检索结果-内蒙古大学图书馆

中华外科杂志 2002年第1期40卷 24-26,T001页

作者：曹谊林蔡霞崔磊商庆新刘伟关文祥上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科上海第二医科大学组织工程研究重点实验室 210011

目的　为制成含表皮细胞与成纤维细胞的双层皮肤替代物 ,直接用于修复全层皮肤缺损。方法　选用长枫杂交仔猪 10只 ,酶消化法获取皮肤表皮细胞与成纤维细胞 ,将原代培养处于对数生长期的表皮细胞、成纤维细胞分别与 3 0 %氧化异丙烯F 1... 详细信息

目的　为制成含表皮细胞与成纤维细胞的双层皮肤替代物 ,直接用于修复全层皮肤缺损。方法　选用长枫杂交仔猪 10只 ,酶消化法获取皮肤表皮细胞与成纤维细胞 ,将原代培养处于对数生长期的表皮细胞、成纤维细胞分别与 3 0 %氧化异丙烯F 12 7混匀成细胞悬液后 ,种植聚羟基乙酸(polyglycolicacid ,PGA)形成细胞生物材料复合物 ,用于修复自体动物背部直径 4cm全层皮肤缺损 ,以单纯生物材料 (PGA +氧化异丙烯 )充填的创面作为对照组。修复术后 1,2 ,4 ,8周取材 ,通过组织学和基底膜特殊染色等方法对新生组织进行评价。结果　第 1周新生组织即出现表皮与真皮 2层结构 ,特殊染色观察到连续的基底膜。第 2周表皮与真皮均较前增厚。修复后第 8周组织工程化皮肤的形态结构均与正常皮肤相似。对照组则无皮肤形成 ,仅见大量肉芽组织。结论　应用组织工程技术 ,以PGA +氧化异丙烯为表皮细胞。

关键词：人工皮肤皮肤移植成纤维细胞动物实验

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小鼠FasL基因的克隆和在软骨细胞中表达

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细胞与分子免疫学杂志 2003年第4期19卷 326-328,337页

作者：胡洪亮曹谊林刘阳刘伟崔磊商庆新上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科上海市组织工程重点实验室上海200011

目的 :获得小鼠FasL(mFasL)的cDNA克隆 ,通过逆转录病毒表达系统 pLNCX2 在软骨细胞中进行表达 ,并分析其功能。方法 :应用RT PCR和T A克隆技术 ,从激活的小鼠脾脏淋巴细胞总RNA中 ,扩增mFasLcDNA并克隆到T载体中 ,再亚克隆到 pLNCX2 ... 详细信息

目的 :获得小鼠FasL(mFasL)的cDNA克隆 ,通过逆转录病毒表达系统 pLNCX2 在软骨细胞中进行表达 ,并分析其功能。方法 :应用RT PCR和T A克隆技术 ,从激活的小鼠脾脏淋巴细胞总RNA中 ,扩增mFasLcDNA并克隆到T载体中 ,再亚克隆到 pLNCX2 中。转染软骨细胞后 ,以流式细胞仪检测mFasL蛋白的表达 ,以单向混合淋巴细胞反应鉴定其活性。结果 :成功地克隆了 0 .85 5kb的mFasLcDNA ,并经测序确证。通过 pLNCX2 转染软骨细胞 ,转染率为 6 0 .6 4 %。流式细胞仪检测到FasL蛋白的表达 ,并能显著抑制同种异体的单向混合淋巴细胞反应 ,刺激指数下调到未转染软骨细胞的11.71%。结论 :克隆到的mFasL基因 ,并能通过 pLNCX2 有效表达。

关键词：逆转录病毒 FasL RT—PCR 软骨细胞 T—A克隆

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骨形成蛋白-7基因逆转录病毒载体的构建及其表达

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细胞与分子免疫学杂志 2003年第4期19卷 329-331页

作者：祝联刘伟陈兵刘德莉刘方军吴娟娟陆俊弘曹谊林上海第二医科大学第九人民医院整复外科上海市组织工程重点实验室上海200011

目的 :实现骨形成蛋白 7(BMP 7)基因在骨髓基质干细胞中的稳定、长久表达。方法 :构建重组BMP 7逆转录病毒表达载体。通过PT6 7包装细胞克隆 ,嘌呤霉素筛选、扩增 ,获得含BMP 7基因的逆转录病毒液 ,直接感染骨髓基质干细胞 ,用免疫组化... 详细信息

目的 :实现骨形成蛋白 7(BMP 7)基因在骨髓基质干细胞中的稳定、长久表达。方法 :构建重组BMP 7逆转录病毒表达载体。通过PT6 7包装细胞克隆 ,嘌呤霉素筛选、扩增 ,获得含BMP 7基因的逆转录病毒液 ,直接感染骨髓基质干细胞 ,用免疫组化方法检测BMP 7的表达。结果 :成功地构建了重组BMP 7逆转录病毒表达载体 ,并可在骨髓基质干细胞中表达BMP 7。结论 :重组逆转录病毒表达载体转染的靶细胞可表达BMP 7,为组织工程中骨和软骨种子细胞的研究奠定了基础。

关键词：重组逆转录病毒载体骨形成蛋白—7 组织工程骨髓基质干细胞

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永生化软骨细胞的生物学特性

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实验生物学报 2003年第6期36卷 435-444页

作者：李卿刘伟陈瑾君陆峻泓刘德莉曹谊林上海市组织工程重点实验室上海200011 上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科

本实验为建立永生化的猪耳软骨细胞系并探讨它的生物学特性,以包含人端粒酶逆转录酶催化亚基(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因的逆转录病毒载体(pBABE-hTERT)转染至正常猪耳软骨细胞中。经筛选、挑取克隆,得永生化... 详细信息

本实验为建立永生化的猪耳软骨细胞系并探讨它的生物学特性,以包含人端粒酶逆转录酶催化亚基(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因的逆转录病毒载体(pBABE-hTERT)转染至正常猪耳软骨细胞中。经筛选、挑取克隆,得永生化软骨细胞系(TL1),在体外已连续培养10个月。RT-PCR和PCR-ELISA法测得其有高水平的端粒酶稳定表达。通过生长曲线、HE染色、流式细胞仪分析,以及裸鼠成瘤实验,表明它的细胞增殖能力增加,凋亡率下降并维持在体外培养早期细胞的水平,且细胞无恶变迹象。对软骨特异性分子的RT-PCR、Western杂交和免疫组化的结果分析,发现TL1中有SOX9的表达;无结构完整的aggrecan表达;有低水平的Ⅱ型胶原表达;Ⅰ型胶原的表达随细胞的表型改变而改变。综上所述,通过外源性hTERT的稳定表达,建立了永生化的猪耳软骨细胞系;但是它在单层培养的状态下,软骨细胞特异性的基因表达逐步发生改变,导致其部分丧失软骨细胞的正常表型。

关键词：软骨细胞永生化分化生物学特性人端粒酶逆转录酶催化亚基

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不同生长阶段软骨细胞构建同种异体软骨的研究

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中华实验外科杂志 2004年第1期21卷 22-23页

作者：王健夏万尧崔磊曹谊林上海组织工程重点实验室上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科 200011

目的　研究不同生长阶段山羊软骨细胞 ,形成同种异体组织工程化软骨组织的能力 ,为软骨组织工程寻找种子细胞来源。方法　取胎羊 (孕 10 0d)、新生羊 (10d龄 )及成年羊 (9个月龄 )各大关节软骨组织。酶消化法获取软骨细胞与生物材料Plur... 详细信息

目的　研究不同生长阶段山羊软骨细胞 ,形成同种异体组织工程化软骨组织的能力 ,为软骨组织工程寻找种子细胞来源。方法　取胎羊 (孕 10 0d)、新生羊 (10d龄 )及成年羊 (9个月龄 )各大关节软骨组织。酶消化法获取软骨细胞与生物材料Pluronic形成复合物 ,接种于异体羊 (9个月龄 )腹部皮下。按不同时间段取材。所取标本进行大体观察、称重 ,并作组织学检测 ,对新生的软骨组织进行评价。结果　各组接种处均有组织工程化软骨组织形成。胚胎组新生软骨的重量最大 (81.8± 17.9)mg及存留时间最长 (>12个月 )。结论　胚胎软骨细胞可以作为组织工程化软骨的种子细胞来源。

关键词：软骨细胞构建同种异体软骨同种异体移植组织工程聚环氧乙烯

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GFP基因转染对骨髓基质细胞体内向软骨细胞分化的示踪作用

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细胞与分子免疫学杂志 2004年第1期20卷 27-30页

作者：周广东王晓云刘德莉崔磊刘伟曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整形外科上海市组织工程重点实验室上海200011

目的 :实现绿色荧光蛋白 (greenfluorescentprotein ,GFP)报告基因在骨髓基质细胞 (BMSC)中的高效、稳定、持久表达 ,直接示踪BMSC在关节软骨缺损内的分布及分化。方法 :构建重组逆转录病毒表达载体RV GFP ,通过PT6 7包装细胞克隆、G4 1... 详细信息

目的 :实现绿色荧光蛋白 (greenfluorescentprotein ,GFP)报告基因在骨髓基质细胞 (BMSC)中的高效、稳定、持久表达 ,直接示踪BMSC在关节软骨缺损内的分布及分化。方法 :构建重组逆转录病毒表达载体RV GFP ,通过PT6 7包装细胞克隆、G4 18筛选及扩增 ,获得大量含GFP基因的假病毒液 ,并直接转染BMSC。将含有GFP基因转染标记的BMSC与生物可降解材料复合后 ,植入猪自体关节软骨缺损处 ,7个月后共聚焦显微镜检测修复组织中GFP标记的BMSC的分布及分化。结果 :经双酶切鉴定证实重组逆转录病毒表达载体RV GFP构建成功 ,转染PT6 7细胞后可在荧光激发波长下 ,发出明亮的绿色荧光 ,转染率达 2 0 %～ 5 0 % ,经G4 18筛选后可达 10 0 %。筛选、扩增后 ,PT6 7细胞的上清培养液可成功地转染BMSC ,筛选后能稳定、持久、高效表达GFP。将标记的BMSC植入关节软骨缺损 7个月后 ,修复组织仍能高效表达GFP ,激光共聚焦显微镜下显示 ,多数新生软骨陷窝内有GFP标记的细胞。结论 :构建的重组逆转录病毒GFP载体 ,能持久标记骨髓基质细胞 ,用于细胞动态变化的研究及细胞转归的示踪 ,该方法简便、灵敏、可靠、直观。标记的BMSC可在关节软骨缺损内分化为成熟的软骨细胞。

关键词：重组逆转录病毒载体绿色荧光蛋白骨髓基质细胞软骨形成

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骨髓间质干细胞向软骨细胞表型定向诱导分化的实验研究

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中华整形外科杂志 2002年第1期18卷 12-14页

作者：夏万尧商庆新崔磊徐蓉丁小邦曹谊林上海第二医科大学组织工程研究中心上海市组织工程研究重点实验室上海第二医科大学附属第九人民医院整形外科

目的　研究体外培养的猪骨髓间质干细胞 (BoneMarrowStemCells,MSCs)在特定培养液作用下向软骨细胞表型转化 ,探讨其作为组织工程化软骨的种子细胞的可行性。方法　取成年崇明长枫杂交猪髂骨骨髓 5ml,在低糖DMEM完全培养液培养 2周 ,传... 详细信息

目的　研究体外培养的猪骨髓间质干细胞 (BoneMarrowStemCells,MSCs)在特定培养液作用下向软骨细胞表型转化 ,探讨其作为组织工程化软骨的种子细胞的可行性。方法　取成年崇明长枫杂交猪髂骨骨髓 5ml,在低糖DMEM完全培养液培养 2周 ,传代后以高糖DMEM无血清特定培养液诱导 (含胰岛素 2mg L、转铁蛋白 3mg L、丙酮酸 10 0mg L、地塞米松 10 - 7mol L、TGF β110ng ml) ,在相差显微镜和电镜下进行观察 ,免疫组化检测Ⅱ型胶原分泌 ,原位杂交检测Ⅱ型胶原mRNA表达。结果　细胞形态由成纤维样梭形向多角形、多边形转变 ,透视电镜观察见大量扩张粗面内质网、高尔基体、线粒体。诱导培养后第 7,14dⅡ型胶原免疫组化阳性 ,同时原位杂交检测Ⅱ型胶原mRNA表达呈阳性。结论　MSCs在特定培养液诱导下能向软骨细胞表型转化 ,并能分泌软骨特异性基质 ,有可能成为软骨组织工程较理想的种子细胞来源的应用前景。

关键词：组织工程骨髓间充质干细胞分化软骨细胞表型动物实验

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自体骨髓基质干细胞在齿槽裂骨缺损修复中的应用

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中华整形外科杂志 2006年第6期22卷 409-411页

作者：柴岗张艳胡晓洁王敏刘伟崔磊曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整形外科上海市组织工程研究重点实验室

目的探讨人自体骨髓基质干细胞（human bone marrow stromal cells，hBMSCs）在治疗齿槽裂骨缺损中的可行性。方法2002至2005年，选择齿槽裂骨缺损患者7例（单侧6例，双侧1例），以患者自体骨髓基质干细胞为种子细胞，部分脱钙骨（partl... 详细信息

目的探讨人自体骨髓基质干细胞（human bone marrow stromal cells，hBMSCs）在治疗齿槽裂骨缺损中的可行性。方法2002至2005年，选择齿槽裂骨缺损患者7例（单侧6例，双侧1例），以患者自体骨髓基质干细胞为种子细胞，部分脱钙骨（partly demineralized bone matrix，pDBM）为支架材料构建组织工程骨，治疗齿槽裂骨缺损。从患者髂前上棘穿刺取骨髓，密度梯度离心法分离hBMSCs，经体外成骨诱导和扩增至第3代。将诱导的hBMSCs，复合部分脱钙骨体外培养1周后，手术回植骨缺损区。分别于术后1、3、6、12、24、36个月进行临床外形和三维CT检查随访。结果6例患者头部三维CT检查，结果示术后3个月能形成组织工程化骨，并修复骨组织缺损。术后1～3年的随访表明组织工程骨稳定存在，无明显骨吸收现象，临床治疗效果稳定。1例患者（双侧齿槽裂）植入物外露感染。结论以自体hBMSCs为种子细胞，部分脱钙骨为支架材料，利用组织工程技术可在人体内形成稳定的组织工程化骨组织，并临床修复齿槽裂骨缺损。

关键词：骨髓基质干细胞骨缺损组织工程齿槽裂

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腺病毒载体介导外源性端粒酶在组织工程种子细胞中的表达

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中华实验外科杂志 2004年第1期21卷 15-16页

作者：李卿陆峻泓王丹茹苗春雷王爱丽刘伟曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科上海市组织工程重点实验室 200011

目的　通过腺病毒载体将外源性人端粒酶逆转录酶催化亚基 (hTERT)基因导入组织工程常用种子细胞中 ,探讨其对各细胞生存状况的影响。方法　取第 4代的猪耳软骨细胞、猪骨髓基质干细胞和人皮肤成纤维细胞 ,分别以Adeno hTERT和Adeno lac... 详细信息

目的　通过腺病毒载体将外源性人端粒酶逆转录酶催化亚基 (hTERT)基因导入组织工程常用种子细胞中 ,探讨其对各细胞生存状况的影响。方法　取第 4代的猪耳软骨细胞、猪骨髓基质干细胞和人皮肤成纤维细胞 ,分别以Adeno hTERT和Adeno lacZ进行基因转染。 5d后 ,取各组细胞样品 ,以逆转录聚合酶链式反应 (RT PCR)和PCR 酶联免疫吸附法 (PCR ELISA)分别检测各自的hTERTmRNA表达及其hTERT的活性。各组hTERT转染细胞与对照细胞接种于 96孔板中 ,通过MTT法对细胞的生存和活力状况进行检测。结果　各组细胞经hTERT转染后 ,端粒酶的表达和活性均显著上升 (P <0 .0 1)。四甲基偶氮唑盐 (MTT)氧化反应结果显示hTERT转染的细胞中 ,细胞存活和活力状况显著高于对照组的细胞 (P <0 .0 1)。猪耳软骨细胞经hTERT转染后达到空白对照组细胞的 (12 1.75± 5 .3 7) % ;猪骨髓基质干细胞达 (12 5 .2 2± 2 .78) % ;人皮肤成纤维细胞达 (112 .5 7± 3 .99) %。结论　腺病毒载体介导的外源性hTERT基因在组织工程种子细胞中的表达 ,可以提高其在体外的扩增潜力 ,改善组织工程构建中种子细胞来源不足的情况。

关键词：腺病毒载体介导外源性端粒酶组织工程种子细胞表达基因转染 PCR-ELISA

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胚胎干细胞在转化生长因子-β1诱导下表达vWF、CD34的研究

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中华实验外科杂志 2003年第1期20卷 49-50,I002页

作者：沈干吴春芳丛笑倩刘晓音刘伟曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院整复外科组织工程实验室

目的　探讨胚胎干 (ES)细胞在转化生长因子 β1(TGF β1)诱导条件下的分化表现 ,为组织工程种子细胞来源提供诱导方法。方法　小鼠ES细胞 ,以 1× 10 - 9mol L维甲酸 (RA)和 3μg LTGF β1进行诱导分化。应用逆转录聚合酶链反应 ... 详细信息

目的　探讨胚胎干 (ES)细胞在转化生长因子 β1(TGF β1)诱导条件下的分化表现 ,为组织工程种子细胞来源提供诱导方法。方法　小鼠ES细胞 ,以 1× 10 - 9mol L维甲酸 (RA)和 3μg LTGF β1进行诱导分化。应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)及免疫组织化学验证细胞性质。结果　证实ES细胞经RA和TGF β1的诱导 ,3～ 4d出现圆形前体细胞 ,6d形成管状血管样结构。分化细胞可表达内皮细胞的标志vWF、CD34。结论　ES细胞在特定的条件下可分化为血管内皮细胞 ,有可能为构建组织工程化血管及其他人工血管的内皮化提供种子细胞来源。

关键词：胚胎干细胞转化生长因子-β1 内皮细胞 CD34

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