检索结果-内蒙古大学图书馆

实验动物与比较医学 2009年第2期29卷 74-80页

作者：华敏敏李玉华李润生施惠娟欧伶华东理工大学生物工程学院上海200237 国家人口和计划生育委员会计划生育药具重点实验室上海计划生育科学研究所上海200032

目的为探索精子细胞特异表达的新基因ssp411在受精及早胚发育中的功能，设计并构建了以ssp411基因为靶点的RNA干扰表达载体siRNA-ssp411s，筛选其中对ssp411基因有显著干扰作用的表达质粒。方法根据已知的ssp411 mRNA序列，选择设计三... 详细信息

目的为探索精子细胞特异表达的新基因ssp411在受精及早胚发育中的功能，设计并构建了以ssp411基因为靶点的RNA干扰表达载体siRNA-ssp411s，筛选其中对ssp411基因有显著干扰作用的表达质粒。方法根据已知的ssp411 mRNA序列，选择设计三条带发卡结构的核苷酸序列，克隆到含有U6启动子的载体pRNAT—U6．1中并测序分析。用脂质体转染的方法将干扰质粒与表达质粒ssp411-pDsRed共转染293T细胞，24h后，荧光倒置显微镜观察转染效率，并收集细胞，通过实时定量PCR方法检测不同干扰质粒对ssp411mRNA的干扰效果。结果3个ssp411的siRNA片断被成功克隆到pRNAT-U6.1质粒载体中，插入片段测序结果与设计的序列完全一致。实时定量PCR结果表明，针对ssp411基因蛋白编码区3—22序列构建的干扰质粒效果最好，干扰效率可达71％。结论成功构建了能表达ssp411 shRNA（small hairpin RNA）的重组质粒，同时通过共转染技术，筛选到一个干扰效果达70％以上的干扰片断，为建立转基因RNA干扰小鼠模型，在体内研究ssp411基因及蛋白的生殖生物学功能打好基础。

关键词： ssp411 RNA干扰短发夹RNA 实时定量PCR

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重组表达SOD对野生小鼠精子的冷冻保护作用

重组表达SOD对野生小鼠精子的冷冻保护作用

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第六届全国SOD学术研讨会

作者：林菊芳贾晓峰宋丽伟周宇荀赵健施惠娟华东理工大学生物工程学院国家人口计生委计划生育药具重点实验室上海计划生育科学研究所东华大学化学化工与生物工程学院

目的探讨重组表达的Mn-SOD或Cu,Zn-SOD对野生小鼠精子冷冻损伤的保护作用。方法以R18S3为基础冷冻保护剂,分别添加不同浓度的重组表达的MnSOD或CuZnSOD,通过对各组ICR小鼠冻融精子的活力、质膜完整性、DNA损伤的比较筛选出两种SOD的最... 详细信息

目的探讨重组表达的Mn-SOD或Cu,Zn-SOD对野生小鼠精子冷冻损伤的保护作用。方法以R18S3为基础冷冻保护剂,分别添加不同浓度的重组表达的MnSOD或CuZnSOD,通过对各组ICR小鼠冻融精子的活力、质膜完整性、DNA损伤的比较筛选出两种SOD的最佳浓度并将其用于野生小鼠的精子冷冻保护液,观察冻融野生小鼠精子活力、质膜完整性、DNA损伤以及体外受精率的变化。结果添加100U CuZnSOD和200U MnSOD后野生小鼠冻融精子的活力以及存活率都有显著性提高(p<0.05),而仅有200U MnSOD组的野生小鼠冻融精子的体外受精率与对照组相比有显著提高(p<0.05)。结论实验结果表明200U MnSOD对野生小鼠精子冷冻损伤具有一定的保护作用。

关键词： SOD 野生小鼠精子冷冻

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着床丝氨酸蛋白酶-2(ISP2)蛋白在小鼠卵子和早胚组织中的表达及其定位

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生殖与避孕 2008年第3期28卷 129-133,155页

作者：周密贾晓峰王健施惠娟复旦大学上海医学院上海200032 国家人口和计划生育委员会计划生育药具重点实验室上海市计划生育科学研究所上海200032

目的:了解ISP2蛋白在小鼠卵细胞和早胚组织中的表达情况。方法:收集小鼠未成熟卵、成熟卵、受精卵和着床前胚泡,利用特异性抗ISP2抗体,采用免疫荧光和激光共聚焦显微镜技术对ISP2在卵细胞和早期胚胎组织中的表达模式以及亚细胞定位进行... 详细信息

目的:了解ISP2蛋白在小鼠卵细胞和早胚组织中的表达情况。方法:收集小鼠未成熟卵、成熟卵、受精卵和着床前胚泡,利用特异性抗ISP2抗体,采用免疫荧光和激光共聚焦显微镜技术对ISP2在卵细胞和早期胚胎组织中的表达模式以及亚细胞定位进行检测分析。结果:在小鼠未受精卵、受精卵和着床前胚泡中均能检测到特异的ISP2蛋白信号;通过激光共聚焦显微镜观察到ISP2在细胞膜上的信号强于其在细胞质。结论:ISP2蛋白在小鼠卵子和早胚组织中均有表达,并主要分布在细胞膜上。

关键词：着床丝氨酸蛋白酶-2(ISP2) 卵细胞胚泡细胞膜

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药物流产后清宫与继后妊娠分娩时并发症关系的临床研究

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中国计划生育学杂志 2008年第11期16卷 679-682页

作者：梁敏红朱虔兮高尔生陈爱民罗琳程怡民袁伟复旦大学上海市计划生育科学研究所200032 上海市计划生育科学研究所 200032 四川省计划生育科学技术研究所国家人口计生委科学技术研究所上海市计划生育科学研究所国家人口和计划生育委员会计划生育药具重点实验室

目的：探讨药物流产后清宫与继后妊娠分娩时并发症的关系。方法：1998年7月～2001年3月在北京、上海和成都3个中心招收仅有1次药物流产史、妊娠16周以内的妇女4661例进行队列研究，研究对象根据药物流产后有无清宫分为清宫组（1181例）... 详细信息

目的：探讨药物流产后清宫与继后妊娠分娩时并发症的关系。方法：1998年7月～2001年3月在北京、上海和成都3个中心招收仅有1次药物流产史、妊娠16周以内的妇女4661例进行队列研究，研究对象根据药物流产后有无清宫分为清宫组（1181例）和无清宫组（3480例），随访观察其继后妊娠分娩时情况。结果：与无清宫组相比，清宫组分娩时第三产程延长的发生率较高，调整相关因素后OR值为2．05（95％CI：1．27～3．30）；两组间胎盘早剥、粘连或植入和产后出血的发生率差异均无统计学意义（P〉0．05）。按流产时的孕龄分层分析后。孕龄〈7周时清宫组胎盘早剥、粘连或植入、第三产程延长和产后出血的发生率均高于无清宫组，调整后OR值分别为3．38（95％CI：1．08—10．61）、1．51（95％CI：0．99～2．53）、2．37（95％CI：1．35～4．16）和1．77（95％CI：1．01～3．09）；孕龄≥7周时，两组上述并发症的发生率差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：药物流产（尤其是孕龄〈7周时）后的清宫可能会对继后妊娠的分娩产生一定的不良影响。

关键词：药物流产清宫分娩并发症

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复盆调经颗粒的制备工艺研究

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生殖与避孕 2008年第9期28卷 545-549页

作者：王茵付剑江曾文亮刘耀明国家人口和计划生育委员会计划生育药具重点实验室上海市计划生育科学研究所上海200032 江西中医学院南昌330004 北京江中高科技投资有限公司北京100600

目的:筛选并优化复盆调经颗粒的制备工艺。方法:通过药效学实验比较和确定提取纯化工艺路线,正交设计优化制备工艺条件。结果:水提醇沉提取物的主要药效学作用与传统水提工艺提取物比较无显著差异,但能显著增强缩宫素引起的离体大鼠子... 详细信息

目的:筛选并优化复盆调经颗粒的制备工艺。方法:通过药效学实验比较和确定提取纯化工艺路线,正交设计优化制备工艺条件。结果:水提醇沉提取物的主要药效学作用与传统水提工艺提取物比较无显著差异,但能显著增强缩宫素引起的离体大鼠子宫平滑肌的作用(P<0.01);能显著增加未成年雌性小鼠阴道开放例数(P<0.01),能显著增加去卵巢小鼠的子宫重量百分率(P<0.01),能显著增加PMSG处理后小鼠的排卵数(P<0.01);通过正交试验优化确定的水提醇沉工艺条件为:药材加10倍量水提取2次,每次1h,合并滤液减压浓缩至相对密度为1.10(55℃),加乙醇使药液含醇量达75%,静置24h,浓缩干燥。结论:水提醇沉工艺能除去杂质,减小复盆调经颗粒的服用剂量,并保证了原处方的疗效;优化得到的工艺简单合理、稳定可行。

关键词：复盆调经颗粒制备工艺药效学评价正交试验芍药苷

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精原干细胞体内转染途径建立rsp3111转基因小鼠的可行性研究

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实验动物与比较医学 2008年第3期28卷 138-143页

作者：周密贾晓峰史庭燕王健袁瑶施惠娟复旦大学上海医学院上海200032 国家人口和计划生育委员会计划生育药具重点实验室上海市计划生育科学研究所上海200032

目的构建目的基因rsp3111与荧光蛋白融合表达的质粒,并且实现目的基因在体外受精胚胎及在体附睾成熟精子中表达。为进一步通过精原干细胞体内转染途径建立rsp3111转基因小鼠奠定基础。方法将rsp3111基因以XholI和BamHI酶切后插入经同样... 详细信息

目的构建目的基因rsp3111与荧光蛋白融合表达的质粒,并且实现目的基因在体外受精胚胎及在体附睾成熟精子中表达。为进一步通过精原干细胞体内转染途径建立rsp3111转基因小鼠奠定基础。方法将rsp3111基因以XholI和BamHI酶切后插入经同样酶切处理的真核细胞表达质粒pDsRed-Monomer-N1中,重组质粒为pDsRed-Monomer-N1-rSP3111。采用共培养和脂质体介导方法将ICR小鼠精子与pDsRed-Monomer-N1-rSP3111质粒共孵育,再与成熟的卵母细胞体外受精;或用脂质体介导睾丸直接注射法,将pDsRed-Monomer-N1-rSP3111导入小鼠睾丸中,通过PCR及荧光显微镜观察体外受精后的受精卵及体内睾丸转染rsp3111基因后附睾精子中是否有外源rsp3111基因的表达。结果PCR结果表明,rsp3111基因成功地转入了附睾精子及受精卵中。荧光检测结果表明,目的基因rsp3111在体外受精胚胎及睾丸的曲细精管中均有表达。结论通过雄性生殖细胞载体法实现了大鼠配子特异性蛋白rSP3111在小鼠受精卵及睾丸、附睾精子中的表达;为进一步通过精原干细胞体内转染途径建立rsp3111转基因小鼠奠定了基础。

关键词：雄性生殖细胞载体法特异性基因rsp3111 体外受精

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益丹内异方治疗子宫内膜异位症的临床疗效观察

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生殖与避孕 2007年第8期27卷 537-540页

作者：房素萍王茵沈观印方广虹曹霖蔡毅上海市计划生育科学研究所附属博康生殖医学医院上海200032 国家人口和计划生育委员会计划生育药具重点实验室上海市计划生育科学研究所上海200032 武警上海市总队医院上海201103

目的:观察益丹内异方治疗子宫内膜异位症(EMs)的疗效。方法:由腹腔镜检查诊断为EMs不孕症患者127例,在腹腔镜下作相应的治疗后,按随机号对其中66例进行中药益丹内异方治疗(实验组):口服益丹内异中药水煎剂,每日1剂,分早晚2次顿服;另61... 详细信息

目的:观察益丹内异方治疗子宫内膜异位症(EMs)的疗效。方法:由腹腔镜检查诊断为EMs不孕症患者127例,在腹腔镜下作相应的治疗后,按随机号对其中66例进行中药益丹内异方治疗(实验组):口服益丹内异中药水煎剂,每日1剂,分早晚2次顿服;另61例为对照组,采用传统的达那唑阴道栓治疗,50mg/次,bid;所有患者经6个月治疗后,进行临床疗效比较。结果:治疗后实验组不孕症者受孕率为53.0%,总有效率为87.9%;对照组不孕症者受孕率为30.0%,总有效率为52.5%,二组间有显著差异(P<0.05)。在免疫调节方面,实验组抗子宫内膜抗体(EMAb)转阴率为100.0%,对照组为53.8%,二者有极显著差异(P<0.01);实验组和对照组在用药期间血清癌抗原(CA125)值均降低,自身对照服药前后二组均有极显著差异(P<0.01)。结论:中药益丹内异方治疗EMs疗效可靠,无毒副作用且用药期间不影响自然排卵及受孕。

关键词：子宫内膜异位症(EMs) 腹腔镜检查 CA125 抗子宫内膜抗体(EMAb)

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用siRNA沉默人血红素加氧酶-1基因降低胆红素水平

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细胞生物学杂志 2007年第2期29卷 282-290页

作者：李春娥金由辛史毅须丽清钟文伟申庆祥李云珠俞善昌夏振炜上海交通大学医学院附属瑞金医院儿科上海200025 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所分子生物学国家重点实验室上海200031 上海市计划生育研究所上海200032

拟通过RNA干扰技术特异下调人血红素加氧酶-1（human heme oxygenase-1，hHO-1）基因的表达，减少hHO-1的产量从而降低胆红素的产生，探讨在胆红素产生前就阻断其产生，为临床早期防治新生儿高胆红素血症及胆红素中毒性脑病探索一种新... 详细信息

拟通过RNA干扰技术特异下调人血红素加氧酶-1（human heme oxygenase-1，hHO-1）基因的表达，减少hHO-1的产量从而降低胆红素的产生，探讨在胆红素产生前就阻断其产生，为临床早期防治新生儿高胆红素血症及胆红素中毒性脑病探索一种新的有效手段。针对hHO-1基因设计并化学合成三对小分子干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）。采用脂质体转染法将siRNA转染入人肝脏细胞株HL-7702；荧光显微镜检测siRNA转染细胞的效率；转染siRNA1-2天后经RT—PCR和Western印迹方法检测hHO-1表达水平和蛋白质量；并采用HO-1诱导剂血红素诱导或hHO—1表达质粒转染细胞以上调hHO—1表达，检测siRNA干扰后hHO-1产量和酶活性。结果显示：设计的三对siRNA能不同程度的特异下调hHO-1表达，筛选获得抑制效果最佳的siRNA-3。siRNA-3抑制hHO—1呈现浓度与时间依赖性。与非特异对照siRNA及未处理组比较，血红素诱导和hHO-1表达质粒转染均能上调HL-7702细胞内hHO-1表达，提高hHO-1产量，但转染siRNA-3后hHO-1表达明显抑制，同时hHO-1活性随着基因表达下调而下降。实验表明设计合成的siRNA-3抑制效果明显。siRNA-3通过降解hHO—1，减少hHO-1产量，降低酶活性，最终减少胆红素产生，从而使RNA干扰技术成为降低新生儿高胆红素血症和胆红素中毒性脑病发生的一种候选方法。

关键词：血红素加氧酶 RNA干扰酶活力胆红素高胆红素血症

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用生物合成肽法的人卵透明带蛋白抗原表位扫描和最小基序鉴定

用生物合成肽法的人卵透明带蛋白抗原表位扫描和最小基序鉴定

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第一届中华医学会生殖医学分会、中国动物学会生殖生物学分会联合年会

作者：徐万祥何亚萍孙志达季朝能顾少华谢彀上海市计划生育科学研究所生殖生物学研究室复旦大学生命科学院遗传工程国家重点实验室

自从1989年鉴定出小鼠 ZPC 第一个 B-细胞表位(BCE),并用其化学合成肽疫苗证明可无自身免疫卵巢炎地诱导明显的抗生育效果以来,相继用化学合成肽或基因亚克隆法扫描鉴定了小鼠、猪、帽猴和人等 ZP 蛋白的许多 BCEs 或表位肽。这些工作... 详细信息

自从1989年鉴定出小鼠 ZPC 第一个 B-细胞表位(BCE),并用其化学合成肽疫苗证明可无自身免疫卵巢炎地诱导明显的抗生育效果以来,相继用化学合成肽或基因亚克隆法扫描鉴定了小鼠、猪、帽猴和人等 ZP 蛋白的许多 BCEs 或表位肽。这些工作开拓了 ZP 避孕疫苗研究新的前沿领域, 为研制无卵巢疾病发生且抗生育完全有效的 ZP 多价嵌合肽免疫原制备莫定了基础.

关键词：抗原表位生物合成卵透明带蛋白合成肤合成肽

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多表位hCG嵌合肽(CP1和CP10)抗原的构建及其免疫原性

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分子细胞生物学报 2006年第5期39卷 414-422页

作者：徐万祥何亚萍邱德义廖矛川洪爱真季朝能顾少华陈金中谢毅上海市计划生育科学研究所生殖生物学研究室复旦大学生命科学院遗传所遗传工程国家重点实验室上海200433

本研究设计了CP1和CP10两种嵌合肽免疫原,它们由人绒毛膜促性腺激素β亚单位(β- hCG)3个线性B细胞表位(BCE)以及包括来自乙肝表面抗原和破伤风类毒素2个广谱性T细胞表位(TCE)的6个TCEs组合而成。编码CP1及其衍生物CP10的人工基因分别... 详细信息

本研究设计了CP1和CP10两种嵌合肽免疫原,它们由人绒毛膜促性腺激素β亚单位(β- hCG)3个线性B细胞表位(BCE)以及包括来自乙肝表面抗原和破伤风类毒素2个广谱性T细胞表位(TCE)的6个TCEs组合而成。编码CP1及其衍生物CP10的人工基因分别重组插入热诱导pBV221载体后,均能在大肠杆菌中以约占细菌总蛋白1％的比例被表达。在蛋白印迹试验中,在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳凝胶上显示约为16．5 kD分子量的CP1和CP10表达蛋白,能被抗各插入表位单克隆或多克隆抗体识别。各表达蛋白可用制备性PAGE方法一步纯化,纯化产物均显示95％以上的电泳均一性,纯化得率可达到每升培养液1-2mg水平。以它们为抗原主动免疫小鼠,都能分别产生识别CP1或CP10和天然β-hCG的抗血清,并都能在它们的抗血清中检测到各插入抗原表位的抗体。hCG CPs的可获得性及其能诱导各表位抗体生成特征,有可能成为研制hCG抗生育和肿瘤治疗性疫苗的新的候选免疫原。

关键词：人毛膜促性腺激素β亚单位嵌合肽免疫原原核表达纯化免疫应答

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