检索结果-内蒙古大学图书馆

纤维蛋白原α链剪切位点IVS2+1G>C突变导致的遗传性低纤维蛋白原血症

内科理论与实践 2008年第2期3卷 118-122页

作者：陈华云杨芳许冠群张利伟戴菁丁秋兰奚晓东王学锋王鸿利上海交通大学医学院附属瑞金医院临床输血科上海200025 上海交通大学医学院附属瑞金医院上海血液学研究所上海200025 上海交通大学医学院附属瑞金医院基因组学国家重点实验室上海200025

目的:探讨遗传性低纤维蛋白原(Fg)血症的分子发病机制。方法:检测凝血指标以明确诊断;用DNA直接测序法对患者Fg基因FGA、FGB和FGG的所有外显子及其侧翼序列进行测序以寻找基因突变,对有突变的序列反向测序证实;通过逆转录结合巢式PCR扩... 详细信息

目的:探讨遗传性低纤维蛋白原(Fg)血症的分子发病机制。方法:检测凝血指标以明确诊断;用DNA直接测序法对患者Fg基因FGA、FGB和FGG的所有外显子及其侧翼序列进行测序以寻找基因突变,对有突变的序列反向测序证实;通过逆转录结合巢式PCR扩增的方法,检测患者外周血中的Fg异位转录产物;构建含有突变点的突变型FGA小基因(minigene)质粒和野生型FGA小基因质粒,将2种质粒分别转染人胚肾(HEK)293T细胞,抽提RNA,逆转录PCR(RT-PCR)后TA克隆测序。结果:先证者呈FGA基因剪切位点IVS2+1G>C杂合突变;对于该突变,逆转录结合巢式PCR的产物经克隆后测序只检测到正常转录本,而没有发现异常转录本;突变型FGA小基因质粒转染HEK293T细胞后,抽提RNA再经RT-PCR、TA克隆、测序,揭示剪接过程中发生了FGA基因2号内含子滞留,导致终止密码的提前出现,从而使异常转录的mRNA在体内很快被降解。结论:异位转录结合体外表达证明先证者FGA基因剪切位点IVS2+1G>C突变导致异常转录mRNA在体内很快被降解,是先证者低Fg血症的原因之一。

关键词：遗传性疾病纤维蛋白原基因突变异位转录

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FⅧ基因内含子1倒位及X染色体非随机灭活导致的女性血友病A1例

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诊断学理论与实践 2008年第3期7卷 286-290页

作者：陆晔玲丁秋兰戴菁王鸿利奚晓东王学锋上海交通大学医学院附属瑞金医院临床输血科上海200025 上海血液学研究所上海200025 基因组学国家重点实验室上海200025

目的:对1例女性血友病A(HA)患者进行基因分析,探讨其分子发病机制,并对其表姐进行携带者诊断。方法:测定1例女性HA患者的活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、FⅧ活性(FⅧ:C)、FⅨ活性(FⅨ:C)及血管性血友病因子(vWF)等,并进... 详细信息

目的:对1例女性血友病A(HA)患者进行基因分析,探讨其分子发病机制,并对其表姐进行携带者诊断。方法:测定1例女性HA患者的活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、FⅧ活性(FⅧ:C)、FⅨ活性(FⅨ:C)及血管性血友病因子(vWF)等,并进行HA表型诊断;采用长距离PCR及序列特异PCR检测其FⅧ基因内含子22及内含子1倒位,并对FⅧ基因的所有外显子及其侧翼序列进行测序。对FⅧ基因内外的8个多态性位点进行遗传连锁分析,应用凝胶电泳法检测PCR产物分析DXS 52(ST14)位点多态性,采用多重荧光PCR法检测7个STR位点(F8Civs13、CA22、DXS15、DXS9901、G6PD、DXS1073及DXS1108)的多态性。应用甲基化敏感的HpaⅡ内切酶,对基因组DNA进行酶切;荧光PCR法对HpaⅡ酶切前后的基因组DNA进行人雄激素受体基因(HUMARA)CAG重复序列扩增;荧光扫捕法对扩增产物进行检测,并根据酶切前后PCR产物的峰值变化,分析判断X染色体的随机灭活模式。结果:表型检测先证者APTT延长(128.5s),FⅧ:C活性明显下降(<1%),家系另2例患者FⅧ:C活性亦明显下降(<1%)。该家系成员FⅧ内禽子22倒位检测均为阴性;1倒位检测则显示该女性HA患者为阳性携带者,该家系另2例男性患者均显示为该倒位阳性;该女性HA患者FⅧ基因测序未发现突变。遗传连锁分析发现,该女性患者携带致病基因的染色体遗传自其母亲;其X染色体为非随机灭活,遗传自父亲的X染色体被大部分灭活,而遗传自母亲的X染色体保留3大部分活性。结论:该女性HA患者存在FⅧ基因内含子1倒位的X染色体来自其母亲,且在X染色体非随机灭活中保留了活性。FⅧ基因内含子1倒位及X染色体非随机灭活导致了女性HA的发生。

关键词：血友病A 女性患者 X染色体随机灭活模式基因诊断

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纤维蛋白原α链剪切位点(IVS2+1G＞C)突变致低纤维蛋原血症分子发病机制研究

纤维蛋白原α链剪切位点(IVS2+1G＞C)突变致低纤维蛋原血症分子发...

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中华医学会第七次全国检验医学学术会议

作者：陈华云杨芳许冠群丁秋兰戴菁奚晓东王学锋王鸿利上海交通大学医学院附属瑞金医院临床输血科上海血液学研究所医学基因组学国家重点实验室

目的探讨遗传性低纤维蛋白原血症的分子发病机制。方法采集家系中三代5人外周血各2.7mL,0.129mol/L枸橼酸钠9:1抗凝,立即4℃,3000r/m离心10min后吸取上层血浆。检测活化部分凝血酶原时间(AFTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT),纤维... 详细信息

目的探讨遗传性低纤维蛋白原血症的分子发病机制。方法采集家系中三代5人外周血各2.7mL,0.129mol/L枸橼酸钠9:1抗凝,立即4℃,3000r/m离心10min后吸取上层血浆。检测活化部分凝血酶原时间(AFTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT),纤维蛋白原活性(FIB:C)和纤维蛋白原抗原(FIB:Ag)分别用Clauss法和免疫比浊法进行检测。用DNA直接测序法对患者维蛋白原(Fg)基因FGA、FGB和FGG的所有外显子及其侧翼序列进行测序寻找基因突变,对有突变的序列反向测序证实;通过逆转录反应结合巢式PCR扩增的方法,检测患者外周血中的纤维蛋白原(Fg)异位转录产物;构建含有突变点的突变型FGA minigene质粒和野生型FGA minigene质粒,将两种质粒分别转染HEK 293T细胞,抽提RNA,RT-PCR后TA克隆测序。结果先证者呈FGA基因剪切位点IVS2+1G>C杂合突变;对于该突变,逆转录结合巢式PCR的产物经克隆后测序只检测到了正常的转录本,而没有发现异常转录本;突变型FGA minigene质粒转染HEK293T细胞后,抽提RNA再经RT-PCR、TA克隆、测序,揭示剪接过程中发生了FGA基因2号内含子滞留,导致了终止密码的提前出现,从而使异常转录的mRNA在体内很快被降解。结论先证者FGA基因剪切位点IVS2+1G>C突变为国际首次报道,异位转录结合体外表达证明该突变导致异常转录mRNA在体内很快被降解,是先证者低纤维蛋白原血症的原因之一。

关键词：分子发病机制先证者 IVS2+1G 剪切位点纤维蛋白原

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血友病患者凝血酶生成试验的检测

血友病患者凝血酶生成试验的检测

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中华医学会第七次全国检验医学学术会议

作者：陈华云杨芳陆晔玲许冠群张利伟戴菁丁秋兰奚晓东王学锋王鸿利上海交通大学医学院附属瑞金医院临床输血科上海血液学研究所医学基因组学国家重点实验室

目的探讨血友病患者的凝血酶生成情况及其与出血的关系。方法收集134例血友病患者(血友病A114例,血友病B20例)、26例正常人的临床信息,检测其因子Ⅷ/Ⅸ活性(FⅧ:C/Ⅸ:C)、抑制物及凝血酶生成各指标。结果根据FⅧ:C/Ⅸ:C不同.将未存在抑... 详细信息

目的探讨血友病患者的凝血酶生成情况及其与出血的关系。方法收集134例血友病患者(血友病A114例,血友病B20例)、26例正常人的临床信息,检测其因子Ⅷ/Ⅸ活性(FⅧ:C/Ⅸ:C)、抑制物及凝血酶生成各指标。结果根据FⅧ:C/Ⅸ:C不同.将未存在抑制物的132例血友病A/B患者分成重型(FⅧ:C/Ⅸ:C:<1%)、中型(FⅧ:C/Ⅸ:C:1～5%)及轻型(FⅧ:C/Ⅸ:C:6-25%)3组。重型血友病患者与轻型血友病患者比较.出血频度及凝血酶生成各指标均存在显著性差异(P<0.01):重型血友病患者与中型血友病患者比较除峰高(peak)和达峰时间(ttpeak)存在显著性差异外(P<0.01),其余指标均不存在显著性差异;中型血友病患者与轻型血友病患者比较除延迟时间(lagtime)和ttpeak不存在显著性差异外.其余指标均存在显著性差异(P<0.01)。血友病患者出血频度与FⅧ:C/Ⅸ:C、lagtime不呈显著性相关,与peak、ETP及ETP%呈负相关(P<0.01)。而与ttpeak呈正相关。FⅧ:C/Ⅸ:C与lagtime及ttpeak呈负相关(P<0.01),与peak、ETP及ETP%呈正相关(P<0.01)。结论凝血酶生成试验(trombin generation ***)可作为预测血友病患者出血风险的有效工具,对于血友病患者建议进行FⅧ:C/Ⅸ:C和TGT联合检测。

关键词：凝血酶抑制物显著性差异

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凝血酶生成试验的临床应用研究

凝血酶生成试验的临床应用研究

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中华医学会第七次全国检验医学学术会议

作者：陈华云杨芳许冠群丁秋兰戴菁奚晓东王学锋王鸿利上海交通大学医学院附属瑞金医院临床输血科上海血液学研究所医学基因组学国家重点实验室

目的探讨凝血酶生成试验(thrombin generation test,TGT)在临床中的应用,包括TGT在监测华法林抗凝治疗中和在遗传性/获得性血友病患者临床出血风险中的应用。方法:1.采集78例因心脏瓣膜置换术后、心房纤维颤动而口服华法林3个月以上的... 详细信息

目的探讨凝血酶生成试验(thrombin generation test,TGT)在临床中的应用,包括TGT在监测华法林抗凝治疗中和在遗传性/获得性血友病患者临床出血风险中的应用。方法:1.采集78例因心脏瓣膜置换术后、心房纤维颤动而口服华法林3个月以上的患者的临床资料及血样,检测INR及凝血酶生成状况。2.用凝血因子活性和TGT,对10例遗传性血友病A患者(B组)和48例健康人(C组)进行检测。3.用凝血因子活性、凝血因子抗体、抗心磷脂抗体(ACL)、狼疮抗凝物质(LA)以及TGT等方法,对13例获得性血友病患者(A组)进行检测,其中长期服用氯丙嗪的精神分裂症5例,天疱疹1例,抗磷脂综合征2例,原因未明5例,这些患者有2例出现出血和11例未出现出血。结果:1.华法林组按INR不同分成3组:Ⅰ组23例,INR:1.51～2.00;Ⅱ组39例,INR:2.01～3.00;Ⅲ组16例,INR:3.01～4.26。三组凝血酶生成的延迟时间(lagtime)、峰高(peak)、达峰时间(ttpeak)都存在显著性差异(P<0.01),而总体反映凝血酶生成量的指标:凝血酶生成潜力(ETP),在Ⅰ组和Ⅱ组比较中存在显著性差异(P=0.0001),Ⅱ组和Ⅲ组比较中无显著性差异(P= 0.06)。有5例患者合并有出血并发症,这些患者ETP值显著低于正常对照组,小于正常对照组ETP值的15%。2.B组患者均有明显出血倾向,TGT的达峰时间较正常对照组显著延长(P<0.01),而延迟时间无显著延长;ETP值较正常对照组显著降低(P<0.01),且ETP比值低于50%。3.A组的APTT延长,FⅧ:C、FⅨ:C、FⅪ:C降低,这些凝血因子的抗体及LA阳性,6例ACL阳性,7例ACL阴性。与正常对照组比较,TGT的延迟时间和达峰时间均显著延长(P<0.01),ETP值无显著降低。无出血症状的获得性血友病患者(11例)较遗传性血友病A患者的ETP值显著增加(P<0.01),且ETP比值大于50%。结论:1.口服华法林抗凝治疗患者,当1NR>3.0后,提高剂量只会增加出血风险并不降低凝血酶生成的量。服用华法林抗凝治疗期间发生出血与否并不完全取决于INR值JNR结合ETP能更好的反映机体的凝血状态,从而有效地防止出血发生。2.遗传性血友病A患者的ETP值降低与临床出血相关。***及(或)ACL是本文获得性血友病的主要原因之一其中部分患者的凝血因子水平虽然很低,但ETP值没有相应的降低,是临床无出血的主要原因之一。

关键词：凝血酶华法林抗凝临床应用研究

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NUP98-IQCG融合基因的克隆和功能研究

NUP98-IQCG融合基因的克隆和功能研究

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第11次中国实验血液学会议

作者：潘勤顾柏炜朱永进蔡循白雪涛员海洋陈竺薛永权陈赛娟上海交通大学医学院附属瑞金医院上海血液学研究所医学基因组学国家重点实验室上海交通大学医学院附属瑞金医院上海血液学研究所医学基因组学国家重点实验室苏州大学附属第一医院江苏血液学研究所上海交通大学医学院附属瑞金医院上海血液学研究所医学基因组学国家重点实验室上海交通大学医学院附属瑞金医院上海血液学研究所医学基因组学国家重点实验室上海交通大学医学院附属瑞金医院上海血液学研究所医学基因组学国家重点实验室上海交通大学医学院附属瑞金医院上海血液学研究所医学基因组学国家重点实验室苏州大学附属第一医院江苏血液学研究所上海交通大学医学院附属瑞金医院上海血液学研究所医学基因组学国家重点实验室

目的：近年来越来越多的累及 NUP98的染色体易位在白血病中被发现,NUP98相关融合基因被克隆。至今已发现至少有21种伙伴基因与 NUP98融合,多数见于 AML/MDS或治疗相关的 MDS/AML 患者,少数见于 ALL 或双表型急性白血病患者。克隆白血病... 详细信息

目的：近年来越来越多的累及 NUP98的染色体易位在白血病中被发现,NUP98相关融合基因被克隆。至今已发现至少有21种伙伴基因与 NUP98融合,多数见于 AML/MDS或治疗相关的 MDS/AML 患者,少数见于 ALL 或双表型急性白血病患者。克隆白血病患者中 NUP98相关融合基因并对其进行功能研究,有助于深入理解 NUP98 相关融合基因的发病机制。

关键词：髓细胞性白血病定位候选克隆 NUP98-IQCG 功能研究

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利用基因免疫进行日本血吸虫Sj22蛋白抗体制备的研究

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中国生物工程杂志 2007年第1期27卷 6-10页

作者：彭海林宋凯叶赛宋怀光刘锋徐斌张庆华上海交通大学医学院附属瑞金医院上海血液学研究所医学基因组学国家重点实验室上海200025 生物芯片上海国家工程研究中心上海201203 国家人类基因组南方研究中心上海201203 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所上海200025

应用基因免疫方法制备日本血吸虫Sj22蛋白的抗体,并研究CpG佐剂和蛋白加强策略在增强基因免疫效果中的作用。采用肌肉注射的方法免疫小鼠,实验动物分为4组:A组注射pVAX1-sj22质粒100μg/只;B组注射pVAX1-sj22质粒50μg/只,同时注射CpG佐... 详细信息

应用基因免疫方法制备日本血吸虫Sj22蛋白的抗体,并研究CpG佐剂和蛋白加强策略在增强基因免疫效果中的作用。采用肌肉注射的方法免疫小鼠,实验动物分为4组:A组注射pVAX1-sj22质粒100μg/只;B组注射pVAX1-sj22质粒50μg/只,同时注射CpG佐剂20μg/只;C、D组注射pcDNA3.1-sj22质粒100μg/只。分别在0、3、6周进行免疫,第9周A、B、C组用30μg重组sj22蛋白加强免疫,D组则用pcDNA3.1-sj22质粒100μg加强免疫。第0、9、10周割尾采血,使用ELISA方法进行抗体效价测定,Westernblot验证抗体的特异性。结果表明:使用基因免疫的方法获得了针对Sj22的特异性抗血清,CpG佐剂能够有效降低质粒用量,基因免疫-蛋白加强的策略使得抗体的滴度提高了40～1280倍。

关键词：基因免疫抗体 CpG佐剂日本血吸虫 Sj22

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Graves病相关的易感基因研究进展

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国际遗传学杂志 2007年第3期30卷 221-224页

作者：程烽宋怀东南京军区福州总医院全军医学检验中心实验科上海交通大学医学院附属瑞金医院人类基因组国家重点实验室上海血液学研究所

Graves(graves’disease,GD)病是一种器官特异性自身免疫病,是一种由多个基因与环境因素参与的多基因病。尽管进行了大量的研究,GD的遗传学机制至今尚未阐明。与GD发病相关的候选基因主要分成两大类:①与机体免疫调节有关的基因:②与甲... 详细信息

Graves(graves’disease,GD)病是一种器官特异性自身免疫病,是一种由多个基因与环境因素参与的多基因病。尽管进行了大量的研究,GD的遗传学机制至今尚未阐明。与GD发病相关的候选基因主要分成两大类:①与机体免疫调节有关的基因:②与甲状腺生理机能调节有关的基因。现就GD易感性研究最多的基因HLA、CTLA-4、TSH-R及一些细胞因子作一简要综述。

关键词： Graves病易感基因单核苷酸多态性易感性关联

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