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第九届中国林业青年学术年会

作者：王泽亮安新民宋跃朋任媛媛张志毅北京林业大学林木育种国家工程实验室林木花卉遗传育种教育部重点实验室四川省林业科学研究院

在自然条件下,植物由于只能固着于生长环境中,不能移动,其生长发育必然会受到干早、低温、盐碱等各种环境胁迫条件的影响。为了维持自身的生长发育,长时间以来,植物已经从分子、细胞及生理生化水平上进化出完整复杂的胁迫响应机制,以适... 详细信息

在自然条件下,植物由于只能固着于生长环境中,不能移动,其生长发育必然会受到干早、低温、盐碱等各种环境胁迫条件的影响。为了维持自身的生长发育,长时间以来,植物已经从分子、细胞及生理生化水平上进化出完整复杂的胁迫响应机制,以适应外界的胁迫环境。从分子水平上来说,外界的各种胁迫条件诱导了一系列基因地表达,其表达产物不仅直接提高了植物的胁迫耐受性,还可能进一步参与了植物体内胁迫信号的转导过程。阐明植物感知外界胁迫信号、信号体内转导以及最终影响植物胁迫耐受性的过程,对提高植物抗逆性与改善植物育种策略具有非常重要的作用,因此一直是科学研究的热点。近年来,科学工作者已经从各种植物中克隆到了一系列胁迫响应基因。DREB类转录因子即是其中重要的一类基因,DREB转录因子属于AP2/EREBP转录因子家族,是植物所特有的一类转录因子,在植物对外界非生物胁迫的响应与适应中起了非常重要的作用。在本研究中,我们从干旱胁迫处理的河北杨(Populus hopeiensis)中克隆了两个序列高度类似的DREB2类基因,分别命名为PhDREB2a、PhDREB2b,长度分别为1419bp、1386bp,分别编码283、272个氨基酸。在氨基酸水平上,PhDREB2a与PhDREB2b有97.7%的一致性,只是在3'编码区包含一11个氨基酸残基的插入删除片段(Indel)外,其余氨基酸则完全一致。这两个基因包含了所有的在其它DREB2类基因中存在的保守的结构域,如AP2区域(核苷酸结合区域,包括YRG与RAYD因子)、核定位位点(NLS),此外,在PhDREB2a/2b3'转录激活区域,还存在两个PEST基序,可能逆向调控了基因的转录激活功能。同其它植物DREB类基因类似,PhDREB2a与PhDREB2b的AP2区域形成了三条链的β折叠与α螺旋,它们都具有第14与19位的缬氨酸与谷氨酸残基,这两个氨基酸残基被认为在转录因子与顺式作用元件结合的过程中起了重要的作用。半定量RT-PCR分析表明,PhDREB2a/2b基因受干旱、高温与NaCl胁迫条件诱导而较强表达,在正常条件下,PhDREB2a/2b也能检测到表达。同时在各种胁迫条件下,PhDREB2a与2b表达模式也并不完全一致,说明PhDREB2a与PhDREB2b在调控河北杨胁迫响应中的作用并不完全一致。瞬时表达研究发现,在烟草叶片中,PhDREB2a/2b能够激活Gus基因的表达,而且转录激活功能有显著的差异,说明其序列的差异导致了其功能的差异,并可能影响到其在河北杨干旱胁迫耐受性中的功能。进一步,通过拟南芥遗传转化研究,发现与对照拟南芥植株相比,转PhDREB2a/2b基因拟南芥生长迟缓、开花期延迟,在正常条件下,其DREB靶基因的表达量明显提高,干旱胁迫耐受性也明显提高,这进一步证实了PhDREB2a/2b的转录激活功能及其在调控河北杨胁迫响应中的重要作用。

关键词：河北杨 DREB2 PEST 非生物胁迫

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基于ESTs序列的杨树木质部形成相关EST-SSRs标记的开发与应用

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分子植物育种 2010年第5期8卷 963-970页

作者：宋跃朋江锡兵张曼李博王泽亮薄文浩安新民张志毅北京林业大学林木育种国家工程实验室林木花卉遗传育种教育部重点实验室国家林业局树木花卉育种与生物工程重点开放实验室北京100083 西北农林科技大学园艺学院杨凌712100

ESTs数据库的发展为分子标记的开发提供了宝贵的资源。本研究从NCBI下载与杨树木质部形成相关的5359条ESTs序列,在其中257条序列中检测到279个SSRs位点,检出率为5.2%。全部SSRs共分为84种重复单元,平均长度18.2bp,变幅为15～36bp,平均... 详细信息

ESTs数据库的发展为分子标记的开发提供了宝贵的资源。本研究从NCBI下载与杨树木质部形成相关的5359条ESTs序列,在其中257条序列中检测到279个SSRs位点,检出率为5.2%。全部SSRs共分为84种重复单元,平均长度18.2bp,变幅为15～36bp,平均分布频率1/6.94kb。所有类型中三核苷酸重复单元占总SSRs的41.3%,处于主导地位。AAG占三核苷酸重复单元的比例为27.0%,是三核苷酸重复单元中的优势重复类型。利用primer3在线设计引物,通过生物信息学方法筛选出7对引物,其中6对扩增效果较好。利用筛选出的引物对19个杨树无性系进行扩增,每对引物产生多态性条带数目为3～6条,平均4.16条。引物多态信息量变化范围为0.2267～0.9845,平均0.5485。应用NTSYS软件在相似系数为0.68水平可将19个杨树无性系准确聚类。研究结果表明,利用ESTs序列进行SSRs的开发是一种切实有效的方法,为EST-SSRs在杨树遗传图谱构建以及遗传多样性等方面的应用奠定了基础。

关键词：杨树木质部形成 EST-SSRs 聚类分析

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rolB-pttGA20ox双价基因对毛白杨的转化和表达

rolB-pttGA20ox双价基因对毛白杨的转化和表达

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2010年全国植物园学术年会

作者：辛蓓陈晓阳李伟北京教学植物园华南农业大学林学院北京林业大学林木花卉遗传育种教育部重点实验室

通过农杆菌介导法将rolB-pttGA20ox双价基因导入毛白杨无性系中。PCR检测和Southern杂交证明,rolB-pttGA20ox双价基因已整合到毛白杨无性系基因组中。转基因植株各部位内源GA含量都有不同程度地增加,而根部IAA/ZR值未显著高于对照;植株... 详细信息

通过农杆菌介导法将rolB-pttGA20ox双价基因导入毛白杨无性系中。PCR检测和Southern杂交证明,rolB-pttGA20ox双价基因已整合到毛白杨无性系基因组中。转基因植株各部位内源GA含量都有不同程度地增加,而根部IAA/ZR值未显著高于对照;植株形态表现为生长加快,生根能力明显优于对照。研究结果为利用rolB-pttGA20ox双价基因促进木本植物生根和顶端优势奠定了基础。

关键词： rolB-pttGA20ox双价基因毛白杨转基因内源激素形态特征

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黄连木LEC1转录因子基因的克隆及表达分析

黄连木LEC1转录因子基因的克隆及表达分析

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第十二届中国科协年会第9分会场——非粮生物质能源与高技术产业化研讨会

作者：林善枝张志翔侯路王涛侯琦孙润泽北京林业大学林木育种国家工程实验室林木花卉遗传育种教育部重点实验室中国林业科学研究院林业研究所

黄连木(Pistacia chinensis Bunge)是一种重要的木本油料树种,其种子含油量高、出油率高,是制备生物柴油的优质原料。本研究以黄连木种子为试材,利用简并RT-PCR和RACE方法首次成功克隆得到黄连木LEC1转录因子基因的cDNA序列(命名为PcLEC... 详细信息

黄连木(Pistacia chinensis Bunge)是一种重要的木本油料树种,其种子含油量高、出油率高,是制备生物柴油的优质原料。本研究以黄连木种子为试材,利用简并RT-PCR和RACE方法首次成功克隆得到黄连木LEC1转录因子基因的cDNA序列(命名为PcLEC1,GenBank上登记号为HM627254),该序列长988bp,包括741bp完整的开放阅读框,编码247个氨基酸;该基因的核酸序列及其编码的氨基酸序列与已报道其他物种的LEC1基因具有较高相似性;同时,对PcLEC1基因编码蛋白进行生物信息学分析,结果表明,PcLEC1蛋白为亲水性蛋白,pI为6.235,二级结构主要为α螺旋和无规则卷曲,三级结构含有histone fold结构。无信号肽和跨膜区域,定位于细胞核,含有CBFD NFYB HMF功能结构域和NFYBAP3保守位点,存在多个潜在的磷酸化位点和其它修饰位点,并具有转录因子活性。另外,通过对黄连木PcLEC1及其他植物来源的LEC1蛋白序列的比对后发现,植物LEC1蛋白的B区序列高度保守,其它区域氨基酸序列差异非常大;进化树分析表明,与黄连木PcLEC1亲缘关系最近的是拟南芥和油菜。在此基础上,开展黄连木PcLEC1基因的原核及真核表达载体构建及表达研究,结果表明,在37℃条件下,1mM IPTG诱导4h,融合蛋白表达量较大;目前已成功获得转PcLEC1基因的烟草植株,转基因烟草种籽的含油量及油质质量分析正进行中。上述研究结果可为黄连木LEC1转录因子基因PcLEC1的应用奠定重要基础,具有广泛的应用前景。

关键词：黄连木 LEC1转录因子基因克隆生物信息学表达分析

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银杏小孢子蛋白提取及双向电泳技术优化

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西南林学院学报 2010年第3期30卷 45-49页

作者：王亚茹李云孙宇涵王谦北京林业大学林木育种国家工程实验室林木花卉遗传育种教育部重点实验室国家林业局树木花卉育种与生物工程重点开放实验室生物科学与技术学院北京100083 北京林业大学总务与产业管理处环境科北京100083

对银杏小孢子蛋白提取方法、上样量等进行试验。结果表明:在蛋白提取方面,TCA/丙酮法最佳,该方法提取的总蛋白得率最高,所获蛋白在2-DE图谱获得的点数最多、最清晰;饱和酚法次之;Tris-HCl法最差。上样量方面,蛋白上样量为1 500μg时得到... 详细信息

对银杏小孢子蛋白提取方法、上样量等进行试验。结果表明:在蛋白提取方面,TCA/丙酮法最佳,该方法提取的总蛋白得率最高,所获蛋白在2-DE图谱获得的点数最多、最清晰;饱和酚法次之;Tris-HCl法最差。上样量方面,蛋白上样量为1 500μg时得到的2-DE图片,蛋白点清晰,重叠现象少,图谱质量最佳;蛋白上样量为2 100μg时2-DE图谱的多蛋白点相互重叠,横竖条纹严重;上样蛋白为900μg时,2-DE图谱上蛋白点较少,丰度较弱。

关键词：银杏双向电泳蛋白提取上样量

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四倍体刺槐硬枝沙藏结合生长调节物质处理扦插研究

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黑龙江农业科学 2010年第8期 85-88页

作者：孟丙南彭祚登张中林徐慧敏李云北京林业大学林木育种国家工程实验室/林木花卉遗传育种教育部重点实验室/国家林业局树木花卉育种与生物工程重点开放实验室北京100083 北京林业大学省部共建森林培育与保护教育部重点实验室北京100083 河南省洛宁县林业局河南洛宁471700

为了解决四倍体刺槐硬枝扦插成活率低的问题,利用冬季沙藏结合生长调节物质处理和倒放催根的方法对四倍体刺槐进行硬枝扦插试验。结果表明:经冬季沙藏,结合沙藏前和扦插时的2次生长调节物质处理,插穗扦插成活率最高,达66.67%;在IBA、NAA... 详细信息

为了解决四倍体刺槐硬枝扦插成活率低的问题,利用冬季沙藏结合生长调节物质处理和倒放催根的方法对四倍体刺槐进行硬枝扦插试验。结果表明:经冬季沙藏,结合沙藏前和扦插时的2次生长调节物质处理,插穗扦插成活率最高,达66.67%;在IBA、NAA和ABT三种生长调节剂的处理试验中,500 ***-1的ABT处理插穗扦插成活率最好,成活率达71.11%;插穗倒放沙藏明显提高了扦插成活率;插穗经温室沙藏处理比室外沙藏处理成活率高。

关键词：四倍体刺槐硬枝扦插植物生长调节剂

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野生藏杏花粉超微结构的观察

野生藏杏花粉超微结构的观察

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第三届中医药现代化国际科技大会

作者：孟凡娟吴辰铉王超陶雷许静张帅东北林业大学生命科学学院哈尔滨150040 东北林业大学林木遗传育种与生物技术教育部重点实验室哈尔滨150040 东北林业大学生命科学学院哈尔滨150040 西藏农牧学院林芝860000

本研究以野生藏杏为材料，首次对其花粉结构进行了研究报道，发现：野生藏杏的花粉粒属于棒状花粉。从极地面进行观察，花粉具有3条沿极轴走向的等间距孔沟，从赤道面看有2条孔沟，孔沟极度凹陷。外壁纹饰具条脊状纵向平行排列，有少量... 详细信息

本研究以野生藏杏为材料，首次对其花粉结构进行了研究报道，发现：野生藏杏的花粉粒属于棒状花粉。从极地面进行观察，花粉具有3条沿极轴走向的等间距孔沟，从赤道面看有2条孔沟，孔沟极度凹陷。外壁纹饰具条脊状纵向平行排列，有少量分枝，同时具有少量的小而长的穿孔。由于野生藏杏资源及其稀少，所以本实验的报道，将会对藏杏的进一步研究利用提供理论依据。

关键词：藏杏花粉超微结构

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3种引种杨树和3种乡土杨树苗叶的光合特性比较

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西部林业科学 2010年第3期39卷 14-19页

作者：刘磊庞洪影杨峰黄凤兰孟凡娟东北林业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150040 内蒙古民族大学生命科学学院内蒙古通辽028000 东北林业大学林木遗传育种与生物技术教育部重点实验室黑龙江哈尔滨150040

在自然条件下,测定了3种引种杨树和3种乡土杨树苗木叶片的光合气体交换参数和叶绿素荧光参数。3种引种杨树为芬兰山杨A21、芬兰山杨16、加杨,3种乡土杨树为小青杨、小叶杨、兴安杨。其测定结果表明,3种引种杨树苗叶的净光合速率(Pn)显... 详细信息

在自然条件下,测定了3种引种杨树和3种乡土杨树苗木叶片的光合气体交换参数和叶绿素荧光参数。3种引种杨树为芬兰山杨A21、芬兰山杨16、加杨,3种乡土杨树为小青杨、小叶杨、兴安杨。其测定结果表明,3种引种杨树苗叶的净光合速率(Pn)显著高于3种乡土杨树,同时蒸腾速率(E)、瞬时水分利用效率(WUE)的平均值也高于3种乡土杨树的苗叶。从而说明3种引种杨树的光合能力较强,对吸收的光能和水分的利用效率较高。3种引种杨树苗叶的初始荧光(Fo)、最大荧光(Fm)、PSⅡ光能捕获效率(F′v/F′m)、稳定荧光(Fs)、光适应下最小荧光产量(F′o)、最大荧光产量(F′m)的平均值均高于3种乡土杨树,3种引种杨树的可变荧光(Fv)、PSⅡ最大光能转换效率(Fv/Fm)、可变荧光与初始荧光之比(Fv/Fo)、PSⅡ电子传递量子效率(ΦPSⅡ)、非光化学猝灭系数(NPQ)、光化学猝灭系数(qP)的平均值均低于3种乡土杨树。相关分析表明,Pn与Tr、Tr与Ci、Fm与Fo、Fv/Fo与Fv/Fm、ΦPSⅡ与Fo均呈极显著正相关(P<0.01);ΦPSⅡ与Fm、F′v/F′m与Fv/Fo呈显著正相关(P<0.05);Fv/Fo与Fo、Fv/Fm与Fo、NPQ与Fv/Fm、NPQ与Fv/Fo均呈极显著负相关(P<0.01);qP与F′v/F′m呈显著负相关(P<0.05)。

关键词： 3种引种杨树 3种乡土杨树苗叶的光合特性

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原料乳嗜冷菌的分离筛选及高产脂肪酶嗜冷菌株的确定

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安徽农业科学 2010年第7期38卷 3550-3551页

作者：任静宋兴舜张兰威东北农业大学成栋学院生物食品系黑龙江哈尔滨150030 东北林业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150040 林木遗传育种与生物技术教育部重点实验室黑龙江哈尔滨150040 哈尔滨工业大学食品科学与工程学院黑龙江哈尔滨150001

[目的]为进一步开展嗜冷菌研究,促进乳品工业的发展提供理论依据。[方法]以生鲜乳为原料,采用6种不同配方的培养基对其中的嗜冷菌进行分离培养,筛选最佳培养基;分别测定各菌株的产脂肪酶活性,筛选出高产脂肪酶的菌株。[结果]改良LA培养... 详细信息

[目的]为进一步开展嗜冷菌研究,促进乳品工业的发展提供理论依据。[方法]以生鲜乳为原料,采用6种不同配方的培养基对其中的嗜冷菌进行分离培养,筛选最佳培养基;分别测定各菌株的产脂肪酶活性,筛选出高产脂肪酶的菌株。[结果]改良LA培养基为分离嗜冷菌的最佳培养基;从40份原料乳样品中共分离筛选到30株嗜冷菌(25株杆菌,5株球菌;17株革兰氏阴性菌,13株革兰氏阳性菌),其中高产脂肪酶的菌株有7株(4、6、9、12、15、16、17号菌株)。[结论]该研究从40份原料乳样品中共分离筛选出7株高产脂肪酶的菌株。

关键词：原料乳嗜冷菌分离纯化

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盐胁迫下刺槐叶片线粒体功能及超微结构的变化

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经济林研究 2010年第2期28卷 18-23页

作者：孟凡娟黄凤兰东北林业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150040 东北林业大学林木遗传育种与生物技术教育部重点实验室黑龙江哈尔滨150040 内蒙古民族大学生命科学学院内蒙古通辽028000

为了揭示四倍体刺槐的耐盐机制,以刺槐Robinia pseudoacacia的二倍体和四倍体为材料,分别在盐胁迫处理前、处理10 d、处理20 d时进行叶片取材,比较了二者在NaCl和Na2SO4胁迫下叶片线粒体功能及超微结构的变化。结果表明,在2种盐胁迫下,... 详细信息

为了揭示四倍体刺槐的耐盐机制,以刺槐Robinia pseudoacacia的二倍体和四倍体为材料,分别在盐胁迫处理前、处理10 d、处理20 d时进行叶片取材,比较了二者在NaCl和Na2SO4胁迫下叶片线粒体功能及超微结构的变化。结果表明,在2种盐胁迫下,二倍体刺槐细胞色素Cyt c/b的比值和SOD酶活性均呈下降趋势,而四倍体刺槐呈上升趋势;二者的H2O2和MDA含量均呈上升趋势。在盐胁迫处理前,二者叶片细胞中线粒体均表现结构完整、基质均匀、被膜清晰、嵴均匀分布且结构完整等特点。在NaCl处理10 d时,二倍体刺槐叶片细胞中部分线粒体出现变形、中空、膜模糊、嵴不均匀分布等现象;在NaCl处理20 d时,线粒体受损情况进一步加重。而Na2SO4胁迫下叶片细胞线粒体的损伤更为严重。四倍体刺槐在NaCl和Na2SO4处理时,线粒体受损情况差异较大,其中Na2SO4对四倍体刺槐叶片线粒体超微结构影响较大。

关键词：刺槐四倍体二倍体盐胁迫线粒体

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