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中国药理学会第八次全国代表大会

作者：吴建辉孙祖越朱焰曹霖上海市计划生育科学研究所计划生育药具国家重点实验室中国生育调节药物毒理检测中心上海市计划生育科学研究所计划生育药具国家重点实验室中国生育调节药物毒理检测中心上海市计划生育科学研究所计划生育药具国家重点实验室中国生育调节药物毒理检测中心上海市计划生育科学研究所计划生育药具国家重点实验室中国生育调节药物毒理检测中心

目的:探讨丙酸睾酮诱导的Beagle犬前列腺增生模型中前列腺增生的发生机制。方法:分别采用SABC免疫组织化学技术,检测Beagle犬前列腺中前列腺特异性抗原(PSA)、酸性磷酸酶(PAP)、Bcl-2及p53的表达情况,并采用图象分析技术对表达结果进行... 详细信息

目的:探讨丙酸睾酮诱导的Beagle犬前列腺增生模型中前列腺增生的发生机制。方法:分别采用SABC免疫组织化学技术,检测Beagle犬前列腺中前列腺特异性抗原(PSA)、酸性磷酸酶(PAP)、Bcl-2及p53的表达情况,并采用图象分析技术对表达结果进行分析;采用电镜手段对各组Beagle犬前列腺上皮中凋亡的发生情况进行观察;借助组织DNA提取试剂盒提取各组犬前列腺DNA,采用2%的琼脂糖凝胶电泳技术观察前列腺中凋

关键词：前列腺增生 Beagle 分子生物学研究

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一个简捷的甾体5α-还原酶抑制剂体外筛选模型

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上海实验动物科学 2002年第4期22卷 204-208页

作者：孙祖越吴建辉屠曾宏朱焰钟恩宏上海市计划生育科学研究所计划生育药具国家重点实验室中国科学院上海生命科学院药物研究所

通过模拟睾丸酮经甾体5α-还原酶催化,从NADPH(辅酶)中获得H^+还原成双氢睾丸酮(DHT)这一反应,参照文献资料以酶动力学原理,分别测定反应底物NADPH和产物[~3H]-DHT含量变化的初始速率以代表酶活性,建立了“分光光度计法”和“同位素法... 详细信息

通过模拟睾丸酮经甾体5α-还原酶催化,从NADPH(辅酶)中获得H^+还原成双氢睾丸酮(DHT)这一反应,参照文献资料以酶动力学原理,分别测定反应底物NADPH和产物[~3H]-DHT含量变化的初始速率以代表酶活性,建立了“分光光度计法”和“同位素法”体外筛药模型,通过这两种模型对比,以非那甾胺为阳性对照药物,对爱普列特进行了体外模型验证研究。两种筛选模型结果一致,确定非那甾胺和爱普列特的抑制常数:用测定OD_(340)nm值的“分光光度计法”求得爱普列特抑制常数Ki=24.9±1.3nmol/L,半数抑制浓度IC_(50)=39.0 nmol/L;非那甾胺Ki=15.3±2.3 nmol/L,IC_(50)=58.6 nmol/L。用测定[~3H」-DHT dpm值的“同位素法”求得爱普列特Ki=67.4±13.2 nmol/L,IC_(50)=49.6nmol/L;非那甾胺Ki=25.0±1.9 nmol/L,IC_(50)=5.1nmol/L。该结果与国外文献中报道的爱普列特Ki=5～23 nmol/L,非那甾胺Ki=23.6 nmol/L相接近。

关键词：大鼠爱普列特前列腺增生筛药模型甾体5α-还原酶抑制剂体外筛选模型

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bcl-2基因家族在前列腺增生和前列腺癌形成中的作用

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实用癌症杂志 2002年第5期17卷 553-554,560页

作者：钟恩宏孙祖越曹霖 200032 上海市计划生育科学研究所国家避孕药具重点实验室中国生育调节药物毒理检测中心

前列腺增生症(benign prostatic hyperplasia,BPH)是中老年男性的常见病和多发病,据国外临床调查报道,50岁以上男性的发病率约为50%;前列腺癌(prostate cancer,PCa)在西方国家导致男性死亡的肿瘤中排名第2位[1],在我国发病率虽然较低,... 详细信息

前列腺增生症(benign prostatic hyperplasia,BPH)是中老年男性的常见病和多发病,据国外临床调查报道,50岁以上男性的发病率约为50%;前列腺癌(prostate cancer,PCa)在西方国家导致男性死亡的肿瘤中排名第2位[1],在我国发病率虽然较低,但近年来已呈现上升趋势,成为严重危害中老年男性健康的主要疾病.1990年以后,分子生物学水平的不断发展推动了对其发病机制的深入研究,现已认识到BPH和PCa的发生并非全是细胞增殖的缘故,同时凋亡的减少也占据重要地位,其中具有重要抗凋亡作用的bcl-2基因在BPH和PCa的发生发展中扮演着重要角色,现就bcl-2基因家族在前列腺增生和前列腺癌中的作用作一综述.

关键词： bcl-2基因前列腺增生前列腺癌作用机制

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人受精蛋白β整联蛋白配体区cDNA的克隆、表达及抗体制备

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2001年第3期33卷 303-308页

作者：丁蓓蓓沈卫英蒋俶王健高尔生申庆祥上海市计划生育科学研究所国家计划生育药具重点实验室!上海200032

从人睾丸中抽提mRNA ,合成双链cDNA ,利用合成的PCR引物扩增受精蛋白 β(fertilinβ)的整联蛋白配体区cDNA(hf2 79)。序列分析表明 ,该区编码 93个氨基酸 ,与文献报道完全相同。将hf2 79插入质粒 pGEX 4T 2 ,构建 pGEX hf2 79表达质粒 ... 详细信息

从人睾丸中抽提mRNA ,合成双链cDNA ,利用合成的PCR引物扩增受精蛋白 β(fertilinβ)的整联蛋白配体区cDNA(hf2 79)。序列分析表明 ,该区编码 93个氨基酸 ,与文献报道完全相同。将hf2 79插入质粒 pGEX 4T 2 ,构建 pGEX hf2 79表达质粒 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,表达菌株经IPTG诱导 ,可产生大量可溶性的表达蛋白GST HF93。SDS PAGE分析表明融合蛋白表观分子量为 38kD ,其含量占菌体可溶性蛋白的 5 0 %以上。表达产物经谷胱甘肽转硫酶 (GST)亲和层析柱纯化 ,得到 90 %以上纯度的融合蛋白。融合蛋白经凝血酶酶切 2h可得HF93肽。再经GST亲和层析柱去除GST ,得到纯度大于 80 %的HF93肽。将其和SDS PAGE凝胶上切下的HF93多肽条带一起用于免疫BALB/c小鼠 ,经ELISA检测 ,证明获得了较高滴度的抗体

关键词：人受精蛋白β整联蛋白配体区基因克隆基因表达大肠杆菌抗体

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受精蛋白β在人精子表面的免疫组织化学定位

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实验生物学报 2001年第4期34卷 283-289页

作者：丁蓓蓓蒋俶蒋文珏王健高尔生左嘉客申庆祥上海市计划生育科学研究所国家计划生育药具重点实验室上海200032

以人受精蛋白β整联蛋白配体区为抗原免疫小鼠并制备单抗,应用免疫组化方法研究了受精蛋白β在不同状态人精子表面的分布规律。结果表明受精蛋白β散在分布于新鲜人精子的头部,获能后则向顶体区集中,顶体反应过程中同时出现表达量及分... 详细信息

以人受精蛋白β整联蛋白配体区为抗原免疫小鼠并制备单抗,应用免疫组化方法研究了受精蛋白β在不同状态人精子表面的分布规律。结果表明受精蛋白β散在分布于新鲜人精子的头部,获能后则向顶体区集中,顶体反应过程中同时出现表达量及分布位置的急剧变化,最后定位于精子头后部。其分布规律与动物受精蛋白有所不同。受精蛋白β在人精子表面分布的位置及其变化揭示其在受精过程中的重要作用。

关键词：受精蛋白β 人精子获能免疫组织化学定位分布

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江南牡丹草的化学成分研究

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武汉植物学研究 2001年第6期19卷 513-516页

作者：廖矛川王有为肖培根上海市计划生育科学研究所计划生育药具国家重点实验室上海200032 中国科学院武汉植物研究所武汉430074 中国医学科学院药用植物研究所北京100094

Bioactive tests show the water soluble alkaloids of Leontice kiangnanensis are effective to adjuvant arthritis in mice. Fifteen alkaloids were isolated from the water soluble alkaloids. On the basis of physical and chemical data,IR,UV,MS, 1HNMR, 13C NMR spectra, seven of they are identified as (-)-5α-hydroxysophocarpine(LK-1),camoensine(LK-2),3α-hydroxylupanine(LK-3),13α-hydroxylupanine(LK-4),caulophylline(LK-5),(-)-7,11-dehydromatrine(LK-6),3β-hydroxylupanine(LK-7).

关键词： Leonticekiangnanensis 水溶性生物碱 Camoensine

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去N端信号肽和C端跨膜区猪卵透明带-3β蛋白在原核系统表达的研究

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生物工程学报 2001年第1期17卷 16-19页

作者：徐万祥邱德义熊艳申庆祥顾少华曹根涛应康谢毅上海市计划生育科学研究所上海200032 复旦大学生命科学院遗传所遗传工程国家重点实验室上海200433 中国科学院上海细胞生物学研究所上海200031

猪卵透明带 (Zonapellucida ,ZP)由生物化学和免疫学性质截然不同的三种糖蛋白 (pZP1、pZP3α和pZP3β)组成。由于抗 pZP3β抗体能在体外与人ZP发生交叉反应 ,因此 pZP3β一直被认为是研制抗受精避孕疫苗的潜在抗原之一。为了能在原核... 详细信息

猪卵透明带 (Zonapellucida ,ZP)由生物化学和免疫学性质截然不同的三种糖蛋白 (pZP1、pZP3α和pZP3β)组成。由于抗 pZP3β抗体能在体外与人ZP发生交叉反应 ,因此 pZP3β一直被认为是研制抗受精避孕疫苗的潜在抗原之一。为了能在原核系统中获得无卵巢因子污染的 pZP3β蛋白 ,本文采用PCR方法删除了原cDNA中编码5′ 和 3′ 端信号肽和跨膜区的DNA顺序。扩增的 pZP3β基因核心片段 (pZP3β″)经DNA测序验证后 ,通过引入其两端的EcoRI和SalI酶切位点被定向插入 pBV2 2 1质粒PRPL 启动子下游的多克隆区。SDS PAGE分析表明 :工程菌在热诱导后能特异地表达pZP3β蛋白 ,并能在蛋白印迹实验中被兔抗 pZPIgGs识别。

关键词： pZP3β蛋白基因表达免疫印迹

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猪卵透明带-4蛋白在大肠杆菌中高表达的研究

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中国免疫学杂志 2001年第12期17卷 660-663页

作者：孙晓溪徐万祥邱德义熊艳李大金谢毅复旦大学附属妇产科研究所上海200011 上海市计划生育科学研究所上海200032 复旦大学生命科学院遗传研究所国家重点实验室上海200433

目的：在大肠杆菌中高水平地直接表达目的蛋白。方法：用PCR方法从猪卵透明带-l（pZP1）cDNA中扩增pZP4目的基因片段，通过在其5'端和3'端引入的双酶切位点将该完整的目的cDNA定向插入pBV221表达质粒PRPL启动因子下游的多克隆... 详细信息

目的：在大肠杆菌中高水平地直接表达目的蛋白。方法：用PCR方法从猪卵透明带-l（pZP1）cDNA中扩增pZP4目的基因片段，通过在其5'端和3'端引入的双酶切位点将该完整的目的cDNA定向插入pBV221表达质粒PRPL启动因子下游的多克隆区。结果：此重组表达质粒转化宿主工程菌后经热诱导培养，可在SDS-PAGE凝胶上得到特异性的高表达蛋白条带，而且它在 Wistem blot鉴定实验中能被鼠抗pZP4的单克隆抗体17D3和兔抗pZPIgGe识别。结论：成功地在大肠杆菌高效表达了可被17D3单克隆抗体及ZP多克隆抗体识别的ZP4。

关键词：猪 cDNA 大肠杆菌基因表达卵透明带-4蛋白

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HCG嵌合肽CP12基因的构建和原核系统表达

HCG嵌合肽CP12基因的构建和原核系统表达

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第五届全国生殖免疫学大会

作者：徐万祥熊艳孙志达廖矛川顾少华应康刘建平谢毅上海市计划生育科学研究所复旦大学生命科学院遗传工程国家重点实验室

本文以克服hCG避免疫苗研制中存在的佐剂和免疫应答的MHC遗传限制等突出问题为目标,探讨hCG嵌合肽CPI编码基因的合成和原核生物表达的阶段性实验结果.

关键词：嵌合肽免疫原避孕疫苗原核生物表达

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少剂量抗孕激素在子宫内膜对胚泡接受中的作用

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Developmental and Reproductive Biology 2001年第B10期10卷 95-95页

作者：刘承权王忠兴袁瑶上海市计划生育科学研究所计划生育药具国家重点实验室中国上海200032

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