅱ型胶原mRNA表达呈阳性。结论　MSCs在特定培养液诱导下能向软骨细胞表型转化 ,并能分泌软骨特异性基质 ,有可能成为软骨组织工程较理想的种子细胞来源的应用前景。

关键词：组织工程骨髓间充质干细胞分化软骨细胞表型动物实验

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真核表达载体pcDNA3.1-h转化生长因子-β1的构建

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中华实验外科杂志 2002年第3期19卷 270-271页

作者：刘方军曹谊林商庆新崔磊刘伟上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科 200011 上海第二医科大学组织工程研究中心

目的　为研究软骨细胞基因转染的可行性创造条件 ,从而为基因修饰的软骨组织工程研究奠定基础。方法　应用基因重组技术和限制性内切酶酶切构建并鉴定 pcDNA3 .1 TGF β1真核表达载体 ,经Fugene6介导质粒转染 3T3细胞后应用逆转录聚... 详细信息

目的　为研究软骨细胞基因转染的可行性创造条件 ,从而为基因修饰的软骨组织工程研究奠定基础。方法　应用基因重组技术和限制性内切酶酶切构建并鉴定 pcDNA3 .1 TGF β1真核表达载体 ,经Fugene6介导质粒转染 3T3细胞后应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测hTGF β1mRNA在真核细胞中的表达。结果　重组真核表达载体 pcDNA3 .1 TGF β1经限制性内切酶XhoⅠ和HindⅢ酶切 ,电泳后显示 1 .35kb的hTGF β1目的片段和 5 .40kb的 pcDNA3 .1载体片段 ,证明重组质粒连接正确 ;经RT PCR检测了hTGF β1在转录水平mRNA的表达情况 ,表明质粒转染 3T3细胞后hTGF β1mRNA的表达明显增强。结论　重组真核表达载体构建正确 ,并能在真核细胞 3T3中表达hTGF β1mRNA 。

关键词：真核表达载体 pcDNA3.1-h 转化生长因子-β1 构建

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壳聚糖作为组织工程软骨支架的实验研究

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中华显微外科杂志 2002年第1期25卷 34-37页

作者：夏万尧曹谊林商庆新刘彦春钟伟 200011 上海第二医科大学组织工程研究中心上海市组织工程研究重点实验室上海第二医科大学附属第九人民医院整形外科复旦大学高分子科学系

目的　探索壳聚糖作为组织工程技术中软骨细胞培养支架的可行性。　方法　消化分离猪耳郭软骨细胞 ,接种于自制壳聚糖、壳聚糖胶原复合多孔支架上培养 ,从光镜和扫描电镜观察其亲水性和对细胞吸附力 ,MTT检测软骨细胞在壳聚糖、壳聚... 详细信息

目的　探索壳聚糖作为组织工程技术中软骨细胞培养支架的可行性。　方法　消化分离猪耳郭软骨细胞 ,接种于自制壳聚糖、壳聚糖胶原复合多孔支架上培养 ,从光镜和扫描电镜观察其亲水性和对细胞吸附力 ,MTT检测软骨细胞在壳聚糖、壳聚糖胶原上的黏附率及壳聚糖、壳聚糖胶原复合多孔支架对细胞的增殖、功能的影响。　结果　软骨细胞能够在壳聚糖、壳聚糖胶原支架上黏附、伸展、增殖和发挥正常功能 ,MTT测得细胞黏附率分别为 81 2 5 %和 87 5 0 % ,MTT测得软骨细胞在壳聚糖胶原支架中的增殖能力较强。　结论　壳聚糖、壳聚糖胶原复合多孔支架与软骨细胞具有较好的相容性 ,壳聚糖胶原复合多孔支架更适合作为软骨组织工程中的细胞培养支架。

关键词：组织工程软骨细胞壳聚糖支架细胞培养

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犬骨髓基质干细胞诱导为成骨细胞的实验研究

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上海口腔医学 2002年第4期11卷 327-331页

作者：王敏翁雨来胡晓洁崔磊刘伟冯希平曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整形外科上海第二医科大学组织工程研究中心上海第二医科大学附属第九人民医院口腔医学院口腔内科上海200011 上海第二医科大学附属第九人民医院口腔医学院口腔预防科上海200011

目的研究骨髓基质干细胞(Bonemarrowstromalcells,BMSCs)在体外培养、诱导后的成骨活性,探讨BMSCs作为骨组织工程种子细胞的可能性和可行性。方法抽取成年犬骨髓,用梯度离心法获取单核细胞,经条件培养液体外诱导培养后,进行组织化学、... 详细信息

目的研究骨髓基质干细胞(Bonemarrowstromalcells,BMSCs)在体外培养、诱导后的成骨活性,探讨BMSCs作为骨组织工程种子细胞的可能性和可行性。方法抽取成年犬骨髓,用梯度离心法获取单核细胞,经条件培养液体外诱导培养后,进行组织化学、免疫组化、原位杂交检测,并在透射电镜下观察其成骨活性。结果第1代细胞Alkalinephosphatase(AKP)染色、Core-bindingfactoralphasubunit1(Osf2/Cbfa1)、Osteopotin(OPN)、Ⅰ型胶原的免疫细胞化学检测和I型胶原的原位杂交结果开始呈现阳性,第3代细胞BoneSailoplain(BSP)、Osteocalcin(OCN)免疫细胞化学染色开始呈现阳性,透射电镜显示细胞外有胶原分泌和钙盐沉积。结论BMSCs不仅能大量扩增,且在一定条件下可向成骨细胞分化,是骨组织工程理想的种子细胞。

关键词：骨髓基质干细胞诱导成骨细胞实验研究组织工程

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简易快速的精子形态染色方法

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中国男科学杂志 2002年第4期16卷 315-317页

作者：刘晓音周鸿吴苹向祖琼上海第九人民医院整形外科组织工程生殖医学研究中心上海200010 上海黄浦区妇幼保健院上海第二医科大学附属仁济医院

精液常规检查中,精子形态分析是反映男性生育力的一项重要指标.通过染色技术可详细判读精子头、体、尾等形态变异,了解正常形态精子与异常形态精子所占的比例,有益于临床诊断.

关键词：精子形态分析快速血球染色液-磷酸缓冲液染色方法 PBS.RS染色法

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