检索结果-内蒙古大学图书馆

白桦环阿齐醇合成酶(CAS)基因与达玛烯二醇合成酶(DS)基因的双基因RNA干扰载体构建

植物研究 2015年第3期35卷 355-362页

作者：梁甜马泓思尹静詹亚光张梦岩东北林业大学生命科学学院哈尔滨150040 东北林业大学林学院林木遗传育种与生物技术国家重点实验室哈尔滨150040

环阿齐醇合成酶(Cycloartenol synthase,CAS)和达玛烯二醇合成酶(Dammarenediol synthase,DS)为白桦三萜合成过程分支途径关键酶基因,对CAS和DS基因的抑制或沉默将有利于三萜前体-2,3氧化角鲨烯向目标产物白桦脂醇和齐墩果酸合成。利用... 详细信息

环阿齐醇合成酶(Cycloartenol synthase,CAS)和达玛烯二醇合成酶(Dammarenediol synthase,DS)为白桦三萜合成过程分支途径关键酶基因,对CAS和DS基因的抑制或沉默将有利于三萜前体-2,3氧化角鲨烯向目标产物白桦脂醇和齐墩果酸合成。利用同源序列PCR方法及pRNAi-GG新型载体,进行DS单基因RNAi及DS与CAS双基因RNAi载体的构建。结果显示,分别克隆获得CAS和DS c DNA序列长度为300和509 bp,Blast同源序列比对与已知日本白桦BPX1和OSCBPD相似度为100%和92%。依据基因RNAi引物设计及pRNAi-GG使用原则,分别将CAS、DS的正向片段和反向片段有序地连接到pRNAi-GG载体PDK内含子两侧,并转化大肠杆菌Trans1-T1中,经PCR及克隆测序验证,获得白桦DS单基因和CAS、DS双基因干扰载体,并通过三亲杂交方法分别获得含有两个RNAi载体的工程农杆菌菌株。该研究为进一步通过基因工程手段阻断白桦三萜分支途径及促进前体物质向目标产物白桦酯醇和齐墩果酸方向合成奠定了基础。

关键词：白桦三萜 RNA干扰载体环阿齐醇合成酶(CAS) 达玛烯二醇合成酶(DS)

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Ca^(2+)在介导MeJA诱导白桦悬浮培养三萜合成中的作用

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植物研究 2015年第1期35卷 117-126页

作者：马泓思潘亚婕王艳尹静詹亚光赵微张梦岩梁甜东北林业大学生命科学学院哈尔滨150040 东北林业大学林学院林木遗传育种与生物技术国家重点实验室哈尔滨150040

以白桦细胞为试材,通过在悬浮培养第七天进行Me JA、Ca Cl2及其互作处理,研究Ca2+在Me JA诱导白桦三萜合成中的作用。结果表明,Me JA处理后显著促进白桦细胞中总三萜和齐墩果酸的合成,分别于48 h达到最高积累量46.90和1.31 mg·g-1... 详细信息

以白桦细胞为试材,通过在悬浮培养第七天进行Me JA、Ca Cl2及其互作处理,研究Ca2+在Me JA诱导白桦三萜合成中的作用。结果表明,Me JA处理后显著促进白桦细胞中总三萜和齐墩果酸的合成,分别于48 h达到最高积累量46.90和1.31 mg·g-1。Me JA+EGTA和Me JA+La Cl3·7H2O处理,均降低了Me JA对三萜合成的促进作用,仍显著高于对照。抗逆酶结果显示,Ca Cl2和Me JA+Ca Cl2处理均不同程度的提高了CAT、PAL和APX的活性,而SOD的活性则受到Ca2+的抑制;两种钙离子抑制剂加入后显著影响抗逆酶的活性。Me JA处理早期(2 h),三萜途径各关键酶基因FPS、SS、SE、BPW、BPY显著上调表达。Me JA+La Cl3·7H2O处理早期(2 h)除BPW降低外,BPY、BPX2、SS和SE表达量均高于Me JA单独处理;而同Me JA处理相比,Me JA+EGTA处理2 h,BPW、BPX2、SS、SE和FPS表达量均下调。暗示Ca2+参与了Me JA诱导白桦防御系统启动和三萜物质合成,但两种Ca2+抑制剂EGTA和La Cl3在三萜合成中的作用效果和机制存在差异。

关键词：白桦悬浮培养 MeJA 三萜化合物 Ca2+

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非洲紫罗兰转基因过程中的抑菌分析

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湖北农业科学 2016年第5期55卷 1301-1303页

作者：国会艳郝爱平贾园园李继光张晓军牡丹江师范学院生命科学与技术学院黑龙江牡丹江157012 东北林业大学林木遗传育种国家重点实验室哈尔滨150040

以农杆菌介导法将白桦花发育相关基因Bp1AGL对非洲紫罗兰(Saintpaulia ionantha Wendl)进行遗传转化,通过设置单一变量研究转基因过程中的抑菌方法。结果表明,在暗培养60 h,侵染时间为6 min,农杆菌活化菌液OD600 nm为0.5,暗培养覆盖无... 详细信息

以农杆菌介导法将白桦花发育相关基因Bp1AGL对非洲紫罗兰(Saintpaulia ionantha Wendl)进行遗传转化,通过设置单一变量研究转基因过程中的抑菌方法。结果表明,在暗培养60 h,侵染时间为6 min,农杆菌活化菌液OD600 nm为0.5,暗培养覆盖无菌纸膜的条件下,抑菌效果良好,转基因效率更高。

关键词：非洲紫罗兰(Saintpaulia ionantha Wendl) 转基因 Bpl AGL 抑菌

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野生大豆内生真菌及发酵液中高质量分数次生代谢产物菌株筛选

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中草药 2015年第22期46卷 3401-3408页

作者：王鹤鸣李凤姿张鸾张秀峰尹静东北林业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150040 东北林业大学林木遗传育种国家重点实验室黑龙江哈尔滨150040

目的以分离纯化的42株野生大豆内生真菌为材料,分析内生真菌菌丝及发酵液中次生代谢产物的积累,筛选高产次生代谢产物内生菌株。方法采用液体发酵摇瓶培养法及紫外分光光度法对不同内生真菌菌丝及发酵液中的总三萜、黄酮、多糖、多酚与... 详细信息

目的以分离纯化的42株野生大豆内生真菌为材料,分析内生真菌菌丝及发酵液中次生代谢产物的积累,筛选高产次生代谢产物内生菌株。方法采用液体发酵摇瓶培养法及紫外分光光度法对不同内生真菌菌丝及发酵液中的总三萜、黄酮、多糖、多酚与总酚的量进行检测。结果 42株野生大豆内生真菌菌丝中,筛选获得高质量分数多糖菌株为Y2S9、WDL3和WDL2,质量分数最高可达85.51 mg/g;高质量分数黄酮菌株为Y1S9和Y6S8,质量分数分别为2.99和2.24 mg/g;高质量分数三萜菌株为Y6S8、Y2R1、Y6R2,质量分数分别为25.55、17.89、15.96 mg/g;而WDS7总酚量最高,为22.65 mg/g。内生真菌发酵液中,黄酮量较高菌株为Y1S8和SYS4,其质量浓度分别为3.11和4.81 mg/L;总三萜质量浓度较高的菌株为YSYL2、Y1S8、WDL3,质量浓度分别为17.46、35.00、42.98 mg/L。结论不同生境可能是导致次生代谢产物量差异的主要原因,本研究筛选出高产次生代谢产物野生大豆内生真菌菌株11株,为野生大豆内生真菌功能挖掘及新药筛选奠定了基础。

关键词：野生大豆内生真菌次生代谢产物总三萜黄酮多糖

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西伯利亚蓼非特异性脂质转移蛋白基因PsnsLTP的功能分析

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植物研究 2015年第4期35卷 547-553页

作者：李蔚曲春浦许志茹刘春刘关君东北林业大学林木遗传育种国家重点实验室哈尔滨150040 东北林业大学生命科学学院哈尔滨150040

通过在农杆菌介导下,利用西伯利亚蓼非特异性脂质转移蛋白基因(植物表达载体:pROKII-PsnsLTP)对烟草进行遗传转化,经卡那霉素抗性分化筛选及PCR鉴定,获得6个转基因烟草株系。接种烟草炭疽病病菌和猝倒病病菌后观察转基因植株和野生型的... 详细信息

通过在农杆菌介导下,利用西伯利亚蓼非特异性脂质转移蛋白基因(植物表达载体:pROKII-PsnsLTP)对烟草进行遗传转化,经卡那霉素抗性分化筛选及PCR鉴定,获得6个转基因烟草株系。接种烟草炭疽病病菌和猝倒病病菌后观察转基因植株和野生型的表型差异,在Na Cl、Cd Cl2、7.5%PEG6000的胁迫下进行表型观察和生理指标的测定。结果显示:与野生型烟草相比,T1代转基因植株已具有较强的耐烟草炭疽病和猝倒病的能力;其超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)活性显著增强,丙二醛(MAD)含量显著降低,且幼苗具有较好的生长性状。由此证明,西伯利亚蓼非特异性脂质转移蛋白PsnsLTP增加了转基因烟草抵御生物胁迫和非生物胁迫的能力,这些工作为深入研究PsnsLTP基因的抗逆机制提供了参考。

关键词：西伯利亚蓼非特异性脂质转移蛋白转基因烟草生物胁迫非生物胁迫

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西伯利亚蓼铜伴侣蛋白与铜锌超氧化物歧化酶基因共转化烟草的耐盐性分析

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植物研究 2015年第2期35卷 208-217页

作者：马静曲春浦许志茹杨传平刘关君东北林业大学生命科学学院哈尔滨150040 东北林业大学林木遗传育种国家重点实验室哈尔滨150040

为验证西伯利亚蓼铜伴侣蛋白基因(Ps ATX)和铜锌超氧化物歧化酶基因(Ps SOD)共转化的烟草是否具有耐盐功能,分别构建了植物单价表达载体pROKⅡ-Ps ATX、pROKⅡ-Ps SOD和双价表达载体pROKⅡ-Ps ATX-PsSOD,通过农杆菌介导遗传转化烟草,PC... 详细信息

为验证西伯利亚蓼铜伴侣蛋白基因(Ps ATX)和铜锌超氧化物歧化酶基因(Ps SOD)共转化的烟草是否具有耐盐功能,分别构建了植物单价表达载体pROKⅡ-Ps ATX、pROKⅡ-Ps SOD和双价表达载体pROKⅡ-Ps ATX-PsSOD,通过农杆菌介导遗传转化烟草,PCR验证转基因植株后测定了盐胁迫条件下转基因烟草的丙二醛(MDA)、活性氧、脯氨酸含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性,以此鉴定转基因植株的耐盐性。结果表明:(1)Ps ATX和Ps SOD基因已成功整合到烟草基因组中;(2)在100 mmol·L-1Na Cl处理条件下,转双价基因植株的MDA、活性氧、脯氨酸含量均比野生型和转单价基因植株低,而SOD活性则高于这两类植株。证明Ps ATX和Ps SOD基因共转化的烟草植株比转单价基因植株具有更强的耐Na Cl能力。本研究将为研究Ps ATX和Ps SOD基因的抗逆机制奠定分子基础。

关键词：铜伴侣蛋白基因铜锌超氧化物歧化酶基因双价表达载体耐盐性

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水曲柳花发育过程中AG、SOC1基因表达的qRT-PCR分析

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植物研究 2015年第4期35卷 612-617页

作者：任小龙詹亚光梁雪齐凤慧东北林业大学生命科学学院哈尔滨150040 东北林业大学林木遗传育种国家重点实验室哈尔滨150040

以水曲柳(Fraxinus mandshurica Rupr.)不同时期的雌雄花为材料,应用实时荧光定量PCR技术,分析了18S rRNA、GAPDH、β-actin和TU 4个常用内参基因在水曲柳花中的表达情况。经Norm Finder软件分析选择出TU作为内参基因,并对水曲柳中的开... 详细信息

以水曲柳(Fraxinus mandshurica Rupr.)不同时期的雌雄花为材料,应用实时荧光定量PCR技术,分析了18S rRNA、GAPDH、β-actin和TU 4个常用内参基因在水曲柳花中的表达情况。经Norm Finder软件分析选择出TU作为内参基因,并对水曲柳中的开花相关基因AG和SOC1在开花不同时期的表达情况进行了分析,结果表明:在水曲柳花发育期间AG、SOC1表达量在雌雄花间存在差异,AG基因在雌花初期表达量最高,之后逐渐降低,到了成熟胚囊时AG表达量又有所增加;而在雄花中AG在减数分裂时最高为1.53。SOC1基因在雌花中的表达量低于雄花。这一研究结果为深入了解水曲柳花发育过程中相关基因的表达提供理论依据。

关键词：水曲柳 AG基因 SOC1基因 QRt-PCR

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EST-SSR标记在水曲柳雌雄鉴定中的应用

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西北植物学报 2015年第3期35卷 472-479页

作者：齐凤慧孙宏冉詹亚光东北林业大学生命科学学院哈尔滨150040 东北林业大学林木遗传育种国家重点实验室哈尔滨150040

选用黑龙江省青山林木种子园成年水曲柳200棵树为实验材料,在来自NCBI中的5 423条白蜡属EST序列和该实验室测得的水曲柳转录组的179 502条序列中查找SSR位点并设计引物,通过PCR扩增筛选有效扩增和有差异片段的引物,用于水曲柳雌雄的鉴... 详细信息

选用黑龙江省青山林木种子园成年水曲柳200棵树为实验材料,在来自NCBI中的5 423条白蜡属EST序列和该实验室测得的水曲柳转录组的179 502条序列中查找SSR位点并设计引物,通过PCR扩增筛选有效扩增和有差异片段的引物,用于水曲柳雌雄的鉴别。结果显示:(1)白蜡属EST和水曲柳转录组中的5 423条和179 502条序列中,分别查找到9 488个和3 557个SSR位点,SSR出现的频率分别是174.96%和1.98%,SSR的类型都是以二核苷酸为主。(2)232对引物中有208对引物获得有效扩增,74对引物在雌雄DNA中有差异,27对扩增片段符合预定大小片段。(3)经过3轮筛选,选出19号和56号引物用于200棵水曲柳中,雌雄差异率分别是64.5%和89.5%。研究表明,利用EST-SSR分子标记对水曲柳性别进行鉴定是一种有效可行的方法。

关键词：水曲柳表达序列标签简单重复序列重复基元雌雄鉴别

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'巍山红雪梨'和'美人酥'叶绿素、花色苷和类黄酮的动态变化分析

'巍山红雪梨'和'美人酥'叶绿素、花色苷和类黄酮的动态变化分析

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第八届全国梨科研、生产与产业化研讨会

作者：高晓宇邓浪付开强王大玮秦秀兰李德龙罗万德周军云南省高校林木遗传育种改良与繁育重点实验室昆明650244 西南林业大学西南山地森林资源保育共建教育重点实验室昆明650244 西南林业大学林学院昆明650224 西南林业大学西南山地森林资源保育共建教育重点实验室昆明650244 西南林业大学林学院昆明650224 西南林业大学林学院昆明650224 昆明市林业技能开发站昆明650223

目的：探究云南红梨果实各部分(果皮、果肉和种子)花色苷、叶绿素和类黄酮的动态变化规律,力求为优质红梨的生产提供理论依据. 方法：以云南境内主栽的'美人酥'和'巍山红雪梨'2个品种为试材,取其不同发育期的果实,... 详细信息

目的：探究云南红梨果实各部分(果皮、果肉和种子)花色苷、叶绿素和类黄酮的动态变化规律,力求为优质红梨的生产提供理论依据. 方法：以云南境内主栽的'美人酥'和'巍山红雪梨'2个品种为试材,取其不同发育期的果实,将其果皮、果肉和种子分离,对花色苷、叶绿素和类黄酮含量进行测定. 结果：'美人酥'各部位花色苷含量为0.395～0.896g·L-1;'巍山红雪梨'各部位花色苷含量为0.047～0.854g·L-1.'美人酥'各部位叶绿素含量为0.011～0.132g·L-1;'巍山红雪梨'各部位叶绿素含量为0.023～0.203g·L-1.'美人酥'各部位类黄酮含量为0.689～2.564g·L-1;'巍山红雪梨'各部位类黄酮含量为0.182～0.974g·L-1.红色砂梨各部位类黄酮含量＞花色苷含量＞叶绿素含量.花色苷在果实成熟过程中各部位含量都呈上升趋势而叶绿素含量呈下降趋势,类黄酮的含量在果皮中先升后降,在果肉中呈降—升—降的趋势. 结论：果实花色苷的变化规律有异于类黄酮和叶绿素,而类黄酮和叶绿素的变化规律相似.

关键词：云南红梨花色苷叶绿素类黄酮动态变化

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过表达ThVHAc1对拟南芥V-ATPase各亚基表达的影响

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植物研究 2015年第5期35卷 692-695页

作者：杨桂燕郭宇聪赵玉琳张凤娇高彩球东北林业大学林木遗传育种国家重点实验室哈尔滨150040 西北农林科技大学林学院核桃研究中心杨凌712100

V-ATPase是多亚基复合蛋白,其c亚基负责V-ATPase的组装及质子通道的形成。本研究拟分析盐胁迫下过表达Th VHAc1基因拟南芥V-ATPase各亚基的表达,探讨过表达外源c亚基对拟南芥V-ATPase全酶响应盐胁迫表达模式的影响。实时荧光定量PCR结... 详细信息

V-ATPase是多亚基复合蛋白,其c亚基负责V-ATPase的组装及质子通道的形成。本研究拟分析盐胁迫下过表达Th VHAc1基因拟南芥V-ATPase各亚基的表达,探讨过表达外源c亚基对拟南芥V-ATPase全酶响应盐胁迫表达模式的影响。实时荧光定量PCR结果显示,盐胁迫下,过表达外源Th VHAc1拟南芥V-ATPase 28个亚基的表达发生了明显改变,且拟南芥5个c亚基的表达均不同程度的被抑制。表明外源Th VHAc1基因能影响拟南芥V-ATPase各亚基的表达以调节V-ATPase全酶的活性,但各亚基的表达模式与V-ATPase活性非简单对应关系,各亚基互相协调决定V-ATPase活性。

关键词：刚毛柽柳表达分析 c亚基 V-ATPase ThVHAc1

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