嗜热链球菌因其优良的安全性和发酵特性,广泛应用于酸奶和奶酪等乳制品的生产,是一类重要的工业乳酸菌。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)是一种基因表达定量分析方法,其准确性依赖于内参基因的选择。但传统的内参基因在不同微生物中表达量存在较大波动,无法保证实验结果的准确性。本研究通过转录组测序在基因组规模上系统地分析基因表达量变化,从嗜热链球菌中鉴定出更加稳定的内参基因。我们在4种不同的实验条件下对1911个基因的表达量进行分析,筛选出21个候选内参基因,其变异系数均<10.0.通过RT-qPCR对这些候选内参基因进行筛选和验证,与最常用的内参基因16S rRNA相比,编码甘氨酸-tRNA连接酶的glyS基因和编码脂肪酸结合蛋白的degV基因在4种实验条件下均能更稳定表达,且从未用作嗜热链球菌RT-qPCR的内参基因。采用geNorm和Normfinder统计学算法对其表达稳定性排名也表明:glyS和degV明显优于16S r RNA。本研究为精确分析嗜热链球菌和其他乳酸菌物种中基因表达奠定基础。
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