检索结果-内蒙古大学图书馆

北京林业大学学报 2010年第1期32卷 52-56页

作者：赵桂媛魏志刚刘关君张凯旋刘桂丰杨传平东北林业大学林木遗传育种与生物技术教育部重点实验室

为了研究小黑杨木材形成过程中的关键基因,以2年生小黑杨茎形成层组织为试验材料提取RNA,采用SMART(RNA转录过程中的5′末端转换机制)技术合成cDNA第一链,通过LD-PCR合成双链cDNA。利用SfiⅠ限制性酶酶切后将其连接到质粒载体pDNR-LIB上... 详细信息

为了研究小黑杨木材形成过程中的关键基因,以2年生小黑杨茎形成层组织为试验材料提取RNA,采用SMART(RNA转录过程中的5′末端转换机制)技术合成cDNA第一链,通过LD-PCR合成双链cDNA。利用SfiⅠ限制性酶酶切后将其连接到质粒载体pDNR-LIB上,采用电穿孔法将重组质粒转化到大肠杆菌感受态细胞DH5α中,构建全长cDNA文库。文库质量鉴定表明:原始文库滴度为2.18×106pfu/mL,扩增后的文库滴度为5.46×109pfu/mL,重组率为96%。插入片段长度在0.5～2.0kb之间,平均长度为1.12kb,表明构建的小黑杨茎形成层cDNA文库较为理想。

关键词：小黑杨形成层 SMART cDNA文库

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二色补血草LbGRP基因的克隆及抗逆能力分析

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遗传 2010年第3期32卷 278-286页

作者：潘妍王玉成张大伟杨传平东北林业大学林木遗传育种与生物技术教育部重点实验室哈尔滨150040

富含甘氨酸RNA结合蛋白(Glycine-rich RNA-binding proteins,GRP)是植物中重要的转录后调控蛋白,在植物的生长发育及对胁迫的抗性调控等过程中起重要作用。文章从二色补血草(Limonium bicolor(Bunge)O.)cDNA文库中克隆出了富含甘氨酸RN... 详细信息

富含甘氨酸RNA结合蛋白(Glycine-rich RNA-binding proteins,GRP)是植物中重要的转录后调控蛋白,在植物的生长发育及对胁迫的抗性调控等过程中起重要作用。文章从二色补血草(Limonium bicolor(Bunge)O.)cDNA文库中克隆出了富含甘氨酸RNA结合蛋白基因(LbGRP)的全长cDNA序列(GenBank登录号:GQ398238)。为了研究LbGRP的抗逆功能,将其构建到酵母表达载体pYES2中,转化到酿酒酵母INVSc1菌株中,获得重组酵母INVSc1(pYES2-LbGRP),同时将转空pYES2质粒的酵母INVSc1(pYES2)作为对照。对重组酵母INVSc1(pYES2-LbGRP)和对照INVSc1(pYES2)进行NaCl、KCl、NaHCO3、Na2CO3、干旱和冷冻胁迫,比较它们在不同胁迫下的存活率。结果表明,INVSc1(pYES2-LbGRP)在各种胁迫下的存活率明显高于对照INVSc1(pYES2),证明LbGRP基因具有抗NaCl、KCl、NaHCO3、Na2CO3、干旱和冷冻等胁迫的能力,推测该基因参与了二色补血草的抗逆调控过程。

关键词：二色补血草富含甘氨酸RNA结合蛋白抗逆酵母表达

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外源亚精胺和精胺对NaHCO_3胁迫下南蛇藤抗氧化系统的影响

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应用生态学报 2009年第3期20卷 549-554页

作者：刘强王庆成徐静孙晶东北林业大学林木遗传育种与生物技术教育部重点实验室哈尔滨150040

研究了叶面喷施亚精胺和精胺对NaHCO3胁迫下南蛇藤叶片抗氧化系统的影响.结果表明:外源亚精胺和精胺处理使NaHCO3胁迫下南蛇藤叶片O2·-产生速率、H2O2、丙二醛(MDA)含量和电解质外渗率显著降低(P<0.05).亚精胺处理明显提高了盐... 详细信息

研究了叶面喷施亚精胺和精胺对NaHCO3胁迫下南蛇藤叶片抗氧化系统的影响.结果表明:外源亚精胺和精胺处理使NaHCO3胁迫下南蛇藤叶片O2·-产生速率、H2O2、丙二醛(MDA)含量和电解质外渗率显著降低(P<0.05).亚精胺处理明显提高了盐胁迫下超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)和抗坏血酸过氧化物酶(APX)等抗氧化酶的活性,以及还原型谷胱甘肽(GSH)、类胡萝卜素(CAR)和脯氨酸(Pro)等抗氧化剂的含量,但对还原型抗坏血酸(AsA)含量没有作用;精胺处理明显提高NaHCO3胁迫下POD和APX的活性以及GSH、CAR和Pro的含量,但对SOD和AsA含量影响不显著,甚至引起CAT活性明显降低.亚精胺和精胺处理明显改善了NaHCO3胁迫下南蛇藤的生长.外源亚精胺和精胺可以改善NaHCO3胁迫下南蛇藤叶片的膜保护功能,减少叶片中活性氧的积累,从而提高南蛇藤对NaHCO3胁迫的抗性.

关键词：南蛇藤亚精胺精胺 NaHCO3胁迫抗氧化系统

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白桦AFLP遗传连锁图谱的构建

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遗传 2009年第2期31卷 213-218页

作者：高福玲姜廷波东北林业大学林木遗传育种与生物技术教育部重点实验室哈尔滨150040

以80个中国白桦(Betula platyphylla Suk)×欧洲白桦(Betula pendula Roth)的F1个体为作图群体,利用扩增片段长度多态性(Amplified fragment length polymorphism,AFLP)标记,按照拟测交作图策略,分别构建了中国白桦和欧洲白桦的分... 详细信息

以80个中国白桦(Betula platyphylla Suk)×欧洲白桦(Betula pendula Roth)的F1个体为作图群体,利用扩增片段长度多态性(Amplified fragment length polymorphism,AFLP)标记,按照拟测交作图策略,分别构建了中国白桦和欧洲白桦的分子标记遗传连锁图谱。从64对AFLP引物组合中筛选出34对多态性丰富的引物组合,这些入选的引物组合在分离群体中共检测到451个多态性位点。χ2检验结果表明,有362个位点符合1:1分离(拟测交分离位点),41个位点符合3:1分离,20个位点符合1:3分离,28个位点属偏分离位点。在符合拟测交分离的位点中,201个位点来自中国白桦,161个位点来自欧洲白桦。利用2点连锁分析,来自中国白桦的201个标记构成了14个连锁群(4个以上标记),10个三连体和14个连锁对,45个为非连锁位点,连锁标记覆盖的总图距为1296.1cM,平均图距15.5cM。而来自欧洲白桦的161个标记构成了17个不同的连锁群(4个以上标记),8个三连体和4个连锁对,15个为非连锁位点,连锁标记覆盖的总图距为1035.8cM,平均图距12cM。

关键词：中国白桦欧洲白桦 AFLP 遗传连锁图谱

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西伯利亚蓼PsPIP1基因的克隆及其在NaHCO_3胁迫下的表达

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遗传 2008年第12期30卷 1621-1628页

作者：王垠刘关君阎秀峰杨传平刘明坤曲春浦东北林业大学林木遗传育种与生物技术教育部重点实验室哈尔滨150040

应用cDNA末端快速扩增(RACE)技术从西伯利亚蓼叶cDNA文库中克隆了质膜内在蛋白基因(PsPIP1)的完整编码区cDNA序列(GenBank accession ***626398),长度为1004bp,编码285个氨基酸。基于和其他植物水通道蛋白的氨基酸序列、推测的三维结构... 详细信息

应用cDNA末端快速扩增(RACE)技术从西伯利亚蓼叶cDNA文库中克隆了质膜内在蛋白基因(PsPIP1)的完整编码区cDNA序列(GenBank accession ***626398),长度为1004bp,编码285个氨基酸。基于和其他植物水通道蛋白的氨基酸序列、推测的三维结构的比较以及系统进化分析结果,初步确定此基因为水通道蛋白基因家族中的PIP1亚族成员。RT-PCR结果显示,PsPIP1在西伯利亚蓼的地下茎、茎、叶中均有表达,叶中表达量最高,地下茎次之,茎中最低。在NaHCO3胁迫与去胁迫的过程中,此基因在地下茎、茎、叶中的表达模式也有较明显的差异。

关键词：水通道蛋白西伯利亚蓼基因克隆实时定量RT-PCR

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盐胁迫下西伯利亚蓼茎叶正反消减文库的构建及初步分析

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遗传 2009年第4期31卷 426-433页

作者：刘关君刘明坤许志茹阎秀峰魏志刚杨传平东北林业大学林木遗传育种与生物技术教育部重点实验室哈尔滨150040

正向文库以3%NaHCO3胁迫48h的材料(茎、叶)为实验方(tester),以未胁迫的材料(茎、叶)为消减方(driver);在负向文库中,以未胁迫的材料(茎、叶)为实验方(tester),以3%NaHCO3胁迫48h的材料(茎、叶)为消减方(driver),利用抑制性消减杂交技术... 详细信息

正向文库以3%NaHCO3胁迫48h的材料(茎、叶)为实验方(tester),以未胁迫的材料(茎、叶)为消减方(driver);在负向文库中,以未胁迫的材料(茎、叶)为实验方(tester),以3%NaHCO3胁迫48h的材料(茎、叶)为消减方(driver),利用抑制性消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH)构建了3%NaHCO3胁迫下西伯利亚蓼茎叶正反消减文库。从文库中共获得2282条有效EST序列,其中从茎正向消减文库中获得598条,从茎负向消减文库中获得490条,从叶正向消减文库中获得627条,从叶负向消减文库中获得567条。经BlastX序列比对后,通过MIPs方法对EST功能进行分类并对茎叶正反消减文库做了比较,其中茎与叶部除细胞救援与防御、转运组件中变化趋势相同外,在代谢、能量、光合作用、蛋白合成、转录和信号传导等方面均表现为相反趋势,另外通过荧光定量RT-PCR对12个潜在与盐胁迫相关基因进行定量分析,结果显示12个基因在未经胁迫与盐胁迫处理后的西伯利亚蓼叶与茎部有着很大差异,说明叶与茎部在NaHCO3条件下可能具有不同应答机制与分工,这有助于进一步理解西伯利亚蓼分子耐盐机制。

关键词：西伯利亚蓼消减文库盐胁迫差异表达基因

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西伯利亚蓼半胱氨酸合成酶基因的克隆与表达

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遗传 2008年第10期30卷 1363-1371页

作者：刘明坤刘关君魏志刚阎秀峰曲春浦王垠刘桂丰杨传平东北林业大学林木遗传育种与生物技术教育部重点实验室哈尔滨150040

半胱氨酸合成酶是植物半胱氨酸合成反应的关键限速酶。文中应用RACE技术从西伯利亚蓼中成功克隆了半胱氨酸合成酶基因(GenBank登录号:EU597481),命名为PcCSase1,该基因全长cDNA为1260bp,编码382个氨基酸。经生物信息学分析,初步确定PcCS... 详细信息

半胱氨酸合成酶是植物半胱氨酸合成反应的关键限速酶。文中应用RACE技术从西伯利亚蓼中成功克隆了半胱氨酸合成酶基因(GenBank登录号:EU597481),命名为PcCSase1,该基因全长cDNA为1260bp,编码382个氨基酸。经生物信息学分析,初步确定PcCSase1的N端前16个氨基酸为信号肽,并引导PcCSase1蛋白定位于胞质,为胞质型半胱氨酸合成酶。同源序列分析表明,此蛋白与其他植物半胱氨酸合成酶成熟蛋白序列高度保守,氨基酸相似性达到90%左右。荧光定量RT-PCR分析表明,PcCSase1在西伯利亚蓼的叶、茎和地下茎中均有表达,叶中表达最高,茎和地下茎次之,在3%NaHCO3胁迫过程中,该基因在叶、茎和地下茎中均在第2d表达量最高。将PcCSase1转入酿酒酵母INVSc1,结果显示培养基中半胱氨酸和菌体中谷胱甘肽含量均有显著增加,在10%NaHCO3和5mol/LNaCl胁迫下,转基因INVSc1-pYES2-PcCSase1菌株的存活率明显高于对照INVSc1-pYES2,证明PcCSase1基因具有耐高盐的作用。

关键词：半胱氨酸合成酶西伯利亚蓼定量RT-PCR 表达分析

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转TaLEA小黑杨矮化突变体的鉴定及侧翼序列分析

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北京林业大学学报 2013年第1期35卷 45-52页

作者：刘玲刘福妹陈肃林琳李慧玉刘桂丰姜静东北林业大学林学院生物技术与林木遗传育种国家重点实验室

以转TaLEA11个株系及野生型对照小黑杨为试材,通过生长性状、叶片解剖结构比较发现,在叶面积、气孔密度、叶片厚度等方面转基因XL11株系明显低于其他参试株系;角质层厚度、栅海比,气孔大小等方面XL11株系显著高于其他参试株系。进而以X... 详细信息

以转TaLEA11个株系及野生型对照小黑杨为试材,通过生长性状、叶片解剖结构比较发现,在叶面积、气孔密度、叶片厚度等方面转基因XL11株系明显低于其他参试株系;角质层厚度、栅海比,气孔大小等方面XL11株系显著高于其他参试株系。进而以XL11株系为材料,采用TAIL-PCR方法克隆插入位点的旁侧序列得到AP2/PthRAV(XM_002311402.1)。荧光定量分析发现AP2/PthRAV的相对表达量在XL11株系中显著高于其他转基因株系及野生型平均值的7.78倍,初步认为该株系在生长及叶片解剖结构等性状的改变,可能与AP2/PthRAV上调表达有关。

关键词：转TaLEA小黑杨矮化突变株 AP2 PthRAV

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转BpLTP4烟草耐盐性分析

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生物技术通报 2020年第12期36卷 34-41页

作者：石晶静郭依萍于颖周美琪王超东北林业大学东北林业大学林木遗传育种国家重点实验室哈尔滨150040

从白桦(Betula platyphylla Suk)中克隆获得CDS为357 bp的BpLTP4。该BpLTP4蛋白为疏水性蛋白且具有一个潜在的跨膜区,蛋白三级结构含有一个疏水腔,该蛋白具有LTP家族基因特有的8个Cys残基结构。BpLTP4与其他物种LTP耐盐基因的亲缘关系... 详细信息

从白桦(Betula platyphylla Suk)中克隆获得CDS为357 bp的BpLTP4。该BpLTP4蛋白为疏水性蛋白且具有一个潜在的跨膜区,蛋白三级结构含有一个疏水腔,该蛋白具有LTP家族基因特有的8个Cys残基结构。BpLTP4与其他物种LTP耐盐基因的亲缘关系较近。qRT-PCR分析表明,NaCl胁迫处理48 h高度诱导BpLTP4表达。通过叶盘法获得BpLTP4过表达烟草转基因株系,用150 mmol/L NaCl胁迫处理转基因和野生型株系后发现,转基因株系耐盐能力高于野生型,其平均发芽率是WT的5.6倍;根长是WT的1.099倍;DAB、NBT、Evans blue染色均浅于WT,POD活性比WT增高了0.28倍,SOD活性较WT增高了0.12倍。BpLTP4响应盐胁迫处理,通过提高保护酶活性、清除活性氧、维持细胞完整性来提高转基因草的耐盐能力。

关键词：白桦 BpLTP4 耐盐性分析烟草

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刚毛柽柳TheIF1A基因转入酵母的抗逆能力分析

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南京林业大学学报(自然科学版) 2014年第5期38卷 62-66页

作者：杨桂燕于丽丽赵玉琳赵震高彩球东北林业大学林木遗传育种国家重点实验室

翻译起始因子eIF1A基因是蛋白合成的重要调控因子之一,在一些植物中可能参与抗逆调控过程。为了研究刚毛柽柳TheIF1A基因是否参与抗逆过程,将TheIF1A基因插入酵母表达载体pYES2中构建成重组载体,转入酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae... 详细信息

翻译起始因子eIF1A基因是蛋白合成的重要调控因子之一,在一些植物中可能参与抗逆调控过程。为了研究刚毛柽柳TheIF1A基因是否参与抗逆过程,将TheIF1A基因插入酵母表达载体pYES2中构建成重组载体,转入酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中获得重组型酵母,分别比较转TheIF1A基因酵母和转空载体对照酵母在山梨醇、H2O2、CdCl2、CuSO4、ZnCl2、KCl、Na2CO3、MgCl2、-20℃和53℃胁迫处理之后的存活能力。结果显示,TheIF1A基因能有效提高转基因酵母的抗干旱、盐碱、氧化、重金属及极端温度的能力,表明TheIF1A可能参与了柽柳多种抗逆调控过程。

关键词：刚毛柽柳翻译起始因子酵母表达抗逆性 TheIF1A

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