检索结果-内蒙古大学图书馆

上海第二医科大学学报 2004年第4期24卷 232-234页

作者：李东柳向东肖开颜舒朝锋崔磊刘伟曹谊林上海第二医科大学第九人民医院整复外科上海市组织工程研究与开发中心上海200235

目的研究不同接种浓度对人骨髓基质干细胞在脱钙骨支架上生长过程及分布的影响。方法荧光活性染料DiI标记人骨髓基质干细胞,接种于部分脱钙骨支架材料上,测定细胞的粘附率;将细胞悬液浓度分别调整为20×106、10×106、5×... 详细信息

目的研究不同接种浓度对人骨髓基质干细胞在脱钙骨支架上生长过程及分布的影响。方法荧光活性染料DiI标记人骨髓基质干细胞,接种于部分脱钙骨支架材料上,测定细胞的粘附率;将细胞悬液浓度分别调整为20×106、10×106、5×106/mL和空白组,依次接种于同一块脱钙骨支架4个相邻象限的中心位置上。接种后第2、7 d在倒置荧光显微镜下观察材料表面的细胞分布、生长的情况,测量细胞材料面积比。结果 DiI标记的骨髓基质干细胞的粘附率为(99.9±0.2)％,未标记的骨髓基质干细胞粘附率为(99.1±1)％,两者无统计学差异(P>0.05)。不同浓度细胞的细胞材料面积比无差异(P>0.05)。结论通过DiI标记可以动态观察细胞在材料上的生长状况。20×106、10×106、5×106/mL接种浓度均能达到覆盖脱钙骨表面直接接种部位的目的。

关键词：组织工程骨髓基质干细胞细胞支架脱钙骨细胞粘附作用

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应用hMSCs-脱钙骨复合物体内构建软骨组织的实验研究

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上海第二医科大学学报 2004年第4期24卷 242-245页

作者：舒朝锋崔磊刘伟曹谊林上海第二医科大学第九人民医院整复外科上海市组织工程研究与开发中心上海200235

目的观察成软骨诱导后人骨髓间充质干细胞和脱钙骨复合物在裸鼠皮下组织形成情况。方法从志愿者髂前上嵴处抽取骨髓,得到骨髓间充质干细胞,将第1代的骨髓间充质干细胞密度调整到1.5×107/mL,均匀接种于脱钙骨,培养4 h后以含有TGF-... 详细信息

目的观察成软骨诱导后人骨髓间充质干细胞和脱钙骨复合物在裸鼠皮下组织形成情况。方法从志愿者髂前上嵴处抽取骨髓,得到骨髓间充质干细胞,将第1代的骨髓间充质干细胞密度调整到1.5×107/mL,均匀接种于脱钙骨,培养4 h后以含有TGF-β3(10 ng/mL)DMEM培养液的培养作为实验组,加10％FBS的DMEM为对照组Ⅰ,空白材料为对照组Ⅱ,体外培养6 d,嘲植到裸鼠皮下。回植前及回植后2、4、6、8、10周取材,石蜡切片进行Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原的免疫组化、Masson’s、Alician Blue’s染色鉴定。结果回植前及回植后各时间段,实验组免疫组化测到Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原的表达,对照组未见Ⅱ型胶原表达;实验组Masson、Alician染色可见材料内的胶原分泌非常旺盛,有硫酸化酸性粘多糖沉积,对照组则表达量极少。结论诱导后人骨髓间充质干细胞一脱钙骨复合物在裸鼠皮下能表达特异性软骨基质。

关键词：骨髓间充质干细胞脱钙骨皮下组织组织工程诱导细胞分化胶原软骨种子细胞

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体外培养人胎儿软骨细胞的生物学特性

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上海第二医科大学学报 2004年第4期24卷 258-261,270页

作者：张英周广东崔磊刘伟曹谊林上海第二医科大学第九人民医院整复外科上海市组织工程研究与开发中心上海200235

目的建立人胎儿软骨细胞分离培养、扩增技术体系,研究其体外单层培养条件下的生长特性,探讨胎儿软骨细胞作为软骨组织工程种子细胞的可行性。方法酶消化法获取胎儿软骨细胞,体外培养扩增,经测定细胞生长曲线、群体倍增时间及累计倍增数... 详细信息

目的建立人胎儿软骨细胞分离培养、扩增技术体系,研究其体外单层培养条件下的生长特性,探讨胎儿软骨细胞作为软骨组织工程种子细胞的可行性。方法酶消化法获取胎儿软骨细胞,体外培养扩增,经测定细胞生长曲线、群体倍增时间及累计倍增数目,观察细胞生长动力学并确定体外生长规律。通过免疫组织化学检测Ⅱ型胶原分泌,阿利辛蓝比色法测定基质糖胺多糖(GAG)含量。P1细胞接种于聚羟乙酸(PGA)纤维支架,观察两者生物相容性及细胞体外成软骨能力。结果关节软骨细胞形态呈典型的多角形,随着传代的次数增加,逐渐变成“成纤维细胞样”的条梭形。平均倍增时间为74 h。细胞连续培养5代,累计倍增数目为7.83±0.42。P1-P5间接免疫组化Ⅱ型胶原表达阳性,P6不表达。GAG含量P1细胞低于P0细胞,随体外培养时间延长逐渐增加。P1细胞接种于PGA纤维支架,体外培养14 d,组织学观察显示有软骨组织形成。结论胎儿软骨细胞经常规体外培养,至第6代失去分泌软骨特异性基质的功能。P1细胞接种PGA纤维展现良好的生物相容性,初步证实胎儿软骨细胞作为软骨组织工程种子细胞的可行性。

关键词：体外培养胎儿软骨细胞生物学特性组织工程种子细胞酶消化法

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组织工程化表皮膜片的构建及其在增殖性疤痕治疗中的应用

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上海第二医科大学学报 2004年第4期24卷 296-298页

作者：杨军杨光辉刘伟崔磊曹谊林钱云良上海第二医科大学第九人民医院整复外科上海市组织工程研究与开发中心上海200235

目的构建组织工程化表皮细胞膜片并应用于增殖性疤痕治疗。方法利用患者少量自体正常皮肤分离、培养、扩增表皮细胞,接种于壳聚糖-明胶膜构建成表皮细胞膜片;断层削除增殖性疤痕,膜片移植于创面、适度加压,术后10、30、90 d行大体观... 详细信息

目的构建组织工程化表皮细胞膜片并应用于增殖性疤痕治疗。方法利用患者少量自体正常皮肤分离、培养、扩增表皮细胞,接种于壳聚糖-明胶膜构建成表皮细胞膜片;断层削除增殖性疤痕,膜片移植于创面、适度加压,术后10、30、90 d行大体观察、组织学检查及广谱角蛋白、包壳蛋白、层粘连蛋白免疫组织化学检测。结果利用自体表皮细胞和壳聚糖/明胶膜能够构建出人表皮细胞膜片,应用于临床增殖性疤痕治疗6例,经过3月随访,创面愈合时间(16.2±15)d,移植膜片存活良好,结构较完整,90 d随访无明显疤痕增生,疗效肯定。结论表皮细胞/壳聚糖-明胶膜片对增殖性疤痕具有良好治疗效果,组织工程皮肤进入临床具有现实的可行性及广阔的应用前景。

关键词：组织工程表皮细胞壳聚糖明胶膜增殖性疤痕皮肤损伤细胞培养

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病毒介导的基因转染在组织工程中的应用

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上海第二医科大学学报 2004年第4期24卷 311-314页

作者：刘德莉刘方军吴娟娟胡晓洁祝联刘伟崔磊曹谊林上海第二医科大学第九人民医院整复外科上海市组织工程研究与开发中心上海200235

目的构建重组病毒载体,将较多细胞因子通过病毒载体转入种子细胞,提高细胞增殖及分泌基质能力,维持表型,延缓老化。方法应用基因工程技术,构建缺陷型逆转录病毒重组载体和缺陷性腺病毒重组载体。分别通过PT67包装细胞筛选克隆及293细... 详细信息

目的构建重组病毒载体,将较多细胞因子通过病毒载体转入种子细胞,提高细胞增殖及分泌基质能力,维持表型,延缓老化。方法应用基因工程技术,构建缺陷型逆转录病毒重组载体和缺陷性腺病毒重组载体。分别通过PT67包装细胞筛选克隆及293细胞扩增,获得假病毒上清液,经浓缩纯化后转染靶细胞。结果成功构建胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、Fas配体(Fas-Ligand)、绿色荧光蛋白(GFP)等逆转录病毒载体以及TGFβ1、人骨形成蛋白因子-7(hBMP7)、端粒酶、Smad3、Smad7等腺病毒载体,其中GFP-逆转录病毒重组载体在软骨细胞表达至2月。结论通过有效的含目的基因重组载体转染种子细胞,延缓体外培养细胞的老化及促进细胞的增殖与基质分泌,获得组织工程所需要的大量种子细胞,为组织工程构建奠定了基础。

关键词：基因转染逆转录病毒载体腺病毒载体组织工程种子细胞基因工程技术

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血管生物反应器的研究与应用

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上海第二医科大学学报 2004年第4期24卷 319-321页

作者：李宏许志成崔磊刘伟曹谊林上海第二医科大学第九人民医院整复外科上海市组织工程研究与开发中心上海200235

该文根据生物力学的原理,分析了直圆筒形血管的流动状况和血管的受力特性,在此基础上设计了一套的能模拟血管体内环境的生物反应器,通过血管的培养和相关检测分析,表明生物反应器的设计是合理的,性能是可靠的。

关键词：血管生物反应器生物力学组织工程平滑肌细胞血管疾病

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组织工程化表皮膜片修复裸鼠创面的实验研究

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上海第二医科大学学报 2004年第4期24卷 293-295页

作者：杨光辉杨军邓辰亮王佳鸣崔磊刘伟曹谊林上海第二医科大学第九人民医院整复外科上海市组织工程研究与开发中心上海200235

目的构建组织工程化表皮细胞膜片并应用于修复裸鼠全层皮肤缺损创面。方法体外分离、培养、扩增人类表皮细胞,与壳聚糖-明胶膜构建表皮细胞膜片,用于修复裸鼠背部全层皮肤缺损创面,以单纯壳聚糖/明胶膜作为对照;术后行大体、组织学观... 详细信息

目的构建组织工程化表皮细胞膜片并应用于修复裸鼠全层皮肤缺损创面。方法体外分离、培养、扩增人类表皮细胞,与壳聚糖-明胶膜构建表皮细胞膜片,用于修复裸鼠背部全层皮肤缺损创面,以单纯壳聚糖/明胶膜作为对照;术后行大体、组织学观察及免疫组织化学检测。结果表皮细胞可以壳聚糖-明胶膜作为载体在体外培养,达到60％-70％亚融合状态时,移植人表皮细胞/壳聚糖-明胶膜到裸鼠全层皮肤缺损创面,人表皮细胞可以在创面存活并继续增殖分化,形成连续的表皮覆盖创面。结论人表皮细胞/壳聚糖-明胶膜是一种理想的组织工程表皮替代物。

关键词：组织工程表皮细胞创面愈合壳聚糖明胶膜皮肤缺损

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组织工程的发展与主要研究方向

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上海第二医科大学学报 2004年第4期24卷 229-231页

作者：崔磊刘伟曹谊林上海第二医科大学第九人民医院整复外科上海市组织工程研究与开发中心上海200235

该文简要回顾了组织工程的建立与发展历史,重点讨论组织工程中的种子细胞、生物材料与组织构建等研究现状,对中国组织工程的建立与研究成果作了概括性总结。

关键词：组织工程种子细胞生物材料研究方向中国

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成人骨髓间充质干细胞的体外培养和表型鉴定

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上海第二医科大学学报 2004年第4期24卷 302-306页

作者：柳向东柴冈李东崔磊刘伟曹谊林上海第二医科大学第九人民医院整复外科上海市组织工程研究与开发中心上海200235

目的建立成人骨髓间充质干细胞(hMSCs)的分离培养方法,并对其表面标志进行检测,研究骨髓间质干细胞(MSC)基本生物学特性。方法采用Percoll(1.073 g/mL)梯度离心分离hMSCs,体外扩增,流式细胞仪检测hMSCs表面抗原表达。结果成人骨髓间... 详细信息

目的建立成人骨髓间充质干细胞(hMSCs)的分离培养方法,并对其表面标志进行检测,研究骨髓间质干细胞(MSC)基本生物学特性。方法采用Percoll(1.073 g/mL)梯度离心分离hMSCs,体外扩增,流式细胞仪检测hMSCs表面抗原表达。结果成人骨髓间质干细胞在体外扩增原代及传代培养显示,hMSCs具有活跃增殖的能力,每10 mL骨髓可获得(1.25±0.56)×106个原代细胞,7代可获得(5.32±1.15)×1010个细胞(n=5),随着传代次数的增加,细胞的增殖能力下降。流式细胞仪检测生长良好的第3代hMSC显示CD29、CD44、CD106、CD105、CD166、HLA-A/B/C表达阳性,CD34、CD45、CD14、CD31、CD49d、CD54、HLA-DR/DP/DQ表达为阴性。细胞周期分析显示,hMSCs中,S+G2+M期的细胞约占(16.25±3.18)％,其中s期为(4.12±2.35)％;而处于G0+G1期的细胞总数占(76.35±5.28)％,说明大部分细胞仍然处于静止期。流式细胞仪检测表明分离的hMSCs具有间充质干细胞的特征。结论 hMSCs有很强的自我更新能力,在体外传代培养可维持良好的干细胞生物学特性,为进一步深入研究hMSCs作为组织工程种子细胞的应用提供参数。

关键词：骨髓间充质干细胞体外培养细胞表型鉴定组织工程流式细胞仪生物学特性

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差速粘附方法分选表皮干细胞及其评价

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上海第二医科大学学报 2004年第4期24卷 288-292页

作者：张杰刘伟丛笑倩徐展远殷德民曹颖崔磊曹谊林上海第二医科大学第九人民医院整复外科上海市组织工程研究与开发中心上海200011 上海市儿童医院泌尿外科

目的评价细胞外基质差速粘附法在分选表皮干细胞中的作用。方法人角质形成细胞接种在Ⅳ 型胶原涂被的培养皿上进行粘附试验。粘附细胞为实验组,未粘附细胞及未分选的细胞分别为对照组1和对照组2。三组细胞分别进行克隆形成率测定、细... 详细信息

目的评价细胞外基质差速粘附法在分选表皮干细胞中的作用。方法人角质形成细胞接种在Ⅳ 型胶原涂被的培养皿上进行粘附试验。粘附细胞为实验组,未粘附细胞及未分选的细胞分别为对照组1和对照组2。三组细胞分别进行克隆形成率测定、细胞周期测定和细胞超微结构观察;应用免疫细胞化学、免疫荧光和流式细胞仪检测β1整合素、细胞角蛋白K19、外皮蛋白(Involucrin)等标记物的表达。结果与对照组1相比,实验组细胞较小,细胞表面的微绒毛较长而密。实验组细胞克隆形成率明显高于对照组1(P<0.05)。β1整合素、K19、Involucrin在不同组别和不同代次的细胞间表达有显著差别。细胞周期分析显示,实验组细胞86.9％处于G0/G1,8.8％在S期。对照组1和对照组2的细胞处于G0/G1期分别为74％和79.5％,处于S期分别为19.2％和12.3％。结论细胞外基质差速粘附法可用于分选表皮干细胞。但要达到较高纯度,还需辅以其它手段。

关键词：表皮干细胞粘附试验细胞外基质克隆细胞周期流式细胞仪

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