检索结果-内蒙古大学图书馆

分子细胞生物学报 2006年第2期39卷 152-162页

作者：张英周广东杨平尹烁刘德莉崔磊刘伟曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整形外科上海组织工程研究中心上海200011

脂肪组织由整形外科吸脂术获得（19例，31．5±5．8岁）。酶消化法分离抽吸物中细胞，体外扩增至第10代，测定细胞生长曲线、累计倍增数目，明确其体外生长规律和增殖能力：通过对表面抗原CD29、CD105、CD106、CD166、CD49d、CD34、... 详细信息

脂肪组织由整形外科吸脂术获得（19例，31．5±5．8岁）。酶消化法分离抽吸物中细胞，体外扩增至第10代，测定细胞生长曲线、累计倍增数目，明确其体外生长规律和增殖能力：通过对表面抗原CD29、CD105、CD106、CD166、CD49d、CD34、CD31、3G5等的检测分析脂肪来源细胞的群体组成；分别向软骨、骨、脂肪定向诱导，进一步明确该细胞群体定向分化能力。实验表明．每300ml脂肪抽吸物平均可获得5×10^7个有核细胞，体外扩增10代，平均每代倍增数目为1．59±0．224，累计倍增数目为15．53。流式细胞学及免疫细胞化学检测显示，干细胞相关抗原CD29、CD105、CD106、CD166等表达率均〉60％，但与造血系相关的CD34、CD31表达率也分别达到7．3％、29．2％。ADC向软骨诱导可检测到Ⅱ型胶原表达；向成骨诱导可见矿化结节形成．并可检测到AKP、Osteonectin基因表达；向脂肪诱导可检测到PPARr2、GLU-4、Leptin基因表达．细胞内有脂滴形成。脂肪来源的细胞获得量大，体外增殖能力强，并含有具有多向分化潜能细胞．有可能作为组织构建的种子细胞。

关键词：脂肪干细胞增殖分化潜能体外

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组织工程技术修复兔气管软骨缺损的实验研究

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中华胸心血管外科杂志 2006年第1期22卷 45-48页

作者：肖开颜周广东刘伟崔磊曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整形外科上海第二医科大学组织工程研究中心 200011

目的探讨以兔耳廓软骨细胞（auricular chondrocytes）为种子细胞,利用组织工程技术修复其自体气管软骨缺损的可行性.方法取兔耳廓软骨,以Ⅱ型胶原酶消化分离软骨细胞,体外培养并扩增至第2代后,接种于聚羟基乙酸（PGA）纤维支架（3 cm&#... 详细信息

目的探讨以兔耳廓软骨细胞（auricular chondrocytes）为种子细胞,利用组织工程技术修复其自体气管软骨缺损的可行性.方法取兔耳廓软骨,以Ⅱ型胶原酶消化分离软骨细胞,体外培养并扩增至第2代后,接种于聚羟基乙酸（PGA）纤维支架（3 cm×2 cm,约60mg）,形成细胞-材料复合物.体外培养7 d后,细胞-材料复合物环行包裹于直径为0.7cm的硅胶管外表面,置于裸鼠皮下.6周后取出,并将形成的管状软骨用于修复兔自体约1.5cm长的节段性气管软骨全层缺损.结果兔耳廓软骨细胞有较强的体外增殖能力,扩增至第2代时即可满足组织构建所需要的细胞量.软骨细胞种植于PGA后,细胞和材料黏附良好,细胞外基质分泌旺盛.置于裸鼠皮下6周后,细胞-材料复合物可形成弹性、韧性良好的管状软骨;其大体外观,组织学结构均与兔自体气管软骨相似.修复兔气管缺损后,组织工程化气管和周围组织愈合良好,实验动物可自主呼吸,成活1～28d不等,平均12.3d,死亡原因多为痰液积存和气管内肉芽增生.结论以兔耳廓软骨细胞与PGA相复合,利用组织工程学技术可以形成大体外观、组织学结构均与兔自体气管软骨相似的“组织工程化气管”,并能用于修复兔自体气管全层缺损.

关键词：气管组织工程软骨细胞兔气管软骨缺损

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猪气管上皮细胞的分离、培养和鉴定

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中华胸心血管外科杂志 2006年第5期22卷 326-328页

作者：肖开颜周广东刘伟崔磊曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整形外科组织工程研究中心 200011

目的探索猪气管上皮细胞体外适宜的生长、增殖条件,以期为组织工程化气管内壁上皮化提供种子细胞。方法无菌切取猪颈段气管,细菌蛋白酶消化。以明胶作为铺层,接种、培养。待细胞贴壁后,进行光镜观察、广谱角蛋白免疫组化检测、免疫荧光... 详细信息

目的探索猪气管上皮细胞体外适宜的生长、增殖条件,以期为组织工程化气管内壁上皮化提供种子细胞。方法无菌切取猪颈段气管,细菌蛋白酶消化。以明胶作为铺层,接种、培养。待细胞贴壁后,进行光镜观察、广谱角蛋白免疫组化检测、免疫荧光鉴定。结果光镜观察可见细胞呈铺路石样生长。角蛋白检测和免疫荧光检测均呈阳性,而阴性对照组和空白对照组呈阴性。结论以明胶作为铺层可以培养出活力较好、纯度高的气管上皮细胞。

关键词：生物假体上皮细胞明胶气管

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皮肤成纤维细胞构建组织工程肌腱的实验研究

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中华医学杂志 2006年第6期86卷 416-418页

作者：陈兵刘伟邓丹许锋崔磊曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整形外科上海市组织工程研究中心 200011

近年来,研究者们应用类似于骨髓基质干细胞的细胞作为组织工程肌腱的种子细胞[1-3],未获明显进展.皮肤成纤维细胞和肌腱细胞均来源于中胚层,细胞形态相似.如果成纤维细胞能取代肌腱细胞,作为种子细胞应用于肌腱组织工程则可望解决种子... 详细信息

近年来,研究者们应用类似于骨髓基质干细胞的细胞作为组织工程肌腱的种子细胞[1-3],未获明显进展.皮肤成纤维细胞和肌腱细胞均来源于中胚层,细胞形态相似.如果成纤维细胞能取代肌腱细胞,作为种子细胞应用于肌腱组织工程则可望解决种子细胞缺乏的难题.作者曾应用成纤维细胞作为种子细胞修复肌腱缺损取得初步成功[4],但缺乏长期观察结果.本研究旨在长期观察皮肤成纤维细胞构建的组织工程肌腱,并与肌腱细胞作为种子细胞的组织工程肌腱进行比较。

关键词：皮肤成纤维细胞组织工程肌腱细胞构建实验研骨髓基质干细胞种子细胞肌腱细胞肌腱组织工程细胞形态细胞修复

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重组BMP7腺病毒的构建及转染骨髓基质干细胞后的表达

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中国生物医学工程学报 2005年第2期24卷 245-253页

作者：祝联刘伟刘德莉吴娟娟王丹茹崔磊曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整形外科上海市组织工程研究中心上海200011

根据Clonetech公司的腺病毒载体构建流程 ,原核表达载体pBlue- BMP7经一系列特定的限制性内切酶酶切 ,重组成BMP7的腺病毒载体 ,并转染 2 93细胞进行大量扩增、滴度测定。重组Adeno- BMP7经限制性内切酶PI SceⅠ和Ⅰ CeuⅠ双酶切获得B... 详细信息

根据Clonetech公司的腺病毒载体构建流程 ,原核表达载体pBlue- BMP7经一系列特定的限制性内切酶酶切 ,重组成BMP7的腺病毒载体 ,并转染 2 93细胞进行大量扩增、滴度测定。重组Adeno- BMP7经限制性内切酶PI SceⅠ和Ⅰ CeuⅠ双酶切获得BMP7基因片段 ,PCR扩增得到特异的扩增片段 ,表明重组的Adeno-BMP7载体构建成功 ,其中携带有目的基因BMP7cDNA片段。Adeno- Lac- Z的体外转染骨髓基质干细胞 (BMSCs) ,染色表明转染率可达90 %以上 ;RT- PCR、免疫组化证明Adeno -BMP7转染BMSCs后BMP7在基因和蛋白水平上均有表达 ;转染Adeno- BMP7后的BMSCs细胞悬液裸鼠肌肉内注射后 ,x光片和组织学观察都表明BMP7转染可明显促进新骨的形成 ,与没转染Adeno -BMP7的BMSCs有显著差异。

关键词：重组腺病毒骨髓基质干细胞骨形成蛋白7

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组织工程与创伤医学

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中华创伤杂志 2005年第1期21卷 25-28页

作者：曹谊林周广东刘伟崔磊上海第二医科大学附属第九人民医院整形外科上海第二医科大学组织工程研究中心200011

组织工程是近年来逐渐发展起来的一项新型医疗技术.其基本原理是应用细胞生物学和工程学的原理,将体外培养扩增后具有生物学活力及特定功能的细胞与可降解生物支架材料复合,在体内或体外再造组织或器官,用以修复或改善损伤组织或器官的... 详细信息

组织工程是近年来逐渐发展起来的一项新型医疗技术.其基本原理是应用细胞生物学和工程学的原理,将体外培养扩增后具有生物学活力及特定功能的细胞与可降解生物支架材料复合,在体内或体外再造组织或器官,用以修复或改善损伤组织或器官的结构与功能,最终形成有活力的正常组织或器官,达到真正意义上的生物学重建[1]。

关键词：组织工程创伤医学正常组织生物支架材料体内体外医疗技术器官结构与功能细胞生物学

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应用骨髓基质干细胞体外构建组织工程化管状软骨的实验研究

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中华显微外科杂志 2005年第4期28卷 328-330,i0004页

作者：夏万尧刘伟刘天一陈付国崔磊曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整形外科上海第二医科大学组织工程研究中心 200011

目的以骨髓基质干细胞(bone marrow stroma cells,BMSCs)为种子细胞,接种于管状聚羟基乙酸(PGA)支架上,在体外构建组织工程化管状软骨. 方法取长枫杂交仔猪髂骨骨髓,在低糖DMEM完全培养液培养2周,传代后以浓度为5×107/ml细胞悬液... 详细信息

目的以骨髓基质干细胞(bone marrow stroma cells,BMSCs)为种子细胞,接种于管状聚羟基乙酸(PGA)支架上,在体外构建组织工程化管状软骨. 方法取长枫杂交仔猪髂骨骨髓,在低糖DMEM完全培养液培养2周,传代后以浓度为5×107/ml细胞悬液均匀接种于管状PGA支架上,以高糖DMEM低血清特定培养液诱导(含胰岛素2 mg/L、转铁蛋白3 mg/L、丙酮酸100mg/L、地塞米松10-7mol/L、TGF-β 10ng/L、葡萄糖4.5 mg/ml、2%胎牛血清),连续诱导培养10周,从大体、组织学和Ⅱ型胶原免疫组化对再生组织进行评价. 结果 6周时染色见BMSCs-PGA复合物表层为2～4层成纤维样细胞组成的软骨膜,下层为较成熟的软骨组织,软骨细胞包埋在软骨陷窝内,有很多散在PGA纤维,而在中间部分,组织量较少,结构较构散.10周时BMSCs-PGA复合物外观呈乳白色软骨样,管壁较厚,有一定的弹性,但中间部管腔塌陷较明显,苏木素-伊红染色见实验组管状BMSCs-PGA和6周时相似,但结构更致密和规则,细胞数量较正常软骨组织少,还可见少量的未降解的PGA纤维.免疫组化证实形成的组织有Ⅱ型胶原分布. 结论管状BMSCs-PGA复合物在特定培养液诱导下,在体外能形成管状软骨,这为将来临床应用BMSCs作为种子细胞,修复软骨缺损或构建复合组织气管提供了实验基础和技术参数.

关键词：骨髓基质干细胞生物医学工程分化组织工程化体外构建软骨膜实验研管状苏木素-伊红染色 PGA支架

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骨髓基质细胞修复猪膝关节非负重区软骨与骨复合缺损的实验研究

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中华医学杂志 2004年第11期84卷 925-931页

作者：周广东王晓云苗春雷刘天一祝联刘德莉崔磊刘伟曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整形外科上海组织工程研究中心 200011

目的　探讨猪骨髓基质细胞 (bonemarrowstromalcells ,BMSC)复合聚羟基乙酸 /聚乳酸(PGA/PLA)支架修复关节软骨与骨复合缺损的可行性。方法　杂交猪 18只 ,抽取股骨骨髓 ,体外培养、扩增BMSC并分别经地塞米松诱导 (A组 )或地塞米松与转... 详细信息

目的　探讨猪骨髓基质细胞 (bonemarrowstromalcells ,BMSC)复合聚羟基乙酸 /聚乳酸(PGA/PLA)支架修复关节软骨与骨复合缺损的可行性。方法　杂交猪 18只 ,抽取股骨骨髓 ,体外培养、扩增BMSC并分别经地塞米松诱导 (A组 )或地塞米松与转化生长因子 β1(TGFβ1)联合诱导 (B组 ) ,以免疫组织化学、逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测其软骨分化表型。其中有 2只猪部分BMSC经绿色荧光蛋白 (GFP)基因转染标记。诱导后的细胞分别接种到PGA/PLA支架 ,体外培养 1周后植入猪自体股骨下端非负重面软骨及骨复合缺损处 ,单纯支架植入 (C组 )及空白不处理 (D组 )作为对照。上述动物分别于 3( 6只 )、6 ( 10只 )个月时取材 ,进行大体观察、修复结果分级、组织学检查、葡糖氨基聚糖 (GAG)含量测定及生物力学测定。含GFP标记细胞的 2只猪 7个月时取材 ,共聚焦显微镜观察植入细胞的分布。结果　诱导后BMSC均能表达软骨特征性的Ⅱ型胶原与聚集蛋白聚糖 (aggrecan) ,两组细胞均与支架材料黏附良好。术后大体观察与组织学检查显示 :A组缺损以不完全修复为主 ,多数缺损软骨修复不良 ,而骨缺损基本修复 ,组织学主要为纤维性软骨及松质骨 ;B组缺损以完全修复为主 ,组织学表现为透明软骨及松质骨 ,少部分标本修复组织中含有纤维?

关键词：骨髓基质细胞细胞修复猪膝关节非负重区软骨骨复合缺损 BMSC 荧光抗体技术

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组织工程技术构建兔角膜基质组织的实验研究

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中华眼科杂志 2004年第8期40卷 517-521页

作者：胡晓洁王敏柴岗张艳李伟国刘伟曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整形外科上海组织工程研究中心 200011

目的探讨应用组织工程技术构建兔角膜基质层组织的可行性。方法新西兰大白免40只,即母兔及其亲生子兔共20对。分离获取新生子兔角膜基质细胞,扩增、培养,汇合后,接种于聚羟基乙酸(PGA),形成细胞-生物材料复合物,移植于对应的母兔角膜... 详细信息

目的探讨应用组织工程技术构建兔角膜基质层组织的可行性。方法新西兰大白免40只,即母兔及其亲生子兔共20对。分离获取新生子兔角膜基质细胞,扩增、培养,汇合后,接种于聚羟基乙酸(PGA),形成细胞-生物材料复合物,移植于对应的母兔角膜基质层。绿色荧光蛋白(GFP)标记角膜基质细胞,示踪角膜基质构建过程。同时,对侧角膜仅行PGA移植,作为材料对照组。8周后取材,行组织学切片,Western blot检测Ⅰ型胶原及电镜下测定胶原纤维直径分布。结果术后8周,实验侧角膜逐渐恢复透明,形成新生角膜基质样组织,胶原与角膜表面平行,排列较整齐,组织学结构接近正常基质组织。实验组Western blot检测提示新生组织中基质细胞表达Ⅰ型胶原;电镜下胶原纤维直径[(29.0±4.7)nm]与正常角膜基质组织比较[(28.5±3.5)nm],差异无显著意义(P>0.05)。对照组正常角膜无新生基质组织形成。GFP标记角膜基质细胞,示踪角膜基质第8周时,荧光显微镜下可见新生组织呈绿色,提示GFP表达。结论应用组织工程技术可以在兔受体角膜内构建角膜基质层组织。(中华眼科杂志,2004,40:517-521)

关键词：组织工程兔角膜基质组织实验聚羟基乙酸角膜移植

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软骨细胞与骨髓基质细胞共培养体外软骨形成的实验研究

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中华医学杂志 2004年第20期84卷 1716-1720页

作者：周广东苗春雷王晓云刘天一崔磊刘伟曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整形外科上海组织工程研究中心 200011 潍坊医学院整形外科研究所

目的　探讨软骨细胞与骨髓基质细胞 (BMSC)共培养体外构建软骨的可行性 ,以阐明软骨细胞能否诱导BMSC向软骨细胞分化并形成软骨组织。方法　分别培养猪的BMSC与耳软骨细胞 ,将 2种细胞按 8:2 (BMSC :软骨细胞 )比例混匀 ,以 5 0× ... 详细信息

目的　探讨软骨细胞与骨髓基质细胞 (BMSC)共培养体外构建软骨的可行性 ,以阐明软骨细胞能否诱导BMSC向软骨细胞分化并形成软骨组织。方法　分别培养猪的BMSC与耳软骨细胞 ,将 2种细胞按 8:2 (BMSC :软骨细胞 )比例混匀 ,以 5 0× 10 7/ml的终浓度接种于聚羟基乙酸 /聚乳酸支架 (PGA/PLA ,直径 9mm ,高 3mm)作为共培养组 ,相同终浓度的单纯软骨细胞和单纯BMSC分别接种于相同支架作为阳性对照及阴性对照 ,1 0× 10 7/ml(相当于共培养组中软骨细胞数 )的单纯软骨细胞接种作为低浓度软骨细胞对照。每组各接种 6例标本 ,每例接种细胞悬液 2 0 0 μl。全部标本均于体外培养 8周后取材 ,通过大体观察、湿重测定、蛋白多糖含量测定、组织学及免疫组织化学等相关检测对新生软骨进行评价。结果各组细胞均与材料支架黏附良好。共培养组及阳性对照组 (软骨细胞组 )体外培养 8周后均形成了成熟的软骨组织 ,并基本保持了复合物初始的大小和形状 ,2组新生软骨外观及组织学特征基本相同 ,免疫组织化学也显示 2组均表达软骨特异性细胞外基质Ⅱ型胶原。定量测定结果表明 ,共培养组的平均湿重和蛋白多糖含量均达到阳性对照组的 80 %以上。阴性对照组 (单纯BMSC组 )在体外培养过程中逐渐皱缩变形 ,仅在组织块边缘的局部区?

关键词：软骨细胞体外培养 BMSC 共培养软骨形成骨髓基质细胞软骨组织阳性对照细胞悬液标本

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