检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医学报 2019年第4期39卷 688-694页

作者：张颖曹增国吴芳芳李国华李恩涛焦翠翠迟航金宏丽韩秋雪张胜男王化磊冯娜高玉伟赵永坤杨松涛夏咸柱吉林农业大学动物科学技术学院，吉林长春130118 军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所/吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室，吉林长春130122 吉林大学动物医学学院吉林长春130062 石河子大学动物科技学院，新疆石河子832003 华南农业大学兽医学院广东广州510000 东北农业大学动物医学学院，黑龙江哈尔滨150030 东北林业大学野生动物资源学院黑龙江哈尔滨150030

以纯化后的埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)糖蛋白(GP)作为抗原,致敏醛化的绵羊红细胞,进行最佳反应条件优化,建立间接血凝抗体检测方法。以EBOV高免马血清、纯化的IgG和精制免疫球蛋白F(ab’)_2为待检样品进行检测,并将检测结果与假病毒... 详细信息

以纯化后的埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)糖蛋白(GP)作为抗原,致敏醛化的绵羊红细胞,进行最佳反应条件优化,建立间接血凝抗体检测方法。以EBOV高免马血清、纯化的IgG和精制免疫球蛋白F(ab’)_2为待检样品进行检测,并将检测结果与假病毒中和试验检测结果相比较。结果显示,该方法可特异性检测EBOV抗体,与马尔堡病毒、裂谷热病毒等的阳性血清均不发生反应;与假病毒中和试验测得的抗体效价增长规律相一致。结果表明,本试验成功建立了EBOV抗体间接血凝检测方法,该方法安全、简便、快捷,为EBOV疫苗免疫后的效果评价提供了又一新的检测方法。

关键词：埃博拉病毒糖蛋白(GP) 间接血凝试验抗体检测

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裂谷热病毒eGn蛋白的制备及免疫原性验证

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中国兽医学报 2019年第8期39卷 1506-1512页

作者：韩秋雪黄培毕津豪金宏丽赵永坤焦翠翠张胜男徐胜男张颖曹增国迟航王化磊杨松涛夏咸柱东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所吉林长春130122 吉林大学动物医学学院人兽共患病研究教育部重点实验室吉林长春130062 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 东北林业大学野生动物资源学院黑龙江哈尔滨150040 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

通过PCR扩增裂谷热病毒(RVFV) Gn蛋白胞外区(eGn)基因,连入原核表达载体pET-30a(+),构建重组质粒pET-30a(+)-RVFV-eGn。将重组质粒转化至感受态BL21(DE3),IPTG诱导蛋白表达,经HisTrapTMFF蛋白纯化柱纯化目的蛋白。将目的蛋白免疫BALB/c... 详细信息

通过PCR扩增裂谷热病毒(RVFV) Gn蛋白胞外区(eGn)基因,连入原核表达载体pET-30a(+),构建重组质粒pET-30a(+)-RVFV-eGn。将重组质粒转化至感受态BL21(DE3),IPTG诱导蛋白表达,经HisTrapTMFF蛋白纯化柱纯化目的蛋白。将目的蛋白免疫BALB/c小鼠,分离小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,筛选分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株,制备单克隆抗体,免疫荧光鉴定制备的单克隆抗体特性。结果显示,PCR扩增出1 287 bp的目的基因;构建的重组质粒转化BL21细胞后可有效表达目的蛋白,确定最佳表达条件为30℃,0.8 mmol/L IPTG诱导5 h,目的蛋白以包涵体形式表达;纯化后目的蛋白纯度为94.136%;制备的单克隆抗体可特异性识别哺乳动物细胞表达的Gn蛋白,表明RVFV eGn蛋白具有良好的免疫原性。研究结果为裂谷热新型疫苗和快速诊断试剂的研制奠定基础。

关键词：裂谷热病毒 Gn胞外区(eGn) 单克隆抗体

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2009年～2012年内蒙古地区狂犬病毒分离株遗传变异分析与免疫保护效果研究

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中国预防兽医学报 2016年第6期38卷 458-462页

作者：周微微王金玲祖述龙王雪莲葛金英张立娜步志高东北林业大学野生动物资源学院黑龙江哈尔滨150040 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010010

为了解内蒙古自治区狂犬病毒(RABV)流行株的遗传进化情况,本研究于2009年~2012年,在内蒙古地区分离得到16株RABV,测序后获得16条N基因和G基因序列。序列分析表明N基因核苷酸相似性为86.5%~100%,G基因核苷酸相似性为83.9%~100%。N基因和... 详细信息

为了解内蒙古自治区狂犬病毒(RABV)流行株的遗传进化情况,本研究于2009年~2012年,在内蒙古地区分离得到16株RABV,测序后获得16条N基因和G基因序列。序列分析表明N基因核苷酸相似性为86.5%~100%,G基因核苷酸相似性为83.9%~100%。N基因和G基因核苷酸遗传进化分析显示本次分离到的病毒株均属于基因I型,其中12株G蛋白V^(332)I突变属于亚洲Asian谱系,其他4株G蛋白T^(36)A突变属于Cosmopolitan谱系,为内蒙古主要流行的两个谱系。CTN-1(Asian谱系)和ERA(Cosmopolitan谱系)疫苗免疫BALB/c小鼠对分离株NM4(Asian谱系)和NM8(Cosmopolitan谱系)的攻击均能够提供有效保护。本研究初步证实了目前疫苗能够有效地保护人和动物对RABV的感染。

关键词：狂犬病毒遗传进化分析免疫保护

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H9N2亚型AIV鼠肺适应株的获得及其氨基酸变异分析

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中国农业科学 2015年第15期48卷 3056-3063页

作者：丁洁高玉伟桑晓宇程凯慧于志君张坤柴洪亮王铁成夏咸柱华育平东北林业大学野生动物资源学院军事医学科学院军事兽医研究所/吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室

【目的】将H9N2亚型禽流感病毒在豚鼠体内连续性传播9代后,能够稳定的在豚鼠间传播,可见H9N2亚型禽流感病毒对哺乳动物的感染能力以及在哺乳动物间传播的能力还是很强的。因此,使用此株病毒A/Chicken/Jinan/Li-2/2010(H9N2)简称JN,应用... 详细信息

【目的】将H9N2亚型禽流感病毒在豚鼠体内连续性传播9代后,能够稳定的在豚鼠间传播,可见H9N2亚型禽流感病毒对哺乳动物的感染能力以及在哺乳动物间传播的能力还是很强的。因此,使用此株病毒A/Chicken/Jinan/Li-2/2010(H9N2)简称JN,应用小鼠动物模型,研究H9N2亚型流感病毒在小鼠肺内适应性传代后对小鼠的致病力,以及传代过程中流感病毒的变异。检测和筛选流感病毒致病性变异的关键氨基酸位点,探索H9N2亚型流感病毒变异的分子机制。【方法】将一株H9N2亚型禽流感病毒A/Chicken/Jinan/Li-2/2010(H9N2)在小鼠的肺脏进行传代,将小鼠解剖、摘除肺部、研磨离心后经滴鼻接种下一代小鼠,传播九代后,用MDCK细胞扩繁病毒,得到鼠肺适应株JN-P9-2-M1;扩增、克隆传代病毒JN-P5-2-M1和JN-P9-2-M1的全基因测序,推断各基因编码的氨基酸,与JN原代病毒(P0)的核苷酸和氨基酸相比对,得到各代次病毒核苷酸与氨基酸变化的位点;解剖小鼠,获得小鼠的肺脏、肝脏、脾脏、肾脏、脑和肠,滴定各组织中的病毒滴度,检测病毒的组织噬性;乙醚麻醉小鼠后,每个病毒稀释度鼻内接种3只小鼠,检测小鼠的幸存率和发病率;采集攻毒小鼠的肺部,固定后进行病理切片和免疫组化,比较JN原代病毒与JN-P9-2-M1对小鼠肺部的损害。【结果】JN-P9-2-M1对小鼠的致病性明显提高,其MLD50为103.5EID50,106EID50、105EID50、104EID50攻毒剂量的小鼠幸存率是0,而原毒JN对小鼠不致死,JN-P9-2-M1对小鼠的致病性比原毒提高了至少1 000倍;攻入JN-P9-2-M1病毒剂量为106—103EID50的小鼠,体重明显减少,临床症状也很明显,攻毒后3—8 d,小鼠表现精神萎靡、被毛零乱、呼吸急促、弓背等症状,而原毒JN在106EID50时,小鼠的体重变化率都跟阴性对照组相似;JN-P5-2-M1和JN-P9-2-M1同原毒JN的受体结合特性相同,都是只能特异性结合SAa-2,6Gal受体,具有人样流感病毒的受体结合特性;JN病毒仅能在小鼠肺部检测到,病毒滴度很高,而JN-P9-2-M1不仅在小鼠肺部有很高的滴度,在小鼠的肝脏、脾脏、肾脏和脑部都能检测到。【结论】JN-P9-2-M1对小鼠的致病性明显提高,比原毒提高了至少1 000倍;PB2 E627K、HA N313D和HA N496S等3个位点可能是病毒对小鼠致病力初步提高的原因,而PA L342I和NA N218T这两个点突变,就有可能是进一步提高病毒对小鼠致病力的关键位点。

关键词：禽流感 H9N2 小鼠致病力

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野生鸟类传播禽免疫抑制性病毒的研究进展

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畜牧兽医学报 2014年第9期45卷 1393-1398页

作者：韩春燕郝瑞军曾祥伟王笑梅东北林业大学野生动物资源学院动物医学实验室哈尔滨150040 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室哈尔滨150001

禽免疫抑制性传染病是由禽免疫抑制性病毒引起的,以感染禽类免疫抑制为主要临床特征、严重威胁世界养禽业发展的一类传染病。以往禽免疫抑制性病毒的流行病学研究多局限于家禽,有关野生鸟类的数据十分有限。鉴于近些年来国内外学者在野... 详细信息

禽免疫抑制性传染病是由禽免疫抑制性病毒引起的,以感染禽类免疫抑制为主要临床特征、严重威胁世界养禽业发展的一类传染病。以往禽免疫抑制性病毒的流行病学研究多局限于家禽,有关野生鸟类的数据十分有限。鉴于近些年来国内外学者在野生鸟类中检测到禽免疫抑制病病毒报道的增加,作者从禽免疫抑制病病毒在野鸟中的流行概况、可能宿主野鸟的种类、野生鸟类在病毒传播中的可能机制以及鸟类疾病的监测和预警等方面对野生鸟类传播禽免疫抑制性病毒的研究进展加以综述,以丰富禽免疫抑制性病毒的流行病学资料,为禽免疫抑制疾病的有效控制奠定基础。

关键词：野生鸟类禽免疫抑制性病毒

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中东呼吸综合征研究进展

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传染病信息 2015年第1期28卷 49-55页

作者：王翀郑学星迟航盖微微张渭蛟杨松涛高玉伟夏咸柱东北林业大学野生动物资源学院哈尔滨150040 解放军军事医学科学院军事兽医研究所吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室长春130062 解放军军事医学科学院军事兽医研究所吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室长春130062 江苏省重要动物传染病防控协同创新中心扬州225009

中东呼吸综合征由中东呼吸综合征冠状病毒感染所致,可导致感染者并发急性呼吸窘迫综合征,严重者可发展为肾衰竭而死亡。该病自2012年WHO首次报告以来,在沙特阿拉伯等20多个国家时有发生,对全球公共卫生构成重大威胁。本文对中东呼吸综... 详细信息

中东呼吸综合征由中东呼吸综合征冠状病毒感染所致,可导致感染者并发急性呼吸窘迫综合征,严重者可发展为肾衰竭而死亡。该病自2012年WHO首次报告以来,在沙特阿拉伯等20多个国家时有发生,对全球公共卫生构成重大威胁。本文对中东呼吸综合征研究进展进行综述,以期对该病的发生和流行及早预防和控制。

关键词：冠状病毒属综合征抗病毒药

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马胞嘧啶脱氨基酶A3Z3的多态性及抗马传染性贫血病毒作用

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中国预防兽医学报 2014年第6期36卷 427-430页

作者：张泽力马建陈方锐尹鑫曹苏亚艾有为王玉龙王晓钧东北林业大学野生动物资源学院黑龙江哈尔滨150040 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030

马胞嘧啶脱氨基酶家族成员之一的A3Z3分子(eqA3Z3),可通过胞嘧啶脱氨基酶活性限制马传染性贫血病毒(EIAV)的复制。为研究eqA3Z3分子多态性与其抗EIAV活性之间的关系,本实验采用RT-PCR技术从10匹马体内扩增A3Z3基因,对获得的不同马体内A... 详细信息

马胞嘧啶脱氨基酶家族成员之一的A3Z3分子(eqA3Z3),可通过胞嘧啶脱氨基酶活性限制马传染性贫血病毒(EIAV)的复制。为研究eqA3Z3分子多态性与其抗EIAV活性之间的关系,本实验采用RT-PCR技术从10匹马体内扩增A3Z3基因,对获得的不同马体内A3Z3分子的序列进行比对分析,发现了两种不同于已报道eqA3Z3分子的突变体。将其克隆于真核表达载体pcDNA-HA中,并分别与EIAV感染性质粒共转染293T细胞,通过GST Pull-down方法证明了3种分子均能够与EIAV Gag蛋白相互作用。此外,western blot结果显示3种分子均能够被包装进病毒粒子。同时荧光素酶活性结果表明3种分子具有相同的限制EIAV复制功能。以上研究结果有助于进一步深入了解和评价马属动物Apobec3分子抗逆转录病毒的作用。

关键词：马A3Z3 多态性马传染性贫血病毒抗病毒作用

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马TRIM5α基因的扩增及抗EIAV作用评价

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中国预防兽医学报 2014年第8期36卷 620-623页

作者：蔡伟刚那雷刘荻萩马建尹鑫张泽力艾有为王晓钧中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 东北林业大学野生动物资源学院黑龙江哈尔滨150040

TRIM5α是一种重要的天然免疫因子,能够限制多种逆转录病毒的跨种感染。为研究马的TRIM5α是否具有抗病毒作用,本实验采用RT-PCR技术从马外周血液细胞的总RNA中扩增TRIM5α基因。测序结果表明,与GenBank中唯一的马TRIM5α(eqTRIM5α)基... 详细信息

TRIM5α是一种重要的天然免疫因子,能够限制多种逆转录病毒的跨种感染。为研究马的TRIM5α是否具有抗病毒作用,本实验采用RT-PCR技术从马外周血液细胞的总RNA中扩增TRIM5α基因。测序结果表明,与GenBank中唯一的马TRIM5α(eqTRIM5α)基因序列相比马基因组预测的TRIM5α(eqTRIM5α-predicted)基因在其C末端部位有208 bp片段的插入,该插入造成TRIM5α的截短突变(eqTRIM5α-S)。通过删除插入片段后得到与eqTRIM5α-predicted基因相同的全长马的TRIM5α(eqTRIM5α-F)基因。同时将eqTRIM5α-S基因和eqTRIM5α-F基因分别插入pLPCX-HA真核表达载体中构建重组质粒,并分别转染293T细胞,转染24 h后感染马传染性贫血(EIAV)假病毒。通过检测荧光素酶活性,实验结果表明相对于阴性对照组eqTRIM5α-S可以有效地降低EIAV假病毒的复制,而eqTRIM5α-F则无该生物学功能。但通过将两种eqTRIM5α重组质粒与EIAV-gag表达重组质粒共转染293T细胞,结果表明eqTRIM5α-S和eqTRIM5α-F均不能降解Gag蛋白,这表明eqTRIM5α-S可能存在另一种机制限制EIAV的复制。

关键词：马TRIM5α 马传染性贫血病毒抗病毒作用衣壳蛋白降解作用

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抗马传染性贫血病毒Rev蛋白单克隆抗体的制备

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中国预防兽医学报 2014年第2期36卷 157-159页

作者：郭纪珂戈曼张泽力马建申之义王晓钧内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010010 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 东北林业大学野生动物资源学院黑龙江哈尔滨150040

为制备马传染性贫血病毒(EIAV)蛋白表达调控因子Rev的单克隆抗体(MAb),本研究以原核表达并纯化的重组EIAV Rev为免疫原,免疫BALB/c小鼠,将其脾细胞与SP2/0细胞融合,采用间接ELISA方法筛选阳性克隆,经3次细胞克隆纯化后获得一株能够稳定... 详细信息

为制备马传染性贫血病毒(EIAV)蛋白表达调控因子Rev的单克隆抗体(MAb),本研究以原核表达并纯化的重组EIAV Rev为免疫原,免疫BALB/c小鼠,将其脾细胞与SP2/0细胞融合,采用间接ELISA方法筛选阳性克隆,经3次细胞克隆纯化后获得一株能够稳定分泌抗Rev的杂交瘤细胞株。MAb亚型鉴定为IgG2a/κ。Western blot与间接免疫荧光试验结果显示,获得的MAb与真核表达的Rev呈阳性反应。本研究首次制备了抗EIAV Rev的MAb,为Rev的功能研究奠定了基础。

关键词：马传染性贫血病毒 Rev 单克隆抗体

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野鸭源禽网状内皮组织增生症病毒的分离与鉴定

野鸭源禽网状内皮组织增生症病毒的分离与鉴定

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辽宁省畜牧兽医学会2014年学会年会

作者：姜莉莉祁小乐高玉龙邓小芸柴洪亮张礼洲贠炳岭秦立廷王永强高宏雷王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨 150001 东北林业大学野生动物资源学院黑龙江哈尔滨 150040 辽宁医学院畜牧兽医学院辽宁锦州 12 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室黑龙江哈尔滨 150001 东北林业大学野生动物资源学院黑龙江哈尔滨 150040

本研究利用扩增禽网状内皮组织增生症病毒(REV)长末端重复序列(LTR)的特异性引物作为检测引物,对采集于吉林省某地健康野鸭的脏器样品进行PCR检测.阳性样品经DF1培养增殖,进行病毒的分离,经PCR和间接免疫荧光(IFA)方法鉴定,确定分离到2... 详细信息

本研究利用扩增禽网状内皮组织增生症病毒(REV)长末端重复序列(LTR)的特异性引物作为检测引物,对采集于吉林省某地健康野鸭的脏器样品进行PCR检测.阳性样品经DF1培养增殖,进行病毒的分离,经PCR和间接免疫荧光(IFA)方法鉴定,确定分离到2株REV,分别来自于针尾鸭和绿头鸭将分离病毒分别命名为DBYR1101和DBYR1102.克隆两个病毒株的主要保护性抗原基因gp90,并进行序列分析.结果显示,两个分离株gp90基因氨基酸同源性为99.5％;DBYR1101gp90基因与REV3个型的代表株170A、SNV和CSV的氨基酸同源性分别为95.7％、94.2％和98.2％;DBYR1102gp90基因与REV3个型的代表株170A、SNV和CSV的氨基酸同源性分别为95.2％、93.7％和97.7％;与我国早期南方分离株HA9901的氨基酸序列同源性分别为94.7％和94.2％;与我国北方分离株氨基酸序列同源性为99.2％～100％.核苷酸遗传进化分析表明,2个野鸟源REV分离株与现有的东北分离株亲缘关系较近,趋于形成一个北方分离群;与SNV株亲缘关系最远;与170A株亲缘关系较远;与美国和中国台湾地区的某些分离株同源性较高.该研究首次自野鸭体内分离到REV,丰富了REV流行病学资料,同时提醒我们重视野生鸟类迁徙在疾病传播中所扮演的角色,为深入研究REV致病机制、免疫抑制机制等奠定了基础.

关键词：野鸭禽网状内皮组织增生病病毒分离菌株鉴定

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