检索结果-内蒙古大学图书馆

上海第二医科大学学报 2004年第4期24卷 271-274页

作者：翟华玲许锋曹德君魏娴崔磊刘伟曹谊林上海第二医科大学第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室上海200011

目的对几种重要的生长因子在正常人体皮肤、肌腱中的表达差异进行研究。方法体外培养人肌腱细胞和人皮肤成纤维细胞,观察细胞的形态特点;用基因芯片、免疫组化、免疫细胞化学、RT-PCR的方法对肌腱细胞和成纤维细胞的几种生长因子进行... 详细信息

目的对几种重要的生长因子在正常人体皮肤、肌腱中的表达差异进行研究。方法体外培养人肌腱细胞和人皮肤成纤维细胞,观察细胞的形态特点;用基因芯片、免疫组化、免疫细胞化学、RT-PCR的方法对肌腱细胞和成纤维细胞的几种生长因子进行检测及比较。结果所测生长因子中除转化生长因子-βⅡ型受体(TGF-βRⅡ)、类胰岛素生长因子-结合蛋白3(IGF-BP3)外,其余在肌腱细胞和成纤维细胞中的表达均无明显的差异。结论人成纤维细胞与人肌腱细胞的生长因子表达基本相似,通过对皮肤成纤维细胞的某些特性的改造,可以使其成为构建组织工程化肌腱的种子细胞。

关键词：生长因子肌腱细胞皮肤成纤维细胞表达差异组织工程种子细胞

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应用GFP标记技术示踪裸鼠体内组织工程化骨的形成

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上海第二医科大学学报 2004年第4期24卷 235-237,266页

作者：袁捷刘德莉周广东苗春雷崔磊刘伟曹谊林上海第二医科大学第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室上海200011

目的应用绿色荧光蛋白(GFP)标记技术,观察组织工程化骨体内形成过程中种子细胞的变化与转归。方法用GFP重组逆转录病毒载体(GFP-RV)转染犬骨髓基质干细胞(BMSCs),将其接种于β-磷酸三钙(β-TCP),形成细胞一材料复合物,移植于裸鼠皮下... 详细信息

目的应用绿色荧光蛋白(GFP)标记技术,观察组织工程化骨体内形成过程中种子细胞的变化与转归。方法用GFP重组逆转录病毒载体(GFP-RV)转染犬骨髓基质干细胞(BMSCs),将其接种于β-磷酸三钙(β-TCP),形成细胞一材料复合物,移植于裸鼠皮下。术后8周,HE染色观察组织结构,碱性磷酸酶(AKP)染色和骨钙素(OCN)免疫组化检测功能蛋白,激光共聚焦显微镜下对GFP进行示踪观察。结果 8周后,大体可见组织工程化新骨形成,组织学示新生骨小梁围绕材料孔隙生成,AKP染色和OCN免疫组化结果阳性,并可见新生组织内有呈绿色的GFP标记细胞,β-TCP部分降解。结论组织工程化骨组织学结构与松质骨小梁类似。新生组织表达GFP,证实组织工程化骨组织的形成来源于供体细胞。

关键词：绿色荧光蛋白标记技术组织工程骨组织重组逆转录病毒载体 β-磷酸三钙供体细胞

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含GFP基因的逆转录病毒与VSV-G蛋白重组形成高滴度假病毒

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上海第二医科大学学报 2004年第4期24卷 315-318页

作者：陈瑾君刘伟刘德莉陆峻泓李卿崔磊曹谊林上海第二医科大学第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室上海200011

目的通过与疱疹性口腔炎病毒糖蛋白G基因(VSV-G)蛋白重组,提高含绿色荧光蛋白(GFP)基因逆转录病毒的感染效率,并使其经受超速离心以达到进一步浓缩。方法应用GFP-RV质粒转染PT67细胞并用G418筛选出GFP阳性克隆,利用其产生的病毒上清... 详细信息

目的通过与疱疹性口腔炎病毒糖蛋白G基因(VSV-G)蛋白重组,提高含绿色荧光蛋白(GFP)基因逆转录病毒的感染效率,并使其经受超速离心以达到进一步浓缩。方法应用GFP-RV质粒转染PT67细胞并用G418筛选出GFP阳性克隆,利用其产生的病毒上清液再转染GP2-293细胞,在G418筛选的同时,瞬时转染VSV-G基因。收集该GP2-293细胞产生的重组病毒作滴度测定,并通过低温超速离心制成含GFP病毒的浓缩液,再感染NIH3T3细胞,观察GFP在NIH3T3细胞内的表达情况。结果 GFP-RV质粒转染PT67细胞产生的GFP阳性克隆,随着细胞传代过程,GFP的表达逐渐减弱。GP2-293细胞转染VSV-G基因后可产生(7.5±1.4)×105cfu/mL的GFP重组假病毒,将其浓缩液转染NIH3T3细胞,可见GFP在细胞内有较强的表达。结论逆转录病毒与VSV-G共转染GP2-293包装细胞可以形成高滴度的假病毒,由此得到含GFP基因的病毒上清液,其在组织工程中应用范围更广泛。

关键词： GFP基因逆转录病毒假病毒疱疹性口腔炎病毒基因转染克隆组织工程

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同种异体组织工程化软骨组织形成的初步研究

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中华整形外科杂志 2000年第5期16卷 264-266页

作者：夏万尧曹谊林商庆新刘彦春王倬崔磊王健上海市第二医科大学组织工程研究中心 200011 上海市组织工程研究重点实验室 200011 上海第二医科大学附属第九人民医院整形外科 200011

探讨同种异体组织工程化软骨在动物体内形成。方法　取怀孕１００ｄ胚胎羊的关节软骨经体外消化分离软骨细胞，与可吸收生物材料ＰｌｕｒｏｎｉｃＦ１２７混合形成细胞──生物材料复合物，将细胞──生物材料复合物注射到异体羊腹壁皮... 详细信息

探讨同种异体组织工程化软骨在动物体内形成。方法　取怀孕１００ｄ胚胎羊的关节软骨经体外消化分离软骨细胞，与可吸收生物材料ＰｌｕｒｏｎｉｃＦ１２７混合形成细胞──生物材料复合物，将细胞──生物材料复合物注射到异体羊腹壁皮下，每隔２周取材，连续半年对所取标本进行大体观察、称重，并作ＨＥ、ＳａｆｒａｎｉｎＯ、Ｍａｓｓｏｎ’ｓｔｒｉｃｈｒｏｍｅ染色，对再生的软骨组织进行评价。结果在同种异体动物体内能形成软骨组织，所形成软骨组织的氨基多糖和胶原分布与正常羊关节软骨组织有相似的组织学特性。组织学结果可见第２，４周的软骨组织有一定程度的免疫排斥反应和炎症细胞浸润。第６周后软骨组织基本成熟，免疫反应减轻，但未消退。结论　应用组织工程技术可在同种异体动物体内再生软骨组织，再生的组织周围存在一定程度的免疫反应，随接种时间的延长逐渐减弱。

关键词：软骨细胞软骨组织同种异体组织工程化复合物

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以羊膜为载体培养角膜内皮细胞的实验研究

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眼科研究 2003年第2期21卷 147-149页

作者：傅瑶范先群刘伟商庆新曹谊林上海第二医科大学附属第九人民医院上海市组织工程研究重点实验室 200011

目的　以羊膜为载体培养角膜内皮细胞并形成单层组织 ,为以后内皮细胞层移植提供方法和材料来源。方法　胰酶消化去除羊膜上皮细胞 ,保留基底膜作为载体 ,种植兔角膜内皮细胞 ,体外培养形成单层内皮层 ,并进行形态、组织学、超微结构观... 详细信息

目的　以羊膜为载体培养角膜内皮细胞并形成单层组织 ,为以后内皮细胞层移植提供方法和材料来源。方法　胰酶消化去除羊膜上皮细胞 ,保留基底膜作为载体 ,种植兔角膜内皮细胞 ,体外培养形成单层内皮层 ,并进行形态、组织学、超微结构观察。结果　角膜内皮细胞在羊膜上黏附生长并增殖 ,体外培养 6～ 7d即融合成单层 ,其形态及生长密度优于单纯培养皿上培养的内皮细胞。复合角膜内皮组织由羊膜基底膜和单层扁平内皮细胞组成 ,与生理状态下的角膜内皮组织相近。结论　以羊膜为载体培养角膜内皮细胞可形成单层细胞层。

关键词：角膜内皮细胞羊膜体外培养

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角膜基质细胞-PGA生物支架复合物体外培养研究

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眼科研究 2001年第4期19卷 308-311页

作者：胡晓洁商庆新曹谊林上海市第二医科大学附属第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室 200011

目的　　研究角膜基质细胞与ＰＧＡ亲和力，为组织工程技术构建角膜提供重要的理论依据和参数。方法体外分离获得角膜基质细胞，经培养扩增后接种于ＰＧＡ，并对细胞－生物材料复合物进行体外培养，观察细胞生长代谢。应用ＭＴＴ技术测... 详细信息

目的　　研究角膜基质细胞与ＰＧＡ亲和力，为组织工程技术构建角膜提供重要的理论依据和参数。方法体外分离获得角膜基质细胞，经培养扩增后接种于ＰＧＡ，并对细胞－生物材料复合物进行体外培养，观察细胞生长代谢。应用ＭＴＴ技术测定角膜基质细胞与ＰＧＡ的黏附率。结果　角膜基质细胞能够在ＰＧＡ中黏附、伸展和分泌基质，ＭＴＴ测得细胞黏附率为７１．４０％。结论　　角膜基质细胞与ＰＧＡ具有较好的亲和力，ＰＧＡ可以作为构建角膜的生物材料。

关键词：组织工程角膜基质细胞生物支架聚羟基乙酸角膜疾病实验研究

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壳聚糖作为组织工程软骨支架的实验研究

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中华显微外科杂志 2002年第1期25卷 34-37页

作者：夏万尧曹谊林商庆新刘彦春钟伟 200011 上海第二医科大学组织工程研究中心上海市组织工程研究重点实验室上海第二医科大学附属第九人民医院整形外科复旦大学高分子科学系

目的　探索壳聚糖作为组织工程技术中软骨细胞培养支架的可行性。　方法　消化分离猪耳郭软骨细胞 ,接种于自制壳聚糖、壳聚糖胶原复合多孔支架上培养 ,从光镜和扫描电镜观察其亲水性和对细胞吸附力 ,MTT检测软骨细胞在壳聚糖、壳聚... 详细信息

目的　探索壳聚糖作为组织工程技术中软骨细胞培养支架的可行性。　方法　消化分离猪耳郭软骨细胞 ,接种于自制壳聚糖、壳聚糖胶原复合多孔支架上培养 ,从光镜和扫描电镜观察其亲水性和对细胞吸附力 ,MTT检测软骨细胞在壳聚糖、壳聚糖胶原上的黏附率及壳聚糖、壳聚糖胶原复合多孔支架对细胞的增殖、功能的影响。　结果　软骨细胞能够在壳聚糖、壳聚糖胶原支架上黏附、伸展、增殖和发挥正常功能 ,MTT测得细胞黏附率分别为 81 2 5 %和 87 5 0 % ,MTT测得软骨细胞在壳聚糖胶原支架中的增殖能力较强。　结论　壳聚糖、壳聚糖胶原复合多孔支架与软骨细胞具有较好的相容性 ,壳聚糖胶原复合多孔支架更适合作为软骨组织工程中的细胞培养支架。

关键词：组织工程软骨细胞壳聚糖支架细胞培养

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小鼠胚胎干细胞定向诱导分化为软骨样细胞的初步研究

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上海第二医科大学学报 2004年第4期24卷 250-253,274页

作者：王晓云丛笑倩刘晓音吴春芳吴娟娟殷德民刘伟曹谊林上海市第二医科大学第九人民医院整复外科上海市组织工程研究重点实验室上海200011

目的全反式维生素A酸(RA)联合转化生长因子-β1(TGF-β1)及骨形态发生蛋白-2(BMP2)等多种因子定向诱导小鼠胚胎干细胞(ESC)分化,探索这几种细胞因子对ESC的成软骨定向诱导分化作用。方法小鼠ESC在小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)饲养层上培... 详细信息

目的全反式维生素A酸(RA)联合转化生长因子-β1(TGF-β1)及骨形态发生蛋白-2(BMP2)等多种因子定向诱导小鼠胚胎干细胞(ESC)分化,探索这几种细胞因子对ESC的成软骨定向诱导分化作用。方法小鼠ESC在小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)饲养层上培养扩增,在1×109mol/L全反式RA条件下制备拟胚体(EB),贴壁后联合应用TGF-β1及BMP2诱导分化,经形态学、免疫细胞化学和RT-PCR检测细胞性质。结果 ESC在悬浮培养下,经RA初步诱导后给予TGF-β1及BMP2等因子继续诱导,贴壁后EB周边可爬出多角形分化细胞,诱导分化细胞和EB表达Ⅱ型胶原和软骨发生早期特异性转录因子Scleraxis。结论在RA预诱导EB分化后,TGF-β1和BMP2等因子可定向诱导小鼠ESC表达软骨特异性相关基因和蛋白,为胚胎干细胞成为软骨组织工程种子细胞提供了可能。

关键词：小鼠胚胎干细胞定向诱导细胞分化维生素A酸转化生长因子β1 骨形态发生蛋白-2 软骨组织工程

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内皮型一氧化氮合酶腺病毒表达载体的构建与鉴定

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上海第二医科大学学报 2004年第9期24卷 717-719页

作者：陆平蔡文玮盛净刘德莉夏万尧刘伟上海第二医科大学第九人民医院老年病科上海200011 上海市组织工程研究重点实验室整复外科

目的构建重组内皮型一氧化氮合酶(eNOS)腺病毒表达系统载体。方法 eNOS的cDNA插入pcDNA3.1(-)中,进行DNA测序、酶切鉴定;插入片段用Xbal和AflⅡ双酶切后连接到pshuttle中,并予酶切鉴定;用P1-sce Ⅰ和Ⅰ-ceu Ⅰ双酶切下pshuttle中eNOS的... 详细信息

目的构建重组内皮型一氧化氮合酶(eNOS)腺病毒表达系统载体。方法 eNOS的cDNA插入pcDNA3.1(-)中,进行DNA测序、酶切鉴定;插入片段用Xbal和AflⅡ双酶切后连接到pshuttle中,并予酶切鉴定;用P1-sce Ⅰ和Ⅰ-ceu Ⅰ双酶切下pshuttle中eNOS的cDNA插入腺病毒载体,通过PCR鉴定。结果正确构建重组eNOS腺病毒表达系统,并被目的基因的PCR鉴定证实。结论重组腺病毒表达载体构建正确,为其在预防经皮腔内动脉成形术术后再狭窄基因转染奠定基础。

关键词：腺病毒 NOS 内皮型一氧化氮合酶鉴定动脉成形术腔内 PCR 表达系统酶切表达载体

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人多潜能胚胎生殖细胞的分离和培养(简报)

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实验生物学报 2002年第2期35卷 142-146页

作者：李晓红丛笑倩汪铮吴春芳曹谊林上海第二医科大学第九人民医院整形外科上海市组织工程重点实验室上海200011 北京大学第一医院北京100034

多潜能胚胎性干细胞来源有两条途经,从植入前的早期胚胎内细胞团(inner cell mass,ICM)分离出来的称胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES);从原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)分离得到的称胚胎生殖细胞(embryonic germ cells,... 详细信息

多潜能胚胎性干细胞来源有两条途经,从植入前的早期胚胎内细胞团(inner cell mass,ICM)分离出来的称胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES);从原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)分离得到的称胚胎生殖细胞(embryonic germ cells,EG)。这两种干细胞在小鼠嵌合体实验中,都证明具有参与生殖系传递的能力。

关键词：人EG细胞多潜能胚胎生殖细胞分离培养

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