检索结果-内蒙古大学图书馆

中华实验外科杂志 2003年第1期20卷 75-76页

作者：陆峻泓李卿刘伟吴娟娟刘德莉曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院上海市组织工程重点实验室 200011

目的　构建人软骨蛋白聚糖 (aggrecan)探针 ,应用于整复外科研究中Northern法对aggrecanmRNA表达水平的检测。方法　取人软骨细胞 ,逆转录多聚酶链反应 (RT PCR )扩增ag grecan球间区域 (IGD)片段。将纯化的RT PCR产物构建入 pUCm T... 详细信息

目的　构建人软骨蛋白聚糖 (aggrecan)探针 ,应用于整复外科研究中Northern法对aggrecanmRNA表达水平的检测。方法　取人软骨细胞 ,逆转录多聚酶链反应 (RT PCR )扩增ag grecan球间区域 (IGD)片段。将纯化的RT PCR产物构建入 pUCm T载体 ,酶切及测序鉴定。32 P标记aggrecan探针 ,Northern杂交法检测人软骨组织和培养软骨细胞 (各 3组 )以及人正常和瘢痕疙瘩成纤维细胞 (各 6组 )中aggrecanmRNA的表达。结果　构建产物经鉴定 ,显示其包含了人ag grecanIGD的基因序列 ,与GeneBank已收录序列 (M 5 5 172 ) 10 0 %相同。Northern结果显示 ,该探针可用于aggrecanmRNA表达水平的定性和定量检测。对正常人软骨组织和体外培养人软骨细胞的aggrecan β actin的吸光度比值进行比较 ,发现其间 ( 0 .5 75 6± 0 .0 15 2 1.36 90± 0 .0 2 0 6 )差异具有显著性 (P <0 .0 1)。结论　Northern杂交法可以对整复外科研究中常见的软骨和瘢痕疙瘩成纤维细胞中aggrecanmRNA的表达水平进行检测 ,且具有较好的灵敏度和特异性。

关键词：基因表达核素放射性Northern法 Northern杂交探针整复外科人软骨蛋白聚糖探针

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永生化软骨细胞的生物学特性

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实验生物学报 2003年第6期36卷 435-444页

作者：李卿刘伟陈瑾君陆峻泓刘德莉曹谊林上海市组织工程重点实验室上海200011 上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科

本实验为建立永生化的猪耳软骨细胞系并探讨它的生物学特性,以包含人端粒酶逆转录酶催化亚基(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因的逆转录病毒载体(pBABE-hTERT)转染至正常猪耳软骨细胞中。经筛选、挑取克隆,得永生化... 详细信息

本实验为建立永生化的猪耳软骨细胞系并探讨它的生物学特性,以包含人端粒酶逆转录酶催化亚基(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因的逆转录病毒载体(pBABE-hTERT)转染至正常猪耳软骨细胞中。经筛选、挑取克隆,得永生化软骨细胞系(TL1),在体外已连续培养10个月。RT-PCR和PCR-ELISA法测得其有高水平的端粒酶稳定表达。通过生长曲线、HE染色、流式细胞仪分析,以及裸鼠成瘤实验,表明它的细胞增殖能力增加,凋亡率下降并维持在体外培养早期细胞的水平,且细胞无恶变迹象。对软骨特异性分子的RT-PCR、Western杂交和免疫组化的结果分析,发现TL1中有SOX9的表达;无结构完整的aggrecan表达;有低水平的Ⅱ型胶原表达;Ⅰ型胶原的表达随细胞的表型改变而改变。综上所述,通过外源性hTERT的稳定表达,建立了永生化的猪耳软骨细胞系;但是它在单层培养的状态下,软骨细胞特异性的基因表达逐步发生改变,导致其部分丧失软骨细胞的正常表型。

关键词：软骨细胞永生化分化生物学特性人端粒酶逆转录酶催化亚基

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重组端粒酶pEGFP-hTRT质粒的构建

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中国修复重建外科杂志 2003年第3期17卷 230-232页

作者：周海文周曾同杨雯君刘德莉李卿胡洪亮刘伟崔磊曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院口腔内科口腔研究所上海200011 上海第二医科大学附属第九人民医院口腔颌面外科上海200011 上海第二医科大学组织工程研究中心上海市组织工程重点实验室上海200011

目的　构建具有绿色荧光蛋白报道 (GFP)基因的端粒酶真核质粒载体 ,为转染细胞、延长细胞寿命提供基础。　方法　酶切含人端粒酶逆转录酶 (h TRT)基因的 p GRN14 5质粒获取 h TRT片段 ,插入经酶切及磷酸化处理的 GFP载体 p EGFP- C1,形... 详细信息

目的　构建具有绿色荧光蛋白报道 (GFP)基因的端粒酶真核质粒载体 ,为转染细胞、延长细胞寿命提供基础。　方法　酶切含人端粒酶逆转录酶 (h TRT)基因的 p GRN14 5质粒获取 h TRT片段 ,插入经酶切及磷酸化处理的 GFP载体 p EGFP- C1,形成 8.1kb质粒 ,经 Hind 、Not 酶切电泳筛选、鉴定并测序。　结果　经酶切电泳分析得到3.4 kb及 4 .7kb大小的两片段 ;测序结果显示接头两端序列正确。　结论　重组端粒酶 p EGFP- h TRT质粒的成功构建 ,可用于细胞转染 ,对进一步研究组织工程种子细胞的衰老问题具有重要意义。

关键词：端粒酶 pEGFP-hTRT质粒构建重组质粒绿色荧光蛋白

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猪软骨细胞老化过程中Aggrecan的表达及其糖链分子结构的改变

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基础医学与临床 2003年第5期23卷 517-520页

作者：李卿刘伟夏万尧崔磊曹谊林上海第二医科大学第九人民医院整复外科上海市组织工程重点实验室上海200011

本实验旨在探讨体外培养软骨细胞在老化过程中 ,aggrecan的表达水平与分子结构的变化及其间的相互关系。取体外培养P1～P5各代猪耳软骨细胞 ,RT PCR检测aggrecan球间区域 (interglobulardomain ,IGD)mRNA的表达状况 ;阿利新兰 (AlcianBl... 详细信息

本实验旨在探讨体外培养软骨细胞在老化过程中 ,aggrecan的表达水平与分子结构的变化及其间的相互关系。取体外培养P1～P5各代猪耳软骨细胞 ,RT PCR检测aggrecan球间区域 (interglobulardomain ,IGD)mRNA的表达状况 ;阿利新兰 (AlcianBlue)法检测糖胺聚糖 (glycosaminoglycan ,GAG)的含量和糖链的分子结构。结果显示aggrecanIGDmRNA的表达在P4、P5细胞内明显降低 (P <0 0 5 ) ;GAG的合成也在P4、P5时显著减少 (P <0 0 5 ) ,但这 2项指标的变化趋势之间无显著相关性。而长链高度硫酸化的GAG由P4软骨细胞开始 ,绝对含量和相对含量均显著减少 (P <0 0 1) ,其与aggrecanIGDmRNA的变化趋势有显著相关性 (P <0 0 1)。由此可见 ,体外培养软骨细胞中ag grecan的表达合成和细胞老化有密切关系。aggrecanIGDmRNA的表达降低与aggrecan中长链高度硫酸化GAG的合成代谢过程受阻可能是影响老化细胞成软骨能力的重要因素之一。

关键词：猪 Aggrecan 糖链细胞老化软骨细胞糖胺聚糖组织工程

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体外培养口腔黏膜角化细胞生物学的特性

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中国临床康复 2003年第11期7卷 1628-1629页

作者：周海文周曾同商庆新曹谊林上海第二医科大学第九人民医院口腔内科上海第二医科大学第九人民医院口腔研究所上海市200011 上海第二医科大学组织工程研究中心上海市组织工程重点实验室上海市200011

目的一个稳定的人类正常口腔黏膜角化细胞体外培养体系对于研究组织工程化口腔黏膜构建及口腔黏膜上皮癌变及阻断有重要意义。研究体外培养的人正常口腔黏膜角化细胞的细胞生物学特性。方法通过测定细胞生长曲线及克隆形成率了解细胞生... 详细信息

目的一个稳定的人类正常口腔黏膜角化细胞体外培养体系对于研究组织工程化口腔黏膜构建及口腔黏膜上皮癌变及阻断有重要意义。研究体外培养的人正常口腔黏膜角化细胞的细胞生物学特性。方法通过测定细胞生长曲线及克隆形成率了解细胞生长基本规律及其增殖能力,并通过流式细胞仪检测细胞染色体倍性。结果细胞接种后第1～3天为静止生长期,第5～10天处于对数生长期,第12天后进入平台期。倍增时间为24～48h;接种密度为200/cm2时,培养细胞克隆形成率为0.979%。经流式细胞仪检测细胞染色体倍性结果表明原代及传代细胞均为二倍体细胞。结论体外连续培养的口腔黏膜角化细胞为正常上皮细胞,增殖能力良好。

关键词：口腔黏膜角化细胞生物学特性细胞体外培养组织工程角蛋白细胞细胞生长

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不同类型人软骨细胞体外生物学特性比较

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中华实验外科杂志 2003年第6期20卷 497-498页

作者：张艳柴岗崔磊刘伟曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整形外科上海市组织工程研究重点实验室上海组织工程研究开发中心 200011

目的　通过研究人耳软骨和肋软骨两种不同类型软骨细胞体外分离、增殖、老化规律 ,为选择合适的组织工程种子细胞提供依据。方法　取小耳畸形残耳软骨和肋软骨 ,体外分别用0 .0 5 %和 0 .15 %Ⅱ型胶原酶消化 16h分离 ,台盼蓝染色计活细... 详细信息

目的　通过研究人耳软骨和肋软骨两种不同类型软骨细胞体外分离、增殖、老化规律 ,为选择合适的组织工程种子细胞提供依据。方法　取小耳畸形残耳软骨和肋软骨 ,体外分别用0 .0 5 %和 0 .15 %Ⅱ型胶原酶消化 16h分离 ,台盼蓝染色计活细胞数 ,得原代细胞获得率。体外单层培养 6代 ,观察形态学改变 ,群体倍增时间 (PDT ) ,免疫细胞化学染色及逆转录聚合酶链反应(RT PCR)检测Ⅱ型胶原和Aggrecan评定软骨细胞老化规律。结果　人残耳软骨组织平均细胞获得率为 ( 1.5 4± 0 .14 )× 10 6/ g ,肋软骨平均获得率为 ( 0 .46± 0 .0 9)× 10 6/ g ,两类软骨细胞P1的PDT最短 ,前 3代增殖力较强 ,P3 以后PDT明显延长 ,P6代细胞不再增殖。免疫细胞化学及RT PCR均证实耳软骨细胞 3代内、肋软骨细胞 4代内软骨细胞表型稳定。结论　第 2代的耳软骨细胞与第 3代肋软骨细胞可作为人体内组织工程化软骨构建的种子细胞。

关键词：软骨细胞体外生物学特性组织工程种子细胞

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以羊膜为载体培养角膜内皮细胞的实验研究

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眼科研究 2003年第2期21卷 147-149页

作者：傅瑶范先群刘伟商庆新曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院上海市组织工程研究重点实验室 200011

目的　以羊膜为载体培养角膜内皮细胞并形成单层组织 ,为以后内皮细胞层移植提供方法和材料来源。方法　胰酶消化去除羊膜上皮细胞 ,保留基底膜作为载体 ,种植兔角膜内皮细胞 ,体外培养形成单层内皮层 ,并进行形态、组织学、超微结构观... 详细信息

目的　以羊膜为载体培养角膜内皮细胞并形成单层组织 ,为以后内皮细胞层移植提供方法和材料来源。方法　胰酶消化去除羊膜上皮细胞 ,保留基底膜作为载体 ,种植兔角膜内皮细胞 ,体外培养形成单层内皮层 ,并进行形态、组织学、超微结构观察。结果　角膜内皮细胞在羊膜上黏附生长并增殖 ,体外培养 6～ 7d即融合成单层 ,其形态及生长密度优于单纯培养皿上培养的内皮细胞。复合角膜内皮组织由羊膜基底膜和单层扁平内皮细胞组成 ,与生理状态下的角膜内皮组织相近。结论　以羊膜为载体培养角膜内皮细胞可形成单层细胞层。

关键词：角膜内皮细胞羊膜体外培养

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组织工程技术构建血管壁的实验研究

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中国临床康复 2003年第6期7卷 922-923,T003页

作者：刘阳张燕中许志成刘伟崔磊曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科上海第二医科大学组织工程重点实验室上海市200011 上海第二医科大学附属仁济医院血管外科上海市200000

目的:构建组织的方法和环境是组织工程研究所涉及的另一重要环节,对于能否最终形成新生组织以及新生组织质量的好坏起着关键作用。探讨运用组织工程技术构建血管中膜组织的方法。方法:将体外培养、扩增的犬平滑肌细胞接种于片状聚羟基乙... 详细信息

目的:构建组织的方法和环境是组织工程研究所涉及的另一重要环节,对于能否最终形成新生组织以及新生组织质量的好坏起着关键作用。探讨运用组织工程技术构建血管中膜组织的方法。方法:将体外培养、扩增的犬平滑肌细胞接种于片状聚羟基乙酸(PGA)材料上,形成细胞-材料复合物,将该复合物包绕于硅胶管使成管状结构后移植于裸鼠皮下,第2,6,11周后行大体及组织学检测。结果:裸鼠皮下形成的组织工程化血管中膜组织学结构在不同的时间点具有不同的特征。结论:运用组织工程技术可形成具有与天然血管中膜组织学结构相似的血管。

关键词：组织工程技术构建血管壁实验研究生物医学工程

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碱性成纤维细胞生长因子在病理性瘢痕形成中的作用

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实用美容整形外科杂志 2003年第2期14卷 100-102页

作者：武晓莉刘伟商庆新上海第二医科大学附属第九人民医院组织工程实验室上海200011

病理性瘢痕的组织学特点为成纤维细胞的过度增生、细胞外基质成分过量沉积、胶原排列紊乱[1].众多细胞因子,包括碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在瘢痕形成过程中发挥重要的作用.现将碱性成纤维细胞生长因子与病理性瘢痕的关系简要介绍如下.

关键词：碱性成纤维细胞生长因子病理性瘢痕形成细胞因子肝素硫酸肝素蛋白多糖

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软骨细胞老化过程中胞外基质表达水平的改变

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中华创伤骨科杂志 2003年第3期5卷 225-228页

作者：陆峻泓李卿刘伟陈瑾君刘德莉吴娟娟崔磊曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院上海市组织工程重点实验室200011

目的研究猪耳软骨细胞在体外培养传代过程中,细胞老化相关基因和胞外基质相关基因表达水平的改变。方法取体外培养猪耳软骨细胞,通过光镜,对各代细胞的形态学变化进行观测。RT-PCR检测各代细胞中bcl-2、端粒酶、Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原在mRN... 详细信息

目的研究猪耳软骨细胞在体外培养传代过程中,细胞老化相关基因和胞外基质相关基因表达水平的改变。方法取体外培养猪耳软骨细胞,通过光镜,对各代细胞的形态学变化进行观测。RT-PCR检测各代细胞中bcl-2、端粒酶、Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原在mRNA表达水平上的改变。结果体外培养软骨细胞随着老化的进程,逐渐显现衰老和凋亡的特征。凋亡抑制基因bcl-2和控制细胞分裂的端粒酶的表达显著下降(P<0.01)。软骨细胞的特征性基质分子Ⅱ型胶原在第3代时表达水平有显著下降(P<0.01),降至原代细胞的5.47%±1.04%,在第4代几乎不再表达。而Ⅰ型胶原在第5代时,有显著上升(P<0.01);在第9代时又显著下降(P<0.01)。结论猪软骨细胞经体外培养,由第4代起逐渐发生去分化,丧失软骨细胞的表型。同时,细胞的增殖分裂能力亦逐步减退,细胞凋亡现象明显增加。

关键词：软骨细胞细胞老化胞外基质基因表达细胞分裂

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