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黑龙江畜牧兽医 2017年第5期 16-19,29,290页

作者：杨莉莉李辉张慧农业部鸡遗传育种重点实验室哈尔滨150030 黑龙江省普通高等学校动物遗传育种与繁殖重点实验室哈尔滨150030 东北农业大学动物科学技术学院哈尔滨150030

为了研究鸡视网膜母细胞瘤基因1(RB1基因)的结构和功能,试验采用生物信息学的方法,选择NCBI数据库上RB1基因的氨基酸序列,从物种间的蛋白理化性质、信号肽、蛋白磷酸化、结构域、Motif和三维结构等方面对鸡RB1基因的结构和功能进行了分... 详细信息

为了研究鸡视网膜母细胞瘤基因1(RB1基因)的结构和功能,试验采用生物信息学的方法,选择NCBI数据库上RB1基因的氨基酸序列,从物种间的蛋白理化性质、信号肽、蛋白磷酸化、结构域、Motif和三维结构等方面对鸡RB1基因的结构和功能进行了分析和预测。结果表明:鸡与哺乳动物之间序列的同源性很高。鸡RB1基因具有结构域和磷酸化等位点,没有信号肽和跨膜区。成熟肽与模板4elj.1.A有73.16%的氨基酸序列一致。说明RB1基因可以调控细胞的生长发育。

关键词：鸡视网膜母细胞瘤基因1(RB1基因) 生物信息学结构与功能分析预测

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长链非编码RNA NRON调控脂肪生成作用的研究

长链非编码RNA NRON调控脂肪生成作用的研究

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中国畜牧兽医学会家禽学分会第十八次全国家禽学术讨论会

作者：董翔宇姜修英高卓然李辉杜志强农业部鸡遗传育种重点实验室黑龙江省普通高等学校动物遗传育种与繁殖重点实验室东北农业大学动物科学技术学院黑龙江哈尔滨150030

1引言NRON最初在表达序列标签测序项目中被筛选出来，被认为是活化T细胞核因子NFAT(nuclear factor of acti-vated T cells)的长链非编码RNA抑制物.NFAT调控免疫反应基因的转录，近年来被发现与脂肪细胞分化有关.NFAT的脱磷酸化由钙调... 详细信息

1引言NRON最初在表达序列标签测序项目中被筛选出来，被认为是活化T细胞核因子NFAT(nuclear factor of acti-vated T cells)的长链非编码RNA抑制物.NFAT调控免疫反应基因的转录，近年来被发现与脂肪细胞分化有关.NFAT的脱磷酸化由钙调磷酸酶(Calcineurin)调节，而且钙调磷酸酶还参与溶酶体和自噬信号通路.本研究着重于探究NRON如何通过影响NFAT参与调控脂肪生成的分子机制.

关键词：鸡 NRON NFAT 脂肪生成

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鸡miR-17-92基因簇上游调控区功能分析

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遗传 2016年第8期38卷 724-735页

作者：程敏张文建邢天宇闫晓红李玉茂李辉王宁农业部鸡遗传育种重点实验室哈尔滨150030 黑龙江省普通高等学校动物遗传育种与繁殖重点实验室哈尔滨150030 东北农业大学动物科学技术学院哈尔滨150030

miR-17-92基因簇(miR-17-92 cluster)在细胞增殖、分化、凋亡、动物发育以及肿瘤发生等过程中发挥重要作用。目前,人和小鼠等哺乳动物miR-17-92基因簇的转录调控已有深入研究,但该基因簇在鸡等鸟类中的转录调控研究还未见报道,主要原因... 详细信息

miR-17-92基因簇(miR-17-92 cluster)在细胞增殖、分化、凋亡、动物发育以及肿瘤发生等过程中发挥重要作用。目前,人和小鼠等哺乳动物miR-17-92基因簇的转录调控已有深入研究,但该基因簇在鸡等鸟类中的转录调控研究还未见报道,主要原因在于鸟类miR-17-92基因簇上游的基因组序列都存在一个gap,且该基因簇启动子的位置和序列也还不清楚。为此,本研究采用染色体步移的方法获得鸡miR-17-92基因簇上游gap区序列,并采用生物信息学分析和报告基因及截短突变技术开展该gap区的功能分析。染色体步移分析发现,鸡miR-17-92基因簇上游gap区全长1704 bp,GC含量达80.11%。生物信息学分析显示,鸡miR-17-92基因簇上游gap区内1段200 bp的序列与人、牛、小鼠等9种动物miR-17-92基因簇上游序列保守性较高,且该区域为人和小鼠等哺乳动物miR-17-92基因簇宿主基因的核心启动子区。将克隆的gap区序列插入pGL3 basic荧光素酶报告基因载体,构建成启动子荧光素酶报告基因载体pGL3-cMIR17HG(-4228/-2506)。荧光素酶报告基因活性分析表明,p GL3-c MIR17HG(-4228/-2506)报告基因的活性是pGL3 basic空载体活性的417倍,证明所克隆的gap区片段是鸡miR-17-92基因簇宿主基因的启动子。为进一步分析该启动子的结构和功能,构建gap区片段的5'端缺失突变(缺失448 bp)和3'端缺失突变(缺失894 bp)的荧光素酶报告基因载体。与pGL3-cMIR17HG(-4228/-2506)相比,5'端和3'端缺失突变分别使启动子报告基因活性降低19.82%和60.14%。这些数据提示,鸡miR-17-92基因簇宿主基因启动子的重要调控区位于-3400/-2506。本研究结果为进一步开展鸡miR-17-92基因簇的转录调控奠定了基础。

关键词：鸡 miR-17-92基因簇启动子转录调控

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鸡Perilipin1基因的克隆及亚细胞定位

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农业生物技术学报 2016年第10期24卷 1560-1568页

作者：秦菲悦周纬男王彦博程博涵李辉王宇祥东北农业大学动物科学技术学院/农业部鸡遗传育种重点实验室/黑龙江省普通高等学校动物遗传育种与繁殖重点实验室

本研究旨在克隆鸡（Gallus gallus）脂滴包被蛋白基因（Perilipin1）的c DNA序列,并检测其在鸡前脂肪细胞分化过程中的亚细胞定位。本研究以7周龄肉鸡腹部脂肪组织为材料,采用RT-PCR和RACE的方法扩增并克隆了鸡Perilipin1基因的5’UTR、... 详细信息

本研究旨在克隆鸡（Gallus gallus）脂滴包被蛋白基因（Perilipin1）的c DNA序列,并检测其在鸡前脂肪细胞分化过程中的亚细胞定位。本研究以7周龄肉鸡腹部脂肪组织为材料,采用RT-PCR和RACE的方法扩增并克隆了鸡Perilipin1基因的5’UTR、CDS和3’UTR片段,分析了该基因的结构;以鸡原代前脂肪细胞为材料,利用免疫荧光及激光共聚焦技术,在诱导分化的不同时间点（12;20 h）,检测了鸡Perilipin1在前脂肪细胞中的表达位置。结果表明,本研究获得的鸡Perilipin1基因5’UTR、CDS和3’UTR序列总长度为2 379 bp,该基因由9个外显子、8个内含子组成（ATG位于第二外显子上）;在鸡原代前脂肪细胞诱导分化过程中,Perilipin1始终包被在脂滴周围。综上,本研究成功克隆了鸡Perilipin1基因的完整c DNA序列并确定了Perilipin1在鸡前脂肪细胞分化过程中与脂滴的空间位置关系,该结果为深入开展鸡Perilipin1基因的功能研究,揭示鸡脂肪代谢的分子遗传机理提供了重要的理论依据。

关键词：鸡脂滴包被蛋白克隆亚细胞定位

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鸡Perilipin1基因启动子的克隆及分析

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畜牧兽医学报 2016年第2期47卷 249-259页

作者：周纬男史铭欣乔书培史洪岩王宇祥东北农业大学动物科学技术学院农业部鸡遗传育种重点实验室黑龙江省普通高等学校动物遗传育种与繁殖重点实验室哈尔滨150030

旨在研究鸡脂滴包被蛋白基因(Perilipin1,Plin)启动子的结构及特征。本研究采用PCR方法扩增了鸡Perilipin1基因5′侧翼区约2kb的DNA片段,并对其进行了克隆、测序及生物信息学分析;同时,构建了其全长及系列截短突变的报告基因表达载体,... 详细信息

旨在研究鸡脂滴包被蛋白基因(Perilipin1,Plin)启动子的结构及特征。本研究采用PCR方法扩增了鸡Perilipin1基因5′侧翼区约2kb的DNA片段,并对其进行了克隆、测序及生物信息学分析;同时,构建了其全长及系列截短突变的报告基因表达载体,瞬时转染鸡胚成纤维细胞系(DF-1),用双荧光素酶报告基因系统测定了荧光素酶活性,确定了该基因的核心启动子区域。生物信息学分析结果表明,鸡Perilipin1基因的启动子区不存在典型的TATA box结构和CpG岛,但可能存在TFIID、Sp1、AP2、PPAR、RXR、SREBP1、C/EBP、GATA、ER、KLF5等多个转录因子结合位点;报告基因分析结果表明,本研究克隆的鸡Perilipin1基因启动子能够极显著地启动报告基因的表达(P<0.01),并且随着启动子片段由5′端逐渐截短,报告基因活性表现出逐渐增强的趋势,其中-360/-11片段具有最强的报告基因活性。综上表明,鸡Perilipin1基因-360/-11区域的启动子片段具有最强的转录活性,包含该基因的核心启动子序列。

关键词：鸡脂滴包被蛋白启动子克隆分析

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鸡PPARγ1启动子的转录调控分析

鸡PPARγ1启动子的转录调控分析

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中国畜牧兽医学会家禽学分会第十八次全国家禽学术讨论会

作者：崔婷婷邢天宇褚衍凯李辉王宁农业部鸡遗传育种重点实验室黑龙江哈尔滨150030 黑龙江省普通高等学校动物遗传育种与繁殖重点实验室黑龙江哈尔滨1500303 东北农业大学动物科学技术学院黑龙江哈尔滨150030

1引言过氧化物酶体增殖物激活受体γ(Peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPARγ)属于核内激素受体超家族,PPARγ是人、鼠、鸡等动物脂肪生成的关键转录调控因子。人和鼠PPARγ基因是一个多启动子调控的基因,人的PPARγ... 详细信息

1引言过氧化物酶体增殖物激活受体γ(Peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPARγ)属于核内激素受体超家族,PPARγ是人、鼠、鸡等动物脂肪生成的关键转录调控因子。人和鼠PPARγ基因是一个多启动子调控的基因,人的PPARγ基因有4个不同的启动子,鼠的PPARγ基因有2个启动子。先前认为鸡的PPARγ基因只有一个启动子,但我们最近研究发现,鸡PPARγ基因也是多启动子调控的基因,鸡的PPARγ基因有3个不词的启动子(PPARγ1-3)。哺乳动物的PPARγ1基因启动子转录调控研究已有许多报道,但是鸡PPARγ1启动子的转录调控还不清楚,为此,本文开展鸡PPARγ1启动子的转录调控分析。

关键词： PPARγ1启动子 Nuclear respiratory factor 1(NRF1) 启动子活性转录调控

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PCSK1基因多态性与黄羽肉鸡生长和体组成性状的关联分析

PCSK1基因多态性与黄羽肉鸡生长和体组成性状的关联分析

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中国畜牧兽医学会家禽学分会第十八次全国家禽学术讨论会

作者：杨莉莉于家强李辉张慧农业部鸡遗传育种重点实验室黑龙江哈尔滨150030 黑龙江省普通高等学校动物遗传育种与繁殖重点实验室黑龙江哈尔滨150030 东北农业大学动物科学技术学院黑龙江哈尔滨150030

1引言黄羽肉鸡是指含有一定我国地方鸡种血缘的黄羽、麻羽等肉用型鸡种的统称，是具有我国特色的肉鸡类型.黄羽肉鸡按生长速度分为快速、中速和慢速三种类型，目前国内黄羽肉鸡以中速型和慢速型为主，其中以慢速型黄羽肉鸡最具特色.PCSK... 详细信息

1引言黄羽肉鸡是指含有一定我国地方鸡种血缘的黄羽、麻羽等肉用型鸡种的统称，是具有我国特色的肉鸡类型.黄羽肉鸡按生长速度分为快速、中速和慢速三种类型，目前国内黄羽肉鸡以中速型和慢速型为主，其中以慢速型黄羽肉鸡最具特色.PCSK1基因是蛋白前体加工酶(proprotein convertase)家族成员.PCSK1基因主要在神经以及内分泌组织中表达，并且对能量代谢有重要的调节作用，包括胰岛素前体、POMC前体以及胰高血糖素前体的代谢.近年来研究表明PCSK1基因可能与食物的消化吸收有关或是一种神经趋化因子，通过调节机体的饱胀感而影响摄食行为，从而影响脂肪的沉积.然而至今未见到有关PCSK1基因与鸡体脂性状关系的研究报道.实验室前期研究结果显示，鸡PCSK1基因与东北农业大学高低脂双向选择系肉鸡的腹脂性状存在显著相关.本研究拟以PCSK1基因作为影响鸡腹脂沉积的重要基因，以黄羽肉鸡为实验材料，在全基因范围内分析PCSK1基因的序列变异与鸡体脂性状之间的相关，筛选影晌腹脂沉积的重要突变.

关键词：黄羽肉鸡 PCSK1 多态性生长和体组成性状关联分析

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鸡miR-19a、miR-19b通过靶向抑制LIN9促进前脂肪细胞增殖

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中国生物化学与分子生物学报 2016年第8期32卷 943-952页

作者：宋鹤张潇飞褚衍凯邢天宇闫晓红李辉王宁农业部鸡遗传育种重点实验室黑龙江省普通高等学校动物遗传育种与繁殖重点实验室东北农业大学动物科学技术学院哈尔滨150030

miR-17-92基因簇编码包括miR-19a、miR-19b在内的至少6个miRNA,在鸡细胞的增殖、分化、凋亡及发育等多种生物学过程中发挥重要作用,但其作用机制尚不清楚。生物信息学分析显示,细胞周期调控子LIN9是miR-17-92基因簇成员miR-19a和miR-19... 详细信息

miR-17-92基因簇编码包括miR-19a、miR-19b在内的至少6个miRNA,在鸡细胞的增殖、分化、凋亡及发育等多种生物学过程中发挥重要作用,但其作用机制尚不清楚。生物信息学分析显示,细胞周期调控子LIN9是miR-17-92基因簇成员miR-19a和miR-19b的潜在靶点。为验证这一预测,构建含野生型LIN9 3'-UTR荧光素酶报告基因载体(psi-CHECK2-LIN9-3'-UTR-WT)及突变型报告基因载体(psi-CHECK2-LIN9-3'-UTR-MUT),开展靶标LIN9的鉴定。复合转染结合报告基因酶活性测定结果表明,过表达miR-19a和miR-19b能显著抑制含野生型LIN9 3'-UTR的报告基因表达,而过表达miR-19a和miR-19b抑制剂显著提高野生型LIN9 3'-UTR报告基因的表达。实时定量PCR(RT-q PCR)证明,miR-19a和miR-19b抑制剂对内源性LIN9 mRNA的表达没有影响,提示miR-19a和miR-19b可能不是通过降解mRNA调控LIN9表达。转染结合CCK-8细胞增殖分析显示,在鸡前脂肪细胞过表达LIN9明显抑制细胞增殖。与此相一致的是,细胞增殖标志分子Cyclin D1、c-Myc、PCNA、Ki67的mRNA表达量明显降低。本研究证实,LIN9是miR-17-92基因簇成员miR-19a和miR-19b的靶标,同时证实,LIN9抑制鸡前脂肪细胞的增殖。是否miR-17-92基因簇编码的其它mi-RNA成员也以LIN9为靶标尚不得而知,我室正在研究中。

关键词： miR-17-92基因簇 LIN9 细胞增殖鸡前脂肪细胞

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鸡PPARγ基因5'UTR区对其转录后水平的调控分析

鸡PPARγ基因5'UTR区对其转录后水平的调控分析

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中国畜牧兽医学会家禽学分会第十八次全国家禽学术讨论会

作者：褚衍凯牟芳靳艳飞邢天宇马广伟李辉王宁农业部鸡遗传育种重点实验室黑龙江哈尔滨150030 黑龙江省普通高等学校动物遗传育种与繁殖重点实验室黑龙江哈尔滨150030 东北农业大学动物科学技术学院黑龙江哈尔滨150030

1引言mRNA的5'非翻译区(5'UTR)在真核生物基因表达调控中具有重要作用。目前已在5'UTR区鉴定出许多顺式调控元件，包括5'帽结构、翻译起始基序、上游AUG密码子(uAUGs)、上游开放阅读框(uORFs)、内部核糖体进入位点(IRES... 详细信息

1引言mRNA的5'非翻译区(5'UTR)在真核生物基因表达调控中具有重要作用。目前已在5'UTR区鉴定出许多顺式调控元件，包括5'帽结构、翻译起始基序、上游AUG密码子(uAUGs)、上游开放阅读框(uORFs)、内部核糖体进入位点(IRES)、5'末端寡嘧啶区(5'TOPs)和G-四链体(G-quadruplexes)等，这些调控元件能在转录后及翻译水平调控基因表达。哺乳动物mRNA 5'UTR的调控研究颇多，但是目前尚无禽类5'UTR区转录后及翻译水平的调控分析。本实验室前期研究发现，鸡PPARγ基因是一个多启动子调控的基因。由于多启动子的使用以及选择性拼接，鸡可产生5个5'端不同的PPARγ转录异构体(cPPARγ 1-5)。鸡PPARγ基因5个转录异构体的5'UTR的长度和序列差异较大，提示这5个转录异构体的5'UTR对鸡PPARγ基因转录后和翻译水平上的调控作用可能不同。

关键词：鸡 PPARγ基因 5'UTR 转录后调控

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高、低脂系肉鸡脂肪组织ApoA-I基因启动子区甲基化的分析

高、低脂系肉鸡脂肪组织ApoA-I基因启动子区甲基化的分析

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中国畜牧兽医学会家禽学分会第十八次全国家禽学术讨论会

作者：武春艳姜修英王宇祥王宁李辉农业部鸡遗传育种重点实验室黑龙江哈尔滨150030 黑龙江省普通高等学校动物遗传育种与繁殖重点实验室黑龙江哈尔滨150030 东北农业大学动物科学技术学院黑龙江哈尔滨150030

1引言载脂蛋白A-I(Apolipoprotein A-I,ApoA-I)是血浆高密度脂蛋白(High density lipoprotein,HDL)的主要成分,在动物脂质代谢、转运及血脂水平的维持中发挥重要作用,特别是在胆固醇的逆转运过程中起关键作用。人和小鼠上的研究报道表明... 详细信息

1引言载脂蛋白A-I(Apolipoprotein A-I,ApoA-I)是血浆高密度脂蛋白(High density lipoprotein,HDL)的主要成分,在动物脂质代谢、转运及血脂水平的维持中发挥重要作用,特别是在胆固醇的逆转运过程中起关键作用。人和小鼠上的研究报道表明,ApoA-I的表达受到DNA甲基化的调控,但是禽类脂肪组织中ApoA-I表达是否受甲基化影响还不清楚。本实验室前期研究发现,ApoA-I蛋白在低脂系中的表达水平显著高于高脂系,本研究对高、低脂系肉鸡脂肪组织ApoA-I启动子区的甲基化水平进行了分析,本研究结果有助于揭示ApoA-I基因在两系脂肪组织中差异表达的分子机理。

关键词：鸡脂肪组织 ApoA-I DNA甲基化

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