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第13届全国实验血液学会议

作者：施小凤黄建松周玉兰崔雄鹰刘萍陶岚岚奚晓东上海交通大学医学院附属瑞金医院上海血液学研究所医学基因组学国家重点实验室

目的:用带有突变整合素β3基因和GFP基因的逆转录病毒MSCV MigR1感染小鼠造血干细胞并移植到野生型小鼠体内,建立血小板整合素β3转基因小鼠模型,从而在体内研究整合素β3对血小板功能的调控作用。造血干细胞移植效率的高低对该模型的... 详细信息

目的:用带有突变整合素β3基因和GFP基因的逆转录病毒MSCV MigR1感染小鼠造血干细胞并移植到野生型小鼠体内,建立血小板整合素β3转基因小鼠模型,从而在体内研究整合素β3对血小板功能的调控作用。造血干细胞移植效率的高低对该模型的建立至关重要,通过检测所带标记基因只能反映转基因效率但不能反映移植效率,而通过FISH及染色体形态学方法检测Y染色体来评估移植嵌合率,既昂贵又繁琐,且常需处死小鼠才能获得足够多的有核细胞。本研究拟建立一种简洁、迅速、经济、敏感、微量、特异的检测移植嵌合率的新方法。

关键词：实时定量骨髓移植 PCR 模型移植

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急性白血病发病的分子基础和分子分型

急性白血病发病的分子基础和分子分型

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第13届全国实验血液学会议

作者：陈赛娟颜晓菁沈杨糜坚青陈冰上海交通大学医学院附属瑞金医院上海血液学研究所医学基因组学国家重点实验室

急性髓细胞白血病是一组临床表现及预后转归差异很大的疾病,尽管细胞遗传学是其独立的预后标志,但约有半数以上的急性髓细胞白血病缺乏特征性的染色体变化。上海血液学研究所以正常核型为主的AML-M5型白血病为例应用全外显子组捕获和第... 详细信息

急性髓细胞白血病是一组临床表现及预后转归差异很大的疾病,尽管细胞遗传学是其独立的预后标志,但约有半数以上的急性髓细胞白血病缺乏特征性的染色体变化。上海血液学研究所以正常核型为主的AML-M5型白血病为例应用全外显子组捕获和第二代测序技术进行全基因组基因突变检测,发现DNA甲基转移酶3A的编码基因--DNMT3A在AML-M5型白血病中突变率高达20.5%,其中累及第882位精氨酸密码子的突变频率达18.8%。进一步蛋白质结构生物学分析、酶活性

关键词：急性白血病分子分型分子基础

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整合素β3的RGT序列在肿瘤进展中的作用

整合素β3的RGT序列在肿瘤进展中的作用

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第13届全国实验血液学会议

作者：周玉兰黄建松施小凤刘萍奚晓东上海交通大学医学院附属瑞金医院上海血液学研究所医学基因组学国家重点实验室

目的:整合素αvβ3广泛表达于各种正常细胞和肿瘤细胞,而其中的β3亚单位胞浆段与Src激酶的相互作用与肿瘤细胞的增殖、浸润迁移、凋亡等重要的病理过程相关。本研究目的是明确在与整合素αv复合的模式下,整合素β3亚单位胞浆段序列与Sr... 详细信息

目的:整合素αvβ3广泛表达于各种正常细胞和肿瘤细胞,而其中的β3亚单位胞浆段与Src激酶的相互作用与肿瘤细胞的增殖、浸润迁移、凋亡等重要的病理过程相关。本研究目的是明确在与整合素αv复合的模式下,整合素β3亚单位胞浆段序列与Src激酶相互作用的分子机制,并探讨具有膜穿透性的模拟整合素β3亚单位胞浆段尾段3个氨基酸的RGT寡肽对β3亚单位胞浆段与Src相互作用的影响,从而为寻找干扰肿瘤进展的分子靶点提供新策略,为肿瘤疾病的治疗带来新的概念。方法:利用CHO细胞模型,构建共表达整合素αv与整合素β3及其F754、T758、Y759位截短体的稳定细胞株,并检测各细胞株在固相化相应配体上的粘附、伸展功能,以及运用诱导迁移的方法观察各细胞

关键词：整合素氨基酸截短体肿瘤进展稳定细胞株 RGT

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以TF启动子上特定片段为靶点的诱骗寡核苷酸对NB4中TF表达的抑制作用

以TF启动子上特定片段为靶点的诱骗寡核苷酸对NB4中TF表达的抑制...

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第13届全国实验血液学会议

作者：陈伟琴董雷鸣奚晓东上海交通大学医学院附属瑞金医院上海血液学研究所医学基因组学国家重点实验室

目的:已有研究表明在急性单核细胞白血病细胞株(U937-PR9)中,PML/RARα融合蛋白与组织因子(TF)启动子上具有转录活性的(-247～-230)片段间接结合诱导TF表达调控;本文为探讨在急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株NB4中,该融合蛋白对TF是否... 详细信息

目的:已有研究表明在急性单核细胞白血病细胞株(U937-PR9)中,PML/RARα融合蛋白与组织因子(TF)启动子上具有转录活性的(-247～-230)片段间接结合诱导TF表达调控;本文为探讨在急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株NB4中,该融合蛋白对TF是否也存在相同的调控机制,研究针对TF启动子上(-247～-230)片段的诱骗寡核苷酸(decoy oligodeoxynucleoddes)对NB4中TF表达是否存在竞争性抑制作用。

关键词：寡核苷酸抑制作用急性早幼粒细胞白血病启动子 NB4

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黄芩苷诱导Burkitt淋巴瘤细胞凋亡的初步研究

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内科理论与实践 2011年第1期6卷 52-55页

作者：肖丹朱伟嵘赵维莅上海交通大学医学院附属瑞金医院血液科医学基因组国家重点实验室上海血液学研究所上海200025 上海交通大学医学院附属瑞金医院中医科上海200025

目的:探讨黄芩苷(baicalin)对Burkitt淋巴瘤细胞系Daudi细胞凋亡的诱导作用。方法:用3-(4,5-二甲基噻唑)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法测定细胞生长抑制率;细胞涂片观察细胞形态学改变;流式细胞术检测细胞凋亡变化;Westernblot法检测凋... 详细信息

目的:探讨黄芩苷(baicalin)对Burkitt淋巴瘤细胞系Daudi细胞凋亡的诱导作用。方法:用3-(4,5-二甲基噻唑)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法测定细胞生长抑制率;细胞涂片观察细胞形态学改变;流式细胞术检测细胞凋亡变化;Westernblot法检测凋亡相关蛋白天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase-3)、caspase-9。结果:黄芩苷对Daudi细胞作用72h的半数抑制浓度(IC50)为(10.1±0.5)μg/mL,对其生长抑制作用呈剂量依赖性。与对照组相比,黄芩苷组细胞呈现明显的凋亡状态。48h流式检测细胞凋亡率40μg/mL药物组为61.5%±6.3%,20μg/mL药物组为44.2%±4.7%,明显高于对照组(8.2%±0.9%)(P<0.01)。黄芩苷作用Daudi细胞24、36h后,caspase家族的蛋白前体(procaspase)-3、9表达均下降,而激活的活性片段caspase-3则表达上调,且呈时间依赖性。结论:黄芩苷可有效抑制Burkitt淋巴瘤细胞生长,诱导细胞凋亡,上述凋亡蛋白可能参与了黄芩苷诱导Daudi细胞凋亡的过程。

关键词：黄芩苷 Burkitt淋巴瘤细胞凋亡

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1185例急性髓细胞白血病基因突变和预后影响研究

1185例急性髓细胞白血病基因突变和预后影响研究

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第13届全国实验血液学会议

作者：沈杨朱勇梅樊星施静艺王琴荣颜晓菁顾朝晖王彦艳陈冰姜春雷严晗陈菲菲陈海敏陈竺金洁陈赛娟上海交通大学医学院附属瑞金医院上海血液学研究所医学基因组学国家重点实验室上海血液学研究所浙江大学医学院附属第一医院血液科血液学研究所

目的:评佶急性髓细胞白血病(AML)患者基因突变对预后价值的影响,并尝试使用基因突变标志对AML进行分层。方法:共入选1185例AML患者,患者可分4组:组Ⅰ为核型大致正常的患者(605例);组Ⅱ为核心结合因子家族(CBF)白血病患者(176例);组Ⅲ为... 详细信息

目的:评佶急性髓细胞白血病(AML)患者基因突变对预后价值的影响,并尝试使用基因突变标志对AML进行分层。方法:共入选1185例AML患者,患者可分4组:组Ⅰ为核型大致正常的患者(605例);组Ⅱ为核心结合因子家族(CBF)白血病患者(176例);组Ⅲ为急性早幼粒细胞白血病患者(387例);组Ⅳ为具有其他少见细胞遗传学预后标志的患者(16例),其中组Ⅰ进行基因异常的临床相关性和预后分析。检测染色体易位所

关键词：急性髓细胞白血病基因突变 AML 预后影响

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凝血因子ⅨArg327Ile突变蛋白结构与功能研究

凝血因子ⅨArg327Ile突变蛋白结构与功能研究

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中华医学会血液学分会第十三届全国血栓与止血学术会议暨“血栓栓塞性疾病（血栓与止血）基础与临床研究进展”

作者：周佳维戴菁郁婷婷陆晔玲丁秋兰王学锋王鸿利医学基因组学国家重点实验室上海交通大学医学院附属瑞金医院上海血液学研究所上海交通大学医学院附属瑞金医院输血科

目的:探讨F9基因Arg327Ile(R327I)突变导致血友病B的分子发病机制研究。方法:定点突变法构建F9基因R327I突变的表达质粒。瞬时转染HEK293细胞,一期法检测细胞上清液中凝血因子Ⅸ活性(FⅨ:C),ELISA法检测细胞上清液和裂解中FⅨ抗原(FⅨ:A... 详细信息

目的:探讨F9基因Arg327Ile(R327I)突变导致血友病B的分子发病机制研究。方法:定点突变法构建F9基因R327I突变的表达质粒。瞬时转染HEK293细胞,一期法检测细胞上清液中凝血因子Ⅸ活性(FⅨ:C),ELISA法检测细胞上清液和裂解中FⅨ抗原(FⅨ:Ag),Western blotting检测R327I突变蛋白的分子量及表达量。潮霉素筛选稳定表达细胞株,ELISA法筛选高效表达FⅨ重组蛋白细胞株,采用快流速Q琼脂糖凝胶和离子交换两步法分离纯化重组蛋白。ELISA和SDS-PAGE电泳分别检测重组蛋白含量和纯度。FⅦa/TF/Ca2+和FⅪa/Ca2+活化野生型及R327I和R327A突变FⅨ蛋白,用Weatern blot法分别检测不同时间内活化生成的FⅨa。野生型及两种突变FⅨa在不同FⅧa浓度下活化激活FⅩ,以此计算野

关键词：突变蛋白 Arg327Ile 重组蛋白野生型结构与功能

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凝血因子ⅧSer470Asn突变相关抑制物灭活凝血因子Ⅷ分子机制的研究

凝血因子ⅧSer470Asn突变相关抑制物灭活凝血因子Ⅷ分子机制的研究

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中华医学会血液学分会第十三届全国血栓与止血学术会议暨“血栓栓塞性疾病（血栓与止血）基础与临床研究进展”

作者：夏燕周佳维戴菁陆晔玲丁秋兰王学锋王鸿利医学基因组学国家重点实验室上海交通大学医学院附属瑞金医院上海血液学研究所上海交通大学医学院附属瑞金医院输血科

目的:研究1例抑制物滴度为216.7BU/ml的血友病A患者的抑制物灭活FⅧ的分子机制。方法:硫酸铵及亲和柱两步法纯化患者血浆中的抗FⅧ抑制物。构建FⅧSer470Asn突变体蛋白(B区缺失型)和FⅧ片段(重链、轻链、A1、A2、A3、C1、C2)表达质粒,转... 详细信息

目的:研究1例抑制物滴度为216.7BU/ml的血友病A患者的抑制物灭活FⅧ的分子机制。方法:硫酸铵及亲和柱两步法纯化患者血浆中的抗FⅧ抑制物。构建FⅧSer470Asn突变体蛋白(B区缺失型)和FⅧ片段(重链、轻链、A1、A2、A3、C1、C2)表达质粒,转染HEK293细胞,G418抗药性作用后筛选获得稳定表达细胞株,并且经亲和纯化得到所需蛋白或多肽链。FⅧ抑制物活性中和试验检测抑制物与FⅧ不同片段的结合。纯化后的患者FⅧ抑制物以标记生物素作为检测抗体,用Western Blotting法检测抑制物与FⅧ不同片段的结合。

关键词：抑制物 Ser470Asn 分子机制

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抗凝血酶Thr98Ile和Ala404Asp突变导致反复静脉血栓发生的分子机制研究

抗凝血酶Thr98Ile和Ala404Asp突变导致反复静脉血栓发生的分子机...

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中华医学会血液学分会第十三届全国血栓与止血学术会议暨“血栓栓塞性疾病（血栓与止血）基础与临床研究进展”

作者：夏燕丁秋兰许冠群张利伟戴菁陆晔玲王学锋奚晓东王鸿利医学基因组学国家重点实验室上海交通大学医学院附属瑞金医院上海血液学研究所上海交通大学医学院附属瑞金医院输血科

目的:对两例□型抗凝血酶(AT)缺陷症家系进行表型诊断、基因分析,并探讨其静脉血栓发生的分子发病机制。方法:常规筛查凝血功能,凝血酶生成试验评估高凝状态。ELISA法及稀释的蝰蛇毒法分别检测抗心磷脂抗体(ACA)及狼疮抗凝物质(LA)。发... 详细信息

目的:对两例□型抗凝血酶(AT)缺陷症家系进行表型诊断、基因分析,并探讨其静脉血栓发生的分子发病机制。方法:常规筛查凝血功能,凝血酶生成试验评估高凝状态。ELISA法及稀释的蝰蛇毒法分别检测抗心磷脂抗体(ACA)及狼疮抗凝物质(LA)。发色底物法或凝固法检测蛋白C、蛋白S和抗凝血酶活性(PC:A,PS:A及AT:A),免疫比浊法检测抗凝血酶抗原(AT:Ag)。Westernblot分析血浆中AT的含量及分子量。PCR法扩增AT基因的全部外显子及侧翼序列,DNA直接

关键词：抗凝血酶静脉血栓先证者 Ala404Asp Thr98Ile 分子机制

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4例遗传性凝血因子Ⅻ缺陷症分子发病机制研究

4例遗传性凝血因子Ⅻ缺陷症分子发病机制研究

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中华医学会血液学分会第十三届全国血栓与止血学术会议暨“血栓栓塞性疾病（血栓与止血）基础与临床研究进展”

作者：夏燕戴菁陆晔玲丁秋兰王学锋王鸿利医学基因组学国家重点实验室上海交通大学医学院附属瑞金医院上海血液学研究所上海交通大学医学院附属瑞金医院输血科

目的:对4例遗传性凝血因子Ⅻ(FⅫ)缺陷症患者进行临床表型及基因诊断,并进行分子发病机制研究。方法:常规检测活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、纤维蛋白原(Fg)、凝血酶时间(TT)筛查凝血功能。凝固法及ELISA法分别检测先... 详细信息

目的:对4例遗传性凝血因子Ⅻ(FⅫ)缺陷症患者进行临床表型及基因诊断,并进行分子发病机制研究。方法:常规检测活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、纤维蛋白原(Fg)、凝血酶时间(TT)筛查凝血功能。凝固法及ELISA法分别检测先证者血浆F□促凝活性(FⅫ:C)和抗原含量(FⅫ:Ag)。直接测序法进行基因序列分析。针对新的基因突变,在100例正常人

关键词：先证者缺陷症分子发病机制

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