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黑龙江畜牧兽医 2024年第15期 6-13,117页

作者：杨昊天王志强苏景冯国峰黄宇翔邹跃马志刚霍明东张红董佳强吕明哲张国华刘雪松王爽沈思思张艳王欢江波涛钟鹏陈志峰黑龙江省农业科学院畜牧兽医分院黑龙江齐齐哈尔161005 东北农业大学黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150030 黑龙江省动物疫病预防与控制中心哈尔滨150069

为了阐明番茄红素(lycopene,LYC)对雏鹅运输应激的影响,揭示LYC保护作用的关键位点,明确LYC保护雏鹅运输应激的具体作用和分子机制,试验采用模拟运输的模型,将45只雏鹅随机分为对照组、运输应激模型组和LYC处理组,其中对照组不做任何处... 详细信息

为了阐明番茄红素(lycopene,LYC)对雏鹅运输应激的影响,揭示LYC保护作用的关键位点,明确LYC保护雏鹅运输应激的具体作用和分子机制,试验采用模拟运输的模型,将45只雏鹅随机分为对照组、运输应激模型组和LYC处理组,其中对照组不做任何处理,运输应激模型组进行持续6 h的摇床振荡,LYC处理组雏鹅按体重50 mg/kg灌胃LYC 1 h后再进行持续6 h的摇床振荡,对雏鹅进行安乐死处理,快速打开胸腔和腹腔,以脏采血,冰上剥离肝脏组织。通过H.E.染色、生化功能检测、ELISA、实时荧光定量RCR检测等技术,观察肝脏的病理组织学改变,测定生化指标和氧化应激指标及肝脏相关基因表达量。结果表明:与对照组比较,运输应激模型组天门冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶、乳酸脱氢酶活性及白蛋白、总胆红素含量均极显著升高(P<0.01);LYC处理组各指标均下降,与运输应激模型组比较差异极显著(P<0.01)。运输应激模型组雏鹅肝脏可见明显的细胞坏死、空泡变性、充血等病理损伤,LYC处理组肝脏损伤明显缓解。与对照组比较,运输应激模型组丙二醛含量显著升高(P<0.05),谷胱甘肽还原酶活性和ATP含量极显著降低(P<0.01),超氧化物歧化酶活性显著降低(P<0.05);与运输应激模型组比较,LYC处理组丙二醛含量显著降低(P<0.05),超氧化物歧化酶活性显著升高(P<0.05),谷胱甘肽和ATP含量极显著升高(P<0.01)。与运输应激模型组比较,LYC处理组氧化应激相关因子肝脏核因子E2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)及醌氧化还原酶1(NQO1)基因相对表达量极显著升高(P<0.01),Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)基因相对表达量极显著降低(P<0.01);炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因相对表达量显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01);肝脏凋亡基因B淋巴细胞瘤/白血病-2相关X蛋白(Bax)基因相对表达量极显著降低(P<0.01),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)基因相对表达量极显著升高(P<0.01),Bax/Bcl-2极显著降低(P<0.01)。说明LYC可通过影响Nrf2/HO-1/NQO1信号通路提高雏鹅抗氧化能力并且可降低炎性因子的释放,同时影响Bcl-2、Bax等凋亡基因的表达,缓解运输应激对肝脏组织功能及实质的损伤。

关键词：运输应激番茄红素氧化应激凋亡籽鹅肝脏

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2018—2020年黑龙江省27个规模化奶牛场奶牛肢蹄病发病情况调查及影响因素分析

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黑龙江畜牧兽医 2023年第24期 65-73,148,149页

作者：魏成威马天文阮红日李亚楠陈鸿王路军张建涛高利东北农业大学动物医学学院哈尔滨150030 东北农业大学动物临床教学医院哈尔滨150036 黑龙江省动物疾病致病机制与比较医学重点实验室哈尔滨150030

为了分析黑龙江地区规模化奶牛场奶牛肢蹄病发病率的影响因素,研究于2018—2020年对黑龙江省哈尔滨市、齐齐哈尔市、牡丹江市、佳木斯市、大庆市27个规模化奶牛场29050头奶牛的肢蹄病发病情况进行了流行病学调查,统计不同地区、不同规... 详细信息

为了分析黑龙江地区规模化奶牛场奶牛肢蹄病发病率的影响因素,研究于2018—2020年对黑龙江省哈尔滨市、齐齐哈尔市、牡丹江市、佳木斯市、大庆市27个规模化奶牛场29050头奶牛的肢蹄病发病情况进行了流行病学调查,统计不同地区、不同规模、不同季节、不同卫生状况、使用不同牛床垫料、采用不同修蹄方式、不同蹄浴频次奶牛场奶牛及不同胎次、不同体况、不同年均泌乳量、不同泌乳时期奶牛的肢蹄病发病率。结果表明:黑龙江省27个规模化奶牛场肢蹄病的总发病率为28.6%;2019年发病率最高,为39.9%;2020年发病率最低,为21.4%。不同类型肢蹄病的发病率不同,其中蹄皮炎的发病率最高,为16.4%;然后依次为变形蹄、蹄底溃疡+蹄尖溃疡,发病率分别为4.2%和3.5%。牡丹江市和佳木斯市奶牛场奶牛肢蹄病发病率较高,分别为33.3%和33.1%;齐齐哈尔市和大庆市奶牛场奶牛发病率较低,分别为25.0%和24.7%。除大规模奶牛场蹄叶炎发病率较高外,其他类型肢蹄病发病率均随奶牛场规模的增大呈下降的趋势。黑龙江地区奶牛肢蹄病一年四季均有发生,冬季和夏季发病率较高,分别为8.7%和7.5%;春季和秋季发病率较低,分别为6.2%和5.9%;冬季发病率显著高于秋季(P<0.05)。奶牛场卫生状况越好,肢蹄病发病率越低。使用牛粪+稻壳的奶牛场肢蹄病发病率最高,为28.8%;然后为使用稻壳的奶牛场,发病率为27.9%;使用沙子的奶牛场发病率最低,为26.1%;但使用不同牛床垫料的奶牛场发病率差异不显著(P>0.05)。修蹄方式“2次/年+日常”的奶牛场肢蹄病发病率(25.8%)显著低于修蹄方式“2次/年”的奶牛场(31.9%,P<0.05)。奶牛肢蹄病发病率随奶牛场蹄浴频次的增加呈下降的趋势,蹄浴频次为1次/周、2次/周、3次/周的奶牛场肢蹄病发病率分别为35.9%、28.3%、24.0%。奶牛肢蹄病发病率随胎次的增加呈上升的趋势,1,2,3,4,≥5胎奶牛发病率分别为24.7%、26.7%、29.2%、31.2%、34.0%。在不同体况奶牛中,体况肥胖的奶牛肢蹄病发病率最高,为35.9%;然后为体况消瘦的奶牛,发病率为32.3%;体况正常的奶牛肢蹄病发病率最低,为28.2%;但不同体况奶牛肢蹄病发病率差异不显著(P>0.05)。奶牛肢蹄病发病率随泌乳量的增加呈上升的趋势,年均泌乳量≤7.5 t、>7.5~9.0 t、>9.0~<10.5 t、≥10.5 t的奶牛肢蹄病发病率分别为26.0%、27.1%、29.4%、31.4%。在不同泌乳期中,处于泌乳早期的奶牛肢蹄病发病率最高,为9.3%;然后依次为泌乳中期和泌乳后期,发病率分别为7.9%、7.4%;处于围生期的奶牛肢蹄病发病率最低,为3.0%。说明2018—2020年蹄皮炎是黑龙江省奶牛主要的肢蹄病类型,季节、修蹄方式、蹄浴频次、胎次、泌乳量和泌乳时期等因素对奶牛肢蹄病发病率具有明显的影响。

关键词：黑龙江省奶牛肢蹄病跛行蹄皮炎

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β-羟基-β-甲基丁酸辅助治疗梅花鹿颈椎骨折病例分析

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动物医学进展 2023年第11期44卷 136-139页

作者：马天文李亚楠李新张佩高利魏成威东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 黑龙江东北农业大学动物临床教学医院黑龙江哈尔滨150030 黑龙江省动物疾病致病机制与比较医学重点实验室哈尔滨150030

在野外及自然保护区中梅花鹿出现骨折的病例较多,骨折后的致死率和致残率较高,该类疾病严重影响了梅花鹿的生活质量、野外救治及人工养殖场的经济效益。2022年8月7日,黑龙江省某自然保护区的1只3月龄梅花鹿出现四肢瘫痪症状,通过X光检... 详细信息

在野外及自然保护区中梅花鹿出现骨折的病例较多,骨折后的致死率和致残率较高,该类疾病严重影响了梅花鹿的生活质量、野外救治及人工养殖场的经济效益。2022年8月7日,黑龙江省某自然保护区的1只3月龄梅花鹿出现四肢瘫痪症状,通过X光检测确诊为颈椎骨折。根据其个体情况和骨折状况,采取食谱调整、限制运动、学步车辅助治疗、药物注射等中西医结合治疗方案,其中在食谱调整中重点补充β-羟基-β-甲基丁酸(β-hydroxy-β-methylbutyric acid,HMB)以促进肌肉蛋白合成,增加肌肉力量及耐力。治疗3周后幼鹿四肢反射渐进性恢复,疼痛感增强,肌肉紧张度较好松弛度较低。2个月后,幼鹿偶尔可以自主尝试站立,学步车内尝试正常走路的步伐增多,前后肢肌肉弹性增加。3个月后,幼鹿颈部活动自由,可以独立站立行走跑动,双侧肌肉对称,肌肉的神经反射正常。4个月后,幼鹿起卧自主,运动状态正常,放回室外保护区内自然饲养。论文记录了通过补充HMB和中西医结合治疗梅花鹿颈椎骨折从瘫痪到康复的救治过程,以期为野生动物颈椎骨折疾病的诊治提供新思路,为HMB在野生动物相关疾病中的应用提供参考。

关键词：梅花鹿颈椎骨折 β-羟基-β-甲基丁酸诊治

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白果内酯调控AMPK-SIRT3正反馈环路介导的线粒体生物发生改善ATDC5软骨细胞炎性损伤

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畜牧兽医学报 2024年第8期55卷 3714-3724页

作者：李亚楠马天文马玉辉魏成威东北农业大学动物医学学院黑龙江省动物疾病致病机制与比较医学重点实验室哈尔滨150030 新疆伊犁哈萨克自治州昭苏县畜牧兽医发展中心昭苏835500

旨在以AMPK-SIRT3正反馈环路为切入点,探讨白果内酯改善白介素1β(IL-1β)诱导的ATDC5软骨细胞炎性损伤的作用机制。采用IL-1β(10 ng·mL^(-1))诱导ATDC5软骨细胞炎性损伤来构建体外骨关节炎模型,随机分为对照组,IL-1β组,IL-1β... 详细信息

旨在以AMPK-SIRT3正反馈环路为切入点,探讨白果内酯改善白介素1β(IL-1β)诱导的ATDC5软骨细胞炎性损伤的作用机制。采用IL-1β(10 ng·mL^(-1))诱导ATDC5软骨细胞炎性损伤来构建体外骨关节炎模型,随机分为对照组,IL-1β组,IL-1β和白果内酯共同处理组,其中,共同处理组按照白果内酯的应用浓度又分为低、中和高(15、30和60μmol·L^(-1))3个不同剂量组。免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测各组软骨细胞中ADAMTS4、PGC-1a、Collagen Type II、MMP-3、NRF-1和Fis1的蛋白与mRNA表达情况。试剂盒检测各组ATP含量,并通过免疫荧光方法检测SIRT3表达水平。Western blot检测AMPK-SIRT3正反馈环路相关蛋白p-AMPK、AMPK和SIRT3表达水平。使用Compound C和3-TYP处理ATDC5软骨细胞,构建AMPK-SIRT3信号通路阻断模型,检测下游PGC-1a、NRF-1和Fis1蛋白变化。结果显示,白果内酯通过下调ADAMTS4和MMP-3表达(P<0.05),促进Type II collagen表达(P<0.05)来调节ECM代谢平衡,并促进ATP合成。在机制上,白果内酯干预软骨细胞后p-AMPK、SITR3、PGC-1a和NRF-1水平显著升高(P<0.05),而Fis1蛋白水平显著降低(P<0.05),并且使用Compound C和3-TYP预处理软骨细胞后,PGC-1a、NRF-1和Fis1蛋白水平被不同程度抑制。综上所述,白果内酯通过AMPK-SIRT3正反馈环路激活PGC-1a,调节线粒体生物发生改善ATDC5软骨细胞炎性损伤。

关键词：软骨细胞炎性损伤白果内酯 AMPK-SIRT3正反馈环路线粒体生物发生

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齐墩果酸抑制骨关节炎大鼠肌肉氧化损伤及软骨下骨异常骨重建

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畜牧兽医学报 2022年第11期53卷 4081-4088页

作者：马天文吕良钰于跃贾丽娜陈鸿汤继浪赵明超王新宇张建涛高利东北农业大学动物医学学院黑龙江省动物疾病致病机制与比较医学重点实验室哈尔滨150030

旨在探讨齐墩果酸(oleanolic acid,OLA)对于骨关节炎(osteoarthritis,OA)大鼠肌肉氧化损伤和软骨下骨异常骨重建的作用。选取18只Sprague-Dawley大鼠随机分为3组:对照组(CON组)、模型组(OA组)和齐墩果酸给药组(OLA组)。OA组和OLA组利用... 详细信息

旨在探讨齐墩果酸(oleanolic acid,OLA)对于骨关节炎(osteoarthritis,OA)大鼠肌肉氧化损伤和软骨下骨异常骨重建的作用。选取18只Sprague-Dawley大鼠随机分为3组:对照组(CON组)、模型组(OA组)和齐墩果酸给药组(OLA组)。OA组和OLA组利用前十字韧带切断联合半月板部分切除手术(ACLT+PMMx)建立大鼠膝OA模型,CON组进行假手术。OLA组大鼠每天灌胃50 mg·(kg·d)^(-1) OLA,CON组和OA组灌服等体积含20 mL·L^(-1) Tween 80的无菌生理盐水,连续给药4周后取膝关节、股四头肌和血清样本。利用伸膝发声试验和热敏感试验检测大鼠关节疼痛情况。酶联免疫吸附测定试验检测大鼠肌肉中柠檬酸合酶(citrate synthase,CS)、肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MHC)、白细胞介素1(interleukin 1,IL-1)和IL-6的水平,以及大鼠血清中骨钙素(osteocalcin,OCN)和Ⅰ型胶原羧基末端肽(C-terminal typeⅠcollagen telopeptide,CTX-Ⅰ)的水平。免疫印迹法检测肌肉组织Nrf2/NQO1/HO-1通路蛋白表达情况。微型计算机断层扫描(Micro-CT)用于软骨下骨扫描和骨组织显微结构定量分析。结果显示,与OA组比较,OLA可以降低OA疼痛评分(P<0.05),激活肌肉Nrf2/NQO1/HO-1通路,促进肌肉CS和MHC表达,并下调IL-1和IL-6水平(P<0.05)。此外,补充OLA后大鼠软骨下骨的骨体积分数(BV/TV)、骨矿物质密度(BMD)和骨小梁厚度(***)显著升高(P<0.05),骨代谢标志物OCN和CTX-Ⅰ表达显著降低(P<0.05)。结果提示,OLA能够抑制OA大鼠关节疼痛反应,通过调控Nrf2/NQO1/HO-1通路抑制OA大鼠肌肉功能障碍,改善OA早期软骨下骨生物力学性能和微结构改变,从而延缓OA大鼠软骨下骨异常骨重建的发生。

关键词：骨关节炎齐墩果酸软骨下骨肌肉氧化应激

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新藤黄酸通过调控KLF5表达影响犬骨肉瘤细胞干性与恶性生物学行为的研究

新藤黄酸通过调控KLF5表达影响犬骨肉瘤细胞干性与恶性生物学行为...

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中国畜牧兽医学会兽医外科学分会第十一次会员代表大会暨第26次学术研讨会

作者：张云彤范宏刚东北农业大学动物医学学院黑龙江省实验动物比较医学重点实验室

犬骨肉瘤（Osteosarcoma,OS）为一种起源于中胚层结缔组织的恶性肿瘤,肿瘤细胞以产生骨或类骨样物质为特点。由于犬OS发病隐匿、易复发和易转移等特性导致患病犬的生存期无法突破平台期。犬OS的形成、复发、耐药产生与远端转移均与干性... 详细信息

犬骨肉瘤（Osteosarcoma,OS）为一种起源于中胚层结缔组织的恶性肿瘤,肿瘤细胞以产生骨或类骨样物质为特点。由于犬OS发病隐匿、易复发和易转移等特性导致患病犬的生存期无法突破平台期。犬OS的形成、复发、耐药产生与远端转移均与干性细胞的驱动效应密切相关。有研究表明KLF转录因子5 （KLF transcription factor 5,KLF5）可对干性核心网络组件中的基因进行直接或间接调控,以实现癌干细胞的自我更新、分化,以及细胞的重编程作用。新藤黄酸（Gambogenic acid,GNA）属于黄酮类化合物,因其抗瘤谱广,毒副作用低等特点使其在肿瘤疾病治疗领域中逐渐受到关注。然而GNA是否对犬OS细胞系McKinley的干性特征产生影响及其作用机制仍不明确。因此,本研究旨在探究GNA对犬OS细胞干性与恶性生物学行为的影响,并明确KLF5是否为GNA发挥抗癌效应的关键分子靶点。为探究GNA对犬OS细胞的恶性生物学行为及干性转化的影响,首先利用CCK-8实验对GNA进行剂量筛选,围绕药物半数抑制浓度设定相关剂量范围,设置组别如下:空白组（OSc组）、0.24μM GNA处理组(OSc-GNA （L）组)、0.28μM GNA处理组(OSc-GNA（M）组)与0.32μM GNA处理组(OSc-GNA （H）组)。剂量确定后,依次进行平板克隆形成实验、细胞凋亡实验、划痕愈合实验、Transwell迁移与侵袭实验及肿瘤干细胞成球实验。随后探究GNA是否对犬OS干细胞的干性特征产生影响,设置组别包括OSc组、OSc组富集的犬OS干细胞组（OSc-stem组）与OSc-GNA （M）组富集的犬OS干细胞组(OSc-stem-GNA （M）组)。首先通过免疫荧光实验鉴定犬OS干细胞,其次对干性及上皮间充质转化的相关基因与蛋白的表达水平进行检测,再次进行碱性磷酸酶染色、茜素红染色及成骨相关分化蛋白的检测,以此共同评估GNA对犬OS干细胞的干性维持、上皮间充质转化及分化潜能的影响。最后探究KLF5是否作为GNA调控犬OS细胞干性及恶性生物学行为的关键靶点。设置组别包括:OSc组、质粒载体阴性对照组(OSc组)、KLF5过表达组(OSc组)、0.28μMGNA处理的阴性对照组(OSc-GNA （M）组)与0.28μM GNA处理的KLF5过表达组(OSc-GNA （M）组)进行细胞增殖、迁移与侵袭、凋亡及肿瘤干细胞成球的检测。再通过以上OSc组、OScNC组、OScNC-GNA （M）组、OSc组与OSc-GNA （M）组5组筛选富集出的犬OS干细胞进行干性维持、上皮间充质转化及分化潜能的检测,设置组别如下:OSc-stem组、OScNC-stem组、OScNC-stem-GNA （M）组、OSc-stem组与OSc-stem-GNA （M）组。试验结果表明:（1）与OSc组相比,GNA处理组的犬OS细胞增殖、迁移与侵袭能力均被抑制,犬OS细胞的凋亡率提高。表明GNA可抑制犬OS细胞恶性生物学行为（2）与OSc组相比,GNA处理组的犬OS干细胞球体形成总数降低。与OSc-stem组相比,OSc-stem-GNA （M）组的犬OS干细胞干性相关标志物及间充质表型标志物表达水平降低;OSc-GNA （M）组的成骨相关分化标志物极升高。表明GNA可抑制犬OS细胞的干性转化与犬OS干细胞的干性维持及上皮间充质转化,并诱导其分化潜能（3）犬OS细胞及组织中KLF5呈高表达模式,GNA降低KLF5的表达与入核水平。与OSc组相比,OSc组的犬OS细胞增殖、迁移、侵袭及干性转化能力均增强。OSc-GNA （M）组的犬OS细胞增殖、迁移、侵袭与干性转化能力强于OSc-GNA （M）组。与OSc-stem组相比,OSc-stem组犬OS干细胞干性及间充质表型标志物表达水平均升高;成骨相关分化标志物表达水平降低。OSc-stem-GNA （M）组的犬OS干细胞干性与间充质表型相关标志物表达水平及成骨分化潜能与OSc-stem-GNA （M）组相比均具有差异性。表明GNA通过调控KLF5表达影响犬OS细胞恶性生物学行为与细胞干性综上所述,GNA通过降低犬OS细胞中KLF5的表达与入核水平,抑制犬OS细胞恶性生物学行为与干性转化;GNA抑制犬OS干细胞的干性维持与上皮间充质转化并诱导其分化潜能。

关键词：犬骨肉瘤 McKinley细胞新藤黄酸 KLF5 细胞干性

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天然黄酮类化合物抗犬骨肉瘤细胞活性筛选及先导化合物新藤黄酸抗瘤机制的研究

天然黄酮类化合物抗犬骨肉瘤细胞活性筛选及先导化合物新藤黄酸抗...

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中国畜牧兽医学会兽医外科学分会第十一次会员代表大会暨第26次学术研讨会

作者：杨天元范宏刚东北农业大学动物医学学院黑龙江省实验动物比较医学重点实验室

犬骨肉瘤(Osteosarcoma,OS)是一种常见的发生于犬骨组织的恶性肿瘤,因其具有生长速度快,转移性强,化疗易产生耐药性等特性,在兽医领域OS是一种极难于诊疗的恶性肿瘤。犬OS在犬骨类肿瘤中占比高达80%以上,并多发于罗威纳犬、金毛寻回猎... 详细信息

犬骨肉瘤(Osteosarcoma,OS)是一种常见的发生于犬骨组织的恶性肿瘤,因其具有生长速度快,转移性强,化疗易产生耐药性等特性,在兽医领域OS是一种极难于诊疗的恶性肿瘤。犬OS在犬骨类肿瘤中占比高达80%以上,并多发于罗威纳犬、金毛寻回猎犬和拉布拉多犬等中、大型犬。OS患犬高预后不良及诊疗困难,给饲养家庭和基地带来沉重的经济和精神压力。探寻动物OS有效治疗药物及先进诊疗技术始终是兽医肿瘤性疾病防治领域的研究热点与难点。近年来发现部分黄酮类化合物具有高效且特异的抗瘤功效,使得这类化合物在多领域内研究不断深入。尽管当前用于犬OS诊疗的药物及技术手段众多,但整体疗效不尽人意,且现今常用的化药毒副作用和耐药现象较为明显,仍需对新型、低毒、有效药物进行系统科学地挖掘,同时揭示其深在作用机制,以便更为精准使用。内源竞争RNA机制(Competing endogenous RNAs,ceRNA)的阐明是肿瘤明确病因、准确诊断,以及科学治疗中重要的研究环节,基于此网络构建及试验验证可全面挖掘与显现肿瘤特异性编码及非编码RNA作为诊疗干预靶点的潜力。综上所述,本研究首先选用犬OS细胞系McKinley细胞,通过天然黄酮类小分子化合物库进行高通量药物筛选,并进行体内、外安全性评估及化合物抗瘤效用验证,确定抗犬OS有效的先导黄酮类化合物;然后通过高通量全转录组学测序、基因预测网络构建,以及双荧光素酶基因报告检测等生物及信息技术手段阐明先导黄酮类化合物对犬OS细胞的抗瘤机制。本试验选择使用犬OS细胞系,选择包含339种天然黄酮类化合物的小分子筛选库,使用30μM、10μM,以及5μM梯度孵育细胞基于对犬OS细胞毒性作用进行筛选,选择抑制率均高于50%的药物进行细胞毒性筛选及药物抗瘤曲线摸索,明确最低浓度药物。应用原代成骨细胞、犬肾细胞,以及裸鼠皮下移植瘤手段,从体内、外对先导化合物的抗瘤效用及安全性进行评估。体外应用先导化合物干预犬OS细胞恶性生物学行为明确其抗瘤效应,并建立差异细胞系进行全转录组学测序,筛选差异编码及非编码RNA,完成富集分析和ceRNA预测互作网络的构建,使用miRNA mimics和inhibitor、过表达质粒及siRNA对先导化合物抗犬OS细胞恶性生物学行为进行干预,完成预测机制的验证。通过双荧光素酶基因报告明确编码RNA与非编码RNA之间的靶向效果,最终阐明先导化合物抗瘤作用机制。(1)天然黄酮类化合物抗犬OS先导化合物的筛选及抗瘤作用的验证1)应用天然黄酮类化合物库中339个化合物以30 nM浓度孵育犬OS细胞48 h,抑制率高于50%的化合物共72个;10 nM浓度孵育犬OS细胞48 h,抑制率高于50%化合物共29个;5 nM浓度孵育犬OS细胞48 h,抑制率高于50%化合物共10个。通过较大剂量范围初步拟合计算各有效化合物对犬OS细胞抑制率接近50%的浓度,分别约为补骨脂查耳酮(4.05 hM)、p-倒捻子素(3 hM)、光甘草醇(4.3 hM)、苦参醇A (4.77 nM)、桑根皮素(4.47HM)、山竹子素(2.5nM)、新藤黄酸(Gambogenicacid,GNA)(0.4nM)、异银杏素(2.75HM)、银杏黄素(1.2nM)、紫花杜荆素(1.51 nM),其中有效浓度最低的为新藤黄酸,有效浓度最高的为苦参醇A。2)通过多层级梯度浓度干预,准确绘制GNA抑制犬OS细胞曲线,明确GNA对犬OS准确IC50值为280nM。提取犬原代成骨细胞通过ALP、OCN、OPN,以及RUNX2免疫荧光染色成功鉴定并应用于GNA安全性评估。GNA浓度为360 nM对犬OS细胞抑制率接近100%,但对犬原代成骨细胞及犬肾细胞的抑制率均低于50%。选择GNA对犬OS细胞抑制率约为30%、50%,以及70%的3个剂量240 nM、280 nM,以及320 nM干预48 h后发现,GNA能够显著抑制犬OS细胞增殖水平、平板克隆形成作用、细胞划痕愈合能力、Transwell小室迁移及侵袭能力,并促进OS细胞凋亡、阻滞细胞周期处于G0/G1期,GNA对上述恶性生物学行为的抑制作用均体现出剂量依赖性。在体外研宄中表明,GNA能够显著抑制犬OS细胞的恶性生物学行为,并且对犬成骨细胞及犬肾细胞具有较低毒性作用。3)对Balb/c-nude裸鼠进行皮下注射犬OS细胞制造56d裸鼠皮下移植瘤模型,GNA(4 mg/kg)隔1 d进行腹腔注射。结果显示相比于control组,GNA组裸鼠成瘤的生长趋势、瘤体的体积及重量均显著受到抑制。在病理结构上观察犬OS细胞在56 d裸鼠成瘤模型构建后没有产生显著的器官迁移现象,并且GNA对心脏、肝脏、脾脏、肾脏,以及肺脏的病理结构没有显著影响。表明GNA在体内能够显著抑制犬OS细胞成瘤效应,并且具备脏器

关键词：犬骨肉瘤新藤黄酸 miRNA-138a 天然化合物库 McKinley细胞

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绿原酸通过肠肝轴缓解慢性应激致大鼠肝损伤的机制研究

绿原酸通过肠肝轴缓解慢性应激致大鼠肝损伤的机制研究

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中国畜牧兽医学会兽医外科学分会第十一次会员代表大会暨第26次学术研讨会

作者：赵元范宏刚东北农业大学动物医学学院黑龙江省实验动物比较医学重点实验室

在兽医临床中,慢性应激较为常见,且常引起动物的肝脏损伤,并促进肝脏疾病的发生发展,加重其严重程度,严重危害畜禽生长发育,降低畜禽产品品质。近年来研究发现肠道菌群紊乱与肝脏疾病的发生发展密切相关。因此,以肠道菌群为出发点探究... 详细信息

在兽医临床中,慢性应激较为常见,且常引起动物的肝脏损伤,并促进肝脏疾病的发生发展,加重其严重程度,严重危害畜禽生长发育,降低畜禽产品品质。近年来研究发现肠道菌群紊乱与肝脏疾病的发生发展密切相关。因此,以肠道菌群为出发点探究慢性应激致肝脏损伤的作用机制及筛选安全有效防治药物已经成为兽医学和医学领域的研究热点。绿原酸（Chlorogenic acid,CGA）是中药金银花的关键有效成分之一,具有来源广、易提取、价格低廉的特点。目前研究证明CGA对肝脏、肠道、肾脏等器官具有很好的保护作用,而新近的多项研究发现CGA对肠道菌群的调控是其发挥器官保护作用的重要机制。因此,本试验利用16S rDNA、非靶向代谢组及转录组测序技术分别检测肠道（回肠与结肠）内菌群变化、血清中代谢产物改变及肝脏基因转录情况,将肠道菌群、代谢、肝脏联系起来,从而阐明CGA缓解慢性应激致肝损伤的具体作用机制。为了探究CGA对慢性应激致肝损伤的影响及干预机制,本试验首先选取36只雄性Wistar大鼠用于CGA剂量筛选试验,36只大鼠随机均分为6组,分别为CON组、CON+CAH组（150 mg/kg CGA）、CRS组、CRS+CAL组（50 mg/kg CGA）、CRS+CAM组（100mg/kg CGA）和CRS+CAH （150 mg/kg CGA）组。应激程序为连续21d的束缚应激（每天6 h）。造模期间记录大鼠体重及采食量变化。造模结束后,通过检测大鼠行为学变化、血清中皮质酮（Corticosterone,CORT）含量,验证模型是否成功。通过检测大鼠肝脏系数、肝脏结构、肝脏功能、氧化应激、细胞凋亡及炎症因子水平明确不同剂量CGA对慢性应激引起的肝损伤的保护效果,并筛选CGA的最佳保护剂量。然后另取18只雄性Wistar大鼠用于CGA保护机制探究试验,18只大鼠随机均分为3组,分别为CON组、CRS组、CRS+CGA组（100mg/kg CGA）。连续21d的束缚应激（每天6 h）后,进行模型验证。通过观测肠道（回肠与结肠）组织病理学变化、肠道（回肠及结肠）超微结构变化、肠道（回肠及结肠）紧密连接结构、血清中脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）含量、肠道菌群（回肠及结肠）、血清代谢物、肝脏基因转录及相关基因表达情况阐明CGA缓解慢性应激致肝损伤的保护作用机制。（1）不同剂量CGA对慢性应激致大鼠肝损伤的作用效果试验结果表明:1)慢性应激后,大鼠血清中CORT水平明显升高;行为学检测发现大鼠运动轨迹集中在边缘且范围小,总路程、中央区域停留时间、跨格次数、站立次数均明显降低,大鼠出现抑郁样行为。表明慢性应激模型建立成功。2)慢性应激后,大鼠平均日增重、日采食量、肝脏系数均降低。低剂量CGA干预后上述指标无明显缓解作用。中高剂量CGA干预后上述指标均明显增加。表明中高剂量CGA能够明显缓解慢性应激对大鼠体重、采食量、肝脏系数的影响。3)慢性应激后,大鼠肝脏功能指标ALT和AST明显升高,低剂量CGA干预后ALT和AST无明显变化。中高剂量CGA千预后ALT和AST指标均明显降低。表明中高剂量CGA能够缓解慢性应激引起的肝脏功能障碍。4)慢性应激后,组织病理学检测发现大鼠肝脏肝索排列不整齐,肝细胞肿胀且淡染,颗粒变性,肝细胞核裂解、消失。低剂量CGA干预肝脏并未缓解结构损伤。而中高剂量CGA干预后,大鼠肝脏结构较为完整,肝细胞肿胀较少。肝脏超微结构观察结果显示,慢性应激后肝细胞结构紊乱,线粒体肿胀、嵴消失,内质网扩张、肿胀,胞质中出现较多空泡、细胞核皱缩。低剂量CGA干预后,肝细胞损伤未得到缓解,而中高剂量CGA干预后,肝细胞结构相对完整,内质网与线粒体结构较为清晰。表明中高剂量CGA干预能够明显修复慢性应激引起的肝脏结构损伤。5)慢性应激后,大鼠肝脏ROS荧光强度、MDA水平明显升高,SOD、GSH、CAT水平明显降低。低剂量CGA干预降低MDA水平并升高SOD、GSH、CAT水平,但未降低ROS荧光强度。中高剂量CGA干预明显降低ROS荧光强度、MDA水平并升高SOD、GSH、CAT水平。表明中高剂量CGA的抗氧化效果更好,能够缓解慢性应激引起的肝脏氧化应激损伤。6)慢性应激后,大鼠肝脏炎症因子（IL-6和TNF-a）蛋白表达量水平、细胞凋亡蛋白Cleaved caspase-3表达量明显升高。低剂量CGA干预对以上3个指标无明显影响。中高剂量CGA明显降低IL-6、TNF-a、Cleaved caspase-3水平。表明中高剂量CGA能够缓解肝脏炎症与细胞凋亡。（2） CGA缓解慢性应激致大鼠肝损伤的作用机制探究:1)肠道组织病理学检测结果显示,慢性应激后回肠损伤严重,肠上皮细胞脱落、局部出现炎性细胞浸润;结肠损伤较轻,仅见少量炎性细胞浸润

关键词：绿原酸慢性应激肝脏损伤肠道菌群代谢组学

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氯胺酮对发育期大鼠肝脏氧化应激和细胞焦亡的影响

引用

东北农业大学学报 2022年第6期53卷 57-64页

作者：张志恒白荟申美伦邱迪李思瑶高利东北农业大学动物医学学院黑龙江省动物疾病发生机制与比较医学重点实验室哈尔滨150030

为探讨氯胺酮麻醉对发育期大鼠肝脏氧化应激和细胞焦亡的影响。7日龄SD大鼠连续注射氯胺酮,对照组注射生理盐水,检测大鼠肝脏病理组织学、肝功能指标、氧化应激水平和炎性细胞因子含量;Western blott和qPCR法检测焦亡相关蛋白和mRNA表... 详细信息

为探讨氯胺酮麻醉对发育期大鼠肝脏氧化应激和细胞焦亡的影响。7日龄SD大鼠连续注射氯胺酮,对照组注射生理盐水,检测大鼠肝脏病理组织学、肝功能指标、氧化应激水平和炎性细胞因子含量;Western blott和qPCR法检测焦亡相关蛋白和mRNA表达含量。结果表明,与对照组相比,氯胺酮组大鼠肝脏结构受损、肝功能指标降低、氧化应激和炎性细胞因子水平增加、细胞焦亡水平(NLRP3、ASC、caspase-1和GSDMD蛋白和mRNA)上调。可知,氧化应激和细胞焦亡参与氯胺酮诱导肝损伤的发病过程,为氯胺酮在兽医临床应用及肝损伤机制提供理论依据和参考。

关键词：氯胺酮肝损伤发育期大鼠细胞焦亡氧化应激

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右美托咪定对氯胺酮致发育期大鼠神经损伤的影响

引用

畜牧兽医学报 2021年第8期52卷 2302-2308页

作者：张志恒白荟申美伦马相影李柔茜金箫笛高利东北农业大学动物医学学院黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150030

本研究旨在探讨右美托咪定干预氯胺酮致发育期大鼠神经损伤的影响及其可能的机制。7日龄SD大鼠随机分为对照组、氯胺酮组(氯胺酮20 mg·kg^(-1)腹腔注射,每1.5 h注射1次,共5次)、右美托咪定组(右美托咪定腹腔注射15μg·kg^(-1)... 详细信息

本研究旨在探讨右美托咪定干预氯胺酮致发育期大鼠神经损伤的影响及其可能的机制。7日龄SD大鼠随机分为对照组、氯胺酮组(氯胺酮20 mg·kg^(-1)腹腔注射,每1.5 h注射1次,共5次)、右美托咪定组(右美托咪定腹腔注射15μg·kg^(-1))和氯胺酮+右美托咪定组(氯胺酮注射前30 min,腹腔注射15μg·kg^(-1)右美托咪定)。最后1次给药90 min后,取大脑组织固定后进行尼氏染色;测定海马和皮质组织中CAT、GSH、MDA、IL^(-1)β和IL^(-1)8的含量。尼氏染色结果显示,与对照组相比右美托咪定预先用药可以缓解氯胺酮导致的海马CA1区、CA3区和皮质区的神经元丢失。右美托咪定预处理还可以显著降低(P<0.05)海马和皮质MDA、IL^(-1)β和IL^(-1)8水平,显著增加(P<0.05)CAT和GSH含量。综上表明,右美托咪定预处理能够有效降低海马和皮质MDA水平、增加CAT和GSH含量,并抑制炎症因子IL^(-1)β和IL^(-1)8的分泌,在氯胺酮致发育期大鼠神经损伤时发挥神经保护作用。

关键词：氯胺酮右美托咪定发育期大鼠认知功能障碍氧化应激

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