检索结果-内蒙古大学图书馆

西南林业大学学报（自然科学） 2016年第1期36卷 28-32页

作者：杨桂燕赵玉琳郭宇聪赵震高彩球林木遗传育种国家重点实验室(东北林业大学) 黑龙江哈尔滨150040 西北农林科技大学林学院核桃研究中心陕西杨凌712100

采用差速离心和不连续蔗糖密度梯度离心法分离和纯化柽柳液泡膜微囊，通过western杂交对获得的微囊蛋白进行检测，获得ThVHAcl蛋白目的条带，表明分离的液泡膜微囊中含有有效的V-ATPase成分，进一步测定液泡膜微囊对NaNO3、Na3VO3、NaN... 详细信息

采用差速离心和不连续蔗糖密度梯度离心法分离和纯化柽柳液泡膜微囊，通过western杂交对获得的微囊蛋白进行检测，获得ThVHAcl蛋白目的条带，表明分离的液泡膜微囊中含有有效的V-ATPase成分，进一步测定液泡膜微囊对NaNO3、Na3VO3、NaN3的敏感性及V-ATPase的水解活性和翻转比例。结果表明：液泡膜微囊主要分布在0-25％蔗糖梯度界面上，且研磨法提取液泡膜微囊具有较高的水解活性和较大的原位比例，表明液氮研磨结合差速离心及不连续蔗糖密度梯度离心法能有效提取柽柳液泡膜微囊。

关键词：刚毛柽柳液泡膜 V-ATPase 翻转比例

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小黑杨碳酸酐酶家族基因表达特性分析

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北京林业大学学报 2015年第2期37卷 94-99页

作者：曲赞霜钱婷婷侯聪张力杰魏志刚东北林业大学林学院林木遗传育种国家重点实验室

本文克隆了小黑杨CA家族的6个基因成员,分别命名为Psn CA1、Psn CA2、Psn CA3、Psn CA4、Psn CA5和Psn CA6,其中Psn CA4和Psn CA6属于α碳酸酐酶家族,Psn CA1、Psn CA3和Psn CA5属于β碳酸酐酶家族,而Psn CA2属于Lbeat H超基因家族。系... 详细信息

本文克隆了小黑杨CA家族的6个基因成员,分别命名为Psn CA1、Psn CA2、Psn CA3、Psn CA4、Psn CA5和Psn CA6,其中Psn CA4和Psn CA6属于α碳酸酐酶家族,Psn CA1、Psn CA3和Psn CA5属于β碳酸酐酶家族,而Psn CA2属于Lbeat H超基因家族。系统进化分析表明,亲缘关系较近的是Psn CA2、Psn CA4和Psn CA6,而Psn CA1、Psn CA3和Psn CA5聚为一大类。通过实时荧光RT-PCR技术研究了小黑杨根、茎、叶中Psn CA基因的表达模式,结果表明:除Psn CA6外,其余5个基因在叶部的表达量显著高于根和茎。在叶部表达量最高的为Psn CA1,在茎部和根部表达最高的为Psn CA3。Psn CA在各部位的表达均受暗处理的影响,其中各基因在根部的表达变化最大,其次为茎和叶。

关键词：小黑杨碳酸酐酶基因家族表达特性

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植物氮代谢中天冬酰胺合成酶B的研究进展

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山东农业科学 2016年第1期48卷 142-149页

作者：郝丙青曲春浦刘忠野许志茹刘关君东北林业大学林学院/林木遗传育种国家重点实验室黑龙江哈尔滨150040 东北林业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150040

天冬酰胺合成酶B(Asparagine synthetase B,AS-B,EC 6.3.5.4)是植物氮代谢中的关键酶,在植物氮素同化与分配上发挥着重要作用,其产物天冬酰胺(Asn)是植物体内有机氮运输和储存的主要形式之一。近年来,对AS-B的研究取得很大进展,本文就A... 详细信息

天冬酰胺合成酶B(Asparagine synthetase B,AS-B,EC 6.3.5.4)是植物氮代谢中的关键酶,在植物氮素同化与分配上发挥着重要作用,其产物天冬酰胺(Asn)是植物体内有机氮运输和储存的主要形式之一。近年来,对AS-B的研究取得很大进展,本文就AS-B的结构、分类、反应机制、表达模式以及生物学功能进行全面的阐述,为利用分子育种方法提高作物或林木的氮素利用率奠定理论基础。

关键词：天冬酰胺合成酶B 生物功能氮代谢氮素利用率

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ThMYB3和ThDof2对ThVHAc1基因表达的调控

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北京林业大学学报 2015年第12期37卷 1-6页

作者：杨桂燕赵震赵玉琳张凤娇高彩球东北林业大学林木遗传育种国家重点实验室西北农林科技大学林学院

ThVHAc1基因能响应干旱、盐、重金属等胁迫诱导,该基因能有效提高转ThVHAc1基因酵母的多种抗逆能力。为进一步研究ThVHAc1基因的抗逆调控机理,本研究利用酵母单杂交技术钓取ThVHAc1可能的上游调控因子,并利用基因枪瞬时共转化技术进行... 详细信息

ThVHAc1基因能响应干旱、盐、重金属等胁迫诱导,该基因能有效提高转ThVHAc1基因酵母的多种抗逆能力。为进一步研究ThVHAc1基因的抗逆调控机理,本研究利用酵母单杂交技术钓取ThVHAc1可能的上游调控因子,并利用基因枪瞬时共转化技术进行初步验证。酵母单杂交结果显示,ThMYB3基因能识别ThVHAc1基因上游MYB顺式作用元件和含有MYB元件的启动子片段。ThDof2基因能识别ThVHAc1基因上游DOF顺式作用元件和含有DOF元件的启动子片段。但ThMYB3和ThDof2均不能识别突变后的元件及含对应突变元件的启动子片段。将ThMYB3和ThDof2分别构建成效应载体,各元件、突变元件、启动子片段及突变的启动子片段分别构建报告载体进行共表达验证。结果发现:效应载体ThMYB3和含MYB元件及含MYB元件的ThVHAc1启动子片段的报告载体,ThDof2和含DOF元件及含DOF元件的ThVHAc1启动子片段的报告载体瞬时共表达烟草叶片能观察到GUS染色,且GUS活性较高;而与相应突变元件及片段的共转化则观察不到烟草叶片的GUS染色,且GUS活性很低。说明只有非突变的元件和启动子片段才能与效应载体进行互作识别,激活GUS基因的表达,验证了酵母单杂交获得的上游调控基因的识别特异性。表明ThMYB3和ThDof2可能通过与相应启动子元件的结合调控ThVHAc1基因。

关键词：刚毛柽柳酵母单杂交 VHAc基因启动子调控因子

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水曲柳子叶和下胚轴愈伤组织和体胚的诱导

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分子植物育种 2015年第7期13卷 1645-1652页

作者：张丽杰赵丽蒙陆秀君沈海龙沈阳农业大学林学院沈阳110866 东北林业大学林学院林木遗传育种国家重点实验室哈尔滨150040

为了建立水曲柳愈伤组织诱导和体胚发生体系,并为体胚发生分子机理研究提供有效培养系统,本研究以水曲柳成熟合子胚和未成熟合子胚的子叶和下胚轴为外植体,探讨了灭菌剂及其处理时间对外植体灭菌效果的影响和激素浓度对愈伤组织诱导和... 详细信息

为了建立水曲柳愈伤组织诱导和体胚发生体系,并为体胚发生分子机理研究提供有效培养系统,本研究以水曲柳成熟合子胚和未成熟合子胚的子叶和下胚轴为外植体,探讨了灭菌剂及其处理时间对外植体灭菌效果的影响和激素浓度对愈伤组织诱导和体胚发生的影响。结果表明:外植体处理试剂和消毒时间是10%Na Cl O处理1 min最为适宜;以MS1/2(MS所有成分均减半)为基本培养基,NAA 3 mg/L+BA1.5 mg/L为水曲柳未成熟合子胚子叶和下胚轴诱导愈伤组织和体胚发生的最佳激素组合,诱导率分别为6.5%和9.7%;NAA 5 mg/L+BA 2 mg/L为水曲柳成熟合子胚子叶与胚轴诱导愈伤组织和体胚发生的最佳激素组合,诱导率分别为29.3%和19.5%。研究结果补充和突破了前人研究只从水曲柳合子胚子叶获得体胚发生和只从叶柄获得有效愈伤组织增殖的结果,并为揭示体胚发生机理有效愈伤组织和体胚发生系统的建立奠定了基础。

关键词：水曲柳愈伤组织诱导体胚发生子叶下胚轴组织培养

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植物组蛋白乙酰基转移酶的研究进展

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生物技术通报 2015年第7期31卷 18-25页

作者：夏德安刘春娟吕世博张彦妮刘奕佳马旭俊东北林业大学林学院林木遗传育种国家重点实验室哈尔滨150040 东北林业大学园林学院哈尔滨150040

组蛋白乙酰化是一个动态的、可逆的过程,包括组蛋白乙酰化和去乙酰化两个过程。组蛋白乙酰基转移酶催化组蛋白乙酰化,与组蛋白去乙酰化酶共同作用来调节组蛋白乙酰化状态。组蛋白乙酰化状态影响染色质的结构,进而影响基因的转录,在植物... 详细信息

组蛋白乙酰化是一个动态的、可逆的过程,包括组蛋白乙酰化和去乙酰化两个过程。组蛋白乙酰基转移酶催化组蛋白乙酰化,与组蛋白去乙酰化酶共同作用来调节组蛋白乙酰化状态。组蛋白乙酰化状态影响染色质的结构,进而影响基因的转录,在植物的生长、发育和胁迫反应过程中具有十分重要的调节作用。对组蛋白乙酰基转移酶的细胞内分布、分类、底物特异性以及在发育和胁迫反应中的功能进行了综述。

关键词：组蛋白乙酰化组蛋白乙酰基转移酶发育胁迫

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毛果杨HDAC基因家族序列及其表达分析

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2015年第3期43卷 63-76页

作者：李淑娟张超张彦妮董亚茹马旭俊东北林业大学林木遗传育种国家重点实验室(东北林业大学) 黑龙江哈尔滨150040 东北林业大学园林学院黑龙江哈尔滨150040

【目的】研究毛果杨组蛋白去乙酰化酶(HDAC)基因家族序列及其对脱落酸(ABA)的应答反应,为HDAC家族基因的功能研究奠定基础。【方法】采用生物信息学方法对毛果杨HDAC家族的16种蛋白进行系统分析;采用实时荧光定量PCR方法,分析了100μmol... 详细信息

【目的】研究毛果杨组蛋白去乙酰化酶(HDAC)基因家族序列及其对脱落酸(ABA)的应答反应,为HDAC家族基因的功能研究奠定基础。【方法】采用生物信息学方法对毛果杨HDAC家族的16种蛋白进行系统分析;采用实时荧光定量PCR方法,分析了100μmol/L ABA叶面喷洒处理后6和24h毛果杨叶片HDAC家族16个基因的表达情况。【结果】HDAC家族蛋白分析显示,毛果杨HDAC可分为3个亚家族,即RPD3/HDA1、HD2和SIR2亚家族,与拟南芥HDAC蛋白的亲缘关系较近。HDAC家族大多数成员为亲水性蛋白质(HDA912属于疏水性蛋白),其等电点呈酸性(除了HDA912和SIR2亚家族)。HDAC家族蛋白受磷酸化调节,磷酸化位点主要发生在丝氨酸残基上。绝大部分HDAC蛋白都有不同数目的跨膜螺旋和不同的跨膜方向,而在HD2蛋白中没有发现跨膜区。二级结构分析显示,RPD3/HDA1和SIR2亚家族成员均含有不同比例的α-螺旋、β-折叠片和无规则卷曲,其中无规则卷曲比例达到50%以上(HDA912除外);而HD2亚家族成员不含有α-螺旋,其二级结构主要以无规则卷曲为主,比例高达80%左右。HDAC家族蛋白主要定位于细胞核内,在细胞质、细胞器及其他膜结构中也有分布,HD2蛋白几乎都定位于细胞核内。RPD3/HDA1和SIR2亚家族成员的三级结构可分为6种类型,预示其生物学功能也可能存在差异。实时荧光定量PCR分析结果表明,ABA处理6h显著提高了毛果杨HDA901、HDA903和HDT901基因的表达,而ABA处理24h则会显著降低HDA907和HDT901基因的表达。【结论】作为植物特有的一类组蛋白去乙酰化酶,毛果杨HD2亚家族蛋白在序列和结构等多个方面与其他2个亚家族不同。ABA能够调节杨树HDAC家族基因的表达,HDAC家族基因不同成员对ABA的应答反应不同。

关键词：毛果杨组蛋白去乙酰化酶生物信息学脱落酸(ABA) 基因表达

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芜菁类黄酮3'-羟化酶基因的功能鉴定及启动子初步分析

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植物研究 2015年第4期35卷 572-582页

作者：许志茹马静崔国新刘通刘关君东北林业大学生命科学学院哈尔滨150040 东北林业大学林学院哈尔滨150040 东北林业大学林木遗传育种国家重点实验室哈尔滨150040

类黄酮3'-羟化酶(Flavonoid 3'-hydroxylase,F3'H)是细胞色素P450单加氧酶,在花青素合成途径中催化二氢山奈酚生成二氢槲皮素,进而形成矢车菊色素。利用津田芜菁Br F3'H1和赤丸芜菁Br F3'H2基因构建过量表达载体后... 详细信息

类黄酮3'-羟化酶(Flavonoid 3'-hydroxylase,F3'H)是细胞色素P450单加氧酶,在花青素合成途径中催化二氢山奈酚生成二氢槲皮素,进而形成矢车菊色素。利用津田芜菁Br F3'H1和赤丸芜菁Br F3'H2基因构建过量表达载体后遗传转化烟草,转基因植株的花色加深。通过染色体步移法克隆了Br F3'H1和Br F3'H2基因上游846和851 bp的启动子序列。生物信息学分析表明,Br F3'H1P和Br F3'H2P均包含TATA box、CAAT box、光调控元件、MRE、ABRE、ATGCAAAT-motif、ERE、O2-site、RY-element、LTR等多个顺式作用元件;二者的核苷酸序列在7个位点存在差异。利用Br F3'H1P和Br F3'H2P序列替换p CAMBIA1301植物表达载体的35S启动子后遗传转化烟草。GUS组织化学染色结果表明,Br F3'H1P和Br F3'H2P序列均能驱动GUS基因表达。通过PCR方法获得了Br F3'H1P和Br F3'H2P的一系列缺失片段,融合GUS基因后转化烟草。染色结果显示,Br F3'H1P和Br F3'H2P系列缺失片段均具有起始GUS基因表达的活性。Br F3'H1和Br F3'H2基因的功能鉴定及启动子的初步分析将为揭示津田芜菁和赤丸芜菁F3'H基因的光诱导表达调控机理奠定研究基础。

关键词：芜菁类黄酮3'-羟化酶基因遗传转化启动子功能分析

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水曲柳胚后熟时期MSAP分析

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南京林业大学学报(自然科学版) 2015年第3期39卷 39-44页

作者：丛建民陈凤清沈海龙李玉花张鹏杨玲白城师范学院生命科学学院东北林业大学林学院东北林业大学林木遗传育种国家重点实验室东北林业大学生命科学学院

为研究水曲柳合子胚发育后熟时期的基因组表观调控模式,以7月上旬到9月中旬8个取材时期多年生水曲柳合子胚子叶为研究对象,通过基因组甲基化敏感扩增多态性分析,检测了各时期基因组甲基化变化。结果表明:水曲柳合子胚在不同发育时期可... 详细信息

为研究水曲柳合子胚发育后熟时期的基因组表观调控模式,以7月上旬到9月中旬8个取材时期多年生水曲柳合子胚子叶为研究对象,通过基因组甲基化敏感扩增多态性分析,检测了各时期基因组甲基化变化。结果表明:水曲柳合子胚在不同发育时期可检测到933;39条清晰的电泳条带,说明不同发育时期水曲柳合子胚甲基化差异不明显。进一步统计胞嘧啶甲基化模式及其变异模式发现,7月初基因组在CNG、CG/CNG位点下降的变异位点多于其他时期,表明在水曲柳合子胚发育过程中发生了较大规模的去甲基化事件。

关键词：水曲柳合子胚表观遗传基因组甲基化敏感扩增多态性(MSAP)

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白桦环阿齐醇合成酶(CAS)基因与达玛烯二醇合成酶(DS)基因的双基因RNA干扰载体构建

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植物研究 2015年第3期35卷 355-362页

作者：梁甜马泓思尹静詹亚光张梦岩东北林业大学生命科学学院哈尔滨150040 东北林业大学林学院林木遗传育种与生物技术国家重点实验室哈尔滨150040

环阿齐醇合成酶(Cycloartenol synthase,CAS)和达玛烯二醇合成酶(Dammarenediol synthase,DS)为白桦三萜合成过程分支途径关键酶基因,对CAS和DS基因的抑制或沉默将有利于三萜前体-2,3氧化角鲨烯向目标产物白桦脂醇和齐墩果酸合成。利用... 详细信息

环阿齐醇合成酶(Cycloartenol synthase,CAS)和达玛烯二醇合成酶(Dammarenediol synthase,DS)为白桦三萜合成过程分支途径关键酶基因,对CAS和DS基因的抑制或沉默将有利于三萜前体-2,3氧化角鲨烯向目标产物白桦脂醇和齐墩果酸合成。利用同源序列PCR方法及pRNAi-GG新型载体,进行DS单基因RNAi及DS与CAS双基因RNAi载体的构建。结果显示,分别克隆获得CAS和DS c DNA序列长度为300和509 bp,Blast同源序列比对与已知日本白桦BPX1和OSCBPD相似度为100%和92%。依据基因RNAi引物设计及pRNAi-GG使用原则,分别将CAS、DS的正向片段和反向片段有序地连接到pRNAi-GG载体PDK内含子两侧,并转化大肠杆菌Trans1-T1中,经PCR及克隆测序验证,获得白桦DS单基因和CAS、DS双基因干扰载体,并通过三亲杂交方法分别获得含有两个RNAi载体的工程农杆菌菌株。该研究为进一步通过基因工程手段阻断白桦三萜分支途径及促进前体物质向目标产物白桦酯醇和齐墩果酸方向合成奠定了基础。

关键词：白桦三萜 RNA干扰载体环阿齐醇合成酶(CAS) 达玛烯二醇合成酶(DS)

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